高压冷冻及冷冻替代样品制备方法在体扫描电镜中的应用

高压冷冻及冷冻替代技术是一种利用高压和低温对含水组织样品进行瞬间冷冻固定和低温脱水的电镜样品制备技术,它因可以保存更加真实的细胞超微结构而常应用于透射电镜观察和分析。本文利用模式动物小鼠为材料,将这种技术应用于体扫描电镜的样品制备,并与常规化学固定的样品制备进行比较。结果显示在小鼠心肌组织中,高压冷冻及冷冻替代技术可以有效避免常规制备样品中的细胞器膜结构皱缩、细胞质分布不均匀、细胞核膜收缩形成锯齿状、甚至局部断裂等现象,使细胞超微结构更接近其生活时的状态。     

高压冷冻-冷冻替代技术在神经组织超微结构中的应用

采用高压冷冻-冷冻替代技术对小鼠和线虫这两种模式生物的神经组织进行了样品制备、超薄切片和电镜观察,并在取材方式上进行了摸索,旨在比较化学固定法(CF)、高压冷冻固定法(HPF)和化学-高压冷冻联合固定法(CF+ HPF)三种不同方式对神经组织超微结构的影响,促进高压冷冻-冷冻替代技术在神经生物学中的应用.透射电镜观察结果显示:与传统的化学固定相比,高压冷冻固定对神经组织样品具有较好的优势,能够减少化学处理所产生的人工假象;另一方面,对于不同动物的神经组织而言,所适用的固定方式也不相同,鼠脑适用于活检枪(biopsy gun)取样后直接进行HPF固定,所得结构比较完整,神经组织微观结构清晰.而在高压冷冻之前选用CF进行预固定,能加大样品结构保存的完整性,但在膜的细腻程度上不如直接进行高压冷冻制样的结果.线虫样品由于存在较厚的体壁保护,它更适于直接进行HPF处理,从而缩短了固定前的滞留时间,可有效保留腹部神经元超微结构.     

高压冷冻技术及其在植物细胞超微结构中的应用

冷冻固定技术可以将生物组织和细胞内所有结构和成分同时固定。因此避免了因化学渗透固定而引起的各种假象。通常,在常压下冷冻技术仅能使生物样品表面１０～３０μｍ厚度得以充分固定,而高压冷冻技术则能使样品有效固定厚度增加至６００μｍ。尽管植物组织细胞具有特殊的结构－厚壁和含大量水分的液泡,使冷冻固定较为困难,但利用高冷冻技术仍能使２００μｍ厚度的样品得到充分固定,而且能够捕获近似自然状态的细胞超微结构。本     

应用高压冷冻-冷冻置换技术研究受Potyvirus侵染的寄主细胞超微结构

应用高压冷冻-冷冻置换技术（HPF-FS）制备了马铃薯Y病毒属的小西葫芦黄花叶病毒（ZYMV）和大豆花叶病毒（SMV）侵染寄主植物叶细胞的超薄切片样品,并与传统化学固定方法进行比较。透射电镜观察结果显示：病毒粒子和内含体的形态分布在两种方法处理的样品中无明显差异,但高压冷冻样品的细胞超微结构精细,细胞壁与细胞质之间边界清晰,质膜平滑而完整,细胞基质丰富;细胞核和叶绿体、线粒体等形态饱满,高尔基体潴泡结构及分泌小泡清晰,在ZYMV感染细胞的叶绿体中观察到囊泡结构。而化学处理的样品普遍存在细胞结构的收缩和变形,特别是质膜褶皱,与细胞壁分离,叶绿体呈梭形,片层结构发生改变,高尔基体潴泡结构及分泌小泡相当少见。实验结果有利于正确区别病毒所引起的细胞病理变化和化学处理而产生的人工假象。     

高压快速冷冻技术在两种培养细胞超微结构中的应用

高压快速冷冻(high-pressure freezing,HPF)能使样品在高压下毫秒内从室温降到液氮温度,所有分子瞬间固定在原位,随后启用冷冻置换(freeze substitution,FS),在低温下缓慢固定的同时用有机溶剂替代样品中的水分,从而保存样品的细微结构接近自然状态.本文使用高压快速冷冻/冷冻置换方法对草地贪夜蛾细胞(sf9细胞)和感染沙眼衣原体的小鼠成纤维细胞(McCoy细胞)进行电镜制样观察,同时对比传统化学固定两种细胞超微结构的差异.结果发现,利用HPF/FS技术,两种细胞中的膜结构、细胞骨架结构更能良好地保存,核膜、高尔基体和囊泡膜平滑完整,无皱缩或断裂,细胞形态更接近自然状态.     

高压冷冻技术在拟南芥细胞微结构研究中的应用

高压冷冻技术是指以高压冷冻固定为主要内容的一种电镜技术。该技术可以充分、快速固定样品的同时,避免引入操作干扰,使得电镜结构更接近样品生活状态。本文利用拟南芥为材料,比较了高压冷冻固定及冷冻替代制备的电镜样品同常规化学固定、室温梯度脱水方法所制备样品的差异。结果显示,在拟南芥根及叶片中,高压冷冻技术可以有效地避免常规制备样品中的细胞壁收缩,细胞质不均匀分布,高尔基体及质体收缩,细胞膜及液泡膜皱缩甚至断裂等现象,使细胞结构更接近其生活时的状态。     

冷冻电镜含水切片技术观察胰岛β细胞的三维超微结构

冷冻电镜含水切片技术(CEMOVIS)作为冷冻厚生物样品制备技术,对高压冷冻的样品直接进行冷冻切片,能够获得完全含水状态的生物样品的超微结构,更好地反映出细胞接近其生理条件的真实状态。本文应用冷冻含水切片技术结合冷冻电子断层扫描和三维重构技术观察到了小鼠胰岛β细胞内细胞器的高分辨超微结构。     

连续切片三维重构技术在细胞超微结构研究中的应用

目的:探究三维重构技术在细胞超微结构研究中的重要性.方法:收集Hela细胞,样品经OTO制样方法处理后进行连续切片,并通过扫描电镜收集序列切片背散射电子信号.通过Amira软件对图片集进行对中、分割处理及三维展示.结果:获得细胞三维重构图,对线粒体长度、宽度和厚度进行了测定和统计,着重对线粒体内质网偶联三维结构进行了观...     

电镜冷冻复型技术在非生物材料研究中的应用

本文叙述冷冻复型方法在透射电镜样品制备中的应用。这一方法不仅在生物医学领域得到广泛应用，而且在化学、石油等非生物领域也是一项不可缺少的实验技术。对生物样品而言，可较好地保存细胞的天然形态结构；对非生物样品而言，也能反映其真实结构；另外，实验周期短是这一方法的突出特点。本文根据作者多年来的工作经验，就如何获得质量较好的复型膜以及实验过程中存在的一些问题和所作的改进作一介绍：如排除陶瓷材料器皿对膜的损伤和破坏；解决表面张力小的液体样品高出样品杯平面的问题；以及掌握复型膜的喷涂技术、塑料薄膜样品的复型膜剥离技巧等。     

干旱胁迫对小麦中国春-Synthetic 6x代换系叶片超微结构的影响

观察比较了干旱胁迫下两个小麦代换系品种及其亲本旗叶超微结构的差异,结果表明:在正常灌水务件下,父本Synthetic 6x、母本中国春以及2D、5D代换系旗叶叶肉细胞中叶绿体、细胞核、线粒体结构正常.干旱胁迫条件下,抗旱性较强的父本Synthetic 6x与2D代换系变化较小,叶绿体稍显膨胀,基粒片层较发达,淀粉粒较多;细胞核与线粒体无明显变化.而抗旱性较弱的母本中国春与5D代换系变化明显,叶绿体膨胀成球形,类囊体肿胀,基质片层模糊,脂类小滴增加,淀粉粒数量减少,郝分叶绿体开始解体;线粒体部分外膜断裂.嵴结构模糊不清;细胞核无明显变化.叶肉细胞变化程度与小麦的抗旱性呈负相关.     

人体及动物不同组织中肥大细胞颗粒超微结构的比较研究

运用透射电镜对人体正常皮肤、肺、心肌及萎缩性胃炎胃粘膜、垂体肿瘤、淋巴管瘤;大肠正常皮肤、舌粘膜、腹腔及小肠,化学致癌剂诱发肝癌、舌粘膜、腹腔及小鼠,化学致癌剂诱发肝癌以及血吸虫感染家兔肝、脾等组织中肥大细胞（MC）胸浆内颗粒的超微结构进行了对比观察,结果表明：存在于人体肺及胃粘膜中的大多数MC颗粒均具有独特 亚结构,它们由多个呈旋涡状排列的筒状结构组成,其它组织中的MC颗粒则主要呈电子致密均质状,前者属MC^T,后者为MC^CT。这种结构特征在正常及病理性组织中并无明显差异。因此,人体MC颗粒的超微结构特征可以作为区别两类不同表型MC的标志之一。与人体组织中MC相反,大鼠体内各部组织中MC颗粒超微结构基本一致,而与人体MC^T颗粒类似。因此,单从颗粒的超微结构不能区分大鼠MC表型,血吸虫感染家兔肝、脾中的MC颗粒超微结构则与上述观察均不相同,颗粒内或见有电子透明的大的结晶样结构或见有许多电子透明的小点状结构。后者有的广布于整个颗粒之中,有的则沿颗粒周边分布,沿有一些颗粒则由单膜包绕,内含多个致密亚单位。     

形态计量学在肝窦细胞超微结构研究中的应用

本文尝试以形状计量学方法用于常规超微病理诊断中。通过对肝窦内皮细胞及隐窝细胞多项参数的测定,初步提出了二种细胞在不同病理状态下的定量指标,为准确及可重复性的分析提供了数据,并为进一步过渡为三维体视学分析打下良好的基础。     

小麦不同发育时期旗叶叶绿体结构与多糖的动态变化

以往有关小麦旗叶的研究多集中在生理生化方面,对不同时期旗叶的生理生化特性及其叶片结构动态变化的研究尚不多见.本文应用光学显微镜、透射电子显微镜、显微组织化学和紫外分光光度计等技术和方法,对高产小麦品系（小偃81）开花前后旗叶叶绿体数目与超微结构变化,以及多糖的显微定位与含量等进行了研究.结果表明：小麦旗叶叶肉细胞中的叶绿体数目、叶绿体基粒类囊片数目和垛叠数随着小麦开花期的到来逐渐增多,至开花后的灌浆期均达最高值,此后随之明显下降.与此同时,多糖与蔗糖含量等也有相似的变化趋势.我们认为：在小麦开花前后,特别是灌浆期,旗叶上述特征与小麦的光合效率及产量关系极为密切.本文的观察结果为高产小麦的选育和栽培管理提供了参考依据.