丁酸钠对重组CHO细胞生长及产物EPO表达的影响

在CHO－S－SFM II无血清培养基中维持培养重组CHO细胞,考查添加丁酸钠对细胞生长,糖代谢及产物EPO表达的影响,丁酸钠浓度达到2mmol/L时完全抑制了细胞的生长,同时,丁酸钠的添加也降低了葡萄糖比消耗速率（30％左右）,在本培养系统中,丁酸钠并不能促进产物的表达,但有助于维持EPO表达的稳定性。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中，低乳酸浓度(1．1～6．14mmol／L，相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响，主要的代谢特征基本不变；在高乳酸浓度(13．1～41，58mmol／L，相应渗透压为701～944kPa)下培养，细胞生长受到抑制，代谢发生明显变化。乳酸对cHsE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中，维持正常的pH，7mmol／L的乳酸浓度，不会明显抑制CHSE细胞的生长。     

柠檬酸对 CHO 细胞生长和代谢的影响

研究了重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)批培养过程中柠檬酸对细胞生长和代谢的影响。结果表明:柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12 mm o l/L柠檬酸的处理组细胞的葡萄糖比消耗速率(QG lc)降低了37.5%,渗透压提高了10.0%,乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值增加了27.0%,氨生成量与谷氨酰胺消耗量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地被捕获在G 1期,阻碍细胞的DNA合成,抑制细胞增殖,并促进蛋白的表达。     

不同理化因素对肌肉疲劳影响的探讨

目的：探讨不同镁离子浓度、不同温度、前负荷对肌肉疲劳的影响及其可能机制。方法：制备蛙腓肠肌标本,在持续通氧灌流任氏液条件下,采用最大刺激强度,连续单刺激经过不同方法处理的蛙腓肠肌,以最大张力下降50％所需时间作为观察肌肉疲劳指标。结果：镁离子浓度为1mmol/L、10mmol/L均可延长蛙腓肠肌达到疲劳的时间,但作用效果不显著,镁离子浓度为5mmol/L对延长最大张力下降50％所需时间具有显著性作用（P＝0．05）。与正常对照组比较,前负荷分别为10g和20g组最大张力下降50％所需时间明显延长（P＜0．05）,但两实验组差异无统计学意义（ P＞0．05）。温度为7℃蛙腓肠肌最大张力百分比下降速率相对减缓,温度为37℃下降速率相对增加。结论：随着镁离子浓度上升,抗肌疲劳时间延长,达最适浓度时,作用最强。适当增加前负荷可延长抗肌疲劳时间,高温比低温更容易诱发肌疲劳。     

营养物质及代谢产物对杂交瘤细胞生长的影响

研究了葡萄糖、谷氨酰胺、氨和乳酸对鼠鼠杂交瘤细胞G_5F_4生长的影响。实验发现,对于G_5F_4细胞,最适宜的葡萄糖和谷氨酰胺浓度范围分别为21～41 mmol/L和6～10mmol/L。乳酸是细胞生长的弱抑制剂,在正常培养产生的乳酸范围内(1.5～2.0 mg/InL),对细胞生长无明显抑制作用。氨是一种强抑制剂,其浓度在2.5～5.0mmol/L内,表现出较明显的抑制作用;当其浓度超过5.0 mmol/L时,有严重的抑制作用,细胞生长基本停止。     

大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株生长和产乙酸规律

大肠杆菌DH5α的耐乙酸突变株DA19在复合培养基中有生长优势，最大比生长速率提高，产乙酸减少，对乙酸的耐受力增加。在基本培养基中DA19生长优势更加明显，消耗葡萄糖速率加快，单位菌体产乙酸得率YA/X比DH5α低，以消耗葡萄糖为基准的菌体得率YX/G提高。在添加乙酸的基本培养基中，DA19细胞浓度高于DH5α，更快利用葡萄糖。DA19在高葡萄糖浓度下(102g／L)也能良好生长，菌体浓度达26g／L，YX/G为0．257g／g。在变速补料分批培养中，DA19可以有效地控制乙酸的生成，细胞浓度达到20g／L，YX/G为0．360g／g，为其在高密度培养中的应用奠定了基础。     

重组巴斯德毕赤酵母高密度培养中铵离子浓度的影响

采用Mut^s表型的重组毕赤酵母生产血管生长抑制素，表达阶段流加甘油—甲醇混合碳源以提高菌体密度和血管生长抑制素的表达水平，菌体密度可达174g／L，约是表达阶段采用甲醇为单一碳源的发酵过程的3倍。菌体密度的提高导致表达阶段发酵液中铵离子浓度下降很快，当发酵液中的铵离子浓度低至40mmol／L时，影响了血管生长抑制素的表达。改变pH调节方式并在发酵后期添加25mmol／L(NH4)2SO4使发酵液中铵离子浓度维持在150mmol／L以上，血管生长抑制素的表达产量达到108mg／L。     

不同葡萄糖浓度对小鼠胰岛β细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨不同葡萄糖浓度对小鼠胰岛β细胞株MIN-6细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度葡萄糖培养MIN-6细胞72h,MTT法观察不同浓度葡萄糖作用后MIN-6的细胞活性增殖率,Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果低浓度（5.6mmol/L、11.1mmol/L）及高浓度葡萄糖（33.3mmol/L）作用72h后可抑制MIN-6细胞的生长;5.6mmol/L、11.1mmol/L、33.3mmol/L组处理72h后,细胞凋亡明显（P〈0.05）。结论低浓度（5.6mmol/L）及高浓度（33.3mmol/L）葡萄糖均可抑制小鼠MIN-6细胞增殖并使其凋亡增加。     

重组毕赤酵母表达猪胰岛素前体代谢参数分析和动力学模型

采用发酵过程参数相关分析理论,分析了毕赤酵母在不同发酵阶段利用不同碳源时的生理代谢参数变化特征。同时,研究了不同比生长速率下重组毕赤酵母表达猪胰岛素前体补料分批发酵过程,建立蛋白表达阶段的细胞生长非结构模型,结果表明:比生长速率和甲醇浓度符合Monod方程,最大比生长速率(μmax)为0.101h-1,基质的半饱和常数(Ks)为0.252g/L,细胞得率系数YX/S=0.386g/g,细胞维持系数m=0.011g/(g·h)。当比生长速率为0.016h-1时猪胰岛素前体(PIP)最大比形成速率(qp,max)达0.098mg/(g·h)。该模型能较好预测毕赤酵母表达阶段细胞生长和PIP表达的发酵趋势,用其控制发酵过程,目标蛋白PIP产量为优化前的1.5倍,达0.976g/L。     

青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度和作用不同时间的青蒿素对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用。方法取对数生长期的细胞接种于96孔板,给予不同浓度的青蒿素0．10．20．40．60．81．01．2 mmol／L）处理,给药24 h后在倒置显微镜下观察细胞形态的改变,并用MTT法检测药物的细胞毒作用。结果倒置显微镜下,细胞随药物浓度和作用时间的增加对细胞的毒性作用增强,细胞数目均有所减少,多数细胞体积固缩变小,失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形。 MTT结果显示,不同浓度青蒿素对肿瘤细胞的抑制效果呈现出浓度和时间的依赖性。1．2 mmol／L的青蒿素,作用细胞24 h后的抑制率达到了81．33％。结论青蒿素在体外对肝HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈现一定的时间和剂量依赖性。     

谷氨酰胺对杂交瘤细胞生长代谢的影响

研究了不同浓度的谷氨酰胺对分泌抗小细胞肺癌单克隆抗体的2F7杂交瘤细胞生长、葡萄糖消耗、乳酸及氨的生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中,用含不同浓度谷氨酰胺的培养液培养2F7杂交瘤细胞,培养条件为pH 7.2～7.4,温度37℃,5%CO_2、95%空气。实验表明,适宜于2F7杂交瘤细胞生长的谷氨酰胺浓度为2.5 mmol/L,谷氨酰胺浓度与细胞的葡萄糖消耗呈反比,与乳酸生成浓度呈反比,与氨的生成浓度呈正比。     

人源促红细胞生成素在Müller细胞中拮抗谷氨酸毒性作用的研究

目的观察高浓度谷氨酸刺激条件下Mtiller细胞的变化以及促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）的保护作用是否与维持Mtiller细胞的谷氨酸转运功能相关。方法用M1Tr法检测不同浓度谷氨酸处理大鼠原代视网膜Mtiller细胞和大鼠视网膜Miiller细胞系rMC一1所引起的细胞活力变化。选择能显著降低细胞活力的最低谷氨酸剂量建立细胞损伤模型,并研究不同浓度EPO干预后细胞活力的变化。TUNEL（terminal deoxynucleotidyl transferase—mediated dUTP nick—end labeling）法检测各组细胞凋亡情况,Western印迹法检测谷氨酸转运体GLSAT在蛋白水平的变化。结果无论是在原代大鼠Mtiller细胞还是rMC-1细胞系中,谷氨酸的细胞毒性作用均呈剂量依赖趋势。原代Miiller细胞中,12mmol／L谷氨酸使细胞活力降低15．5％,10mmol／L谷氨酸使rMC-1细胞活力降低15．6％;此时细胞凋亡明显增加,GLAST表达降低。0．2U／ml和0．5U／mlEPO分别对原代Mfiller细胞和rMC-1细胞的保护作用最佳,细胞凋亡数量显著减少,并防止了GLAST蛋白水平的降低。结论体外高浓度谷氨酸可损伤Mtiller细胞,EPO可以通过维持谷氨酸转运体GLAST水平等机制维持Mfiller对谷氨酸的正常摄取、抑制凋亡发生。     

L-精氨酸在人肝癌细胞生长增殖中的作用

目的 :探讨L 精氨酸在人肝癌细胞生长增殖中的作用。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)比色法和流式细胞仪 ,检测和分析不同浓度L 精氨酸作用下体外培养人肝癌细胞株QGY 770 3的生长、增殖和凋亡情况。结果 :(1)浓度在4mmol/L以下的L 精氨酸 ,轻度促进肝癌细胞的生长 ;4mmol/L以上浓度的L 精氨酸 ,则抑制肝癌细胞的生长增殖 ,且具有浓度和时间依赖性。 (2 )高浓度L 精氨酸 (16mmol/L和 6 4mmol/L)可诱导肝癌细胞凋亡 ,凋亡率较对照组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,并且使肝癌细胞增殖指数较对照组显著降低 (P <0 .0 5 )。结论 :低浓度L 精氨酸促进肝癌细胞的生长 ;高浓度抑制肝癌细胞的生长增殖 ,并可诱导肝癌细胞凋亡。     

丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用

目的: 观察丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用。方法: 以1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理Eca-109细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞凋亡的形态,四甲基噻唑氮蓝法检测抑制细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果: Eca-109细胞经丁酸钠处理后:光镜下观察细胞变小、变圆,部分从培养瓶壁上脱落下来;电镜下细胞核体积缩小,染色质浓缩聚集于核膜处;细胞增殖受到明显抑制,1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理24h、48h和72h后,细胞生长抑制率分别是13.38%、34.15%、39.02%,14.04%、33.33%、46.49%和31.11%、40.74%、48.15%,与低浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01);2.5mmon/L丁酸钠处理24h组与阴性对照组细胞凋亡率分别是5.5%和1.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: 丁酸钠可抑制食管癌Eca-109细胞增殖、促进凋亡,且呈浓度和时间依赖性。     

褪黑激素对体外培养肿瘤细胞活性的影响

目的 研究褪黑激素（MT）对体外培养肿瘤细胞活性的影响。方法 MTT法测定MT的抗肿瘤活性;电镜观察药物对肿瘤细胞形态学的影响;流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞周期的影响。结果 高浓度MT（1mmol/L或2mmol/L)可抑制肿瘤细胞的生长,延长肿瘤细胞倍增时间（TD）;作用3天,可使S期细胞的比例减少,细胞形态学发生非特异性改变,有较多的坏死细胞和少量凋亡细胞。结论 高浓度MT抑制肿瘤细胞增殖。MT作为肿瘤患者的辅助治疗药物有待深入研究。     

甘草酸诱导人乳腺癌细胞凋亡和细胞内Ca2+的相关性研究

目的 探讨甘草酸对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖抑制和诱导凋亡的作用,了解凋亡发生与细胞内Ca2 的相关性.方法 MTT比色法测定细胞增殖能力,末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP末端标记法、Annexin V流式细胞仪法和单细胞凝胶电泳(彗星试验)法检测凋亡细胞,Fura-2荧光负载方法测定[Ca2 ]i的变化.结果 从5 mmol/L甘草酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P＜0.01),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为15.84 mmol/L.7.5 mmol/L和10.0 mmol/L甘草酸使细胞凋亡率显著升高(P＜0.05和P＜0.01).甘草酸处理组的[Ca2 ]i明显低于对照组(P＜0.05).甘草酸与BAPTA-AM组合处理组的凋亡率明显高于单纯的7.5 mmol/L处理组(P＜0.05和P＜0.01).结论 甘草酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导其凋亡的作用;其诱导凋亡可能与细胞内Ca2 水平下调有关.