实时荧光跨越式滚环等温扩增技术检测蜂蜜掺伪大米糖浆

将跨越式滚环等温扩增技术(SRCA)与荧光技术相结合,建立一种实时荧光SRCA技术检测蜂蜜掺伪大米糖浆的方法。对DNA提取方案进行评估,以大米的特异性基因(PDL、SPS、rbcL、GOS9)为靶序列设计引物,筛选适宜的引物,优化扩增反应条件结合荧光技术建立检测蜂蜜掺伪大米糖浆的方法,并对该方法进行评价。结果表明,建立的实时荧光SRCA方法检测大米DNA的灵敏度为8.45×101 fg/μL,经特异性评价证实其特异性良好,在人工模拟掺伪检测中建立掺伪比例的对数与Ct值的线性关系,线性方程为y=6.618x+7.651(R2=0.993),可准确检出蜂蜜中低至1%的大米糖浆成分。该方法灵敏度高,检出限低,能够快速、准确检测蜂蜜掺伪大米糖浆,为蜂蜜掺伪的快速检测提供了新思路。     

不同蜜源蜂蜜的挥发性成分分析

蜂蜜是由蜜蜂从开花植物上采集的花蜜酿造而成,其成分(尤其是挥发性成分)组成在很大程度上取决于蜜源植物的种类。本文采用顶空固相微萃取技术HS-HPME对17种蜜源蜂蜜样品的挥发性成分进行富集,采用气相色谱-质谱联用仪GC-MS分析。结果显示:共有79种挥发性成分被鉴别出来,分属于醇类(22.78%)、醛类(17.72%)、芳香类(17.72%)、酯类(16.46%)、酮类(7.59%)、醚类(7.59%)、酸类(5.06%)、酚类(2.53%)、萜烯类(1.27%)和烷烃类(1.27%)。其中苯乙醇在16个样品中被检出,乙酸在15个样品中被检出,糠醛在14个样品中被检出,甲苯和苯甲醛在13个样品中被检出,乙醇在8个样品中被检出。不同蜜源蜂蜜的挥发性成分之间存在明显差异,主要表现在特定物质的种类或含量上。另外,蜂蜜的理化特性、储存条件、加工方式和分析方法及仪器均对其挥发性成分的组成或检测产生影响。     

蜂蜜的真实性鉴别方法研究进展

蜂蜜作为一种营养物质,有许多健康益处,例如调节免疫力和肠道微生物、抗菌、抗炎、抗氧化等。基于蜂蜜的营养价值和药用价值,蜂蜜需求的增长速度似乎快于产品的生产速度。因此,为了获取更高的利益可能出现掺假蜂蜜。蜂蜜通常被掺入各种糖浆或被混淆植物和地理来源,传统方法很难对各种蜂蜜进行检测。最近,国际养蜂联合会建议蜂蜜应能追溯到蜂农、蜜源植物,以及蜂场的地理位置,并推荐了更先进的方法,如核磁共振和高效液相高分辨质谱等方法来检测多种掺杂模式和蜂蜜植物来源和地理来源。本文综述了近年来蜂蜜真实性鉴别的新方法,包括光谱法、色谱法、核磁共振法、同位素比质谱法、电化学法、脱氧核糖核酸技术和酶活性方法,旨在为蜂蜜鉴定提供参考。     

基于电子鼻及气相色谱-质谱联用技术对川西高原4 种蜂蜜挥发性成分分析

为分析川西高原不同蜜源蜂蜜挥发性物质种类及成分的差异,采用电子鼻、顶空固相微萃取（headspace solid-phase microextraction,HS-SPME）与气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术对川西高原油菜蜂蜜、当归药花蜜、白刺花蜜和山花蜜4?种蜂蜜挥发性成分的响应值进行主成分分析、线性判别分析以及成分定性定量分析。结果表明：电子鼻检测到油菜蜂蜜、当归药花蜜、白刺花蜜、山花蜜的挥发性成分差异明显;HS-SPME-GC-MS分别检测出40、51、39?种和46?种挥发性成分,主要为醇类、酯类、酮类、醛类、烃类等化合物。4?种蜂蜜中共有挥发性成分有7?种,特有挥发性成分分别有22、27、26?种和19?种。电子鼻联合GC-MS分析可以成功区分不同来源蜂蜜样品的挥发性成分。     

氢核磁共振结合正交偏最小二乘法对油菜蜜中果葡糖浆掺假的判别分析

利用氢核磁共振(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)谱图结合正交偏最小二乘(orthogonal partial least squares,OPLS)法对油菜蜂蜜和果葡糖浆掺假蜂蜜进行判别分析。采集了303个油菜蜜样品和180个按照不同比例配制的果葡糖浆掺假蜂蜜样品的1H NMR谱图,并对油菜蜜主要糖类成分和部分低含量化合物进行了信号归属。采用OPLS对训练集数据进行分析,建立蜂蜜果葡糖浆掺假判别模型。通过排列实验法对模型进行可靠性检验。结果显示,油菜蜜和果葡糖浆掺假蜂蜜样品在OPLS得分图中能明显区分。训练集和测试集样品的总体判别正确率分别为98.40%和98.24%。因此,1H NMR与OPLS相结合可以实现油菜蜜中果葡糖浆掺假的快速鉴别。该方法是基于对蜂蜜成分的整体分析,避免了仅仅分析个别成分指标的检验方法中存在的缺陷,为蜂蜜质量监控提供了一种新思路。     

碳同位素比率法检测分析市售蜂蜜碳-4糖浆的 掺假情况

目的优化稳定碳同位素比率法,分析蜂蜜市场质量状况。方法蜂蜜用水混匀后,利用钨酸钠溶液和硫酸溶液沉淀蛋白,多次洗涤后冷冻干燥获得蜜蛋白,利用同位素质谱仪同时检测蜜蛋白和蜂蜜δ~(13)C值,用两点标准漂移校准进行数据处理分析,测得碳-4植物糖浆含量。结果对来自19个省的137批样品进行检测,有15批蜂蜜不符合我国蜂蜜产品行业标准的真实性要求,检出碳-4植物糖浆掺假情况,不合格率10.95%。结论检测方法优化后,检测时间缩短,蛋白提取成功率提高。通过对实际样品的分析,发现目前市售蜂蜜质量不容乐观。     

梯型熔解温度等温扩增检测食品中植物源成分的内标方法构建

目的 为梯型熔解温度核酸等温扩增(ladder-type melting temperature isothermal amplification, LMTIA)检测食品中植物源特异性基因建立内标方法, 同时可作为检测肉制品中植物成分的LMTIA方法。方法 针对植物ITS的共有序列, 设计LMTIA引物, 优化反应温度, 测定灵敏度, 并评估淀粉制品、蜂蜜、食用油DNA提取方法与LMTIA检测方法的适应性, 以H2O、鸭肉、鸡肉、羊肉、猪肉和牛肉基因组为阴性对照测试LMTIA方法的假阳性。结果 所建LMTIA方法在最优温度57 ℃时, 灵敏度为10 pg/μuL 玉米基因组与10 pg/μL玉米基因组, 可检出肉制品掺入0.1%的玉米淀粉, 并且所选淀粉制品、蜂蜜、食用油DNA提取方法均适用于LMTIA检测, 并且所有阴性对照样品在测试中均未出现假阳性。结论 本研究建立了LMTIA检测食品中植物源特异性基因的内标方法, 排除了DNA提取引起的LMTIA检测的假阴性, 同时为肉制品中植物成分定性检测建立了LMTIA方法。     

改良十六烷基三甲基溴化铵-磁珠核酸提取方法及在植物转基因检测中的应用

目的 建立一种快速、高效、便捷的植物基因组DNA提取方法并运用于植物转基因检测。方法 改良传统的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium ammonium bromide, CTAB)方法, 并结合磁珠吸附基因组DNA, 配合核酸自动提取系统提取水稻和加工米粉中的核酸, 荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测Bt63大米转基因成分, 并与另外4种提取方法的结果进行对比, 评价提取效果。结果 5种不同方法中CTAB-磁珠法提取的样品基因组DNA浓度和质量最佳, 荧光PCR检测低浓度Bt63转基因成分(0.01%)的Ct值最小, 检测结果最好。结论 该方法可高效快速地提取植物核酸, 在低含量的转基因成分检测中相比其他几种方法具有绝对优势。     

砷含量测定在蜂蜜掺假鉴别中的应用

目的建立一种通过检测蜂蜜中砷的含量来鉴别大米糖浆掺假的方法。方法检测并比较大量不同来源的大米糖浆和纯正蜂蜜中砷的含量,同时优化了蜂蜜中砷的检测方法,样品以硝酸-微波消解,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定,内标法定量。结果在0~5.0μg/L范围内线性良好,定量限为10μg/kg,10、15和30μg/kg的添加水平的回收率均在83.7%~109.6%之间,相对标准偏差小于5.9%,并确定了蜂蜜中大米糖浆的阳性判定限,砷含量在15μg/kg以上的蜂蜜为大米糖浆掺假蜂蜜。结论该方法前处理简单,结果准确度和精密度高,纯蜂蜜和大米糖浆的中砷的含量差别明显,可用于蜂蜜中大米糖浆的掺假鉴别。     

膜芯片技术对牛、羊、牦牛、驴肉源食品的掺伪鉴别

采用膜芯片技术,通过对牛、羊、驴、牦牛、鸡、鸭、兔、貂、狐、鼠、猪11 种目标物种的检测,实现对牛、羊、驴、牦牛物种的掺伪鉴别。结果表明：该方法具有良好的特异性和适用性,检测灵敏度和掺伪灵敏度均可达到0.1%,能快速、准确地同时鉴别牛、羊、驴、牦牛、鸡、鸭、兔、貂、狐、鼠、猪11 种动物源性成分,可满足肉类食品样品中对牛、羊、牦牛、驴等掺伪鉴别的检验需求。     

Development of primer and probe sets for the detection of plant species in honey

An objective of workpackage 3 within the European Research Project “TRACE” was the identification of PCR markers for the detection of plant species related to honey. Within the project “Miel de Corse”, a protected designation of origin (PDO) honey and “Miel de Galicia”, a protected geographical indication (PGI) honey as well as German and English honeys were analysed. Beside the development of plant species specific real-time PCR systems a method has been established for the detection of DNA derived from plant species in general.     

基于气相色谱-离子迁移谱法快速鉴别油菜蜜混合洋槐蜜

目的 探究油菜蜜混合洋槐蜜的快速识别方法。方法 利用感官分析方法和气相色谱-离子迁移谱法(gas chromatography-ion mobility spectrometry, GC-IMS)技术对100%洋槐蜜、100%油菜蜜及不同比例油菜蜜混合洋槐蜜样品挥发性组分进行测定与分析。依据GC-IMS指纹图谱信息,采用主成分分析法(principal componentanalysis,PCA)及聚类分析对蜂蜜样品进行分析。结果 油菜蜜混合洋槐蜜可通过三点检验分辨的混合比例为50%以上; 100%洋槐蜜、100%油菜蜜及混合蜜中共检测出84种不同的特征信号,鉴定出61种挥发性成分,洋槐蜜挥发性物质信号峰体积高于油菜蜜;随着油菜蜜混合比例的增加,混合蜜挥发性物质组成逐渐偏离洋槐蜜,更趋近于油菜蜜。PCA和聚类分析可以有效提取并压缩GC-IMS三维矩阵中的特征信息,区分和辨识100%洋槐蜜、100%油菜蜜以及50%～10%混合比例的混合蜜,并且能够表征油菜蜜掺假量对洋槐蜜挥发性成分信息的影响趋势。结论 GC-IMS方法可高效快速检测蜂蜜中挥发性化合物,作为区别不同植物源蜂蜜的一个判断指标...     

种属特异性PCR法鉴别罐头食品中猪、牛、羊、鸡、鸭源性成分

建立适用于肉类罐头等长时间高温加工食品中猪、牛、羊、鸡、鸭5种动物源成分种属特异性PCR鉴别方法。通过使用猪、牛、羊、鸡、鸭的种属特异性引物,对5种动物的总DNA模板进行PCR扩增,得到分别为212、147、202、131、201 bp的扩增产物,将测序结果在美国国家生物技术信息中心(US National Center for Biotechnology Information,NCBI)进行BLAST比对确认实验的准确性,并对市售罐头样品进行检测。该方法5种动物引物种属特异性良好,对猪、牛、羊、鸭源性成分的检测灵敏度可达1%,对鸡源性成分的检测灵敏度为2.5%。在对市售肉类罐头样品的检测中,6.6%样品与标签标注结果不符。该方法操作简便,成本低,结果准确可靠,可广泛用于肉类罐头食品和长时间高温加工食品中猪、牛、羊、鸡、鸭5种动物源成分的鉴别,具有十分广泛的实际应用价值。     

膜芯片用于肉制品中动物源性成分检测的研究

目的研究膜芯片技术检测肉类及其制品中动物源性成分,验证该技术的准确性及可行性。方法利用膜芯片检测肉制品中的动物源性成分,对样品中猪、牦牛、驴及羊源性成分的灵敏度、检出限进行相关实验,并就实际样品的检测与国家标准进行比较。结果该技术用于动物源性成分检测特异性良好,4种动物源性检测的灵敏度为0.1 ng,检出限为0.1%(w:w),适用的样品种类较广,实际样品的检测结果与国家标准荧光PCR法一致。结论该技术可作为快速筛选的方法,为肉制品的动物源性成分鉴定和掺假检测提供理论依据。     

SPME-GC-MS analysis of volatile organic compounds in honey from Basilicata. Evidence for the presence of pollutants from anthropogenic activities

Solid‐phase microextraction gas chromatography‐mass spectrometry analysis of nineteen samples of honey from Basilicata (southern Italy) showed the presence of some flavour components never described before in honey. Furthermore, some phenyl‐substituted hydrocarbons were detected. These compounds may be derived from the wastewater treatment plant in the area. Furthermore, in honey collected near an oil extraction plant, hydrocarbons were found; these may be derived from such plants present in the area.     

基于β-葡萄糖苷酶活力的蜂蜜真伪鉴别

提出以β-葡萄糖苷酶活力为指标的蜂蜜真伪鉴别新方法,采用分光光度法分析不同来源蜂蜜中的β-葡萄糖苷酶活力,研究不同储存条件下蜂蜜中β-葡萄糖苷酶活力的变化规律,探讨掺入不同比例大米高果糖浆的蜂蜜中以β-葡萄糖苷酶活力的变化规律。结果表明:不同来源蜂蜜中均能检测出β-葡萄糖苷酶活力,而大米高果糖浆中检测不到该酶活力;不同浓度油菜蜜分别在-18、4、25(室温)、30℃条件下储存11个月,随着储存时间的延长,蜂蜜中β-葡萄糖苷酶活力变化较小;随着油菜蜜中大米高果糖浆的掺假比例增大,β-葡萄糖苷酶活力呈线性下降。因此,β-葡萄糖苷酶活力是检测蜂蜜是否掺假的一个有效定性指标。     

同位素质谱联用技术鉴别无蛋白蜂蜜的真实性

本文从120份蜂蜜样品中筛选出15份无蛋白蜂蜜样品,应用元素分析-同位素质谱联用技术（EA-IRMS）、液相色谱-同位素质谱联用技术（LC-IRMS）、液相色谱测定蜂蜜还原糖含量等检测方法,进行无蛋白蜂蜜样品真实性系统研究。发现15份无蛋白样品皆为掺假掺杂蜂蜜,无蛋白蜂蜜样品的三类典型掺假掺杂手段为：一是掺入碳-4植物源水解产物;二是掺入碳-3植物源水解产物;三是以碳．3植物源高纯度果葡糖浆造假。     

实时荧光定量PCR法鉴别俄罗斯鲟鱼子酱分子

目的建立鉴别荧光定量PCR法鉴别俄罗斯鲟鱼子酱的方法。方法以鲟形目16种鱼类D-LOOP基因序列作为目的基因进行比对,选择差异序列设计俄罗斯鲟特异性引物,构建俄罗斯鲟源性成分实时荧光PCR检测方法。结果通过特异性检测同目7种近源物种、46种非近源物种,表明该方法对于俄罗斯鲟源性成分具有较好的特异性;进行梯度稀释灵敏度检测,可检出0.1 ng/μL俄罗斯鲟DNA。通过对市售6种鱼子酱共35个样本进行检测,可检测出鱼子酱中的俄罗斯鲟成分。结论该荧光检测方法特异性强、灵敏度较高,适用于鱼子酱中俄罗斯鲟源性成分的鉴定检测。     

The botanical sources,entomological proteome and antibiotic properties of wild honey

We hypothesize that the wild honey (Apis dorsata honey (ADH), A. florea honey, A. laboriosa honey and A. andreniformis honey) had high antibacterial activity to defend against degradation. The entomological proteins, botanical sources and antibacterial activities of wild honey were determined via a label-free proteome, DNA metabarcoding and agar well diffusion assay. The results showed that there were significant differences among physico-chemical properties, proteins and plant sources of honey samples from different honey bee species. All the honey samples diluted to a 90% moisture content inhibited Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Bacillus subtilis with the exception of 90% ADH. Honey solutions inhibited Chromobacterium violaceum, with exception of ADH and some other species honey with different moisture contents. The differences in antibacterial activity were attributed to differences in the botanical sources, entomological proteins of the honey. The species-specific proteins in honey from each species can be used for their identification     

Determination of important biochemical properties of honey to discriminate pure and adulterated honey with sucrose (Saccharum officinarum L.) syrup

The aims of the present study were to determine biochemical properties of honey samples and to discriminate pure and adulterated honey produced by the standard bee feeding method (control honey), the shaking method (pure blossom honey), and overfeeding (100 kg/colony syrup) with sucrose syrup (adulterated honey). The biochemical properties evaluated were moisture, ash, acidity, hydroxymethylfurfural (HMF), specific sugars (i.e. fructose, glucose, fructose–glucose, sucrose, and maltose), diastase activity, δ¹³C value (honey), δ¹³C value (protein), electrical conductivity, potassium, vitamin C, and proline. Fifteen honey samples were analyzed by discriminant analysis stepwise method. Proline, electrical conductivity and sucrose were found as discriminative characters of samples. Based on these three properties 100% of original group cases (samples) correctly classified in their real group. We found that the honey produced by feeding with 100 kg sucrose syrup per colony contained the sucrose as low as pure blossom honey. Therefore, the sugar (sucrose, fructose and glucose) content of honey cannot be used to distinguish between adulterated (sucrose syrup) and pure blossom honey.