动物细胞高密度培养用多孔微球

动物细胞高密度培养用多孔微球王佃亮肖成祖（中国人民解放军航空医学研究所１０００３６）多孔微球（ｐｏｒｏｕｓｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ）又称多孔微载体（ｐｏｒｏｕｓｍｉｃｒｏｃａｒｉｅｒｓ）或大孔微载体（ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｍｉｃｒｏｃａｒｉｅｒｓ）,是近几年在国外发展起来的一项新的动物细胞高密度培养生物技术。它克服了固体微载体（ｓｏｌｉｄｍｉｃｒｏｃａｒ－ｉｅｒｓ）培养时细胞仅在表面生长、微...     

培养乳鼠心肌细胞自发性〔Ca~（2＋）〕_i瞬间变化的实验模型

使用Ｃａ￣（２＋）敏感的荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ,对培养的心肌细胞测定细胞内Ｃａ￣（２＋）的瞬间变化。结果为,在一个心搏周期中,经过大约１８０ｍｓ的时间,［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化达到最大值,然后恢复到基线水平（最小值）,经历了２６０ｍｓ。测得平均［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的最大值及最小值分别为３４６±３８ｎｍｏｌ／Ｌ和１０２±１８ｎｍｏｌ／Ｌ。血管紧张素Ⅱ１００ｎｍｏｌ／Ｌ引起［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化最大值明显增加,但对［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的基线水平没有明显的影响。ｒｙａｎｏｄｉｎｅ３μｍｏｌ／Ｌ使［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的幅度明显降低。ＫＣｌ５０ｍｍｏｌ／Ｌ使［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化完全停止,并明显增加［ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的基线水平。结果提示,本实验模型可用来观察［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的瞬间变化。     

植物青枯病菌细菌素的产生,性质及其利用

细菌素（Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ）是细菌代谢过程中合成的、对同种或近缘种有特异性抑制作用的杀菌蛋白或多肽物质［１］。大多数植物病原细菌如放射农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、密执安棒形杆菌（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｓｔｓ）、软腐欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ、 Ｅ． ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、丁香假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ）、甘蓝黑腐黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）等都具有产生细菌素的能力［２］…     

显示基因表达差异的PAGE—银染技术

ｄｄＲＴ－ＰＣＲ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ　ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ－ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术是Ｌｉａｎｇ和Ｐａｎｄｅｅ~（［１］）于１９９２年首先建立的一种在ＲＮＡ水平上显示基因表达差异,进而分离目的基因的有效方法。与其它分离基因的方法相比,ｄｄＲＴ－ＰＣＲ方法具有许多优点~（［２］）,目前已经成为筛选未知差异表达基因的最为有效的方法之一。ｄｄＲＴ－ＰＣＲ是３种技术的有机结合：（１）通过错定引物Ｔ１２ＭＮ（Ｍ＝Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ,Ｎ＝Ａ、Ｃ…     

有序差异显示:一种基因表达谱系统比较法

系统研究具有同一基因组的各种细胞群之间基因的差异表达谱十分重要。目前,研究基因差异表达的技术大致有ｍＲＮＡ差异显示［１］、ＲＤＡ［３］、ＳＳＨ［４、５］和ｃＤＮＡ阵列［６］等。近几年,还发展了一些研究基因差异表达谱系统的技术,如ＲＬＣＳ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｌａｎｄ－ｍａｒｋｃＤＮＡｓｃａｎｎｉｎｇ）［８］、ＧＥＦ（ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ－ｓｉｏｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）［２］和ＲＮＡ指纹法［９］等。然而,这些技术或较为复杂,或灵敏度偏低。本文拟介绍一种有效的基因表达谱系统比较法——有序差…     

人工饲养褐马鸡的繁殖生物学研究

人工饲养褐马鸡的繁殖生物学研究刘冰许,徐新杰郑州市动物园４５０００２褐马鸡（Ｃｒｏｓｓｏｐｔｉｌｏｎｍａｎｔｃｈｕｒｉｃｕｍ）,属鸡形目雉科,为我国一级保护野生动物。刘焕金等曾对褐马鸡的野外生态学进行了较为系统的研究￣［２］,而人工饲养褐马鸡的繁殖生...     

山东宁阳早更新世哺乳动物化石(英文)

１９９９年,作者收到王元青博士转来胡长康老师未研究的一批哺乳动物化石。这些化石由山东省博物馆工作人员采自山东宁阳县伏山的裂隙堆积物中。根据化石围岩判断这批化石可归入同一动物群。该动物群包含１２种：松鼠科１种（Ｓｃｉｕｒｏｔａｍｉａｓ　ｓｐ．）,兔科２种（Ｂｒｅｖｉｌａｇｕｓ ｂｒａｃｈｙｐｕｓ,Ｌｅｐｕｓ ｓｐ．）,食肉目５种（Ｐａｃｈｙｃｒｏｃｕｔａ ｐｅｒｒｉｅｒｉ,Ｎｙｃｔｅｒｅｕｔｅｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ,Ｃａｎｉｓ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ, Ｈｏｍｏｔｈｅｒｉｕｍ ｓｐ．和Ｍｅｌｅｓ ｓｐ．）,牛科２种（Ｇａｚｅｌｌａ ｓｐ．, Ｏｖｉｂｏｖｉｎａｅ ｇｅｎ ｅｔｓｐ．ｉｎｄｅｔ．）,鹿科２种（Ｃｅｒｖｕｓ　ｓｐ．,Ｃｅｒｖｉｄａｅ　ｇｅｎ　ｅｔ　ｓｐ．ｉｎｄｅｔ．）。其中,Ｐａｃｈｙｃｒｏｃｕｔａ　ｐｅｒｒｉｅｒｉ个体明显小于桑氏鬣狗（Ｐａｃｈｙｃｒｏｃｕｔａ ｌｉｃｅｎｔｉ）,ｐ２后附尖较发育,ｐ４前附尖高,ｍｌ三角座窄。四川巫山原鉴定为桑氏鬣狗的标本中至少有一件下颌骨（重庆自然博物馆,ＣＶ８７７）应当归入此种。Ｍｅｌｅｓ ｓｐ．具有较周口店第１８点发现的Ｍｅｌｅｓ ｃｈｉａｉ及中更新世常见的Ｍｅｌｅｓ　ｍｅｌ?     

染色体显微切割技术

最近十几年里,在对染色体特定基因研究和分子标记遗传图谱等研究方面,以经典的遗传作图为基础,出现了很多新方法,微切及微克隆技术（ＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＭｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎａｎｄＭｉ－ｃｒｏｃｌｏｎｇ）是随着近１０年来分子生物学技术的发展而诞生的...     

糖皮质激素对肝细胞内游离钙的作用

应用钙离子荧光指示剂ｆｕｒａ－２,对糖皮质激素（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ,ＧＣ）是否影响肝细胞内游离钙（Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｆｒｅｅ　ｃａｌｃｉｕｍ,［Ｃａ２＋］ｉ作了初步探讨。结果发现,ＧＣ在短期内能升高肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ,水平,并具有明显的量效关系。以１．０μｍｏｌ／Ｌ的Ｃｏｒｔｉｓｏｌ和１０．０μｍｏｌ／Ｌ的Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ效果最好。加入１．０μｍｏｌ／Ｌ的Ｃｏｒｔｉｓｏｌ０．２５ｍｉｎ即可引起肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ的明显升高,到１０分钟时效应达高峰。此时与静息状态的肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ水平相比,胞浆内游离钙升高了近３倍;与相应对照组比较,胞浆内游离钙升高具有明显的统计学意义,Ｐ＜０．０１。ＲＵ４８６为一种人工合成的糖皮质激素受体（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＧＲ）的拮抗剂,它可以取消ＧＣ升高肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ的效应,提示ＧＣ升高肝细胞内［Ｃａ２＋］ｉ可能与ＧＲ介导有一定关系。鉴于ＧＣ升高［Ｃａ２＋］ｉ时间较短,推测与肝细胞膜ＧＲ的非基因快速调节作用影响钙离子通道有关。     

肿瘤坏死因子的分离纯化

肿瘤坏死因子（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα）具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节等功能。自从１９７５年Ｃａｒｓｗｅｌ等人［１］发现该因子以来,ＴＮＦ一直受到科学界的重视。ＴＮＦ是一种含有１５７个氨基酸的非糖基化蛋白,相对分子质量大约为１７３５...     

毛叶香茶菜素的结构订正

我们从安徽省黄山产的大萼香茶菜（Ｒａｂｄｏｓｉａｍａｃｒｏｃａｌｙｘ（Ｄｕｎｎ）Ｈａｒａ）中分得一结晶,其元素分析和１３Ｃ－ＮＭＲ与毛叶香茶菜素［１］完全一致,故推定为毛叶香茶菜素,根据该结晶的元素分析,ＭＳ、ＮＭＲ、ＣＯＳＹ和ＮＯＥＳＹ等光谱数据,其结构应订正为（２）。表１表明：毛叶香茶菜素（２）的分子式由元素分析和高分辨质谱确定为Ｃ２４Ｈ３６Ｏ９,毛叶香茶菜素（１）的分子式由元素分析也应确定为Ｃ２４Ｈ３６Ｏ９。由于赵治清等误将质谱中Ｍ＋－Ｈ２Ｏ碎片离子峰ｍ／ｚ４５０当作分子离子峰（毛叶香茶菜…     

六倍体山羊草与普通小麦杂种F1细胞学研究

粗厚山羊草［Ａｅｇｉｌｏｐｓｃｒａｓｓａ Ｂｏｉｓｓ．（２ｎ＝ ６ｘ＝ ４２,ＤＤＤ２ Ｄ２ＭＣｒＭＣｒ）］、叙利亚山羊草［Ａｅ．ｖａｖｉｌｏｖｉｉ （Ｚｈｕｋ．）Ｃｈｅｎｎ．（２ｎ＝ ６ｘ＝ ４２, ＤＤ ＭＣｒＭＣｒＳＰ ＳＰ）］与普通小麦［Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．（２ｎ＝ ６ｘ＝ ４２, ＡＡＢＢＤＤ）］杂种Ｆ１ 植株形态大多偏向山羊草亲本。４ 个叙利亚山羊草×普通小麦和１ 个粗厚山羊草×普通小麦杂种Ｆ１ 自交结实,结实率在０．１％ —６．５％ 之间。这些种子胚乳很少,生活力较弱,播种后,只有少数种子出苗。杂种Ｆ１ ＰＭＣ减数分裂染色体配对水平较低,出现大量的单价体,二价体低于理论值,并且大多为棒形,说明两种山羊草的Ｄ组染色体已经过很大的修饰。在各杂种Ｆ１ 中还观察到少量的三价体,有些杂种还可见频率很低的四价体和五价体。以山羊草为母本的杂种Ｆ１ 染色体交叉频率优于反交。Ｆ１ 染色体分离极不正常,产生大量的多分孢子和微核。在叙利亚山羊草×冀麦３０ 号中还发现１ 株体细胞染色体为２１ 条的植株,其原因尚需进一步研究确定     

小鲤地理分化的研究

小鲤Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｍｉｃｒｉｓｔｉｕｓ分布于云南省的滇池、抚仙湖和星云湖,对历年馆藏和作者近年定期野外收集的２００尾标本和生态资料进行综合分析的结果表明：小鲤已分化为两个地理亚种,即滇池特有的小鲤指名亚种Ｃ．（Ｍ．）ｍｉｃｒｉｓｔｉｕｓ ｍｉｃｒｉｓｔｉｕｓ Ｒｅｇａｎ和分布于抚仙湖、星云湖的抚仙小鲤Ｃ．（Ｍ．）ｍｉｃｒｉｓｔｉｕｓ ｆｕｘｉａｎｅｎｓｉｓ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．,亚种间形态的     

工布乌头根中的二萜生物碱

工布乌头（ＡｃｏｎｉｔｕｍｋｏｎｇｂｏｅｎｓｅＬａｕｅｎｅｒ）系毛茛科乌头属植物,分布于西藏及四川西部,其块根有剧毒,泡酒外用可治疗跌打损伤和毒虫咬伤［１］。Ｙｕｅ等［２］、王锋鹏等［３］和庞志功等［４］曾从该植物分离到５个二萜生物碱。本文报道从四川产工布乌头的块根分离出的４个二萜生物碱。根据ＭＳ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ等波谱分析,确定其中一个微量成分为新Ｃ１９－二萜生物碱,命名为工布生（ｋｏｎｇｂｏｅｎｓｉｎｅ,１）另外３个已知化合物分别鉴定为瓜叶乌碱甲素（２）、印乌碱（３）和它拉乌头胺…     

用多孔微载体Cytopore高密度培养CHO工程细胞生产rHEPO

在２．２Ｌｃｅｌｉｇｅｎ灌注培养系统中采用Ｃｙｔｏｐｏｒｅ多孔微载体培养产重组人促红细胞生成素（ｒＨＥＰＯ）的细胞Ｃ２。细胞密度达到１×１０７／ｍＬ,ｒＨＥＰＯ最高可达９．７ｍｇ／Ｌ。该载体具有表面积高,使用浓度低,便于扩大培养的特点,便于进行大规模培养     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)cDNA的克隆与表达

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ,ＴＲＡＩＬ）是新近发现的肿瘤坏死因子家族成员,亦称凋亡素２配体（Ａｐｏ２ｌｉｇａｎｄ,Ａｐｏ２Ｌ）［１,２］．由于ＴＮＦ参与机体的免疫调节和炎症反应,并发挥细胞毒作用,因而为世人所瞩目［３,４］．研究表明,ＴＲＡＩＬ与ＴＮＦ和Ｆａｓ／Ａｐｏ１配体一样,为典型的Ⅱ型跨膜蛋白,Ｃ端细胞外区域形成同源三聚体的亚结构,而Ｎ端１５～４０氨基酸为疏水区域并形成跨膜结…     

糖皮质激素对肝细胞内游离钙的作用

应用钙离子荧光指示剂ｆｕｒａ－２,对糖皮质激素（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ,ＧＣ）是否影响肝细胞内游离钙（Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕａｌａｒ ｆｒｅｅ ｃａｌｃｉｕｍ,［Ｃａ＾２＋］ｉ作了初步探讨,结果发现,ＧＣ在短期内能升高肝细胞［Ｃａ＾２＋］水入１．０μｍｏｌ／Ｌ的Ｃｏｒｔｉｓｏ０．２５ｍｉｎ即可引起肝细胞［Ｃａ＾２＋］的明显升高,到１０分钟时效应达高峰。此时与静息状态的肝细胞水平相比胞浆内游离钙     

[^3H]Cortisol及[^3H]Dexamethasone在大鼠肝细胞膜上的特异结合位点

本研究应用［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ和［３Ｈ］ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＤＥＸ）两种配基,观察到大鼠肝细胞膜上存在一类糖皮质激素（ＧＣ）特异结合位点。这些位点与ＧＣ的结合具有饱和性、高亲和力及低容量。其平衡解离常数（Ｋｄ）分别为１２．８４±６．５８ｎｍｏｌ／Ｌ和４０．２７±２３．４４ｎｍｏｌ／Ｌ;最大结合容量（Ｂｍａｘ）分别为２．５７±１．８４ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白质与０．６４±０．１８ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白质（ｃｏｒｔｉｓｏｌ,ｎ＝４;ＤＥＸ,ｎ＝３;±ＳＥ）。动力学实验数据所得的Ｋｄ值与Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析所得的Ｋｄ值结果基本一致。［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ和［３Ｈ］ＤＥＸ饱和结合实验数据用Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图分析,均显示为直线。Ｈｉｌｌ系数则分别为０．９８８０和０．９９９０．竞争抑制实验结果表明,ｃｏｒｔｉｓｏｌ对［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ的结合位点有高度特异性竞争,比其它几种类固醇（强的松、黄体酮、ＲＵ４８６、ＤＥＸ）的竞争力至少强４０倍以上．用放射自显影技术进行研究,也提供了［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ特异结合银粒位于大鼠肝细胞膜上的依据。     

脉冲电场对鸡胚脑细胞Ca~(2 )和cAMP含量的影响

利用ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光方法和放射免疫方法分别研究了脉冲电场对１１天和１４天胚龄的悬浮鸡胚脑细胞内Ｃａ２＋和环腺苷酸（ｃＡＭＰ）含量的影响,并探讨了在脉冲电场作用下这两种信号物质变化的相关性。实验结果表明：当电激液中［Ｃａ２＋］为１ｍｍｏｌ／Ｌ时,在宽度为１００微秒．强度为０．５,１．０,２．０ｋＶ／ｃｍ的脉冲电场作用下,１１天胚龄的鸡胚脑细胞内钙离子浓度（以［Ｃａ２＋］ｉ表示）与对照相比显著上升,其升高值随着脉冲强度的增加而增加,而细胞内ｃＡＭＰ含量与对照相比显著降低;用ＥＧＴＡ络合电激液中游离Ｃａ２＋以后,虽然细胞内［Ｃａ２＋］ｉ显著上升,细胞内ｃＡＭＰ含量没有显著变化。１４天胚龄的鸡胚脑细胞内［Ｃａ２＋］ｉ在脉冲电场作用下显著上升,而细胞内ｃＡＭＰ含量没有显著变化。脉冲电场对１１天和１４天胚龄的鸡胚脑细胞膜和细胞内Ｃａ２＋库Ｃａ２＋转移系统的开放均有显著作用,此作用具有对脉冲强度的依赖性。为了解物理信号跨细胞膜传导的方式提供了初步的实验根据     

湖南6种毛莨科植物的核型研究

本文对产于湖南的６种毛莨科植物的染色体进行了研究。裂叶星果草［Ａｓｔｅｒｏｐｙｒｕｍｃａｖａｌｅｒｉｅｉ（Ｌｅｖｌ．ｅｔＶａｎｔ）Ｄｒｕｍｍ．ｅｔＨｕｔｃｈ．）的染色体属于Ｒ型,核型公式为２ｎ＝１６＝１２ｍ＋２ｓｍ＋２ｔ,核型类型属于ＺＢ;打破碗花花（ＡｎｅｍｏｎｅｈｕｐｅｈｎｓｉｓＬｅｍ．）的核型公式为２ｎ＝１６＝１０ｍ＋４ｓｔ＋２ｔ（２ｓａｔ）,核型类型属于２Ａ;粗齿铁线莲［Ｃｌｅｍａｔｉｓａｐｉｉｆｏｌｉａｖａｒ．ａｒｇｅｎｔｉｌｕｃｉｄａ（Ｌｅｖｌ．ｅｔＶａｎｔ）Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ］的核型公式为２ｎ＝１６＝１０ｍ＋２ｓｔ＋４ｔ（２ｓａｔ）或２ｎ＝１６＝１０ｍ＋２ｓｔ＋４ｔ（４ｓａｔ）随体染色体数目在居群之间有变化,核型类型属于２Ａ;扬子铁线莲［Ｃｌｅｍａｔｉｓｇａｎｉｐｉｎｉａｎａ（Ｌｅｖｌ．ｅｔＶａｎｔ）Ｔａｍｕｒａ］的核型公式为２ｎ＝１６＝１０ｍ＋２ｓｔ＋４ｔ（４ｓａｔ）,核型类型属于２Ｂ;毛莨（ＲａｎｕｎｃｕｌｕｓｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓＤＣ．）的核型公式为２ｎ＝１６＝６ｍ＋４ｓｔ＋６ｓｔ（２ｓａｔ）,核型类型属于３Ａ;毛莨（ＲａｎｕｎｃｕｌｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓＴｈｕｎｂ．）的核型公式为２ｎ＝?