X线照射后肺癌细胞肿瘤坏死因子mRNA的表达

目的探讨X线诱导和调节肺癌细胞株NCI-H596和A549肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达作用及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术,定量检测NCI-H596和A549细胞株照射前和接受不同剂量(2,5,10,20,30和40Gy)的X线照射后,以及受照30Gy后不同时间TNF-αmRNA的表达。同时进行集落形成试验,检测NCI-H596和A549细胞株的放射敏感性。结果集落形成试验结果显示,未照射的NCI-H596细胞株集落形成率为0.12～0.24;A549细胞株集落形成率为0.37～0.45。照射后,A549细胞的存活分数(SF)在2Gy时为47.3%±9.0%,4Gy时为18.0%±3.0%,6Gy时为6.0%±2.0%,8Gy时为1.4%±0.3%;NCI-H596细胞的SF在2Gy时为55.2%±51.0%,4Gy时为15.9%±9.2%,6Gy时为3.5%±1.7%;8Gy时为0.9%±0.6%;二者SF差异无统计学意义,二者的D0值和Dq值差异亦无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,NCI2H596细胞受照后TNF-αmRNA表达逐渐升高,照射剂量达40Gy时,TNF-αmRNA表达水平达高峰,为对照组的83倍;受照后,1hTNF-αmRNA表达逐渐升高,6h达高峰,为对照组的568倍。A549细胞受照后,1hTNF-αmRNA表达即达高峰,为对照组的136倍。结论X线可诱导肺癌细胞株A549和NCI2H596产生TNF-α,且呈剂量、时间依赖性,可提高肺癌放射治疗的疗效,也可对正常组织和     

卡托普利对小鼠在肺部照射后TGF-β1、TNF-α水平的影响

目的：探讨卡托普利在小鼠放射性肺损伤中对血清转化生长因子-β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的干预影响。方法：雄性C57／BL小鼠，设对照组、右肺单次照射10Gy组、右肺单次照射10Gy＋卡托普利组，于照射后36h、7d、15d、30d采集血液标本，ELISA法测血清中TGF-β1及TNF-α；同期取右肺组织以HE染色制成病理学标本。结果：10Gy照射组在照射后不同时段血清中TGF-β1水平及TNF-α水平均较对照组升高；而单次照射10Gy＋卡托普利组则表现为在不同时段均较对照组水平降低。析因分析结果为时间因素间、处理因素间、交互作用间均有统计学差异（P〈0．05）。病理结果显示10Gy照射组出现进行性加重的炎症改变，而单次照射10Gy＋卡托普利组则与对照组比较无明显区别。结论：卡托普利可以减低小鼠肺照射时TGF-β1、TNF-α等细胞因子浓度，并抑制放射性肺损伤的发生。     

TNF-α和低氧对胰腺癌细胞表达VEGF-A、C的调节

目的:探讨细胞活素肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、SNAP(S-Nitroso-Nacetyl-penicillamine)对胰腺癌细胞产生血管内皮生长因子A、C(VEGF-A、C)的调节.方法:用Northern杂交和Western杂交法分析6种人胰腺癌细胞株中VEGF-A、C基因和蛋白的表达;以TNF-α或SNAP刺激其中两个细胞株后用逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)分析其VEGF-A、C基因的表达.结果:Northern杂交法显示这6种胰腺癌细胞株均有4.1kb VEGF-A基因和2.4kb VEGF-C基因的表达;Western杂交法显示它们均有分子量为43kD的VEGF-A蛋白质和分子量为55kD的VEGF-C蛋白质的表达.RT-PCR分析法显示:TNF-α使细胞株COLO-357产生VEGF-A、VEGF-C mRNA分别减少约1～2.5倍、1～2倍,使细胞株CAPAN-1产生VEGF-A、VEGF-C mRNA分别减少约1倍、1.6～2.5倍;而SNAP刺激细胞株COLO-357产生VEGF-A mRNA增加约5倍,刺激细胞株CAPAN-1产生VEGF-A mRNA增加约4倍,但对这两种细胞株产生VEGF-C mRNA均无明显刺激作用.结论:细胞活素TNF-α和低氧通过调节血管内皮生长因子A、C的表达而影响胰腺癌细胞的生物学特性,抑制癌细胞的增殖,促进其凋亡、死亡或进展、恶化.     

血液肿瘤患者血清TNF、TGF-α的水平及临床意义

目的　探究TNF和TGF α在血液肿瘤性疾病中的变化和病情及预后的关系。方法　用放射免疫分析法检测了血液肿瘤性疾病患者 (63例 )和正常健康人 (3 0例 )血清TNF和TGF α水平 ,对治疗前后、病情变化进行了比较。结果　血液肿瘤性疾病患者治疗前TNF水平都明显高于正常组 (P <0 .0 1) ,治疗缓解后比治疗前明显降低 (P <0 .0 1)。急、慢性白血病和非何杰金氏淋巴瘤患者治疗前血清TGF α水平都明显高于正常组 (P <0 .0 5 ) ,而多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合症患者治疗前血清TGF α水平低于正常组 (P >0 .0 5 ) ,急、慢性白血病、非何杰金氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤治疗缓解后比治疗前明显降低 (P <0 .0 1) ,骨髓增生异常综合症患者血清TGF α水平治疗后比治疗前降低但差异不显著 (P >0 .0 5 )。急、慢性白血病患者恶化后血清TNF和TGF α水平均升至治疗前水平。结论　检测血液肿瘤性疾病患者血清TNF和TGF α水平 ,有助于了解这种病人的病情变化及其预后。     

TNF-α通过JNK和AP-1途径调节乳腺癌MCF-7细胞VEGF的表达

目的: 探讨肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的机制.方法:以20 ng/ml TNF-α处理MCF-7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP-1家族(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP-1存在形式;以RT-PCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证p-c-Jun结合在VEGF启动子区.结果:TNF-α通过激活JNK信号转导通路活化AP-1;被TNF-α激活后AP-1以p-c-Jun-c-Jun和p-c-Jun-JunB同源二聚体形式存在;TNF-α通过激活转录因子AP-1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;p-c-jun通过与VEGF启动子AP-1结合参与对VEGF转录的调控.结论:在TNF-α作用下,AP-1通过p-c-jun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP-1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控.     

HIF-1α、VEGF和TGF-β1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨缺氧诱导因子-1cx（hypoxiainduciblefactor-1仪,HIF—loL）、血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）和转化生长因子B1（transforminggrowthfactorpl,TGF—p1）在非小细胞肺癌（non—sinallcelllungcancer,NSCLC）中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学sP法检测58例NSCLC患者术后癌组织和13例正常肺组织中HIF—1α、VEGF和TGF—β1的表达水平。结果NSCLC组织中HIF-1α、VEGF和TGF-β。的阳性表达率均明显高于正常肺组织,其表达与临床分期和有无淋巴结转移有关（P〈0．01）,与性别、年龄、病理类型和分化程度无关（JD〉0．05）,三项指标在NSCLC组织中的表达呈正相关（R0．05o结论HIF-1α、VEGF和TGF—β,在NSCLC中的高表达可能与NSCLC的侵袭和转移密切相关。     

非小细胞肺癌血清VEGF、bFGF和TNF-α的临床意义

[目的]观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)与NSCLC临床特征的相关性,探讨三者在NSCLC疗效评价中的临床价值。[方法]采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测NSCLC患者化疗前1d、化疗结束1周后血清VEGF、bFGF和TNF-α的含量。[结果]NSCLC患者化疗前血清VEGF、bFGF和TNF-α与患者临床分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别及病理类型无关;分析68例晚期NSCLC患者化疗前后血清VEGF、bFGF和TNF-α的变化,临床获益组与疾病进展组比较三者均有明显下降(P<0.05)。[结论]血清VEGF、bFGF和TNF-α与NSCLC肿瘤负荷有关;血清VEGF、bFGF和TNF-α水平可作为NSCLC患者化疗疗效预测的参考指标。     

TNF-α通过JNK和AP-1途径调节乳腺癌MCF-7细胞VEGF的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子（tumor necrosis factorα, TNFα）诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的机制。方法：以20 ng/ml TNFα处理MCF7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP1家族(cJun,JunB,cFos,Fra1,Fra2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP1存在形式;以RTPCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证pcJun结合在VEGF启动子区。结果： TNFα通过激活JNK信号转导通路活化AP1;被TNFα激活后AP1以pcJuncJun和pcJunJunB同源二聚体形式存在;TNFα通过激活转录因子AP1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;pcjun通过与VEGF启动子AP1结合参与对VEGF转录的调控。结论：在TNFα作用下,AP1通过pcjun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控     

Kaposi’s肉瘤中转化生长因子Ⅱ型受体基因的表达及意义

目的:探讨Kaposi’s肉瘤中转化生长因子Ⅱ型受体基因(TGF-βRⅡ)的表达特点及其意义。方法:采用免疫组织化学技术检测30例Kaposi’s肉瘤组织和30例皮肤良性血管瘤组织中TGF-βRⅡ的表达。结果:TGF-βRⅡ基因在Kaposi’s肉瘤真皮瘤体中的表达阳性率为46.7%(14/30),在血管瘤真皮瘤体中表达阳性率为66.7%(20/30),(P<0.05)。TGF-βRⅡ基因在Kaposi’s肉瘤表皮中表达的阳性率为63.3%(19/30),在血管瘤表皮中为53.3%(16/30),差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:TGF-βRⅡ基因在真皮瘤体中的表达与Kaposi’s肉瘤的发生相关。     

Fas/FasL及TNF-α在人甲状腺癌中表达的分子病理学研究

Ｆａｓ不仅在结构上与肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）具有同源性，其功能也有相似之处，如二者均可与其特异性配体结合而引发细胞凋亡。我们应用抗Ｆａｓ、ＦａｓＬ多克隆抗体及抗ＴＮＦα单克隆抗体，采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法，对４４例甲状腺癌、１６例甲状腺瘤和１１例结...     

奥曲肽对TGF-α刺激EGFR和ERK表达的抑制作用

目的 研究奥曲肽对转化生长因子-α（TGF-α）刺激表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法TGF-α刺激人肝癌细胞系SMMC-7721前后EGFR的表达以免疫组化法和RT-PCR检测,ERK的表达以免疫组化法和Western-blot检测。结果TGF-α使人肝癌细胞中EGFRmRNA和蛋白、ERK蛋白表达增加,奥曲肽对TGF-α刺激的EGFR和ERK表达增加具有明显的抑制作用。结论奥曲肽对TGF-α刺激的EGFR和ERK表达具有明显的抑制作用,这可能是奥曲肽抗肝癌的机制之一。     

滑膜肉瘤组织VEGF和PDGFR-α表达临床意义的研究

目的:探讨滑膜肉瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF) 、血小板衍生生长因子α受体 (PDGFR-α)的表达与肿瘤血管形成的情况及其临床意义.方法: 采用免疫组化SP法分析34例原发性滑膜肉瘤组织VEGF、PDGFR-α的表达情况,检测Ⅷ因子以计算微血管密度(MVD) .结果: 滑膜肉瘤组织中VEGF和PDGFR-α表达率分别为61.76 %(21/34)和55.89%(19/34);两者共同阳性表达率为38.24%(13/34).VEGF、PDGFR-α与滑膜肉瘤的分级、分期和预后相关,并与MVD呈正相关,P<0.05.此外,两者之间也有相关性,P<0.05.结论:VEGF、PDGFR-α能共同调节滑膜肉瘤的血管形成,可用于判断滑膜肉瘤的生物学行为.     

TGF-β1对人早孕细胞滋养层细胞和绒毛膜癌JAR细胞明胶酶mRNA表达的影响和意义

目的:探讨TGF-β1和明胶酶在妊娠滋养细胞疾病(GTD)发病机制中的作用。方法:RT-PCR法检测TGF-β1诱导的人正常早孕细胞滋养细胞(CTB)和绒毛膜癌JAR细胞中明胶酶CMMP2和MMP97及其抑制剂(TIMP1和TIMP2)mRNA的表达。结果:TGF-β1上调CTB细胞MMP2的表达,但对MMP9的mRNA表达无明显作用(P>0.05)。TGF-β1能显著上调JAR细胞MMP2和MMP9的mRNA表达(P<0.01)。随着TGF-β1浓度的增加,TGF-β1能明显诱导CTB细胞TIMP1和TIMP2的mRNA表达水平上调(P<0.01);然而这种转录水平在TGF-β1处理或未处理的绒毛膜癌细胞中均为极低表达甚至无表达。结论:TGF-β1与明胶酶在GTD的发生、发展中起了协同促进其侵袭、浸润和恶化进展的作用。     

双氢青蒿素对早期放射性肺损伤大鼠TNF-α表达的影响

目的:探讨双氢青篙素对早期放射性肺损伤大鼠肺组织及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的动态影响.方法:采用γ射线单次全肺照射15 Gy,建立SD大鼠放射性肺损伤模型.108只同体质量雄性SD大鼠,随机分为1)正常对照组:灌服等体积溶媒;2)单纯照射组:灌服等体积溶媒+全肺单次照射15 Gy;3)照射用药组:灌服双氢青蒿素+全肺单次照射15 Gy.双氢青蒿素和溶媒皆于照前3 d开始灌服持续至照射后15 d.ELSIA法及免疫组化方法检测照射后60 d内血清及肺组织TNF-α表达情况.结果:单纯照射组肺组织炎症渗出及纤维化征象严重.照射15 d,单纯照射组、照射用药组肺组织及血清TNF-α表达依次递增,单纯照射组肺组织TNF-α表达最强,照射用药组介于正常对照组和单纯照射组之间(P＜0.05),照射后30 d,两组差异无统计学意义(P＞0.05).血清TNF-α两组表现为从照射后3 d开始增加,到15 d达到高峰,30 d与正常对照组无差别,照射用药组较单纯照射组明显减少(P＜0.05).结论:双氢青蒿素具有降低早期放射性肺损伤大鼠血清、肺组织TNF-α表达的作用.     

非小细胞肺癌GLUT-1和TNF-α表达及其生物学意义的探讨

目的:研究葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测100例NSCLC组织和24例良性肿瘤组织中TNF-α、GLUT-1的表达,并分析其与临床病理特点之间及两者相互关系。结果:NSCLC组织中的GLUT-1、TNF-α蛋白阳性率明显高于良性肿瘤组织(P<0.05)。TNF-α组:晚期组织(Ⅲ)明显高于中、早期(Ⅱ、Ⅰ)组织(P<0.05),有淋巴结转移组织明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05),N2组明显高于N1组(P<0.05)。GLUT-1组:中低分化组织明显高于高分化组织(P<0.05),有淋巴结转移组织明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05),N2组明显高于N1组(P<0.05)。GLUT-1与TNF-α的表达呈正相关。结论:TNF-α、GLUT-1在NSCLC组织中的过表达与肺癌的生长、侵袭转移有密切关系,联合两者的检测有助于判断NSCLC的转移、分期。     

HIF-1α和VEGF在横纹肌肉瘤中的表达及临床意义

目的:本研究旨在探讨横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)组织中缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测70例RMS组织HIF-1α和VEGF的表达,分析其与RMS患者临床病理特征及预后的相关性.结果:RMS组织中HIF-1α阳性表达率为75.7％(53/70),VEGF阳性表达率为72.9％(51/70).统计结果显示,HIF-1α和VEGF的表达呈正相关(r=0.554,P=0.000).HIF-1α蛋白表达与RMS患者的性别(P=0.035)、肿瘤大小(P=0.016)、分期(P=0.008)有相关性,但与患者的年龄(P=0.555)、病理亚型(P=0.625)及淋巴结转移(P=0.750)无相关性;HIF-1α蛋白表达阴性组与表达阳性组患者的3年总生存率分别为54.5％及38.0％ (P=0.045).VEGF蛋白表达与RMS患者的分期有相关性(P=0.026),但与患者的年龄(P=0.478)、性别(P=0.944)、肿瘤大小(P=0.535)、病理亚型(P=0.399)及淋巴结转移(P=0.356)无相关性;VEGF蛋白表达阴性组与表达阳性组患者的3年总生存率分别为68.1％及31.1％ (P=0.011).COX 回归分析显示,VEGF表达、肿瘤分期和肿瘤大小是RMS的独立不良预后因素(P分别为0.005、0.004和0.000),而HIF-1α尚不能作为RMS的独立不良预后因素(P=0.845).结论:RMS组织中存在HIF-1α蛋白和VEGF蛋白的高表达,与肿瘤分期有关;HIF-1α和VEGF的表达存在相关性;VEGF的表达是RMS独立的不良预后因素.     

TNF-α基因转导淋巴细胞对人胃癌细胞杀伤作用的实验研究

目的：观察将肿瘤坏死因子n（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）基因导入淋巴细胞能否增强其对胃癌细胞的杀伤作用。方法：从胃癌转移淋巴结中分离淋巴细胞及胃癌细胞并在体外培养扩增,再用脂质体法将TNF-α基因导入淋巴细胞,在蛋白印迹法证实导入基因成功表达后,再用MTT法检测此转基因淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤作用。结果：15例行TNF-α转导的淋巴细胞中,12例经蛋白质印迹法证实转导成功;其中4例转导入TNF-α基因后能显著增强淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤作用,而另外8例则未见显著增强淋巴细胞的杀伤作用。结论：采用脂质体法能成功将TNF-α基因转导入淋巴细胞,而且转导入TNF-α基因有可能增强淋巴细胞对胃癌细胞的杀死作用。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,不同处理因素按指定时间作用后,RT-PCR检测NF-κBp65mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果静息状态下,在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平,TNF-α诱导Hela细胞NF-κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关,NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng/mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化,抑制率为49.69%,并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用,凋亡增加率为57.52%。结论TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

TGF-β1对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究

目的肝细胞对TGF-β1敏感性的丧失据认为是肝癌重要的致病因素之一。本研究旨在明确人肝肿瘤细胞系中TGF-β1的作用及其与凋亡的关系。方法选用三种含不同p53基因状态的人肝肿瘤细胞系,应用脱氧核糖核苷酸末瑞转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝肿瘤细胞的凋亡进行定量检测。结果在应用TUNEL检测三个细胞系中,TGF-β1仅能诱导Hep3B细胞(缺失p53)则凋亡较少。这提示凋亡p53基因的表达具有明确的联系。结论HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B系细胞更易发生TGF-β1诱导的凋亡,TGF-β1通过p53依赖性途径诱导肝癌细胞系发生凋亡。     

EGF和TGF-α促进子宫内膜癌细胞增殖信号转导通路的研究

目的:探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α (TGF-α)促进子宫内膜癌细胞增殖的信号转导通路.方法:应用不同浓度的EGF和TGF-α分别处理子宫内膜癌细胞Ishikawa, MTT法检测细胞增殖,Western blot分析EGF和TGF-α处理后,不同时间MAPK通路关键分子ERK1/2的磷酸化水平和调控增殖的重要分子Survivin蛋白的表达.然后应用特异性的MAPK通路阻断剂U0126预处理细胞,观察EGF和TGF-α对细胞增殖和Survivin蛋白表达的影响.结果:不同浓度的EGF和TGF-α均促进了Ishikawa细胞增殖.与对照组相比,0.1、1、10和100 ng/mL的EGF处理组细胞增殖率分别为(112.12±10.23)%、(138.39±6.85)%、(165.50±15.20)%和(162.86±15.17)%;0.1、1、10和100 ng/mL的TGF-α处理组细胞增殖率分别为(102.87±6.44)%、(121.97±3.51)%、(144.42±11.60)%和(141.12±13.50)%.EGF和TGF-α还迅速诱导了ERK1/2的磷酸化,并使Survivin蛋白水平增加了8.35和9.42倍.MAPK通路阻断剂U0126则完全抑制了EGF和TGF-α诱导的ERK1/2磷酸化,阻断了MAPK通路的激活.阻断MAPK通路还明显抑制了EGF和TGF-α诱导的细胞增殖和Survivin蛋白表达的上调.结论:EGF和TGF-α能够促进子宫内膜癌细胞增殖,其机制是通过激活MAPK通路引起Survivin蛋白表达的增加,从而引发增殖的生物学效应.