吡那地尔对缺血心肌保护作用的实验研究

目的: 探讨吡那地尔对大鼠在长时间缺血心肌的保护效果。方法: 取大白鼠18只,随机分为空白组、对照组和实验组,每组6只。灌注液分别采用S.t Thomas高钾停跳液、S.t Thomas高钾停跳液+川穹嗪、S.t Thomas高钾停跳液+吡那地尔。取下心脏后即刻及间隔30 min、40 min和50 min分别注射灌注液1次。收集第2、第3、第4次灌注后的心肌过滤液,检查心肌酶谱肌酸磷酸激酶(CPK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)和肌钙蛋白I(CTNI),电镜观察心肌超微结构。结果: 实验组自第3次灌注后CPK、CKMB、CTNI低于对照组和空白组(P<0.05~P<0.01),心肌超微结构明显好于对照及空白组。结论: 吡那地尔对长时间缺血心肌有明显的保护作用。     

吡那地尔预处理对不同温度高钾停跳离体兔心的保护作用

目的:观察ATP敏感性钾通道开放剂(KCOs)吡那地尔(Pinacidil)药物预处理对不同温度高K 停跳液灌注离体兔心肌的保护效果. 方法:离体兔心24颗以Langendorff模型灌注10 min,随机分成3组:对照组(C组):低温高K 停跳;WP组和CP组为预处理组(停跳前以Pinacidil 10 μmol/L灌注15 min):分别为常温及低温高K 停跳. 全心缺血45 min, C组及CP组心脏停跳期间的温度为26～28℃,WP组为36～38℃. 三组恢复37℃ K-H灌注20 min. 分别测定心脏停、复跳时间,心率、心律、左心室内压(LVP)及收缩力、心肌腺苷酸及脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,检查心肌光镜结构. 结果:三组心脏停跳时间无明显差异,预处理组复跳迅速,两组间无显著差异,C组复跳缓慢,与预处理组比较差异有显著性(P<0.05);再灌注后CP组较WP及C组心肌收缩力与LVP恢复较快(P<0.05),而WP组LVP又比C组恢复好(P<0.05). 预处理组心肌组织腺苷酸,总腺苷酸(TAN)、细胞能荷(EC)显著高于C组(P<0.01),CP组又明显高于WP组(P<0.01或P<0.05),预处理组的心肌结构也明显好于C组,CP组又好于WP组. 三组MDA含量无显著差异. 结论:Pinacidil预处理能显著增强离体兔心肌缺血/再灌注的保护效果,对低温停跳心脏的保护效果更佳.     

吡那地尔后处理对缺血/再灌注大鼠离体心脏超微结构的影响

目的观察吡那地尔后处理对缺血/再灌注成年大鼠离体心脏超微结构和线粒体评分的影响。方法 24只健康雄性SD大鼠,采用Langendorff离体心脏灌流系统,建立缺血/再灌注损伤模型,随机分为4组（n=6）,正常组（N）、缺血/再灌注组（I/R）、缺血后处理组（IPO）、吡那地尔后处理组（Pi）,使用透射电子显微镜,观察各组心肌组织超微结构变化,并进行线粒体评分。结果电镜显示心肌细胞N组结构正常,I/R组损伤最严重,IPO组及Pi组损伤程度相似,介于N组与I/R组之间。N组、IPO组、Pi组线粒体评分均低于I/R组（P〈0.05）。IPO组和Pi组线粒体评分无统计学意义（P=0.247）。结论缺血/再灌注可对心肌细胞超微结构造成严重损伤,使线粒体评分分值增加,造成心肌损害,缺血及吡那地尔后处理均可减轻再灌注所致心肌细胞超微结构损伤,降低线粒体评分分值,可能产生心肌保护作用。     

吡那地尔对大鼠心肌缺血/再灌注时细胞凋亡及fas基因表达的影响

目的　探讨 ATP敏感性钾通道 (KATP)开放剂吡那地尔对大鼠心肌缺血 /再灌注时心肌细胞凋亡及 fas基因蛋白表达的调节作用 .方法　 4 0只大鼠随机分成 4组 :1假手术组 (仅穿线而不结扎 ,观察 6 .5 h) ;2缺血 /再灌注组(缺血 30 min,再灌注 6 h) ;3吡那地尔组 (缺血前 10 m in静推吡那地尔 0 .2 mg· kg- 1 ,然后缺血 30 min/再灌注 6 h) ;4吡那地尔 +优降糖组 (缺血前 10 min静推吡那地尔 0 .2 m g·kg- 1 +优降糖 3mg·kg- 1 ,然后缺血 30 min/再灌注 6 h) .称质量法计算心肌梗死范围 ,以缺口末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,以 SABC免疫组化法检测 fas蛋白的表达 .结果　缺血 /再灌注组出现显著的心肌细胞凋亡 ,伴有 fas蛋白表达指数升高 (P<0 .0 1vs假手术组 ) ;吡那地尔可抑制心肌细胞凋亡 ,并显著下调 fas蛋白的表达 (P<0 .0 5 ) ,而优降糖可取消吡那地尔的作用 .结论　细胞凋亡及 fas基因表达改变参与了心肌缺血 /再灌注损伤过程 ,KATP开放剂 (吡那地尔 )可抑制心肌细胞凋亡、下调 fas基因的蛋白表达 .     

匹那地尔对大鼠停跳心肌的能量保存作用

为探讨匹那地尔 (Pinacidil)冷超极化停搏液对大鼠缺血心肌的能量保存作用 ,并与传统高钾去极化停搏液(St.Thom as液 )进行比较 ,在改良 L angendorff离体大鼠工作心模型基础上进行低温缺血再灌注实验。把 4 0只大鼠随机分为 4组 ,每组 10只 ,S1组停搏液为 4℃ St.Thomas液 ,停搏时间为 1h;P1组为 4℃含匹那地尔的超极化停搏液 ,停搏时间为 1h;S2组停搏液同 S1组 ,停搏时间为 2 h;P2组停搏液同 P1组 ,停搏时间为 2 h。再灌注转为工作心 30 min后 ,取心肌标本置入液氮罐中 ,用荧光素酶法分别测定心肌 ATP含量。结果显示 :在保存心肌 ATP含量方面 P1组优于 S1组 (P<0 .0 5 ) ,而 P2组与 S2组相当。提示 :匹那地尔可作为心肌保护成分。含匹那地尔的冷超极化停搏液对大鼠停跳心肌保存作用优于或等同于传统高钾冷晶体停搏液     

吡那地尔联合硝酸甘油对兔缺血再灌注心肌的保护作用

目的 观察吡那地尔联合硝酸甘油对兔缺血再灌注心肌的保护作用。方法 50只家兔随机分为假手术组（SO）、缺血再灌注组(I/R)和硝酸甘油组（NG）、吡那地尔组（PN）、硝酸甘油+吡那地尔组(PN+NG)5组,每组10只。分别于再灌注即刻0（T0）、30（T30）、60（T60）、120min（T120）取静脉血2ml离心后用硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）,羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD）,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）、肌酸激酶（CK）;各组分别于再灌注后30（T30）、60(T60)、90(T90)、150min（T150）采集心室发展峰压（LVSP）等心室内压指标。各组于再灌注结束后原位结扎冠状动脉,伊文思蓝、氯化三苯基四氮唑双染缺血再灌注心肌后使用计算机辅助软件（Image Pro Plus, Media Cybernetics）计算心肌梗死面积。 结果 ①血生化指标：SOD：在各时间段SO、NG、PN组和NG+PN组均高于I/R组(P＜0.01或P＜0.05),NG+PN组高于NG、PN组(P＜0.01);MDA：在各时间段SO、NG、PN组和NG+PN组均低于I/R组(P＜0.01或P＜0.05),NG+PN组低于NG、PN组（P＜0.01）;NO：在各时间段SO、NG、PN组和NG+PN组均高于I/R组(P＜0．01或P＜0.05),NG+PN组高于NG、PN组(P＜001)。②心功能指标：LVSP：在各时间点I/R、PN、NG、PN+NG组较SO组明显下降（P＜0.01）;在T150时,I/R组LVSP较NG、NG+PN、PN组下降（P＜0.01）或（P＜0.05）;NG、PN组较NG+PN组下降（P＜0.01）。③心肌酶：CK:在各时间点NG、PN、PN+NG、I/R组较SO组均有显著提高（P＜0.01或P＜0.05）。④心肌梗死面积：再灌注结束后NG、PN、NG+PN组与I/R组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）,其中NG+PN组较NG、PN组缩小（P＜0.01）。结论 硝酸甘油、吡那地尔具有明显的抗兔心肌缺血再灌注药理性预适应的心肌保护作用,合用优于单用。     

匹那地尔对大鼠缺血心肌钙调控的作用

目的 :探讨大鼠缺血心肌再灌注 (I- R)损伤的钙调控机制及匹那地尔对心肌 I- R损伤的保护作用机理。方法 :取 SD大鼠 ,心室肌细胞酶解分离 ,心肌细胞静息 1～ 2 h后随机分为 4组 :对照组、高钾停搏液组、匹那地尔强化组、格列苯脲拮抗组。 4组细胞在 2 4℃下保存 2 h后 ,复氧、复灌 2 0 min同时测定 [Ca2 + ]i 瞬态变化、肌浆网内贮钙释放功能。结果 :经匹那地尔强化处理的心肌细胞在 I- R过程中 [Ca2 + ]i 瞬态变化恢复率明显高于高钾停搏液组 (90 .2 7%～ 95 .5 7% vs6 7.0 5 %～ 80 .11% ,P<0 .0 1)。肌浆网内贮钙释放能力 (173.15 %± 2 6 .0 1% )明显高于高钾停搏液组 (112 .0 0 %± 16 .93% ) (P<0 .0 1)。经匹那地尔强化处理的心肌细胞在咖啡因诱导的钙释放后 ,胞内钙离子浓度从高水平回复到舒张末静息水平的时间为 (3.2 0± 0 .71) ms,显著短于高钾停搏液组 (3.93± 0 .4 6 ) ms(P<0 .0 5 )和对照组 (4 .6 8± 0 .77) ms(P<0 .0 1)。结论 :匹那地尔通过肌浆网和细胞膜 Na+ /Ca2 +交换体功能来调节钙瞬态变化 ,减少细胞内钙超载使心肌细胞在 I- R过程中保持较好的钙调控功能。     

吡那地尔预处理对过氧化氢损伤心肌细胞保护作用的研究

目的　观察不同浓度的H2 O2 对心肌细胞的损伤作用 ,以及吡那地尔对H2 O2 损伤的保护作用。方法　胰酶消化法分离和培养KM乳鼠心肌细胞 ,按照 1× 10 5 ml的密度接种于 96孔培养板。分为正常对照组 ,H2 O2 组 ,观察 40 0、60 0、80 0 μmol LH2 O2 对心肌细胞处理 1、3、6、12、2 4h后MTT比色A值影响 ;用 40 0 μmol LH2 O2 处理心肌细胞后MTTA值的改变 ,以及 1× 10 - 4、1× 10 - 5、1× 10 - 6 mol L吡那地尔对心肌细胞保护作用的观察。结果　H2 O2 对心肌细胞的损伤作用 ,随H2 O2 浓度的增加和作用的时间的延长而加重。以 1× 10 - 5、1× 10 - 6 mol L吡那地尔预处理可以提高经H2 O2 处理心肌细胞的MTTA值 ,其中以 1× 10 - 6 mol L的浓度最佳。结论　心肌细胞对H2 O2 引起的损伤呈明显的剂量及时间依赖关系。小剂量的吡那地尔 (1× 10 - 6 mol L)预处理可明显减轻H2 O2 对心肌细胞的损伤。表明吡那地尔预处理对心肌的过氧化损伤有保护作用。     

含氢保存液降低大鼠供心保存过程中氧化应激和炎性损伤

目的 观察含氢保存液对大鼠供心保存过程中氧化应激和炎性损伤的影响。方法 32只SD大鼠随机分4组(n=8):对照组(保存液为HTK液),H1组(保存液为含氢浓度约0.2 mmol/L的HTK液),H2组(保存液为含氢浓度约0.4 mmol/L的HTK液),H3组(保存液为含氢浓度约0.8 mmol/L的HTK液)。采用Langendorff离体大鼠心脏灌注法,心脏分别在各组保存液中冷存(4℃) 6 h,复灌后硫代巴比妥酸法检测心肌组织中MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测心肌组织中SOD活力,ELISA法检测心肌组织中8-羟基脱氧鸟苷、TNF-α、IL-6含量。结果 供心冷保存(4℃) 6 h后,H1、H2、 H3组MDA含量低于对照组(P<0.01,P<0.05)。H2、H3组SOD活力高于对照组(P<0.01,P<0.05);对照组8-羟基脱氧鸟苷水平高于H1、H2、H3组(P<0.01),对照组TNF-α、IL-6含量也高于H1、H2、H3组(P<0.01,P<0.05)。结论 含氢保存液能降低供心保存过程中的心肌氧化损伤,减少炎性细胞因子的产生。     

长冷缺血时间对心脏移植供心超微结构的影响

 目的 观察长冷缺血时间对离体供心超微结构的影响,为临床心脏移植供体的合理利用提供资料。方法 将离体供心置于低温器官保存液（the University of Wisconsin solution,UW液）中保存,分别于冷缺血时间6、8、10、12及14 h取部分左心室心肌和冠状动脉在电镜下观察超微结构的变化。结果 供心缺血时间6 h,心肌细胞及冠状动脉内皮细胞超微结构基本正常。随着缺血时间的延长,心肌细胞及血管内皮细胞出现损伤性改变。供心缺血超过12 h,心肌肌丝断裂,心肌细胞出现局灶性坏死,血管内皮细胞完全脱落。结论 心肌超微结构的改变是衡量供心质量的重要指标。供心冷缺血时间10 h以内,心肌损伤程度较轻,供心可用于移植。缺血时间超过10 h,心肌超微结构出现不可逆损伤改变明显增多,供心将不宜用于移植。     

四逆汤对供心冷保存保护作用的实验研究

目的探讨四逆汤对供心冷保存的保护作用,以达到延长供心保存时限的目的．方法新西兰大白兔16只随机分2组,A组为对照组,B组为实验组。B组取心前连续四逆汤汤剂灌胃3d,A组灌注及保存用Uw液、B组则另加用四逆汤注射液。保存6h后在langendoff模型上A组用氧合的KHB液、B组用KHB液加四逆汤注射液灌注30min。以功能、代谢和结构等指标评价供心恢复情况。结果再灌注至恢复稳定心跳节律的时间、稳定心跳时的心率、心肌收缩力恢复情况、再灌注0、5、10、15、30min各时点的冠脉流量和心肌耗氧量、再灌注前和再灌注末ATP、MDA及SOD含量、再灌注末超微结构等各项指标B组均优于A组。结论用四逆汤对供心作预处理,并在灌洗液、保存液和再灌注液中加入适量的四逆汤,对供心冷保存有保护作用,值得临床应用。     

腺苷A1受体激动剂预处理延迟效应保护大鼠心脏的实验研究

目的探讨腺苷A1受体激动剂预处理延迟效应对大鼠心脏的保护效果.方法A组以高选择性A1受体激动剂CCPA预处理Wistar大鼠24 h后制成离体心脏,4℃改良St.Thomas液,诱导心脏停搏,并放入该液中低温保存4 h,再灌注1 h.观察心功能恢复率、心肌ATP、Ck-Mb释放量.另设单纯改良St.Thomas液保存对照组(C).结果A组左室内压上升与下降最大速率恢复率(±dp/dtmax,%)为(62.83±17.27),(66.81±18.99),心肌ATP含量10-3μmol/wet·g(3.67±1.42);而B组分别为(40.41±18.29),(44.70±25.14),(1.46±0.54).A组都明显高于B组,差别均有显著性(P＜0.01或P＜0.05).结论以腺苷A1受体激动剂预处理延迟效应能改善离体大鼠心脏的保存效果.     

腺苷A1受体激动剂延迟预处理保存大鼠心脏的实验研究

目的 :探讨腺苷A1受体激动剂延迟预处理对大鼠心脏的保护效果。方法 :实验组 (P组 )以高选择性A1受体激动剂CCPA预处理Wistar大鼠 2 4h后处死 ,分离心脏并置于 4℃改良St.Thomas液中诱导心脏停搏 ,然后放入该液中低温保存 4h ,再灌注 1h。观察心功能恢复率、心肌ATP、Ck mb释放量。另设单纯改良St.Thomas液保存对照组 (C组 )。结果 :P组左室内压上升与下降最大速率恢复率 (±dp/dtmax,% )为 62 .83± 17.2 7,66.81± 18.99,心肌ATP含量 (10 -3 μmol/g) 3 .67± 1.42 ;而C组分别为 40 .41± 18.2 9,44 .70±2 5 .14 ,1.46± 0 .5 4。P组都明显高于C组 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论 :以腺苷A1受体激动剂延迟预处理能改善离体大鼠心脏的保存效果     

含二氮嗪的Celsior液和HTK液对移植鼠心脏超时低温保存效果的分析

目的评价含二氮嗪的Celsior液和HTK液对移植鼠心长时间低温保存的效果。方法将32只同种系雄性SD大鼠随机分为Celsior液组和HTK液组，每组8对。采用改良Heron法大鼠颈部异位心脏移植术建立模型。供体麻醉抗凝后，4℃ stanford停搏液灌注心脏停跳，制备离体鼠心，保存于4℃两种不同保存液中10h。之后移植于受体，成功复跳后观察1h，留取标本并测定心率（HR）、心肌含水量（MWC）、心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、心肌酶谱[乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）]，并观察心肌超微结构。结果两组大鼠心脏复跳后均跳动有力、心律齐，与Celsior液组比较，HTK液组大鼠HR明显较慢（P〈005），cTnⅠ、LDH及CK含量明显较高（P〈005），但MWC并无明显变化（P〉0．05）。心肌超微结构显示，Celsior液组大鼠心肌结构清楚，肌纤维排列较整齐，肌节清晰，偶见肌丝溶解；线粒体肿胀不明显，嵴结构相对清楚。HTK液组大鼠心肌结构尚清楚，肌纤维疏松，个别区域肌丝肌节溶解，线粒体轻度肿胀，嵴排列尚整齐，偶有空泡变性。结论含二氮嗪的Celsior液和HTK液低温长时间（10h）保存离体心脏均具有良好的心肌保护效作用，而且相对于HTK液，Celsior液的保存效果更好，可作为临床上心脏移植手术中心脏保存的一种有效的方法。     

卡维地洛治疗心力衰竭对大鼠心肌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响

目的 从细胞凋亡角度探讨卡维地洛治疗心力衰竭的机制。方法 采用结扎冠状动脉复制慢性心功能不全模型，观察卡维地洛治疗心力衰竭，对心肌细胞凋亡率、bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。结果 卡维地洛干预心功能不合可以剂量依赖地使心肌细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低，使bcl-2蛋白表达水平增加。特拉唑嗪对心肌细胞凋亡和Bax、bcl-2的蛋白表达水平无影响。结论 抑制Bax蛋白表达水平，同时增加bcl-2蛋白表达水平，从而抑制心肌细胞凋亡，是卡维地洛治疗心力衰竭的重要机制之一。卡维地洛抑制心肌细胞凋亡的效应与α1－受体阻滞作用无关。     

木犀草素对冷保存心脏功能及心肌细胞凋亡的影响

目的研究木犀草素对UW液低温保存离体大鼠心脏的功能及对心肌细胞凋亡的影响。方法将40只成年SD大鼠随机分成2组（n=20）：对照组（UW组）及实验组（添加30μmol/L木犀草素的UW液）。利用Langendorff离体心脏灌流法,观察离体心脏冷保存18h复灌60min后心率、左心室最大收缩压、左心室压力变化率、心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果与对照组比较,实验组复灌期心脏的收缩功能（LVPSP,＋dp/dtmax）、舒张功能（-dp/dtmax）及心率高于对照组差异有统计学义意义（P〈0.05）;心肌细胞的凋亡及促进凋亡Bax基因的表达均明显低于对照组;而抑制凋亡Bcl-2基因的表达均明显高于对照组。结论木犀草素能显著改善UW液低温保存离体大鼠心脏的功能,对心肌细胞凋亡有明显抑制作用。     

腺苷预处理对大鼠离体心脏长期保存的心肌保护作用

目的观察腺苷预处理对大鼠离体心脏长期保存的心肌保护作用。方法将24只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组6只,分成空白对照组、预处理组、保存组和预处理后保存组。离体大鼠心脏用Langendorff装置灌注稳定后,分别给予腺苷预处理后再灌注、心脏保存24 h后再灌注及腺苷预处理后再经24 h保存后再灌注60min,观察左室收缩功能的恢复率、冠脉回流液中肌酸肝激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenage,LDH)的浓度以及心肌形态结构改变。结果预处理组同空白对照组相比,各项指标差异无显著性(P>0.05)。单纯保存组同对照组相比,左室收缩功能明显减弱,冠脉回流液中心肌酶的漏出明显增加,光镜及电镜观察心肌损伤严重。而经腺苷预处理后再保存组,左室收缩功能的恢复率较单纯保存组有明显提高52.1%±7.4%vs35.9%±4.8%,P<0.05,心肌酶漏出明显减少[CK:(302±42)IU/Lvs(632±118)IU/L;LDH:(28±8)IU/Lvs(78±11)IU/L,P<0.05],光镜及电镜观察,心肌损伤程度明显减轻。结论腺苷预处理过程本身对心肌细胞无明显损伤,是比较安全的;腺苷预处理对离体心脏长期保存有明显的保护作用。