miR-16-5p靶向NLRP1抑制缺氧复氧诱导的BRL-3A细胞焦亡

目的探讨mi R-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制。方法通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测mi R-16-5p的表达水平;运用mi R-16-5p mimic在细胞中过表达mi R-16-5p并研究mi R-16-5p对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并鉴定mi R-16-5p与NLRP1的靶向关系;通过过表达和干扰NLRP1,研究NLRP1及mi R-16-5p/NLRP1轴对细胞焦亡的影响。结果与空白对照组相比,模型组焦亡率极显著上升(P0.01),mi R-16-5p表达量显著降低(P0.05)。过表达mi R-16-5p极显著抑制细胞焦亡(P0.01)并抑制焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的表达(P0.01或P0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示NLRP1是mi R-16-5p的靶基因,过表达mi R-16-5p显著降低了NLRP1的m RNA和蛋白水平(P0.01或P0.05)。此外,过表达NLRP1逆转了mi R-16-5p对细胞焦亡的抑制作用(P0.01)和对caspase1、IL-1β、IL-18表达的抑制作用(P0.01或P0.05)。结论 MiR-16-5p通过靶向NLRP1来抑制caspase1、IL-1β、IL-18的表达,从而改善缺氧复氧引起的BRL-3A细胞焦亡。     

miR-210inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用

【目的】观察mi R-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用。【方法】体外培养大鼠背脊髓神经元细胞,随机分成正常组,H2O2组,H2O2联合mi RNA Negative control组以及H2O2联合mi R-210 inhibitor组。采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧,Elisa检测NOX2。【结果】q PCR结果显示,100μmol/L H2O2处理可导致大鼠背脊髓神经元细胞内mi R-210表达量上升7.34倍;转染mi R-210 inhibitor可明显抑制mi R-210的表达量;MTT结果显示,抑制mi R-210的表达可明显降低H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞存活率的抑制作用;流式细胞仪检测发现抑制mi R-210的表达可以明显阻止H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞凋亡的诱导,显著降低凋亡率;进一步研究发现,转染mi R-210 inhibitor可显著性降低H2O2诱导的细胞内NOX2和ROS的表达。【结论】H2O2刺激鼠脊髓神经元细胞导致细胞内mi R-210表达的上调;降低mi R-210的表达能够降低细胞内NOX2和ROS的表达,抑制NOX2/ROS通路从而减缓H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞造成的损伤,推测mi R-210可以作为脊髓损伤治疗的靶点。     

miR-145靶向PDCD4在缺血性脑卒中的作用机制

目的探讨mi R-145对缺血性脑卒中引起的神经干细胞凋亡和炎性反应的分子机制。方法采用H2O2处理小鼠神经干细胞NE-4C细胞构建缺血性脑卒中细胞模型,流式细胞仪检测NE-4C细胞凋亡水平;RT-q PCR检测mi R-145和炎性相关因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的表达;采用双荧光素酶报告基因验证mi R-145与PDCD4之间的靶向关系;Western blot检测PDCD4的表达水平。结果 H2O2能够引起NE-4C细胞凋亡并上调IL-1β、IL-6、TNF-α的表达(P<0.01或P<0.05)。mi R-145在H2O2处理的NE-4C细胞表达下调;当过表达mi R-145时能显著抑制NE-4C细胞凋亡并下调IL-1β、IL-6、TNF-α的表达(P<0.01或P<0.05)。双荧光素酶报告基因证实mi R-145靶下调PDCD4的表达水平(P<0.01)。实验进一步证实,mi R-145通过靶向下调PDCD4的表达水平抑制NE-4C细胞凋亡并下调IL-1β、IL-6、TNF-α的表达(P<0.01或P<0.05)。结论过... 更多     

丁苯酞对β淀粉样蛋白诱导新生SD大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨丁苯酞对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导新生SD大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法:将培养的大鼠海马神经元细胞分成Aβ组、Aβ+丁苯酞组和对照组三组,其中Aβ组采用20μmol/L Aβ处理24 h;Aβ+丁苯酞组先采用10μmol/L丁苯酞处理30 min后再加入20μmol/L Aβ处理24 h;对照组不进行任何处理。检测各组海马神经元凋亡、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达情况。结果:(1)MTT检测结果:Aβ组和Aβ+丁苯酞组OD_(570)均显著低于对照组(P0.05),Aβ+丁苯酞组OD_(570)显著高于Aβ组(P0.05)。Aβ组和Aβ+丁苯酞组相对于对照组的海马相神经元对存活率分别为48.15%、69.13%。(2)海马神经元细胞凋亡情况:Aβ组和Aβ+丁苯酞组海马神经元细胞凋亡率分别为(50.38±5.32)%和(25.87±2.66)%,均显著高于对照组的(1.24±0.17)%,而Aβ组海马神经元细胞凋亡率显著高于Aβ+丁苯酞组(P0.05)。(3)Western Blotting结果:Aβ组、Aβ+丁苯酞组和对照组i NOS相对表达量分别为(1.92±0.18)、(0.98±0.12)和(0.37±0.08),Aβ组和Aβ+丁苯酞组i NOS相对表达量均显著高于对照组,Aβ组i NOS相对表达量显著高于Aβ+丁苯酞组(P0.05)。结论:丁苯酞能够有效抑制Aβ造成的大鼠海马神经元细胞的凋亡作用,降低i NOS表达水平,减少自由基产生和毒性作用。     

miR-124通过靶向STAT3表达抑制食管癌的机制研究

目的:探讨miR-124通过靶向转录激活因子3(STAT3)表达抑制食管癌的机制。方法:将培养转染后EC9706细胞分为miR-NC组、miR-124-mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-124组、miR-124+pGL3-Basic组、miR-124+pGL3-Basic-STAT3组、anti-miR-124+pGL3-Basic组、anti-miR-124+pGL3-Basic-STAT3组,未转染EC9706细胞为对照组,每组细胞各9株。采用流式细胞术、MTT法、免疫印迹(Western blot)、Transwell小室实验分别检验各组细胞的凋亡率、细胞增殖及STAT3、B淋巴细胞瘤因子2 XL(Bcl-xL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达量及细胞迁移及侵袭能力;双荧光素报告基因检测验证miR-124与STAT3的靶向关系。结果:与人正常食管上皮细胞相比,食管癌Eca-109、EC-1、EC9706细胞中miR-124表达下调(P<0.05),STAT3 mRNA及蛋白表达升高(P&...     

miR-19a对慢性压迫性损伤大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制

目的 观察miR-19a对慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛的作用,并探讨其潜在机制.方法 75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组,行假手术;CCI组,坐骨神经结扎法构建CCI大鼠模型;CCI+inhibitor组,CCI大鼠鞘内注射miR-19a inhibitor.于术前当天(0 d)和术后3、7、14、21 d观察机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热刺激反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)的变化.采用RT-qPCR检测腰椎脊髓中促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA及JAK2和STAT3表达的变化,Western blot检测SOCS3蛋白水平的表达,荧光素酶报告基因技术验证miR-19a的靶基因.结果 与假手术组比较,CCI组大鼠脊髓的miR-19a表达显著上升(P＜0.05),MWT显著降低,TWL显著缩短(P＜0.05).与CCI组比较,CCI+ inhibitor组MWT显著升高,TWL显著延长(P＜0.05).RT-qPCR检测结果表明,CCI可显著促进促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA的表达;而与CCI组比较,CCI+inhibitor组IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均显著降低(P＜0.05).另一方面,与假手术组比较,CCI组大鼠术后脊髓中JAK2和STAT3 mRNA水平明显增加;与CCI组比较,CCI+ inhibitor组术后脊髓中JAK2和STAT3的表达显著降低(P＜0.01).荧光素酶报告基因检测结果表明JAK2/STAT3上游的负调控因子SOCS3是miR-19a的靶基因.Western blot检测结果表明CCI组大鼠脊髓中SOCS3水平较假手术组升高,且SOCS3水平在CCI术后第7天达到最高,而后呈下降趋势;与CCI组比较,CCI+inhibitor组SOCS3表达明显上升(P＜0.05).结论 miR-19a inhibitor能缓解CCI大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏,该作用与SOCS3介导的JAK2/STAT3通路有关.     

长链非编码RNA生长抑制特异因子5调控微小RNA-137对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)调控微小RNA(miR)-137对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法实验分为对照(control)组、Aβ组、Aβ+si-NC组、Aβ+siGAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组,每组10只。Y迷宫法检测大鼠学习记忆力;实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-qPCR)检测海马CAI区GAS5、miR-137水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测海马CAI区B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白水平;尼氏染色观察神经元形态; Tunel染色观察大鼠神经元凋亡情况;双荧光素酶鉴定miR-137与GAS5的靶向关系。结果与对照组相比,Aβ组、Aβ+si-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P0.05);分别与Aβ组、Aβ+si-NC组相比,Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率降低(P0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平升高(P0.05);分别与Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组相比,Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组海马CAI区GAS5mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P0.05)。经验证,miR-137与GAS5之间存在靶位点。结论干扰GAS5可上调miR-137从而保护Aβ诱导的大鼠海马神经元损伤,缓解神经元凋亡过程;而进一步下调miR-137可逆转上述过程。     

miR-148b对肝癌SMMC7721细胞衰老的影响

目的探讨mi R-148b对肝癌SMMC7721细胞衰老的影响。方法分别使用50 nmol/L的mi R-148b mimics(mi R-148b)和negative control(mi R-NC)转染肝癌SMMC7721细胞48 h后,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测mi R-148b表达的变化。通过β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老的变化,应用western blot检测P21表达的影响。结果与对照组相比,mi R-148b能明显增加肝癌SMMC7721细胞中mi R-148b的表达。50 nmol/L的mi R-148b转染SMMC7721细胞48 h后,细胞形态变得大而扁平,衰老细胞比例明显增加[(9.67±2.08)%vs(43.67±3.51)%,P0.01]。mi R-148b使肝癌细胞P21蛋白的表达也明显增加。结论 mi R-148b可能通过影响P21的表达促进肝癌SMMC7721细胞的衰老,mi R-148b有可能成为肝癌SMMC7721细胞生物治疗的新靶点。     

miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制

目的 探讨miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制。 方法 将90只7周龄SD大鼠随机分为对照组(n=20)、七氟醚组(n=20)、七氟醚+NC mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组+vector组(n=5)、七氟醚+miR-138 mimic+pcDNA-LCN2组(n=5)。构建七氟醚诱导的大鼠认知障碍模型,七氟醚诱导的大鼠分别注射10 μL miR-138 mimic、NC mimic慢病毒悬液。采用Morris水迷宫实验分析潜伏期、跨台时间和游泳速度;HE染色检测海马神经元的病理变化;TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR)检测miR-138、脂质运载蛋白2（LCN2）的mRNA水平表达;双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-138和LCN2之间的关系;Western blotting 检测海马组织中LCN2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白水平;ELISA实验检测海马组织中IL-6、TNF-α、IL-1β。 结果 与对照组比较,七氟醚组中miR-138表达水平显著降低（P<0.05）;大鼠逃避潜伏期显著增加,穿越平台次数显著减少,海马神经元损伤,海马神经元凋亡数量显著增加,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平降低（均P<0.05）。与七氟醚+NC mimic组比较,七氟醚+miR-138 mimic组中大鼠逃避潜伏期减少,穿越平台次数增加,神经元病理损伤减轻,海马神经元凋亡数量显著减少,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平降低,Bcl-2水平升高,IL-1β、TNF-α、IL-6水平降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平升高（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因结果显示LCN2 是miR-138的靶基因,过表达LCN2可显著逆转miR-138对七氟醚诱导的认知障碍大鼠凋亡的作用（P<0.05）。 结论 miR-138靶向LCN2通过JAK2/STAT3通路对七氟醚诱导的认知障碍具有神经保护作用。     

熊果酸通过调节miR-373-3p对肺癌A549细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨熊果酸通过调节mi R-373-3p对肺癌A549细胞凋亡和迁移的影响。方法 MTT法检测熊果酸对肺癌A549细胞的毒性作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法、流式细胞术检测熊果酸作用于转染mi R-373-3p的A549细胞后对A549细胞凋亡影响;实时荧光定量PCR法分别检测熊果酸加药组和转染mi R-373-3p mimics组中A549细胞mi R-373-3p表达程度;RT-PCR和免疫印迹法检测熊果酸作用下mi R-373-3p调控的下游靶基因TXNIP m RNA及蛋白的表达;细胞划痕愈合实验检测mi R-373-3p细胞迁移能力。结果熊果酸显著降低肺癌A549细胞的生长活力(P<0.05),IC 50为60μmol/L;瞬时转染mi R-373-3p mimics可以上调A549细胞中mi R-373-3p的表达(24 h,11.367±2.120;48 h,12.167±1.108);熊果酸作用于转染mi R-373-3p mimics的A549细胞后,能够显著提高细胞中mi R-373-3p mimics的表达水平(24 h,16.787±3.109;48 h,16.980±3.106);并且mi R-373-3p mimics下游预测的目标基因TXNIP m RNA(10.757±0.79)及蛋白表达量(0.8210±0.043)均明显上升;FCM结果显示:mi R-373-3p能够促进肺癌A549细胞凋亡(46.20±5.970)。细胞转染mi R-373-3p mimics后,迁移能力明显受到抑制(P<0.001)。结论熊果酸能够通过促进肺癌A549细胞凋亡抑制其迁移,其作用机制可能是通过上调mi R-373-3p表达来完成的。     

microRNA-574-3p抑制结肠癌细胞增殖的机制研究

目的观察微小RNA-574-3p(micro RNA-574-3p,mi R-574-3p)对结肠癌细胞增殖的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法采用结肠癌细胞HCT116作为实验对象,细胞转染mi R-574-3p mimic和阴性对照分别作为mi R-574-3p mimic组和阴性对照组,同时以正常HCT116细胞作为空白对照组。RT-qPCR检测细胞mi R-574-3p表达; CCK-8法检测细胞增殖活力;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期变化; Western blot法检测Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A及P53蛋白表达变化。结果与阴性对照组相比,mi R-574-3p mimic组mi R-574-3p表达明显上调(P0.01),且在36～72 h细胞活力明显降低(P0.01)。与阴性对照组相比,mi R-574-3p mimic组细胞克隆形成率显著降低(P0.01),同时S期细胞比例显著增加(P0.01)。相较于阴性对照组,mi R-574-3p mimic组Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A蛋白表达显著下调(P0.01),P53蛋白表达明显上调(P0.01)。阴性对照组与空白对照组上述各指标均无明显差异。结论 mi R-574-3p可抑制结肠癌HCT116细胞增殖,这可能与下调Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A及上调P53蛋白表达,最终诱导细胞S期阻滞有关。     

MicroRNA-212-3p与靶基因转化生长因子-β2基因3'UTR的关系研究*

目的?构建转化生长因子-β2（TGF-β2）基因3''UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p（miR-212-3p）与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系。方法?将TGF-β2 3''UTR片段构建至双荧光素酶报告载体pYr-MirTarget上,随后将重组质粒与miR-212-3p核苷类、无核苷类及其抑制剂共同转染Saos-2细胞（人成骨肉瘤细胞）,通过双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,RT-PCR检测Hsa-miR-212及TGF-β2基因的mRNA相对表达量,Western blotting检测TGF-β2蛋白相对表达量。结果?miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组荧光素酶活性较对照组低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组Has-miR-212 mRNA相对表达量最高,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2 mRNA相对表达量最低,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最高（P?<0.05）。miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2蛋白相对表达量最高,miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。结论?该实验成功构建了TGF-β2基因3''UTR荧光素酶重组质粒,而且miR-212-3p可以与TGF-β2基因的3''UTR结合,抑制荧光素酶活性,由此推断TGF-β2是miR-212-3p的靶基因。     

柚皮苷调控miR-199a-5p/ECE1分子轴促进骨损伤修复

目的探讨柚皮苷通过调控mi R-199a-5p/ECE1分子轴对骨损伤修复的影响。方法 Western blotting检测ECE1及成骨分化相关标志物的表达水平;RT-qPCR检测mi RNAs相对表达水平;双荧光素酶报告基因验证mi R-199a-5p和ECE1靶向关系;MTT检测MC3T3-E1细胞增殖活力;碱性磷酸酶(ALP)检测MC3T3-E1细胞成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞矿化情况。结果柚皮苷处理显著促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化指标Runx2、OPN、BMPs、OC等的表达、ALP活性以及细胞钙化能力水平(P<0.01)。其中20ng/m L浓度处理的效果最优。RT-qPCR检测结果显示,柚皮苷能显著上调mi R-199a-5p的表达水平。双荧光素酶报告基因检测结果表明ECE1是mi R-199a-5p的一个靶基因;并且,mi R-199a-5p靶向下调ECE1的表达。进一步实验表明,敲降mi R-199a-5p显著降低柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化的促进作用(P<0.01);敲降ECE1显著促进了柚皮... 更多     

LINC00342调控miR-384对肺鳞癌细胞增殖侵袭迁移的影响研究

目的:探讨LINC00342通过miR-384对肺鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:将肺鳞癌SK-MES-1细胞分为：ctrl组(正常培养的SK-MES-1细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00342组(转染si-LINC00342)、si-LINC00342+inhibitor-NC组(si-LINC00342和inhibitor-NC共转染)、si-LINC00342+miR-384 inhibitor组(si-LINC00342和miR-384 inhibitor共转染);RT-qPCR检测细胞中LINC00342、miR-384表达；CCK-8法及Transwell小室法分别检测细胞增殖和侵袭；划痕实验及流式细胞仪分别检测细胞迁移和凋亡；Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达；双荧光素酶报告基因实验验证LINC00342和miR-384的关系。结果:与ctrl组、si-NC组比较，si-LINC00342组SK-MES-1细胞的OD450值、...     

大鼠GLUT3基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定

目的:克隆大鼠葡萄糖转运体3(glucose transporter 3,GLUT3)基因启动子区,并构建其萤火虫荧光素酶报告基因载体。方法:在对大鼠GLUT3基因5′侧翼区进行详尽生物信息学特征分析后,设计相应引物,用PCR的方法从大鼠基因组中扩增出GLUT3基因5′侧翼区-1037～155bp段长为1 292bp的启动子区(以翻译起始点ATG为+1),再用定向克隆的方法将这一启动子区片段定向重组入专门用于启动子活性研究的萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-basic)中,构建出包含大鼠GLUT3基因启动子区的萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-GLUT3),电泳与测序鉴定,最后再将pGL 3-GLUT3与内参pRL-TK用脂质体转染的方法瞬时共转染PC12和原代培养的神经元中,通过双荧光素酶报告基因检测系统鉴定pGL 3-GLUT3的启动子活性,并用独立样本t检验方法进行统计分析。对照组共转染pGL3-basic与内参pRL-TK。结果:构建出荧光素酶报告基因载体pGL3-GLUT3。与转染空质粒pGL3-basic组相比,原代神经细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性升高(5.182 9±0.264 8 vs 2.893 1±0.775 4,P=0.008),在PC12细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性也升高(2.797 7±0.512 0 vs 1.179 8±0.312 5,P=0.010)。结论:成功克隆GLUT3基因启动子区,并构建出包含GLUT3基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体,并且在PC12和原代培养的神经元中pGL 3-GLUT3可以表现出启动子活性。这为后续大鼠GLUT3基因转录调控研究提供研究素材。     

miR-223-3p在不同分期的糖尿病肾脏疾病血浆中的表达差异及意义

目的 探索mi R-223-3p在糖尿病肾脏疾病 (DKD) 患者血浆中的表达情况及其临床意义.方法应用实时荧光定量PCR技术 (q RT-PCR) 分别检测糖尿病无肾病组60例 (DM组) 、糖尿病早期肾病组60例 (Micro-DKD组) , 糖尿病临床期肾病组60例 (Macro-DKD) 和正常健康对照组60例 (Control组) 血浆中mi R-223-3p的表达变化, 分析其与糖尿病肾脏疾病的关系;运用基因预测分析软件预测mi R-223-3p靶基因.结果与Control组相比, 其余3组患者血浆中mi R-223-3p的表达水平明显下降 (P<0.001) , 随着病情严重程度的进展, 血浆中mi R-223-3p的表达水平下降更加明显.生物信息学分析得出IL6ST和PRKCE为mi R-223-3p的靶基因.结论 mi R-223-3p表达水平在DKD患者血浆中表达下降并与严重程度有关, 可能通过调控其下游靶基因在糖尿病肾脏疾病发生过程中起重要作用.     

颅脑创伤血清标志物miR-124的表达及其意义的研究

目的:研究颅脑创伤血清标志物mi R-124(脑组织特异性的mi RNA-124)的表达及其意义。方法:选取2014年11月-2015年6月本院接诊的颅脑创伤患者38例为研究组,另选38例正常人为正常组。研究组采取积极的手术治疗,正常组不予以任何治疗措施。比较两组mi R-124、白细胞介素10(IL-10)、调节性T细胞(Treg细胞)的表达水平及治疗前格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、预后格拉斯哥结局评分(GOS)。结果:入院4、24 h,研究组mi R-124、IL-10水平和Treg细胞比例均显著高于正常组,比较差异均有统计学意义(P0.05);研究组治疗前GCS评分明显低于正常组(P0.05);两组预后GOS评分和mi R-124表达水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:血清标志物mi R-124与颅脑创伤诊断和预后有一定的关系,其能够帮助临床医师开展个体化治疗和早期更精确地估计预后,值得在临床大力推广。     

大鼠短暂性全脑缺血后STAT3表达与神经原凋亡的关系

目的 探讨短暂性全脑缺血/再灌注(I/R)大鼠海马CA1区信号转导和转录激活子-3(STAT3)表达与迟发性神经元凋亡的关系.方法 30只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(n=5)和全脑I/R后4、24、48、72、96 h组(n=5).双侧颈总动脉阻断+全身低血压法建立大鼠短暂性全脑缺血模型;运用Nissl和TUNEL染色观察海马CAI区神经元存活数和凋亡细胞数;免疫组化法检测STAT3蛋白在全脑I/R后的表达.结果 全脑I/R后24 h,海马CA1区STAT3阳性细胞数显著增多,72 h达峰值,至96 h开始下降.TUNEL染色显示,在I/R后24 h即出现少量凋亡细胞,48～72 h显著增多;STAT3蛋白高表达与神经元凋亡两者的部位和时间段基本一致.结论 STAT3蛋白表达增强可能介导缺血性脑损伤的信号转导过程,其在脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用.     

miR-454-3p通过靶向STAT3调控CNE-2人鼻咽癌细胞上皮-间质转化

目的：探讨miR-454-3p和STAT3在鼻咽癌组织中的表达情况,以及miR-454-3p靶向STAT3对鼻咽癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：收集2023年6月～8月右江民族医学院附属医院和百色市人民医院的鼻咽癌组织和正常组织各5例,采用qRT-PCR检测各样本中miR-454-3p与STAT3的表达情况;以未处理的鼻咽癌细胞CNE-2作为空白对照组(blank group),采用Lipofectamine^TM 3000将miR-454-3p mimics、mimics NC(negative control)、miR-454-3p inhibitor、inhibitor NC(negative control)分别转染CNE-2细胞作为miR-454-3p mimics组、mimics NC组、miR-454-3p inhibitor组、inhibitor NC组;利用Targetscan预测miR-454-3p与STAT3的靶向关系并用双荧光素酶实验验证;分别采用qRT-PCR检测转染效率及转染后STAT3的mRNA水平变化;划痕愈合实验、Transwel...     

冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b的表达

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)患者外周血单核细胞中mi R-125a-5p、mi R-193b的表达水平。方法收集研究对象共102例,分为四组,其中对照组25例(A组),稳定型心绞痛组22例(B组),不稳定型心绞痛组26例(C组),急性心肌梗死组29例(D组)。抽取静脉血,进行单核细胞分离、提取总RNA,实时荧光定量(RT-q PCR),检测外周血单核细胞中mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平。结果与A组比较,B组、C组、D组mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,C组、D组mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平显著上调(P <0.01);而C组和D组之间mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 mi R-125a-5p、mi R-193b可能参与动脉粥样硬化的发生和进展,可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点。