肾小球系膜细胞增生与系膜硬化机制的初步探讨

我们应用细胞培养及免疫组化的方法，探讨了肾小球系膜细胞增生及系膜硬化的机制，并进而观察了它们在肾小球硬化听作用。结果显示：系膜细胞有自分泌功能，肿瘤坏死因子和血管内皮素可促进系膜细胞增生。大量增多的系膜基质不但含有Ⅳ型胶原，也有Ⅲ型胶原。系膜细胞增生，系膜基质增多最终导致肾小球硬化。     

肾小球系膜细胞与氧化应激

肾小球系膜细胞是最活跃的细胞固有成分,其在多种因素如高糖、血管紧张素-Ⅱ、醛固酮、机械牵拉、炎症反应、脂质沉积等刺激下表现为氧化应激(活性氧类产生过多和清除减少),促进肾小球硬化(包括糖尿病肾病)的发生和发展.干预治疗如噻唑烷二酮、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂、醛固酮受体拮抗剂、他汀类药物、抗氧化剂等...     

大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号：200410064899X)。 目的：观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。 方法：用20,40,80 μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。 结果与结论：苏木精-伊红染色及4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P < 0.05)。提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧和TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧(ROS)和转化生长因子β1，(TGF-β1)表达的影响及茶多酚的干预作用。方法 培养人肾小球系膜细胞，分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组，培养0、12、36h后，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞内TGF-β1，mRNA和蛋白表达的变化。结果 高糖导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量升高，上调TGF-β1，mRNA和蛋白表达，随时间延长更为明显；茶多酚干预可拮抗高糖时系膜细胞的上述改变。结论 高糖能促进人肾小球系膜细胞ROS产生增加，上调TGF-β1 mRNA和蛋白表达，茶多酚能抑制高糖对系膜细胞的作用。     

细胞因子对肾小球系膜细胞增殖的影响

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法，观察了人重组ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＴＮＦα对体外培养的成人肾小球系膜细胞增殖的影响，结果表明，在无血清培养条件下，ＨｒＩＬ－１β，ＨｒＩｌ－６和ＨｒＴＮＦα在一个较大的浓度范围内，均不能刺激系膜细胞的增殖；而有少量胎牛血清存在时，ＨｒＩＬ－６和ＨｒＴＮＦα可以促进系膜细胞增殖，但ＨｒＩＬ－１β无此作用另外，在实验中还发现，雷公藤多甙（ＴⅡ）对系膜细胞生长具有     

HGF抑制肾小球硬化作用机制的研究进展

肾小球硬化是多种原因导致肾小球损伤和病变的共同结局,也是肾功能衰竭的主要病理基础。从形态学来看,肾小球硬化表现为肾小球细胞的丧失和细胞外基质(extracel-lular matrix,ECM)的积聚。机械因素(如肾小球高压、高滤过)、代谢因素(如糖尿病、高脂血症)以及多种调节分子(如细胞因子、生长因子)等都与肾小球硬化的发生发展密切相关。近年来研究表明,减少ECM的积聚,拮抗细胞因子的不良作用,抑制系膜细胞(mesangial cell,MsC)的增殖活化已成为防治肾小球硬化、延缓肾小球疾病进展中的重要环节[1,2]。肝细胞生长因子(hepatocyte growth fac…     

环磷酰胺在体外对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究环磷酰胺(CTX)在体外对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞凋亡的影响。方法: 采用MTT法检测CTX、甲基强的松龙(MP)、低分子肝素(LMWH)对GMC细胞增殖的影响;采用光镜、荧光镜、流式细胞仪检测GMC细胞凋亡;GMC的Fas、Bcl-2蛋白质水平采用免疫组化法检测。结果:CTX、MP、LMWH均对GMC生长有抑制作用;CTX诱导GMC细胞凋亡, 使GMC的Fas蛋白水平增加。结论:CTX在体外可以抑制GMC细胞增殖, 可能通过Fas蛋白调节途径诱导GMC细胞凋亡。     

VLDL促进脂蛋白脂酶在人肾小球系膜细胞系的表达

目的 探讨人肾小球系膜细胞脂蛋白脂酶（LPL）的表达情况以及极低密度脂蛋白(VLDL)对其表达的影响。方法 用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、western blot和放射性同位素标记的脂质体底物法检测人肾小球系膜细胞系（HMCLs）LPLmRNA表达、蛋白合成及酶活性。western blot检测VLDL对肾小球系膜细胞LPL表达的影响。结果 用HMCLs,在276bp处可扩增出一条hLPL基因特异的条带;在55kd处可检测出LPL蛋白特异的条带;经肝素释放后HMCLs培养液中LPL是有活性的,为（0.959±0.022）U/L。VLDL在一定范围内可时间（0～16h）和剂量（0～100 mg/L）依赖性的刺激HMCLs LPL蛋白表达。结论 在肾小球系膜细胞可表达具有活性的脂蛋白脂酶,且其表达可受VLDL的调节。     

miR-451通过靶向Psmb8抑制糖尿病肾病小鼠肾小球系膜细胞炎症反应

目的:探讨微小RNA-451(miR-451)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)炎症发生的抑制作用及靶向β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunitβtype 8,Psmb8)基因的调控机制。方法:分别将MCs培养于低糖和高糖DMEM培养基中,q PCR检测miR-451的表达水平;q PCR检测过表达miR-451后炎症相关因子IL-18和TNF-α的m RNA表达水平;Western blot检测IL-18、TNF-α及Psmb8的蛋白表达水平;Western blot检测低表达Psmb8的MCs中IL-18和TNF-α蛋白的相对表达水平。结果:高糖组MCs的miR-451表达水平较低糖组明显降低(P0.01),而Psmb8表达却显著增高(P0.01)。进一步在高糖组过表达miR-451后,Psmb8的表达水平明显降低(P0.01),炎症相关因子IL-18和TNF-α表达水平亦明显降低(P0.01)。同时,在高糖组中沉默Psmb8后,IL-18和TNF-α表达水平降低(P0.01)。结论:miR-451在高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞中靶向抑制Psmb8的表达,降低炎症相关因子IL-18和TNF-α蛋白的表达,从而缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞的炎症反应。     

高糖培养人肾小球系膜细胞对JAK2/STAT1信号蛋白活化的影响

目的:观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMCs)Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法:将HMCs于高糖(30mmol/L)环境下培养不同时间后,Western blotting检测磷酸化JAK2、STAT1(p-JAK2、p-STAT1)水平;RT-PCR检测TGF-β1和FN mRNA的表达;ELISA测定上清液中TGF-β1和FN的含量,同时以低糖组作为对照。结果:与低糖对照组比较,高糖培养HMCsp-JAK2、p-STAT1蛋白明显上调,TGF-β1和FN mRNA表达和蛋白水平显著增加(P<0.01)。结论:高糖能通过激活HMCs中JAK2/STAT1信号途径,促进TGF-β1和细胞外基质分泌。     

环磷酰胺在体外对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响增殖及凋亡的影响

目的：研究环磷酰胺（CTX）在体外对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法检测CTX、甲基强的松龙（MP）、低分子肝素（LMWH）对GMC细胞增殖的影响；采用光镜、荧光镜、流式细胞仪检测GMC细胞凋亡；GMC的Fas、Bcl-2蛋白质水平采用免疫组化法检测。结果：CTX、MP、LMWH均对GMC生长有抑制作用；CTX诱导GMC细胞凋亡，使GMC的Fas蛋白水平增加。结论：CTX在体外可以抑制GMC细胞增殖，可能通过Fas蛋白调节途径诱导GMC细胞凋亡。     

高糖条件下Tensin在人肾脏系膜细胞上的表达

目的: 探讨在高糖刺激的条件下,Tensin在人类肾脏系膜细胞上的表达及变化.方法: 体外培养系膜细胞,用含不同浓度的葡萄糖(5 mmol/L,30 mmol/L)刺激细胞48 h、 72 h和5 d.用免疫荧光法观察tensin在人类肾脏系膜细胞上表达及变化,ELISA法检测上清液中纤连蛋白含量.结果: 高糖刺激下系膜细胞tensin的表达随着培养时间的延长逐渐增多,且纤连蛋白的分泌也随培养时间的延长而增加.结论: 高糖刺激下tensin在人类肾脏系膜细胞的细胞膜上表达增加,在细胞外基质增多的发生机制中起重要作用.     

地塞米松对大鼠肾小球系膜细胞增殖和合成胶原物质的影响

本文采用大鼠肾小球系膜细胞体外培养技术，用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和羟脯氨酸测定方法，观察了地塞米松对大鼠肾小球系膜细胞增殖及合成细胞外基质－胶原的影响。结果显示：地塞米松可抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖。     

自由基对培养的鼠肾小球系膜细胞膜系统损伤的研究

目的　观察自由基对肾小球系膜细胞 (GMC)膜系统的影响。方法　用黄嘌呤氧化 酶黄嘌呤生成自由基 ,作用于培养的鼠GMC ,通过TBA比色法检测脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量及透射电镜观察超氧化物歧化酶 (SOD)对细胞膜系统的保护作用。结果　未加SOD组GMC的MDA含量明显增加 ,电镜下出现细胞膜系统的损伤性改变。加SOD组MDA含量未见明显增加。电镜下细胞膜系统未见明显改变。结论　自由基可引起GMC膜系统脂质过氧化损伤 ,SOD具有保护作用     

Akt／NF-kB信号途径在免疫复合物诱导肾系膜细胞增殖中的作用

目的：观察免疫复合物(IC)能否诱导体外培养的肾小球系膜细胞(MC)增殖及其Akt/NF—kB信号在其中的作用。方法：实验设对照组、刺激组及Akt1正义(SODN)、错义(MSODN)与反义寡核苷酸(ASODN)组。寡核苷酸组：以lipofectin分别介导Akt1 SODN、MSODN、ASODN转染MC8h；对照组和刺激组：以lipofectin作用MC8h。然后刺激组和寡核苷酸组均用聚合IgG(aggregated IgG，AIgG，一种标准的IC模型)刺激，对照组用等量的单体IgG刺激。用MTT比色法检测细胞的增殖，流式细胞术分析MC的细胞周期，RT-PCR分析mRNA的表达，Westem blot检测蛋白的表达，电泳迁移率变动实验(EMSA)检测NF—KB的活性。结果：IC可诱导MC中NF-kB的活化，上调细胞周期蛋白cyclinD1的mRNA及蛋白表达，促进MC进入S期。Akt1 ASODN可抑制Akt1蛋白的表达，抑制IC诱导的MC中NF—kB活性，抑制cyclinD1 mRNA及其蛋白的表达，进而抑制IC促进MC进入S期和增殖。Akt1 SODN、MSODN则无上述抑制作用。结论：IC可通过Akt/NF—kB信号途径，介导体外培养的MC增殖。提示Akt／NF-kB信号途径，可作为干预IC诱导MC过度增生的一个新的治疗靶点。     

ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达

ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其表达定位于细胞质及线粒体.该基因在人体各组织器官表达具有特异性.     

血小板活化因子介导肾小球系膜细胞产生活性氧的研究

为探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）产生活性氧的调节作用，本研究观察了ＰＡＦ对体外培养的大鼠ＧＭＣ产生超氧化物阴离子（Ｏ）和过氧化氢（Ｈ－２Ｏ－２）的影响。结果表明１０￣（－９）Ｍ／Ｌ的ＰＡＦ已能诱导ＧＭＣ产生Ｏ和Ｈ２Ｏ２（１．１４±０．４２ｎｍｏｌ／１０￣５ＧＭＣ、０．９７±０．１６ｎｍｏｌ／１０－５ＧＭＣ），这一效应呈剂量依赖性；溶ＰＡＦ无诱导ＧＭＣ产生活性氧作用；特异性ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１抑制ＰＡＦ的刺激作用，抑制作用也呈剂量依赖性，５×１０￣（－５）Ｍ／ＬＢＮ５２０２１完全抑制ＧＭＣ合成活性氧。本研究说明ＰＡＦ可诱导ＧＭＣ合成活性氧。     

依维莫司对高糖诱导肾小球系膜细胞凋亡的保护作用

目的:观察依维莫司对高糖诱导肾小球系膜细胞(HBZY-1)凋亡的保护作用,并探讨其意义。方法:将培养HBZY-1细胞按不同葡萄糖和依维莫司浓度分组处理72h后,用磺酰罗丹明B法测量细胞OD值,计算各组细胞存活率,用Annexin V和PI双标法检测各组细胞凋亡率。结果:30mM葡萄糖处理的细胞存活率明显降低,凋亡率明显增加(均P<0.05)。不同浓度依维莫司均能提高细胞存活率(均P<0.05),其中以200ng/ml依维莫司效果最好(P<0.05);200ng/ml依维莫司具有明显抗HBZY-1细胞凋亡作用。结论:依维莫司对高糖诱导HBZY-1细胞凋亡具有保护作用,从而为其治疗糖尿病肾病提供新的研究方向。     

白细胞介素-17在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化中的作用

目的 观察白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)在阿霉素肾病大鼠肾组织中的表达,并探讨其在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化中的作用.方法 雄性SD大鼠分为正常对照组和阿霉素肾病组(模型组),每组8只,于第2、4、8、12周分别处死.光镜观察肾小球的病理学情况并分析肾小球硬化指数;采用半定量RT-PCR法检测肾组织IL-17 mRNA的表达;ELISA法检测肾组织匀浆上清中IL-17和IL-1β蛋白水平;免疫组化观察IL-17在肾脏的定位表达.结果 第8周模型组肾组织IL-17 mRNA水平、IL-17和IL-1β蛋白水平均高于正常组(P=0.041、P=0.000、P=0.007);第12周均进一步升高(均P=0.000),并且IL-17与IL-1β、肾小球硬化指数均呈明显的正相关(P=0.037、P=0.021).结论 IL-17在阿霉素肾病大鼠硬化的肾组织中表达明显增加,可能在阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中起了一定的作用.