单核细胞增生李斯特菌研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Lm)是一种重要的食源性致病菌,全国各地都对Lm在食品中的污染情况进行调查,建立简单快速、具有良好的稳定性和重复性、灵敏度高、特异性强的检测方法显得非常重要。本文就Lm的病原学、流行病学及检测方法等的研究进展进行介绍。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法研究

[目的 ]　建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。　 [方法 ]　以miniVIDAS仪结合API系统 ,将该法与传统方法进行比较。　 [结果 ]　该方法能检出 <10个 /mL模拟样品中的单核细胞增生李斯特氏菌 ,与食品中常见的细菌无交叉反应 ,能对非单核细胞增生李斯特氏菌作出正确鉴定。在 4天内能作完全鉴定结果。对 2 2 6份实样的检测 ,检出率为 11.5 %。　 [结论 ]　以miniVIDAS仪结合API系统建立的方法具有特异性好、灵敏度高、快速简便的特点 ,是一种较好的检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法     

生鲜肉中单核细胞增生李斯特菌检测情况分析

目的观察15份生鲜肉中单核细胞增生李斯特菌检出情况,让人们认识了解该菌在生鲜肉中感染率高,危害大。方法环境卫生评价人员随机采样,生鲜肉共计15份,按照GB4789．30—2010食品微生物学检验一单核细胞增生李斯特菌检验方法进行检测。结果15份生鲜肉样品中有4份感染单核细胞增生李斯特菌。结论人们在食用生鲜肉时必须充分加热灭菌,以防感染单核细胞增生李斯特菌致病。     

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌。本文对当前检测方法：传统分离技术、显色培养基鉴定技术、数值分类鉴定与新型计数技术、免疫检测技术以及分子检测技术作了简要概述；指出了单核细胞增生李斯特菌传统检测耗时，免疫学检测单克隆抗体制备困难，分子检测易产生假阴性和假阳性等若干问题；最后对检测技术未来的发展作了展望。     

进口三文鱼单核细胞增生李斯特菌污染检测

目的对2003~2006年由北京口岸挪威进口的三文鱼进行单核细胞增生李斯特菌污染情况监控,并对分离的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型。方法采用美国食品药品管理局颁布的检测方法对单核细胞增生李斯特菌进行分离和血清分型。结果挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的检出率为1.2%~6.3%,在2003~2006年呈下降趋势;血清分型结果显示,分离自三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的血清型主要是1/2a、1/2b和4b型,分别占分离菌株的85%,6%和6%。结论首次对分离自挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型,所分离的菌株中97%是引起人类李斯特菌病的菌株。     

深圳南山区食品中单核细胞增生李斯特菌检测

目的了解各类食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况。方法以GB/T4789.30-2003方法为基础,分离培养改用PALCAM培养基,生化鉴定改用API生化试剂条,结合VIDS免疫荧光或实时荧光PCR等试验进行确证。结果从生肉及水产品中共检出5株。结论PALCAM-Listeria分离培养基和API Listeria生化鉴定试剂条在细菌的分离及鉴定中起关键作用,实时荧光PCR和VIDS试验从基因学和免疫学上确证。     

应用Taqman实时PCR法检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌

目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的实时PCR方法。方法以hlyA基因为靶标,建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC 54004,制备不同浓度的纯菌液,用实时PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率。进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g猪肉样本1.3×100、1.3×101、1.3×102、1.3×103、1.3×104、1.3×105和1.3×106CFU。分别在增菌0、4、8、12、18、24、30、36和46 h取1 ml培养液,提取DNA进行实时PCR检测,并用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性。采集24份市售猪肉样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出率。结果建立的实时PCR法特异性好,对纯菌液的检出限为1.3×103CFU/ml。人工染菌样本增菌24 h后,实时PCR检出限1.3 CFU/25 g,PCR及传统方法达到这一检出限需要增菌46 h。根据增菌24 h的检测结果,建立实时PCR样本标准曲线。24份猪肉样本,实时PCR检出17份阳性,阳性率70.83%(17/24),与PCR和传统方法的阳性率一致。根据所得的样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌。结论所建立的实时PCR具有快速简便、敏感特异等优点,整个操作可在27 h内完成,适用于猪肉中单核细胞增生李斯特菌的快速定量检测。     

单核细胞增生李斯特菌研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocyto-genes)是一种人畜共患病的病原菌。李斯特菌属内共有6种菌:单增李斯特菌(L.monocytogenes)、绵羊李斯特菌(L.ivanovii)、西尔李斯特菌(L.seeligeri)、英诺克李斯特菌(L.innocua)、威尔李斯特菌(L.welshimeri)和格式李斯特菌(L.grayi);其中单增     

显色培养基在单核细胞增生李斯特菌快速检测中的应用研究

目的:研究显色培养基对单核细胞增生李斯特菌的检测效果,探讨建立新型快速检测方法。方法:检测按国标GB4789-33程序进行。结果:人工污染样品和实际样品检测中,显色培养基CHROM agar L isteria和HKL isteria与传统平板OXA和MMA可以达到相同的检测限和灵敏度,且具有更高的特异性。结论:用显色培养基检测单核细胞增生李斯特菌是一种新途径,可大大提高检测效率。     

食源性单核细胞增生李斯特菌的自动化核糖体基因分型

[目的]为了解我国食品来源的单核细胞增生李斯特菌(Listeria Monocytogene,LM)的遗传物质多态性特征,探索LM鉴定及溯源新方法. [方法]运用自动化的核糖体基因分型系统(RiboPrinter),用EcoRI酶,对我国食品污染物监测网来源的67株LM进行了分子分型研究. [结果]67株菌均被鉴定为LM;并获得了13种RiboPrinter 核糖体基因条带型,除2种被系统判定为新条带型,另外11种分别与杜邦数据库中的DUP-1038、DUP-1039、DUP-1042、DUP-1044、DUP-1045、DUP-1052相似. [结论]RiboPrinter分型结果为建立我国LM分子分型数据库积累了一定的数据和经验,但由于菌株的来源地及数量都有限,因此尚不能看出核糖体基因型是否有明显的地域分布特征.     

荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌

目的研制荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌。方法采用双抗夹心免疫吸附法筛选7株抗单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,获得最佳配对抗体10E7H6和10A11。以生物素化的10A11为检测抗体,10E7H6为捕获抗体,建立了基于链霉亲和素标记荧光微球为检测探针的荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌。结果该方法中最佳捕获抗体浓度为10μg/mL,最佳检测抗体浓度为5μg/mL,反应最佳pH为7.4;在该条件下,单核细胞增生李斯特菌最低检测限为10~5 CFU/mL,比传统酶联免疫吸附法提高了两个数量级;与李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌有一定的交叉反应,与其他非李斯特菌属的主要致病菌无显著交叉反应。结论该方法可用于纯培养液中单核细胞增生李斯特菌的检测,也可用于李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌的免疫学快速筛查检测。     

快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究

目的：为产单核李斯特菌提供了一个方便快捷切实有效的检测技术。方法：采用胶体金标记产单核李斯特菌抗体制备免疫层析检测试剂，通过免疫层析作用对产单核李斯特菌进行检测。结果：通过选用柠檬酸钠改良法制备胶体金，测定其最适结合蛋白浓度为28μg／ml，构建起免疫层析检测试剂和检测方法，检测了冷冻猪肉、牛奶、冰激凌以及不同稀释度的产单核李斯特菌标准样品，灵敏度达87．5％，具有良好的重现性。结论：免疫胶体金层析法用于快速检测产单核李斯特菌是可行的。     

逆转录-聚合酶链反应检测风疹病毒基因

针对风疹患者发病早期血清中特异性风疹IgM抗体阳性率低的特点 ,以及对胎儿风疹病毒感染检测的需要 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)直接从风疹减毒活疫苗BRDⅡ株、风疹GOS株、临床风疹患者的含漱液和咽拭子中检测出 411bp特异性片段 ;而麻疹、流行性腮腺炎、流行性感冒病毒均未检测出相应片段。通过对RT PCR一次产物的再次扩增 ,可以使检测的灵敏度达到 0 1TCID50 。该技术可作为风疹酶联免疫吸附试验 (ELISA)的一种补充 ,同时对控制先天性风疹综合征与优生优育工作具有积极的作用。     

HIV-1结构基因多重巢式RT-PCR方法检测

目的 建立一种简便、可靠的可用于诊断人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的多重巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法 针对广西壮族自治区HIV-1主要流行毒株pol、gag和env基因区设计PCR引物,建立同时扩增3个基因的多重巢式RT-PCR方法,检测118例HIV-1阳性样本和48例HIV-1阴性样本,并与免疫印迹法检测结果比较,对多重巢式PCR方法进行评价.结果 多重巢式RT-PCR方法的检测下限为250 copies/mL,灵敏度和特异度分别为96.6%,97.9%,重复性为98.3%,与免疫印迹法的一致性为97.6%.结论 本研究建立的多重巢式RT-PCR检测方法具有高灵敏度、高特异度、重复性好、快速等优点,可作为一种快速、简便、可靠的HIV-1感染辅助诊断方法.     

双荧光探针实时RT-PCR检测不同样品中甲型H1N1病毒核酸的临床意义

目的采用双荧光探针实时RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒感染患者不同样品中H1N1病毒核酸,了解其对甲型H1N1流感的快速诊断及病程进展的关系。方法用双荧光探针实时RT-PCR法分别检测118例H1N1患者发病48 h后和（或）恢复期咽拭子、血浆及下呼吸道分泌物中H1N1病毒核酸。结果 118例H1N1患者发病48 h后咽拭子H1N1病毒核酸阳性;57.5%（23/40）重症患者下呼吸道分泌物中H1N1病毒核酸阳性,恢复期3例阳性;37.5%（15/40）重症患者血浆中检测到H1N1病毒核酸。结论双荧光探针实时RT-PCR法可以快速检测H1N1病毒感染,血浆中H1N1病毒核酸阳性可能是重症患者的标志。     

荧光定量RT-PCR定量检测诺如病毒方法的建立及其评价

目的:建立荧光定量RT-PCR快速检测诺如病毒GⅠ、GⅡ的方法,以用于患者标本的检测、分型及绝对定量。方法:经过优化筛选出最佳反应体系及反应条件,建立荧光定量RT-PCR快速检测诺如病毒的方法;制作两种不同型号的荧光定量PCR仪的绝对定量标准曲线,并从灵敏度、特异性、重复性、对患者标本检测能力等方面对建立的方法进行综合评价。结果:该方法在两种不同型号的仪器上对108~101copy/μl范围内的病毒,具有良好的线性关系,最低灵敏度为101copy/μl。与容易引起腹泻症状的轮状病毒、腺病毒、星状病毒、肠道病毒均无交叉反应;诺如病毒GⅠ、GⅡ两种常见感染人类的亚型之间无交叉反应。批内及批间重复性实验的标准差在0.10~0.59、变异系数在0.43%~2.84%之间,显示该方法重复性较好。用该方法共检测腹泻患者粪便标本181份,其中33份诺如病毒阳性,随机抽取10份阳性标本测序分析,结果证实均为诺如病毒。结论:本研究建立的诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法,灵敏度、特异性、重复性、对患者标本的检测能力等均显示较好的结果,且能快速区分GⅠ、GⅡ两种感染人类的重要亚型,在诺如病毒的快速检测中有着实际推广意义。     

2010年桂林地区手足口病病原体RT-PCR检测结果分析

目的 了解2010年桂林地区手足口的病原体流行特征,确定其型别分布情况.为手足口病防控提供科学依据.方法 收集临床诊断为手足口病病例粪便样本1 144份,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR法)对样本病毒RNA进行总肠道病毒核酸,以及EV71和CoxA16特异性核酸检测.结果 1144份手足口病病例粪便样本中查出总肠道病毒核酸检测阳性823份,阳性率71.94％ (823/1 144);EV71阳性率44.32％ (507/1 144),CoxA16阳性率1.74％ (20/1 144),非EV71、CoxA16的其他肠道病毒阳性率25.87％ (296/1 144).结论 引起桂林地区2010年手足口病流行的病原体主要是肠道病毒EV71型.     

用RT-PCR法鉴定人冠状病毒SARS、229E和OC43

目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物,然后通过对扩增片断测序、限制性酶切方法和根据扩增片断的长度进行鉴定。结果:两种方法均能扩增到与预期目标一致的片断,特异性和灵敏度高,能快速区分3种病毒。结论:这些方法将为了解冠状病毒在呼吸道感染中的作用提供一个有利的工具。     

衢州市2009年流感病毒荧光定量RT-PCR检测结果分析

目的了解衢州市流感病毒的感染情况,为制定预防和控制流感策略提供依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法,对衢州市692例流感标本进行检测。结果共检测出甲1型流感25份,阳性率3.61%;甲3型流感117份,阳性率16.91%;乙型流感18份,阳性率2.6%;甲型H1N1流感242份,阳性率34.97%。结论衢州市流感形势不容乐观,需要有关部门加大对流感的防控力度。     

TaqMan-MGB荧光定量逆转录聚合酶链反应快速检测甲型流感病毒

目的:建立一种特异、灵敏、快速检测甲型流感病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法。方法:根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物软件在甲型流感病毒膜蛋白(MP)基因的保守区设计与筛选引物和MGB探针,对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性和敏感性。并通过对疑似流感临床样本的检测,以评价该方法的实际应用价值。结果:该方法对甲型流感病毒的检测有高度的特异性、通用性,对乙型流感、麻疹、风疹、腮腺炎、RSV和腺病毒等其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.1TC ID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需2.5 h左右,且操作简便,重复性好。结论:本研究建立的MGB荧光定量RT-PCR的方法具有特异、敏感、快速的特点,适用于甲型流感疫情的应急快速检测。