富血小板纤维蛋白对兔脂肪干细胞成骨分化的影响

目的：体外分离培养兔脂肪干细胞（adipose—derived stem cells,ADSCs）,鉴定其分化能力并观察富血小板纤维蛋白（platelet—rich fibrin,PRF）对ADSCs成骨分化的影响。方法：取新西兰兔腹股沟处的脂肪组织,将其分离获得脂肪干细胞,培养至第三代用于实验。分别以油红O、茜素红染色鉴定其成脂和成骨分化能力。取兔耳中央动脉血一次离心法制备PRF膜。将脂肪干细胞分为2组：对照组不含PRF膜;实验组含PRF膜。用碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测不同时间点PRF对ADSCs成骨分化的影响。结果：脂肪干细胞呈长梭形贴壁生长;油红O及茜素红染色均呈阳性;在不同的时间点,实验组ALP活性值均高于对照组（P〈0．05）。结论：ADSCs具有成骨的潜能,且PRF可以促进ADSCs向成骨细胞分化。     

富血小板纤维蛋白与富血小板血浆体外释放生长因子的比较及其对脂肪干细胞增殖分化的影响

目的比较富血小板纤维蛋白（PRF）与富血小板血浆（PRP）体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞（ADSCs）增殖和成骨分化的影响。方法抽取兔耳中央动脉血,一次离心法制备PRF,二次离心法制备PRP,分别将其置于5 mL新鲜的α-MEM培养液中,分别于37 ℃下静置1、7、14、21、28 d,收集PRF与PRP析出液,检测析出液中转化生长因子-β1（TGF-β1）及血小板源性生长因子-AB（PDGF-AB）的质量浓度。将收集的PRF与PRP析出液配置成条件培养液培养ADSCs,观察其对ADSCs增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。结果1）生长因子释放情况：不同时间点的PRF析出液中,14 d时TGF-β1的质量浓度达到最高,7 d时PDGF-AB的质量浓度最高;不同时间点的PRP析出液中,1 d时TGF-β1与PDGF-AB的质量浓度即达最高,以后逐渐下降。2）对ADSCs增殖及ALP活性的影响：PRF析出液中,14 d时对其影响最大;PRP析出液中,1 d时对其影响最大。结论与PRP相比,PRF能够缓慢持久地释放生长因子,更有力地刺激ADSCs的增殖和分化。     

BMP2/Smads通路介导富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞成骨分化的作用研究

目的:基于骨形态发生蛋白2(BMP2)/母亲信号蛋白同源物通路(Smads)通路,分析富血小板纤维蛋白(PRF)对人牙髓干细胞成骨分化的作用.方法:分离纯化牙髓干细胞,流式细胞仪检测并鉴定牙髓干细胞表面抗原标记物,随机分为对照组、PRF组、BMP激活剂组和BMP抑制剂组(简称激活剂组和抑制剂组),检测培养7d、14d后的碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-qPCR检测牙髓干细胞胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN) mRNA相对表达水平;茜素红染色观察矿化结节形成;Western-Blot检测牙髓干细胞BMP2、Smad1、Smad5、p-Smad1/5、RUNX2蛋白相对表达水平.结果 ..STRO-1、CD29、CD90表达阳性,符合牙髓干细胞的表型.各组ALP活性随时间延长而升高(P＜0.05),从对照组到抑制剂组、PRF组、激活剂组,牙髓干细胞ALP活性及COL-Ⅰ、RUNX2、OCN mRNA相对表达水平依次升高,红色矿化结节数目、A值依次增加(P＜0.05).从抑制剂组到对照组、PRF组、激活剂组,牙髓干细胞BMP2、p-Smad1/5、RUNX2蛋白相对表达水平依次升高(P＜0.05).结论 ..PRF可能通过激活BMP2/Smads信号通路促进人牙髓干细胞成骨分化.     

富血小板血浆对人脂肪间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响

目的：探讨富血小板血浆（PRP）对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）增殖、分化及成骨能力的影响。方法：脂肪组织体外分离获得hADSCs,2次离心制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活PRP。倒置相差显微镜观察成骨诱导实验中PRP对细胞增殖、分化状况的影响,钙-钴法检测PRP作用下hADSCs矿化结节形成,碱性磷酸酶（ALP）检测PRP对细胞活性及分化能力的影响。CCK-8法检测成骨诱导组和非成骨诱导组加PRP培养后2、4、6、8、16d细胞活性变化。结果：成骨诱导实验中50%PRP30μL组细胞密集、数量最多,且有剂量依赖性;钙-钴法检测见PRP原液组细胞染色最深,且有浓度依赖性;碱性磷酸酶显色见PRP原液组细胞活性最强,染色最深。CCK-8检测显示无论有无成骨诱导,各浓度PRP均可促进细胞增殖,且有浓度依赖性。结论：适宜浓度的PRP可明显促进hADSCs增殖,并有浓度及剂量依赖性。     

富血小板纤维蛋白对牙髓细胞增殖与分化的影响

目的:评估牙髓细胞在富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)存在下的体外增殖及成骨分化的能力,为PRF作为支架材料、牙髓细胞作为种子细胞构建组织工程骨,进行前期研究。方法:3月龄比格犬拔除乳磨牙获得乳牙牙髓细胞;恒牙牙髓细胞从16月龄成年比格犬磨牙获得。静脉取血离心10 min获得PRF。实验分4组:对照组(普通培养基不加入PRF);实验组A(普通培养基加入PRF);实验组B(成骨诱导培养基不加入PRF);实验组C(成骨诱导培养基加入PRF)。分别于1、4、7和11d测定细胞数量、MTT值、半定量碱性磷酸酶值、成骨相关基因Q-PCR值,并于21d测定钙结节吸光度值。结果:PRF是一种可以促进牙髓细胞增殖的,无毒性作用的纤维网状支架结构;细胞水平上PRF促进了两种细胞的成骨分化:钙结节以及碱性磷酸酶半定量数值都明显上调(P<0.05);基因水平上,4个时间点成骨相关基因的表达量都显著增加(P<0.05),且乳牙牙髓细胞的表现均优于恒牙牙髓细胞。结论:可使用PRF和牙髓细胞复合构建组织工程骨。     

富血小板纤维蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化的研究

目的 :研究富血小板纤维蛋白(PRF)通过Wnt/β-catenin信号通路对骨髓基质干细胞(BMSCs)分化的影响。方法:分离、培养原代兔BMSCs,取第三代细胞进行干细胞鉴定,收集同一只兔耳缘静脉血离心制备PRF,将PRF与BMSCs置于Transwell小室中共培养并进行成骨分化。实验分组:A组为单纯BMSCs对照组;B组为PRF与BMSCs共培养组;C组为加入DKK1的PRF与BMSCs共培养组;D组为加入Wnt3a的PRF与BMSCs共培养组。茜素红染色观察各组钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组ALP活性,定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测成骨成脂相关基因Runx2、OCN、PPARγ2及LPL的m RNA表达,同时检测Wnt/β-catenin信号通路关键因子Cyclin D1及β-catenin的m RNA表达。结果:流式细术检测结果显示,原代培养的BMSCs符合间充质干细胞鉴定标准。茜素红染色结果显示,B组和D组的钙结节数量明显多于A组和C组,A组和C组之间无明显差异。碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,B组与D组的ALP活性较A组和C组明显增加(P<0.05),且两组之间差异无明显统计学意义。q RTPCR结果显示B组与D组中的成骨分化标志基因Runx2、OCN的m RNA表达,较A组和C组显著增加(P<0.05),而成脂分化标志基因PPARγ2、LPL的m RNA表达显著降低(P<0.05)。此外,B组和D组中Wnt/β-catenin信号通路关键因子Cyclin D1及β-catenin的m RNA表达较A组和C组显著增加(P<0.05)。结论:PRF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化而抑制其成脂分化。     

富血小板血浆对鼠骨骼肌卫星细胞增殖及成骨活性的影响

目的:观察富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对体外培养的SD大鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellitecells,MSCs)增殖与诱导成骨的影响,探讨富血小板血浆诱导MSCs成骨的可能机制。方法:从SD大鼠心脏抽取全血,参照Landesberg法制备PRP,并进行全血和PRP中血小板(PLT)计数。取新生3～5 d的SD大鼠四肢骨骼肌,采用酶消化及差速贴壁法体外培养鼠MSCs,采用免疫组织化学的方法进行鉴定。四甲基偶氮唑盐法(MTT)观察不同浓度的自体PRP(1.6%、6.25%、12.5%)对MSCs增殖的影响;以碱性磷酸酶(ALP)钙钻法染色、ALP活性测定、茜素红染色及骨钙素和Ⅰ型胶原免疫组织化学染色法,检测PRP对MSCs向成骨细胞分化的诱导作用。结果:采用Landesberg法成功获取PRP;酶消化及差速贴壁的方法成功获取MSCs,desmin及α-sarcomeric actin免疫组织化学染色阳性;浓度为6.25%的PRP可明显促进MSCs的增殖;ALP钙钴法染色阳性,胞质内见大量黑色颗粒沉积;ALP活性较对照组增高明显(P<0.01);茜素红染色可见钙结节形成;骨钙素和Ⅰ型胶原免疫组织化学染色阳性。结论:PRP对体外培养的鼠MSCs增殖及成骨分化活性具有显著的促进作用。     

富血小板血浆和浓缩生长因子对人牙周膜细胞增殖和成骨分化影响的研究

目的 研究富血小板血浆(PRP)和浓缩生长因子(CGF)对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及成骨分化的影响.方法 分离、培养并鉴定hPDLCs;制备人全血、PRP和CGF,分别进行血小板计数;分别将全血(对照组)、PRP(PRP组)和CGF(CGF组)与hPDLCs共培养,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测...     

富血小板血浆对骨髓间充质干细胞成骨向分化的作用

目的:观察不同浓度改良富血小板血浆(PRP)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨向分化的作用效果。方法:使用健康志愿者骨髓培养的3~4代BMSCs。将由该志愿者静脉采集的静脉血制备成改良PRP作用于BMSCs,使用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定矿化诱导7 d后BMSCs的ALP活性,通过茜素红染色观察矿化诱导21 d后BMSCs的矿化结节形成情况,并通过实时荧光定量PCR检测矿化诱导7 d后BMSCs中成骨相关基因Runx2表达的变化。结果:5%改良PRP明显提高了BMSCs的ALP活性,促进了其矿化结节的形成,并上调了BMSCs中Runx2基因的表达。结论:液氮冻融激活的改良PRP促进BMSCs成骨向分化具有浓度特异性。     

改良富血小板血浆促进乳牙牙髓干细胞成骨分化作用研究

目的：体外研究改良富血小板血浆（modified platelet-rich plasma,mPRP）促进人乳牙牙髓干细胞成骨分化的作用。方法：以α-MEM作为基础培养基,分别加入1％、2％、5％、10％4种不同浓度 mPRP 或者10％胎牛血清（对照）,对第4代SHED 连续培养并诱导矿化,碱性磷酸酶试剂盒检测 ALP 活性的变化,qRT-PCR 方法检测细胞内 RUNX2和骨钙素 mRNA 含量的改变。结果：不同浓度的 mPRP 均可以促进乳牙牙髓干细胞的 ALP 活性,且浓度为2％时 A 值最高;qRT-PCR 检测显示2％ mPRP 可以上调乳牙牙髓干细胞内 RUNX2及骨钙素 mRNA 的含量。结论：一定浓度的 mPRP 对乳牙牙髓干细胞的成骨分化具有一定的促进作用。     

富血小板纤维蛋白对牙髓干细胞体外增殖与分化特性的影响

目的:探讨不同浓度富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对犬牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)体外增殖及成牙本质/成骨分化能力的影响.方法:酶消法分离培养犬DPSCs,经流式细胞术和多向分化鉴定后分别在含自体PRF体积比为1/8、2/8、3/8的3种浓度的培养基中进行培养;采用MTT法检测1、2、3、4、5、6、7d各时间点的细胞增殖活性;实时定量PCR检测培养7、14、21 d时ALP、DSPP、DMPl mRNA的表达水平.结果:成功分离并获得克隆化培养的犬DPSCs,DPSCs具有成骨和成脂分化能力;3种浓度PRF均能促进DPSCs的增殖,1周内促增殖作用有时间依赖性而无PRF浓度依赖性;不同浓度PRF可通过上调成牙本质/成骨早期标志基因ALP、DSPP mRNA及晚期标志基因DMP1mRNA的表达来促进犬DPSCs成牙本质/成骨向分化,该效应既具时间依赖性又具有PRF浓度依赖性.结论:自体PRF可以不同方式同时促进犬DPSCs的增殖及分化.     

富血小板血浆对干细胞增殖及分化作用的研究进展

干细胞具有高度的自我更新、增殖和多向分化的潜能,可通过细胞分裂维持自身细胞群的大小,同时又可进一步分化为各种组织的细胞,从而构成机体复杂的器官。然而干细胞数量少,含量低,解决间充质干细胞快速增殖能力是当今组织工程学研究的热点问题。富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)是自体全血经离心后得到的,含有大量血小板和少量的其他血细胞,PRP中含有的生长因子,如血小板衍生生长因子、胰岛素样生长因子和转化生长因子等可共同作用于干细胞,影响干细胞的增殖和分化。而且PRP还能克服异源性排斥的缺陷,并且价格低廉,生物安全性高,并发症少。因此了解PRP对干细胞增殖及分化具有重要的意义。     

富血小板纤维蛋白的研究进展

富血小板纤维蛋白(Platelet-Rich Fibrin, PRF)是一种富含细胞因子和生长因子的自体来源的新型生物材料,被誉为新一代血小板浓缩物。本文就PRF的生物学特点及其医学研究作用作一综述。     

富血小板血浆在牵引成骨中的应用及研究进展

牵引成骨（distraction osteogenesis,DO）是应用特制的牵引装置,在被截断骨质的骨段之间产生持续缓慢的作用力——张力。此张力刺激骨间隙内新骨组织生成,从而修复因先天及获得性因素引起的骨缺损。DO技术飞速发展,并已广泛应用于临床,成为一种较为理想的骨缺损修复方法。尽管如此,DO同时存在一些不足之处,如牵引速度受限,治疗周期长,牵引器固定时间长引起的不便及并发症等。如何促进新骨组织生成,缩短治疗时间,一直受到学者关注。     

富血小板血浆促进成骨作用的研究进展

<正>富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)是自体全血经过梯度离心、分离得到的血小板浓缩物,血小板含量丰富。当血小板激活时,能释放多种生长因子,如血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF),转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β),血管内皮生长因子(vascular     

应用浓缩生长因子促进干细胞增殖及成骨分化修复口腔颌面部缺损的研究进展

浓缩生长因子（concentrated growth factor,CGF）作为最新一代血小板浓缩物,制备方法简单,来源广泛,安全性能高,含有高浓度生长因子,具有柔软纤薄的纤维蛋白网络结构,能够加速组织再生,被广泛应用于修复口腔颌面部软硬组织缺损,并逐渐成为再生医学及组织工程的研究热点。干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞,经诱导后可转化为成骨细胞,进而促进骨组织再生。研究证实,CGF可显著促进干细胞增殖及成骨分化。因此,文章就CGF的发展历史、主要成分及作用、在口腔颌面部缺损修复领域CGF对干细胞增殖及成骨分化的作用和总结展望四个方面进行综述,旨在为口腔颌面部软硬组织修复提供新的治疗思路。     

改良型与可注射型富血小板纤维蛋白对人牙龈成纤维细胞增殖及分化的影响

目的 探究改良型富血小板纤维蛋白（advanced platelet-rich fibrin, A-PRF）和可注射型富血小板纤维蛋白（injectable platelet-rich fibrin, i-PRF）对人牙龈成纤维细胞增殖及分化的影响,为两种血小板纤维蛋白制品促进软组织愈合的表观差异及临床效能评估提供实验数据参考。方法 观察A-PRF及iPRF显微及超微结构,测定血小板浓缩物生长因子（PDGF-BB,TGF-β1,EGF）的释放情况,将A-PRF及i-PRF作用于人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts, HGFs）,观察两者对HGFs的增殖影响及HGFs I型胶原蛋白（COL1）的表达情况,通过qRT-PCR进一步检测I型胶原蛋白α2(COL1α2)、纤连蛋白I (FN1)、转移生长因子β(TGF-β)、血小板衍生生长因子（PDGF）基因的表达。结果 i-PRF中白细胞层较A-PRF更宽,且白细胞数量更多,而A-PRF的纤维网状结构更为致密。A-PRF、i-PRF中的细胞因子随着时间的延长,在各时间点释放量逐渐降低,A-PRF中TGF-β1...     

富血小板血浆的三次离心法制备及其对脂肪干细胞增殖、成骨矿化的影响

目的 探索高效制备富血小板血浆(PRP)的方法,并观察不同体积分数的PRP对Beagle犬脂肪干细胞(ADSC)体外增殖及其向成骨细胞分化的影响.方法 抽取3只Beagle犬静脉血各40 mL,分别用传统的二次离心法和改良的三次离心法制备PRP,进行血小板计数分析.分别将体积分数为5%、100k、15%、20%的PRP...