樟芝发酵液和液体发酵菌丝体提取物对SPCA-1细胞的体外抑制作用

樟芝(Taiwanofungus camphoratus)发酵液和经95％乙醇浸提后的菌丝体醇提物分别用石油醚和氯仿进行分级提取,得到石油醚和氯仿提取物.对不同提取物进行体外抑制SPCA-1肺癌细胞增殖实验,发现各提取物均可抑制SPCA-1细胞的增殖,其中发酵液石油醚提取物抑制作用最好,IC5.为62.5 μg/mL,发酵液和菌丝体氯仿提取物的抑制作用较好,IC50分别为120.9和109.5 μg/mL,菌丝体石油醚提取物的抑制作用较差,在25～150 μg/mL作用浓度下,抑制率低于20％.各提取物对SPCA-1细胞凋亡和生长周期作用的测定结果表明,各提取物在肺癌细胞SPCA-1中通过诱导细胞凋亡及S期周期阻滞来表现其抑制作用.     

樟芝皿培菌丝提取物体外对SPCA-1肺癌细胞增殖的抑制作用

利用细胞克隆实验、划痕实验和alamarBlue^TM细胞活力测定实验评价樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相对SPCA-1非小细胞肺癌的体外抑制作用,并进一步利用流式细胞术Annexin V-FITC(fluorescein isothiocyanate)/PI(propidium iodide)双染测定细胞早期凋亡率、流式细胞术2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA)单染测定ROS(reactive oxygen species)释放量、流式细胞术PI单染测定细胞周期变化和ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、p53和PARP的表达,探讨樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相抑制SPCA-1增殖的作用机理。研究结果表明:樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相均能抑制SPCA-1细胞克隆的形成、迁移和增殖,石油醚萃取相的活性明显好于氯仿萃取相;石油醚萃取相通过促进SPCA-1释放ROS来诱发线粒体依赖性早期凋亡的发生,并使促凋亡蛋白Caspase-3和p53表达上升,同时抑制蛋白PARP表达,从而发挥其抑制SPCA-1肺癌细胞增殖的作用;而氯仿萃取相主要通过将SPCA-1细胞阻滞在S期抑制其增殖。     

猴头菌子实体醇提物的生物活性

通过对猴头菌(Hericium erinaceus)子实体的乙醇提取物进行萃取,得到了石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和剩余水分部共5个分部,通过定性鉴定分析了其中次生代谢物质的成分,并以保护PC12细胞损伤和抑制DPP-IV酶的活性为实验模型,寻找具有抗衰老、降血糖等生物活性组分。结果表明,猴头菌子实体的醇提取物中可能含有生物碱、酚类(或鞣质)、甾类(或萜类)、蒽醌等物质。5个分部对NaN3诱导所致的PC12细胞损伤均具有一定恢复作用,与对照(69.5%)比,剩余水分部活性最强(84.6%)。石油醚分部和剩余分部在浓度为1.0mg/mL时对DPP-IV酶的抑制率超过了阳性对照药(25.25%),而氯仿萃取分部在浓度为0.4mg/mL时活性已超过阳性对照药,说明氯仿分部具有较强的降血糖潜力。     

猴头菌子实体粉的复合酶解及其功能特性

在筛选的复合酶(纤维素酶:β-葡萄糖苷酶:壳聚糖酶)配比(1:1:1)基础上,采用单因素实验研究料液比、加酶量、酶解时间、酶解温度、pH对猴头菌(Hericium erinaceus)子实体粉中多糖溶出量的影响,通过响应面法确定其最佳提取工艺参数,并对酶解后子实体粉溶出多糖的理化性质及保护胃黏膜上皮细胞效果进行分析.结...     

金针菇子实体多糖FVPB1对小鼠B细胞的免疫调节作用

通过检测金针菇(Flammulina filiformis)子实体多糖FVPB1对小鼠B细胞的体外增殖、激活、分泌免疫球蛋白和白细胞介素-10(IL-10),以及调节IL-10相关信号通路的作用,评价FVPB1的免疫调节活性.结果 表明:FVPB1可激活B细胞并促使其增殖、分泌免疫球蛋白IgG、IgM和产生IL-10,...     

茯苓多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用

为评价茯苓(Poria cocos)多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用,用CCK-8法测定茯苓多糖对细胞增殖的抑制率,用DAPI染色法、AOEB双荧光染色法分析茯苓多糖对细胞凋亡的影响,用细胞划伤愈合实验测定茯苓多糖对细胞迁移能力的影响,用蛋白免疫印迹实验检测茯苓多糖对细胞凋亡、迁移相关蛋白表达的影响。结果表明：茯苓多糖具有抑制NCI-H460细胞增殖、集落形成和迁移的能力,可诱导NCI-H460细胞凋亡;500、1 000μg·mL^-1的茯苓多糖可使Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2和MMP-2蛋白表达量降低。     

菌草栽培猴头菌子实体多糖的研究

以菌草栽培和木屑栽培的猴头菌子实体为试材,采用L9(34)正交实验设计方法对2种猴头菌子实体粗多糖进行提取,研究了不同浸提次数、料液比、浸提时间和温度对猴头菌子实体粗多糖得率的影响;用DEAE SepHarose Fast Flow离子柱层析法和SepHadex G-100凝胶柱层析色谱法对提取出的粗多糖进行初步分离和纯化,以期得到几个组分,且每组分为具有单一对称峰的多糖。结果表明:猴头菌子实体粗多糖提取的最佳条件是,浸提2次,料液比1∶25g·mL-1,浸提时间4h,温度90℃。菌草栽培猴头菌子实体多糖得到3个组分,分别记为cHEP1、cHEP2、cHEP3;木屑栽培猴头菌的子实体多糖纯化后只得到2个组分,分别记为sHEP1、sHEP2。对分离出的cHEP2、cHEP3和sHEP2纯度鉴定结果表明,3种组分均显示为单一对称峰。     

三种植物提取物对梨储藏期黑斑病菌抑制作用

以梨黑斑病原菌(Alternaria kikuchiana Tanaka)为供试菌株,采用菌丝生长速率测定法和病原孢子萌发率方法,研究了三七、五味子和白果3种提取物不同浓度对梨黑斑病原菌的抗菌活性。结果表明:3种植物提取物对梨黑斑病均表现出了不同程度的抑制活性,随着提取物浓度的增大相对菌落直径减小,且同种提取物对菌落生长的抑制作用在不同浓度之间存在差异。在三七提取物的浓度为4 000mg·L~(-1)时抑制率高达79.29%,同时在2 000、1 000mg·L~(-1)的质量浓度下排除乙醇干扰(相加或相减作用)影响,抑制率大于50.00%。五味子和白果提取物只有在4 000mg·L~(-1)下抑制率分别为52.78%和50.56%,而在其它浓度下抑制不明显。表明三七提取物在较高浓度4 000、2 000、1 000mg·L~(-1)下具有较高抑制梨黑斑病病菌的活性。三七、五味子和白果各提取物的EC50分别为524.40、3 196.44、3 558.51mg·L~(-1)。三七、五味子和白果提取物浓度在4 000mg·L~(-1)时孢子萌发率分别为28.16%、44.44%和52.21%。表明三七提取物处理能够抑制梨黑斑病病菌丝生长和病原孢子的萌发。     

36种植物提取物液对食用菌两种竞争性木霉菌的抑制作用

木霉菌是食用菌生产中危害普遍和严重的一类病原菌,常引起培养料污染和菌丝体凋亡。本研究将35种植物提取液加入PDA培养基,筛选对绿色木霉(Trichoderma viride)和矩孢木霉(T.oblongisporum)具有抑制效果的植物材料。结果表明,商陆(Phytolacca acinosa)水煎液对绿色木霉(T.viride)抑制率达到了92.9%,蒲公英(Punica granatum)提取液对矩孢木霉抑制率达到73.5%。     

美味侧耳子实体组织的细胞活力

依据子实体组织中的细胞活力与TTC－脱氢酶活性的正相关性，对生长发育的美味侧耳（Pleurotus sapidus)子实体各结构组织进行了TTC－脱氢酶的活性测定。结果是：随着侧耳子实体的生长发育菌龄 的增加，菌褶组织中的细胞活力逐渐增强，其它各结构组织中的细胞活力逐渐下降。菌柄和菌柄与菌盖之间的组织细胞活力以幼龄时期的最强，周边和表皮组织中的细胞活力，除幼龄时期的菌柄组织外，均高于同发育时期的其内部各结构组织中的细胞活力。     

猴头菇子实体碱溶性葡聚糖的分离纯化

猴头菇(Hericiumerinaceum)又名猴菇、猴头蘑、猴头菌、刺猬菌,自古以来被视为珍贵的中药药材。日本学者从猴头菇子实体中首次发现了数种新的生理活性物质,如对海拉细胞的繁殖有明显抑制作用的酚类物质[1]和脂肪酸[2]、3种对神经生长因子的合成有显著促进作用的化学物质[3],3种     

超声提取桦褐孔菌子实体多糖及多糖对癌细胞作用的研究

采用正交试验优化桦褐孔菌子实体多糖的超声提取工艺条件,并对提取多糖的抗肿瘤活性进行研究。结果表明,桦褐孔菌多糖超声提取的最佳工艺条件为超声时间70min,温度80℃,频率20kHz,加水量12倍水,其多糖在体外对肝癌HEPG2细胞株具有明显的抑制作用,并可诱导肿瘤细胞凋亡,体内实验发现多糖可显著抑制小鼠S180肉瘤的生长,并具有增强免疫作用。     

桑黄醇提物对MCF7乳腺癌细胞活力和周期改变的影响

为评价桑黄(Phellinus baumii)子实体醇提物对MCF7乳腺癌细胞的影响,用不同浓度醇提物作用于MCF7细胞,用Alamar blue法测定细胞增殖率,显微观察细胞形态变化,用流式细胞术PI染色法和DCF染色法分别检测细胞周期变化和ROS释放量。结果表明:桑黄子实体醇提物使MCF7细胞形态发生明显变化,对MCF7细胞增殖有显著的抑制作用,能引起MCF7凋亡细胞数量升高、降低S和G2/M细胞数量,并呈现浓度梯度依赖性,但ROS实验结果提示桑黄子实体醇提物的促肿瘤细胞凋亡与ROS释放无关。     

十株野生猴头菌菌株的栽培性状及麦角甾醇含量

考查采自黑龙江省不同地区的10个猴头菌(Hericium erinaceus)野生菌株的液体培养性状和栽培农艺性状,同时测定了菌丝体、子实体中麦角甾醇含量,为猴头菌育种筛选亲本材料。结果表明:液体培养中,5号和10号菌株菌丝产量较高,分别为2.23g/100 mL、2.39g/100 mL,麦角甾醇含量分别为0.92 mg/g、0.90mg/g;栽培中,5号和10号菌株子实体产量高,菇型圆整、商品性状好;4、6和9号菌株子实体中麦角甾醇含量相对较高。     

棘托竹荪发酵物的体外抗肿瘤活性

以肿瘤细胞HepG2、B16、K562和正常细胞WPMY-1为受试细胞,对棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata)发酵菌丝体和发酵液不同浓度乙醇提取物和水提物的体外抗肿瘤活性进行测定.结果表明:菌丝体的不同乙醇浓度提取物仅对肿瘤细胞K562和B16的增殖有较好的抑制作用,而在实验浓度内对肿瘤细胞HepG2和正常细胞WPMY-1增殖的抑制能力较弱.与菌丝体相比,发酵液对肿瘤细胞的增殖抑制作用更强,其不同浓度乙醇提取物对肿瘤细胞HepG2、B16、K562和正常细胞WPMY-1的增殖都有较强的抑制能力.     

Ethyl acetate extract of Pleione bulbocodioides (Franch.) Rolfe induces apoptosis of human leukemia K562 and HL-60 cells through intrinsic mitochondrial apoptosis pathway

AIM:To investigate the effects of ethyl acetate (EtOAc) extract of Pleione bulbocodioides (Franch.) Rolfe on proliferation and apoptosis of human leukemia K562 and HL-60 cells and the possible apoptosis pathway. METHODS:Human leukemia cell lines were treated with EtOAc extract of Pleione bulbocodioides at different concentrations. XTT method was used to evaluate the viability of K562 cells and HL-60 cells. The cell growth inhibition was calculated by Trypan blue exclusion test. The percentage of apoptotic cells was determined by flow cytometry, and 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) was used to observe morphological changes of the cells. The cell cycle was observed by propidium iodide (PI) staining. The protein expression of Bcl-2, Bax, cleaved poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), cleaved caspase-3, cytochrome C and apoptosis-inducing factor (AIF) wase determined by Western blot. RESULTS:The cell viability and proliferation were inhibited by EtOAc extract of Pleione bulbocodioides with IC₅₀ of (42.14±2.54) mg/L for HL-60 cells and (51.28±3.12) mg/L for K562 cells at 24 h. The results of Annexin V-FITC/PI and DAPI staining showed that EtOAc extract of Pleione bulbocodioides induced cell apoptosis in a dose-dependent manner. The apoptotic rate was increased compared with control group (P<0.05). The G₂ phase increased with typical cell apoptosis-induced morphological changes. The levels of pro-apoptotic proteins Bax, cleaved PARP and cleaved caspase-3 were increased, while Bcl-2 was down-regulated (P<0.05). Cytochrome C and AIF in cytosol, characteristic proteins of intrinsic mitochondrial apoptosis pathway, also increased with the concentration of EtOAc extract of Pleione bulbocodioides increasing (P<0.05). CONCLUSION:EtOAc extract of Pleione bulbocodioides significantly inhibits cell proliferation and induces cell apoptosis in human leukemia cell lines HL-60 and K562 through intrinsic mitochondrial apoptosis pathway.