肿瘤坏死因子—α单抗对烫伤大鼠组织脂多糖结合蛋白mRNA表达 …

探讨肿瘤坏死因子－α单抗治疗对烫伤后组织ＴＮＦ－α及脂多糖结合蛋白ｍＲＮＡ表达、不同器官功能改变的影响。方法采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型,检测伤后肺,肝,肠肾等组织ＴＮＦ－α及ＬＢＰｍＲＮＡ水平。结果烫伤后肺,肝,肠,肾等组织ＴＮＦ－α及ＬＢＰＭｒｎａ表达前水平均有显著升高,约为正常对照地１．７－２．５倍。     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的 探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法 采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素Ｂ治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织ＴＮＦ－αｍＲＮＡ含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果 烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,８ｈ达高峰,２４ｈ则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素Ｂ     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA 的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠35%体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验动物随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素 B 治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织 TNF-α mRNA 含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,8h 达高峰,24h 则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素 B 治疗可显著降低门静脉内毒素峰值(P<0.05)。另一方面,烫伤后2h 肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达较伤前值即有显著升高(P<0.05～0.01),烫伤后8h 达高峰,约为伤前值的1.7～2.6倍,且一直持续至伤后24h。给予多枯菌素 B 抗内毒素治疗后可不同程度抑制 TNF-α mRNA 的表达(P<0.05～0.01)。相关分析显示,门静脉内毒素水平同肺、肠、肾组织 TNF-α mRNA 呈显著正相关关系(r 值分别为0.365,0.381,0.484,P<0.05),但与肝组织无显著相关。结论肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达在烫伤早期即显著增多,并呈一逐渐升高的趋势。创伤后内毒素血症对机体多种组织 TNF-α基因表达具有重要影响。     

烫伤后脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-α基因表达的变化规律

目的 观察烫伤后机体主要脏器脂多糖受体ＣＤ１４（ＣＤ１４）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的表达的变化规律及二者的相互关系。方法 采用大鼠３５％Ⅲ度烫伤模型,分别于伤前,伤后１２,２４,４８,７２小时活杀动物,留取组织标本或分离腹腔巨噬细胞,检测组织或巨噬细胞ＣＤ１４,ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达。结果 烫伤后肝,肺,肾,肠等组织ＣＤ１４ｍＲＮＡ水平均有不同程度增高,分别于伤后１２小时和４８小时     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体在烧伤大鼠胸腺组织中的表达

目的 了解肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体（TRAIL）及其受体在严重烧伤大鼠胸腺组织细胞异常凋亡中的作用。方法 将50只Wistar大鼠随机分为假伤组（模拟烧伤）lO只和烧伤组40只（设伤后4、12、24、48h 4个时相点）。应用膜联蛋白A5-异硫氰酸荧光素／碘化丙啶双染法，观察大鼠胸腺组织中细胞凋亡的情况；反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测TRAIL的死亡受体5（DR5）、DR4、诱骗受体1（DcR-1）、DcR2在大鼠胸腺组织中的表达。结果 与假伤组大鼠细胞凋亡率[（6．7±0．8）％]比较，烧伤组于伤后4h[（17．1±0．4）％]起增高，12h时[（25．2±1．1）％]达高峰，48h时仍明显高于假伤组（P〈0．05）。烧伤组大鼠胸腺组织中DR5的表达显著高于假伤组，DcR2的表达则显著低于假伤组；其余受体的表达组间相似。结论 严重烧伤后早期大鼠胸腺组织的细胞凋亡明显增加，且胸腺组织中DR5和DcR2的表达异常，提示TRAIL凋亡途径可能参与了病理性细胞凋亡过程。     

肠内免疫营养对烫伤大鼠血清内毒素/脂多糖肿瘤坏死因子α及其mRNA和肝脏CD14 mRNA表达的影响

疾病条件下，特殊营养物质能防治营养缺乏，刺激免疫细胞增强应答功能，维护肠黏膜屏障功能等。本研究观察肠内免疫营养剂Stresson对烫伤大鼠血清内毒素/脂多糖（LPS），肿瘤坏死因子（TNF）α及其mRNA，肝组织CD14 mRNA表达的影响，并探讨其作用机制。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠肝脏中的表达及细胞定位

作者采用原位杂交法检测了大鼠严重烫伤后肿瘤坏死因子ｍＲＮＡ（ＴＮＦｍＲＮＡ）在肝脏中的表达及细胞定位。结果发现，在正常大鼠肝脏中的枯否氏细胞就表达ＴＮＦｍＲＮＡ。烧伤后，ＴＮＦｍＲＮＡ表达阳性细胞数迅速增加。伤后６～１２小时达顶峰，２４小时与正常无明显差异。其动态变化与门静脉血浆内毒素的变化极为相似。同时还发现烧伤后血窦内皮细胞及门静脉周围浸润的炎症细胞ＴＮＦｍＲＮＡ表达也为阳性，其变化以伤后１２～２４小时最为明显。作者认为肠源性内毒素是ＴＮＦｍＲＮＡ表达的主要刺激物。内皮细胞、中性粒细胞表达阳性提示其已被活化。上述三种细胞在内毒素导致的肝脏损害中发挥了重要作用。     

杀菌/通透性增加蛋白对休克大鼠肺组织细胞因子mRNA表达的影响

作者在大鼠失血性休克（４ｋＰａ，１８０分钟）模型上，观察了重组杀菌／通透性增加蛋白（ＢＰＩ）对肺组织肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白介素－６（ＩＬ－６）ｍＲＮＡ表达及急性肺损伤的影响，并对肠源性内毒素血症与炎症细胞因子诱发的关系进行了探讨。结果显示：失血性休克可导致血浆内毒素含量显著升高，肺组织ＴＮＦ、ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达分别在复苏后２、８小时明显增多（Ｐ＜０．０５～０．０１）；给予ＢＰＩ治疗则完全中和休克所致内毒素血症，并不同程度地抑制肺组织ＴＮＦ、ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０５～０．０１）；肺毛细血管通透性与髓过氧化物酶活性均明显降低。作者认为，ＢＰＩ可有效防止失血性休克诱发的急性肺损伤，其作用机制可能与抑制肠源性内毒素血症所介导的局部组织炎症细胞因子基因表达有关。     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞形态及表达结缔组织生长因子的影响

目的 通过观察肿瘤坏死因子（TNF）-α对肝星状细胞（HSC）形态和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨TNF—α在肝纤维化中的作用机制。方法 采用体外培养大鼠肝星状细胞，加入TNF-α和TGF-β1，透射电镜观察肝星状细胞的形态学改变并应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测不同处理组HSC中CTGF的表达。结果 TNF-α、TGF—β1均诱导HSC中CT-GF表达；10μg／L浓度的TNF-α作用6、24和48h后，检测到CTGFmRNA表达，而TGF-β1在1μg/L浓度作用4h后，即可诱导HSC中CTGFmRNA表达。结论 TNF-α诱导HSC中CTGF的表达可能参与早期肝纤维化的形成。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞定位的研究

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子(TNF)在大鼠小肠中的表达及细胞定位,应用斑点杂交及原位杂交方法,结合血浆 TNF、内毒素浓度的变化,探讨了 TNF mRNA 的表达及细胞定位规律。结果发现,烧伤后小肠 TNF mRNA 的表达量迅速升高,在伤后6小时达峰值,是正常值的5.56倍。门静脉血浆TNF、内毒素的变化与之类似。正常大鼠小肠有少量的细胞表达 TNF mRNA,主要是小肠固有层内的单核吞噬细胞。烧伤后固有层内的阳性细胞明显增多,而且固有层毛细管内皮细胞表达也是阳性,隐窝内也出现大量的阳性细胞。提示 TNF 的表达分泌,在烧伤早期与肠源性内毒素血症有非常密切的联系。固有层及粘膜下层间质中的内皮细胞及单核吞噬细胞是肠道分泌 TNF 的主要细胞。TNF 分泌量明显增加,其结果是造成小肠局部微循环障碍或诱导自由基的产生,从而导致肠粘膜屏障的破坏。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞定位的研究

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在大鼠小肠中的表达及细胞定位，应用斑点杂交及原位杂交方法，结合血浆ＴＮＦ、内毒素浓度的变化，探讨了ＴＮＦｍＲＮＡ的表达及细胞定位规律。结果发现，烧伤后小肠ＴＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速升高，在伤后６小时达峰值，是正常值的５．５６倍。门静脉血浆ＴＮＦ、内毒素的变化与之类似。正常大鼠小肠有少量的细胞表达ＴＮＦｍＲＮＡ，主要是小肠固有层内的单核吞噬细胞。烧伤后固有层内的阳性细胞明显增多，而且固有层毛细管内皮细胞表达也是阳性，隐窝内也出现大量的阳性细胞。提示：ＴＮＦ的表达分泌，在烧伤早期与肠源性内毒素血症有非常密切的联系。固有层及粘膜下层间质中的内皮细胞及单核吞噬细胞是肠道分泌ＴＮＦ的主要细胞。ＴＮＦ分泌量明显增加，其结果是造成小肠局部微循环障碍或诱导自由基的产生，从而导致肠粘膜屏障的破坏。     

谷氨酰胺对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的评价谷氨酰胺对内毒索性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法静脉注射脂多糖(LPS)5 mg·kg-1复制大鼠ALI模型。雄性SD大鼠50只随机分为5组(n=10):A组为对照组;B组为LPS组;C组、D组、E组为谷氨酰胺+LPS组,分别于LPS注射前1h时、LPS注射同时、LPS注射后1 h静脉注射谷氨酰胺0．75 g／kg。所有动物于注射LPS或生理盐水后4 h颈动脉放血处死,采用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织TNF-αmRNA表达,免疫组织化学方法检测肺组织TNF-α蛋白表达,HE染色,光镜下观察肺组织病理学变化。结果与A组相比,B组TNF-αmRNA表达上调(P<0．01),肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、上皮细胞表达增强(P<0．01);与B组相比,C组和D组肺组织TNF-αmRNA及TNF-α蛋白水平均降低(P<0．01),肺组织的炎症反应减轻。结论在静脉注射LPS前或同时给予谷氨酰胺可通过抑制ALI大鼠肺组织TNF-α的过度生成,减轻肺损伤。     

肠内免疫营养对烫伤大鼠内毒素和CD14/肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的研究肠内免疫营养物对烫伤大鼠内毒素和CD14 mRNA、肿瘤坏死因子 (TNF)-α mRNA表达的影响及机制。方法致64只SD大鼠总体表面积(TBSA)30％Ⅲ度烫伤, 随机分为肠内免疫营养组(EIN组,32只)和标准肠内营养组(EN组,32只),另取8只大鼠作为伤前正常对照组(N组)。EIN组和EN组均给予等热量(125 Kcal／dl)肠内营养液。分别于伤前、伤后 1、4、7、10 d抽取静脉血和肝组织,检测血清内毒素和TNF-α浓度,RT-PCR检测肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA。结果烫伤后EN、EIN组血清内毒素、TNF-α浓度比伤前血清内毒素 (0．125±0．050)和TNF-α浓度(0．85±0．27)显著升高(P<0．01),且肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多;在伤后4、7、10 d,EIN组血清内毒素和TNF-α浓度以及肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA的表达均比EN组显著降低(P<0．05或P<0．01)。结论肠内免疫营养与标准肠内营养相比,可明显降低烫伤后血清内毒素水平,减少肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善烫伤后机体炎症反应。     

重组人N末端脂多糖结合蛋白对脂多糖致伤小鼠保护作用的初步研究

目的　初步观察重组人N末端脂多糖结合蛋白 (tLBP)对细菌脂多糖 (LPS)致伤小鼠的保护效应。　方法　选用雄性昆明小鼠 70只 ,随机分为致伤组 1(2 1只 ) :腹腔内注射LPS 10 0ng;保护组 1(2 1只 ) :腹腔内注射 10 0ngLPS 40mgtLBP;对照组 (8只 ) :腹腔内注射等渗盐水。于注射后15、30min及 1、3、6、12、2 4h测定 3组动物血清丙氨酸转氨酶 (ALT)及肿瘤坏死因子α(TNF α)的含量 ,并观察其肝、肺组织的病理学改变。另设致伤组 2及保护组 2各 10只 ,分别腹腔内注射LPS 4 0 0ng及4 0 0ngLPS 40mgtLBP,观察伤后 2 4h内动物的死亡数。　结果　保护组 1与致伤组 1血清ALT含量分别于伤后 12、6h到达峰值 ,各为 (41.0 0± 4 .5 8)、(99.5 0± 6 2 .6 3)U L,前者的升高幅度显著低于后者 (P <0.0 1);两组血清TNF α含量均于伤后 3h到达峰值 ,各为 (35 .96± 7.33)、(42 .4 9± 4 .79)fmol ml,保护组 1的升高幅度低于致伤组 1。与致伤组 1比较 ,保护组 1肝细胞变性程度明显减轻 ,未见肝细胞散在坏死病变 ;肺组织充血有不同程度减轻 ,肺泡腔内、支气管内炎性渗出明显减弱。致伤组2伤后 2 4h死亡 9只 ,保护组 2死亡 3只。　结论　初步认为重组人tLBP具有一定的生物学活性 ,对LPS致伤小鼠具有一定保护作用。     

静脉注射肿瘤坏死因子α对大鼠骨骼肌蛋白降解的影响及机制初探

目的　观察静脉注射重组大鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)对大鼠骨骼肌蛋白降解的影响 ,初步探讨其与糖皮质激素的关系。　方法　Wistar大鼠随机分为 3组 :A组为对照组 ;B组一次性静脉注射重组大鼠TNFα 1× 10 6 U kg ;C组预先使用糖皮质激素受体拮抗剂RU384 86灌胃 ,2h后注射重组大鼠TNFα(条件同B组 )。用药后 12h ,测量各组大鼠体温 ,分离伸趾长肌 ,称重后进行有氧孵育。采用高效液相色谱法测定总蛋白和肌纤维蛋白的降解率 ,以RNA印迹法检测泛素mRNA(2 .4kb)和C2亚基mRNA的表达变化。　结果　用药后 12h ,体温 :B、C组大鼠均明显高于A组 (P〈0 .0 1) ;伸趾长肌重量 :B、C组均明显轻于A组 ((P〈0 .0 1) ,但C组重于B组 (P〈0 .0 5 ) ;总蛋白和肌纤维蛋白降解率 :B组较A组分别升高 4 3%和 112 % (P〈0 .0 1) ;C组较B组分别降低 16 %和 2 8% (P〈0 .0 1) ;泛素mRNA和C2亚基mRNA的表达 :B组较A组分别升高约 4 .3、3.6倍 ,C组较B组均明显降低。　结论　静脉注射大剂量重组大鼠TNFα ,能增强大鼠骨骼肌泛素 -蛋白酶体途径的活性 ,导致总蛋白 ,特别是肌纤维蛋白降解率升高 ,糖皮质激素是该效应的介导因素之一     

肿瘤坏死因子-α对小鼠骨髓基质细胞护骨素表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对骨髓基质细胞护骨素(OPG)mRNA和蛋白质表达的影响以及TNF-α在骨代谢中的作用。方法用TNF-α干预培养的小鼠骨髓基质MBA—1细胞，用RT-PCR和Western blot检测TNF-α不同剂量和不同作用时间时OPG表达变化。结果①MBA—1细胞表达OP(；；②TNF-α对MBA—1细胞OPG mRNA和OPG蛋白质表达有下调作用，但无剂量和时间依赖性；③17—β雌二醇(17—β E2)能阻断TNF-α对MBA—1细胞OPG表达的下调作用；而吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC，一种核因子-κB抑制剂)不能拮抗此作用。结论TNF-α下调OPG表达。雌激素拮抗TNF-α，使MBA—1细胞OPG表达上调。TNF-α对OPG表达的影响与转录因子—κB信息通路无关。     

细胞外信号调节激酶抑制剂对烫伤脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及意义

目的　观察细胞外信号调节激酶 (ERK)抑制剂对烧伤后金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )脓毒症动物组织肿瘤坏死因子 (TNF) α表达及多器官功能损害的影响。方法　采用SD大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤后金葡菌攻击所致脓毒症模型 ,34只动物随机分为正常对照组 (n =6 )、烫伤对照组 (n=6 )、烫伤后金葡菌感染组 (n =12 )和ERK抑制剂AG12 6拮抗组 (n =10 ) ,检测动物肝、肾、肺组织中ERK磷酸化和TNF α基因 /蛋白表达的改变。结果　烫伤脓毒症后 0 5～ 2 0h肝、肺、肾组织ERK均呈现不同程度的活化 ,其中 2 0h分别为正常对照组的 1 94倍 (P <0 0 5 )、2 86倍 (P <0 0 1)、1 4 1倍。AG12 6拮抗组肺组织磷酸化ERK水平在 2 0h下降 70 6 % (P <0 0 1) ,而肝、肾组织其磷酸化水平不同时相点几乎完全抑制 ,同时各组织中TNF α基因及蛋白表达水平明显下调 (P<0 0 5或 0 0 1)。与烫伤脓毒症组相比 ,AG12 6拮抗组 2 0h肝、肾功能指标明显改善 ,肺组织髓过氧化物酶活性下降 4 0 3% (P <0 0 5 )。结论　ERK信号通路参与了严重烧伤后金葡菌感染所致炎症反应与急性组织损伤的病理过程 ,针对该环节进行早期干预可有效缓解多器官功能异常改变。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞…

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子在大鼠小肠中的表达及细胞定位，应用斑点杂交及原位杂交方法，结合血浆ＴＮＦ，内毒素浓度的变化，探讨了ＴＮＦｍＲＮＡ的表达及细胞定位规律。结果发现，烧伤后小肠ＴＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速高，在伤后６小时达峰值，是正常值的５．５６倍。门静脉血浆ＴＮＦ，内毒素的变化与之类似。     

烫伤大鼠肝脏脂多糖结合蛋白和脂多糖受体CD14 mRNA表达的意义

目的　观察烫伤后肠源性内毒素移位与肝组织内毒素增敏系统———脂多糖结合蛋白/脂多糖受体CD14(LBP/CD14)的相互关系及其意义。　方法　采用大鼠 35 %TBSAⅢ度烫伤模型 ,动物随机分为正常对照组、烫伤和重组杀菌 /通透性增加蛋白治疗组。烫伤组和rBPI2 1　治疗组动物于伤后 12h活杀。留取肝组织和血标本分别检测组织LBP、CD14、肿瘤坏死因子α(TNFα)mR NA表达及肝脏功能指标。　结果　烫伤后肝组织内毒素含量显著降增高 (P <0 .0 1) ,且肝组织LBP/CD14、TNFαmRNA表达亦明显增多。给予rBPI2 1　治疗可显著降低肝组织内毒素水平 ,并不同程度抑制组织LBP/CD14、TNFα基因表达。同时 ,rBPI2 1　治疗组动物血清谷丙转氨酶水平显著降低 (P <0 .0 1)。　结论　烫伤后移位内毒素聚积于肝脏 ,可明显刺激机体局部组织LBP/CD14mRNA的表达 ,而组织LBP/CD14表达上调可能是严重烫伤增敏内源性内毒素作用的主要分子生物基础