杜仲叶提取物对体外培养的成骨细胞代谢功能调节研究

目的：研究杜仲叶提取物对体外培养成骨细胞（Osteoblast OB)代谢功能的调节作用,从而进一步明确杜仲补肾,强筋健骨的作用机理以及筛选杜仲叶防治骨质疏松药效成分,方法：用杜仲叶三个提取部位（Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ）不同浓度对体外培养的成骨细胞作用,由新生SD大鼠头盖骺作原代培养,用传代的第一代细胞做药效试验,测定指标：（1）细胞增殖情况,用MTT计数法[1,2];（2）碱性磷酸酶（ALP）活性测定,对硝基磷酸盐法。结果：Ⅱ,Ⅲ提取部位对细胞增殖作用与对照组比较,P＜0．001,ALP的活性与对照组比较,三个部位均为P＜0．001,结论：表明Ⅱ,Ⅲ提取部位的10^-5mg/L浓度组具有明显的调节骨代谢功能的药效作用。     

不同方法炮制姜半夏对β-谷甾醇含量的影响

半夏为天南星科植物半夏 Pinellia ternata( Thunb.) Breia.的块茎 ,具有燥湿化痰 ,降逆止呕 ,消痞散结的功效。半夏是有毒中药之一 ,内服必须经过严格炮制。半夏所含成分 β-谷甾醇 ,具有止咳、抗癌抗炎及降低血中胆固醇等药理作用 ,可作为质量评价标准之一。本文通过比较传统方法炮制的姜半夏与蒸制法炮制姜半夏所含成分β-谷甾醇的变化 ,为姜半夏蒸制提供实验数据。1　样品制备《中国药典》法姜半夏 :取生半夏适量 ,按照《中国药典》1 995版半夏项下姜半夏的炮制方法炮制。广东法姜半夏 :取生半夏适量 ,按照广东省中药炮制规范中姜半夏…     

HPLC法测定安痔消炎片中β-谷甾醇的含量

目的:用HPLC法测定安痔消炎片中β-谷甾醇的含量。方法:样品加甲醇和15%盐酸回流提取后,采用HPLC法测定安痔消炎片中β-谷甾醇的含量,使用C18色谱柱,甲醇-水(99∶1)为流动相,检测波长205nm,流速1mL/min。结果:β-谷甾醇线性范围0.10～4.19μg,相关系数r=0.9998,平均回收率为99.7%。结论:样品处理方法合理,方法学考察符合定量要求,结果准确,可用于安痔消炎片中β-谷甾醇的含量测定。     

HPLC-ELSD法测定三叶青中的β-谷甾醇的含量

目的:建立测定三叶青药材中β-谷甾醇含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法,色谱柱为Inersil ODS-3 C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇,流速为0.7mL.min-1,柱温为30℃,漂移管温度为40℃,载气压力3.5 bar。结果:β-谷甾醇0.264μg～2.64μg与峰面积的自然对数呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为96.3%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可以作为控制三叶青药材质量的方法参考。     

β-谷甾醇替代胆固醇制备槲皮素脂质体的可行性研究

目的 探讨用β-谷甾醇替代胆固醇制备槲皮素脂质体的可行性,并筛选最佳制备工艺与处方。方法 以卵磷脂和β-谷甾醇为膜材制备不含胆固醇的槲皮素脂质体;以离心沉淀法测定脂质体的包封率;以包封率和载药量为评定指标,筛选该新型槲皮素脂质体的最佳制备方法;用正交设计优化该脂质体的制备工艺;用粒径、Zeta电位、AFM电镜、体外释放表征该新型槲皮素脂质体。结果 该新型脂质体的最佳制备方法为薄膜分散法,通过正交设计得最佳工艺为槲皮素与卵磷脂的质量比为1∶5,卵磷脂与β-谷甾醇的质量比为6∶1,PBS缓冲溶液pH值为6.0,水化时间为2 h。制备的槲皮素脂质体的包封率为（82.55±1.10）%,载药量为（11.40±1.14）%,粒径为（194.60±4.38）nm,Zeta电位为（?30.45±0.42）mV;AFM电镜验证表明该新型脂质体呈规则球形,粒径均一;新型脂质体体外释放与普通脂质体无差异。结论 用β-谷甾醇替代胆固醇制备槲皮素脂质体方法可行,采用最佳工艺制备的槲皮素脂质体包封率高,形态和粒径均较好,重现性好,可应用于工业化生产。     

β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

薄层扫描法测定八棱麻中β-谷甾醇的含量

目的：建立薄层扫描法测定八棱麻中β-谷甾醇含量的方法。方法：以0．5％CMC—Na硅胶G为薄层板,以甲苯-氯仿-丙酮-甲醇(8：5：1：1)为展开剂,以20％硫酸乙醇液为显色剂,检测波长λ=530nm。结果：Rf为0．65,回归方程Y=177.52X 33．42,r=0．9912,表明β-谷甾醇在0．9960—4．970μg范围内有良好的线性关系。结论：该方法简单、方便、可靠,可作为八棱麻中β-谷甾醇含量测定的方法。     

HPLC法测定白土茯苓中β-谷甾醇的含量

目的建立白土茯苓中β-谷甾醇的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为sinachrom ODS-BP(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-0.1%磷酸(98:2)为流动相,检测波长为210nm,流速为1.0mL/min。结果β-谷甾醇在0.22～8.8μg范围内线性关系良好,r=1.0000;平均回收率为96.5%,RSD=1.15%。结论本方法简便准确,重复性好,可作为白土茯苓药材质量控制的有效方法 。     

用薄层扫描法测定地产药材菝葜中β-谷甾醇的含量

菝葜又名金刚藤 ,王瓜草 ,为百合科植物菝葜Smilax china L.的干燥根茎 ,含多种甾体皂苷及 β-谷甾醇等成分。有清热解毒 ,消肿散结作用。其单方制剂“金刚藤糖浆”已收载于部颁标准《中药成方制剂》第九册 ,主要用于治疗附件类和附件炎性包块及妇科多种炎症。根据河池地区菝葜药材资源丰富的优势 ,对采于凤山县境内的菝葜药材 ,用薄层扫描法测定其中 β-谷甾醇的含量 ,为今后本地菝葜药材资源的开发利用 ,并控制其制剂的质量提供依据。1　材料1 .1　仪器　日本岛津 CS- 90 0 0薄层扫描仪 ;瑞士CAMAG自动点样器 ;BPXIID十万分之一电子…     

HPLC-ELSD法测定玉米须中β-谷甾醇

玉米须最早药用记载见于《滇南本草》,为禾本科植物玉蜀黍Zea mays L.的干燥花柱和柱头。为《中国药典》1977年版收载品种[1]。能够利尿消肿,降血压。临床用于肾炎水肿,小便不利,湿热黄疸,高血压症。β-谷甾醇为玉米须的主要有效成分之一[2~4],实验证明β-谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作用。目前国内外报道的分析β-谷甾醇的方法有毛地黄皂苷法、薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱-紫外检测法、HPLC-ELSD法[5~9]。本研究采用蒸发光散射检测器(ELSD)测定玉米须中β-谷甾醇,与以上方法比较具有对样品不必进行…     

β-谷甾醇对帕金森病模型大鼠脑氧化应激损伤及Nrf2/HO-1蛋白通路的影响

目的 探讨β-谷甾醇对帕金森病模型按照随机数字表法大鼠脑氧化应激损伤的保护作用及对Nrf2通路蛋白表达的影响。方法 将40只2月龄SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为正常组、造模组、治疗组和美多芭组,每组10只。模型组、美多芭组及治疗组采用鱼藤酮葵花油乳液颈背部注射建立帕金森病大鼠模型。造模成功后,治疗组以60 mg/（kg·d）β-谷甾醇、美多芭组以5 mg/（kg·d）美多芭混悬液、正常组和模型组采用生理盐水分别灌胃,均为每天1次,连续14 d。采用超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）检测试剂盒检测4组大鼠血清SOD、MDA含量,免疫组化检测4组大鼠脑黑质中黑质酪氨酸羟化酶（TH）、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)阳性细胞数;Western blot检测4组大鼠脑组织中Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、蛋白醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组SOD含量降低、MDA含量升高,脑黑质TH、Nrf2阳性细胞数减少,脑组织中Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达降低（P<0.05）。与模型组比较,治疗组和美多芭组SOD含量升高、M...     

β-谷甾醇通过PI3K/AKT信号通路抑制裸鼠甲状腺滤泡癌生长的机制研究

目的 探讨β-谷甾醇通过PI3K/AKT信号通路抑制甲状腺滤泡性癌生长的作用机制。方法 构建FTC-238甲状腺滤泡状癌裸鼠腋下异位移植瘤模型,随机分为模型组(n=7,模型鼠+生理盐水),β-谷甾醇单药组(n=7,模型鼠+β-谷甾醇(130mg·kg^-1·d^-1)每天一次,LY294002单药组(n=7,模型鼠+LY295002(25g·kg^-1·d^-1)一周三次,联合用药组(n=7,模型鼠+β-谷甾醇(130mg·kg^-1·d^-1)每天一次;+LY295002(25g·kg^-1·d^-1)一周三次。21d后获取小鼠血清及肿瘤组织,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清p-AKT水,Real-time PCR、Western blot法、免疫组化法检测各组裸鼠肿瘤组织中凋亡相关Bcl-2、Bax、Caspase-3的mRNA及蛋白表达,Western blot检测裸鼠肿瘤组织内PI3K/AKT通路关键蛋白p-PI...     

半夏3种不同炮制品中β-谷甾醇含量的比较

目的:建立半夏中β-谷甾醇的含量测定方法,比较半夏3种不同炮制品清半夏、法半夏、姜半夏中β-谷甾醇的含量差异。方法:利用紫外可见分光光度法建立,优选测定波长、显色试剂用量、显色时间及显色温度,建立β-谷甾醇的含量测定方法;测定半夏3种不同炮制品中β-谷甾醇的含量。结果:确定了β-谷甾醇显色的条件为检测波长为420 nm,加浓H_2SO_41.0 mL,并于50℃水浴显色4 min,建立β-谷甾醇的含量测定方法,其线性回归方程为y=0.010 1x+0.026 1,R~2=0.999 3,β-谷甾醇在10~70μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好线性关系。清半夏、法半夏、姜半夏3种半夏炮制品中β-谷甾醇的含量分别为1.780、1.172、0.844 mg/g。结论:半夏3种炮制品中β-谷甾醇含量清半夏最高,法半夏其次,姜半夏最低。结果可为半夏炮制品的深入研究,尤其是临床上选用半夏组方提供了较好的实验参考依据。     

β-谷甾醇对T47D细胞雌激素受体表达及其下游基因PS2的影响

目的:观察β-谷甾醇对T47D细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)及下游基因PS2的影响,探讨其植物雌激素样作用机制。方法:以ER拮抗剂ICI182 780为工具药,应用实时荧光定量PCR技术检测ERα、ERβ及PS2mRNA表达变化,western-blot技术检测ERα、ERβ蛋白表达变化。结果:β-谷甾醇可诱导ERα、ERβ及PS2 mRNA表达,且上调ERβ更显著,对PS2 mRNA的诱导作用可以被ICI182 780抑制,能够上调ERα和ERβ蛋白表达,且可以被ICI182 780抑制。结论:β-谷甾醇可以通过ER途径调节下游靶基因的表达而发挥植物雌激素样作用。     

基于网络药理学探寻β-谷甾醇的作用机制

目的:通过网络药理学分析探寻β-谷甾醇的潜在作用机制.方法:首先,利用PubChem数据库下载β-谷甾醇的2D结构,利用PharmMapper数据库预测靶标信息,再将结果中输入UniProt数据库提取靶标的基因名,然后利用TTD数据库查询到靶标对应的疾病信息,STRING数据库构建基因功能关联网络,利用DAVID数据库...     

藏药材珠芽蓼中β-谷甾醇含量的超高液相色谱-蒸发光散射检测法测定

目的 测定藏药材珠芽蓼中β-谷甾醇含量,来控制珠芽蓼药材质量.方法 采用超高液相色谱-蒸发光散射检测法( UPLC - ELSD).色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEHC18( 100 mm ×2.1 mm,1.7 μm),以甲醇-水为流动相,体积流量0.4 ml/min;柱温40℃;蒸发光散射检测器参数为漂移管温度40℃,载气(压缩空气)体积流量为2.5 L/min.结果 β-谷甾醇在进样量0.3～3 μg的范围内线性关系良好,r=0.999 7,回收率为98.1％(n=9).结论 采用UPLC - ELSD法测定藏药材珠芽蓼中β-谷甾醇的方法简便、高效、准确,可用于控制珠芽蓼药材质量,且该方法比HPLC-ELSD法测定节省时间和溶剂.     

天山雪莲鲨烯合酶SiSQS1和SiSQS2调控β-谷甾醇合成机制研究

目的通过比较天山雪莲Saussurea involucrata细胞中鲨烯合酶Si SQS1和Si SQS2的位点变异、蛋白原核表达及表达水平差异以及下游产物β-谷甾醇量的高低,探索天山雪莲细胞Si SQS1和Si SQS2催化β-谷甾醇合成的机制。方法从天山雪莲细胞中克隆出β-谷甾醇生物合成途径上关键酶Si SQS1与Si SQS2基因,并对其进行生物信息学分析;分别对Si SQS1和Si SQS2进行原核表达与条件优化,比较二者在天山雪莲细胞中的蛋白原核表达差异;采用RT-PCR技术对二者在天山雪莲三色系细胞中的表达水平进行比较,采用GC-MS对雪莲三色系细胞中β-谷甾醇进行定量分析,并对β-谷甾醇量与Si SQS1、Si SQS2表达水平做相关性分析。结果 Si SQS1和Si SQS2在242E/D存在残基变异,原核表达及条件优化实验表明二者都有目的蛋白条带出现,但二者之间的原核表达最适体系不同;化学定量与基因表达水平的相关性分析表明β-谷甾醇量与Si SQS1、Si SQS2基因表达水平呈正相关,相关系数分别为0.92和0.89。结论 Si SQS1与Si SQS2二者242E/D残基变异可能影响Si SQS蛋白的表达,二者在催化活性以及对β-谷甾醇积累调控作用上可能存在一定的功能差异,为研究鲨烯合酶SQS调控天山雪莲细胞β-谷甾醇积累的机制提供了技术支持和奠定了理论基础。     

柏子仁及霜品中-谷甾醇的含量测定△

目的:测定柏子仁制霜前后JB-谷甾醇的含量.方法:建立了测定柏子仁中β-谷甾醇含量的薄层扫描法.结果:柏子仁炮制前后β-谷甾醇的含量分别为0.173%和0.071 9%.结论:该方法稳定、简单、快速,适用于柏子仁中β-谷甾醇的含量测定.柏子仁经制霜后,β-谷甾醇含量有一定的损失.     

β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究

目的:探讨β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:以MTT法检测细胞增殖活力,高内涵活细胞成像系统检测细胞周期变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bcl-2,Bax,tBid,cytochrome c的表达.结果:β-谷甾醇剂量依赖性地抑制肝癌细胞HepG2的生长、降低线粒体膜电位并诱导其凋亡;上调细胞Bax及tBid表达,下调细胞Bcl-2表达;诱导Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9等蛋白酶原表达逐渐降低而激活的大片段表达逐渐增加;胞浆中cytochrome c表达逐渐增加而线粒体中的cytochrome c表达逐渐减少.β-谷甾醇对正常肝细胞QSG7701的生长及凋亡相关蛋白几乎没有影响.结论:β-谷甾醇对人肝癌HepG2细胞生长具有较强的抑制作用,并通过线粒体途径及膜死亡受体途径诱导该细胞凋亡.     

HPLC-ELSD法测定千斤拔的不同种和不同药用部位中β-谷甾醇

目的测定千斤拔的不同种、不同药用部位中β-谷甾醇的量,以期评价不同种的药材质量,为寻找新药源和新的药用部位提供实验数据。方法采用HPLC-ELSD法。色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇为流动相,体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;蒸发光散射检测器检测参数为漂移管温度35℃,载气(N2)体积流量2 mL/min。结果该方法简便、快速、准确,β-谷甾醇在0.65～3.25μg呈良好的线性关系,平均回收率为99.4%(n=9),RSD为0.87%。球穗千斤拔与《中国药典》收载种蔓性千斤拔、大叶千斤拔比较,其根、茎和叶中β-谷甾醇的量低很多,蔓性千斤拔茎、叶中β-谷甾醇的量远高于其根的量,大叶千斤拔茎、叶中β-谷甾醇的量也相近或略高于其根中的量。结论球穗千斤拔不宜替代蔓性千斤拔、大叶千斤拔入药;蔓性千斤拔和大叶千斤拔的茎、叶可以与其根同等入药。