PHI逆转K562/A02细胞阿霉素耐药的机制

目的 探讨异硫氰酸苯乙酯(PHI)逆转K562/A102细胞株阿霉素(ADM)耐药的可能机制.方法 将耐ADM的人慢性粒细胞白血病K562/A02细胞株分别与不同浓度(0,5,10,20,30,40和50μM)的PHI共同孵育后,流式细胞术检测细胞周期、细胞内ADM浓度以及P-糖蛋白1(P-gp1)表达水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PHI作用前后细胞内mdr1 mRNA的转录水平.结果 与对照组相比,联合作用48 h后,随着PHI浓度的增加G2期细胞逐渐减少,G1期细胞明显增多,而S期细胞无明显变化;K562/A02细胞内ADM平均荧光强度均高于对照组,K562/A02细胞mdrl mRNA表达下降和P-gp1表达下调(P＜0.05).结论 PHI逆转K562/A02细胞耐药机制可能与细胞G1期阻滞和P-gp1表达下调有关.     

AGE-RAGE系统与糖尿病足综合征的发病机制及治疗进展

糖尿病足综合征（DFS）是糖尿病严重慢性并发症之一,其发病机制至今尚未完全阐明。晚期糖基化终末产物（AGEs）的形成参与DFS的发生、发展,AGEs与AGEs受体（RAGE）相互作用,并通过一系列分子机制导致糖尿病神经病变和外周血管病变。因此,抑制AGEs形成或阻断AGEs与其受体相互作用可以延缓糖尿病足的发生、发展。本文就AGEs形成、AGE-RAGE系统在DFS中的作用和DFS的治疗进展等作一综述。     

绞股蓝皂苷对AGEs诱导下人肾小球系膜细胞中RAGE及转化生长因子-β_1表达的影响

目的观察绞股蓝皂苷(gypenosides,GP)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation endproducts,AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及转化生长因子-β_1(TGF-β1)表达的影响。方法将体外培养的(体积分数为0.15的FBS的DMEM低糖培养液)人肾小球系膜细胞(HMCs)分为4组:正常组、模型组、GP组、阳性对照组。除正常组外,其余组均再给予200 mg·L~(-1)AGEs刺激。此外,GP组中加入不同浓度GP(25、75、175 mg·L~(-1))进行干预,阳性对照组中加入氨基胍盐酸盐(10~(-1)mmol·L~(-1))。应用Western blot技术检测各实验组中RAGE和TGF-β_1蛋白的表达;RT-PCR技术检测各实验组中RAGE和TGF-β_1 mRNA的表达。结果模型组AGEs诱导下HMCs中RAGE、TGF-β1蛋白及mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.01);与模型组比较,GP组中GP可明显下调HMCs中RAGE、TGF-β_1蛋白及mRNA的表达,且呈浓度依赖性(P<0.01)。结论 GP可降低AGEs诱导下HMCs中RAGE的表达,阻断AGEs-RAGE信号通路,并下调下游因子TGF-β_1的表达,进而延缓糖尿病肾病纤维化进程。     

复方当归注射液逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的:研究复方当归注射液对人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/A02MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷光甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因及其相应蛋白表达的影响。方法:采用台盼蓝染色法检测复方当归注射液的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法分别检测复方当归注射液在非细胞毒浓度(IC10)作用下对K562/A02细胞上述基因及其表达的影响。结果:复方当归注射液作用后,K562/A02细胞中MDR1基因及P-gp表达降低(P<0.01);TopoⅡ蛋白表达增高(P<0.01),TopoⅡ基因表达无显著变化(P>0.05);MRP、GST-π基因及其蛋白的表达无明显变化(P>0.05)。结论:复方当归注射液能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少及在蛋白水平上调K562/A02细胞TopoⅡ的表达有关。     

葛根素对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜的保护作用及机制研究

目的探讨葛根素对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及可能机制。方法 40只♂SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病(DM)模型组、DM+葛根素低剂量组(Pue1组)、DM+葛根素高剂量组(Pue2组)。给药后4周,行视网膜组织病理学检查,荧光法检测视网膜晚期糖基化终末产物(ad-vanced glycation end products,AGEs)含量、Real-time PCR法、Western blot法分别检测视网膜组织晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mR-NA表达和蛋白水平。结果 DM组视网膜外核层细胞厚度明显变薄,Pue2组较DM组有所好转。DM大鼠视网膜中VEGF的mRNA和蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P<0.01);Pue1、Pue2组VEGF的mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.01)。DM大鼠视网膜内AGEs水平较正常对照组明显上调(P<0.05),高剂量葛根素能抑制AGEs形成(P<0.05)。RT-PCR与Western blot结果显示,DM大鼠视网膜中RAGE的mRNA水平和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.05),高剂量葛根素可使之下调(P<0.05)。结论葛根素可抑制DM大鼠视网膜AGEs形成及RAGE的表达,抑制视网膜VEGF的表达,起到保护糖尿病大鼠视网膜的作用。     

晚期糖基化终末产物受体在心血管疾病中的研究概况

晚期糖基化终末产物受体（ receptor for advanced glycation end products ,RAGE）是晚期糖基化终末产物（ advanced glycation end products ,AGEs）的特异性受体。 RAGE与AGEs结合可启动一系列受体后信号转导途径,导致多种细胞因子与生长因子的合成与释放,引起血流动力学、血液流变学异常、细胞基质异常增生、血管内皮损伤等病理变化,参与大血管并发症的发生、发展过程。本文就RAGE在心血管疾病中的研究进展进行综述。     

辣椒素经内质网应激反应途径诱导K562/ADM耐药细胞凋亡

目的：研究辣椒素（capsaicin）是否经内质网途径诱导耐药性白血病K562/ADM细胞凋亡。方法：以耐药性白血病K562/ADM细胞为靶细胞,采用MTT比色法测定细胞增殖活性;细胞形态学和AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,电镜观察凋亡细胞内质网形态结构变化;实时定量RT-PCR检测GRP78mRNA的表达;Western blot法检测GRP78蛋白的表达。结果：不同浓度的辣椒素显著抑制K562/ADM细胞的增殖活性,20、50μmol/L辣椒素诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率明显增高,分别为39.67%和41.78%。辣椒素诱导凋亡过程中,K562/ADM细胞出现内质网明显扩张和脱颗粒现象,GRP78mRNA的表达增高,GRP78蛋白的表达量分别增高1.5和2.2倍,随时间延长有所降低。结论：辣椒素可能通过内质网应激反应性途径诱导K562/ADM细胞发生凋亡。     

干扰α烯醇化酶对耐药细胞株K562/A02耐药性的影响

目的肿瘤耐药的产生是肿瘤治疗失败的主要原因之一,α烯醇化酶(eno1)与肿瘤细胞耐药产生和发展密切相关。探究eno1对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02生长及耐药的影响。方法筛选3株稳定干扰eno1的细胞系K562/A02-sheno1和对照细胞系K562/A02-shcon;采用细胞计数法测定细胞生长速率,MTT法测定细胞增殖能力,细胞内罗丹明123含量测定细胞外排药物能力,real-time PCR反应测定基因mRNA表达水平,Western blot实验测定基因蛋白表达水平。结果与敏感性细胞株K562相比,eno1在耐药细胞株K562/A02中为高表达状态,其在mRNA水平和蛋白水平表达分别增高(2.85±0.56)倍和(1.43±0.05)倍;而K562/A02细胞生长速率与K562细胞相比差异无显著性。K562/A02-sheno1细胞系与对照组K562/A02-shcon相比生长速率降低,对抗肿瘤药物紫杉醇和阿霉素的敏感性均增强,且K562/A02-sheno1细胞系中罗丹明123含量也明显增高。K562/A02-sheno1细胞系中耐药相关基因MDR1表达水平降低。结论稳定干扰eno1表达能抑制K562/A02细胞生长,有效逆转K562/A02细胞耐药性,提高其对药物的敏感性,其机制与MDR1基因表达相关。     

阿霉素诱导的人白血病细胞系K562/A02多药抗药性(英文)

目的:研究白血病细胞多药耐药发生的机制. 方法:用逐步增加培养基中阿霉素(Dox)浓度的方法,诱导出一株耐Dox的人白血病细胞系K562/A02.用[~3H]TdR参入法测定IC_(50),HPLC法测定细胞内药物浓度,免疫组织化学法检测P-糖蛋白的表达,RT-PCR法测定mdr1基因表达,点杂交测定基因组中mdr1DNA和拓扑异构酶Ⅱ(TopⅡ)基因表达,CDNB法测定谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活性. 结果:K562/A02对Dox、HHT、Dau、VCR、m-AMSA、VP-16具有较强的交叉耐药性,而对Ara-C耐药较弱,对5-FU、Cis和MTX不交叉耐药,表现出典型的多药耐药表型.K562/A02细胞内药物浓度明显低于K562细胞,P-170阳性表达.K562/A02细胞中MDR1基因拷贝数与K562的无差异,但mdr1mRNA高表达.TopⅡ的mRNA水平低于K562,GST的活性增高. 结论:白血病细胞多药耐药的机制与mdr1基因表达密切相关,也与TopⅡ和GST有关.     

可溶性晚期糖基化终末产物受体在肺部疾病中作用的研究进展

可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)由Ⅰ型肺泡细胞产生，是晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的异构体，它可作为诱饵受体阻断由RAGE介导的炎症级联反应。目前，sRAGE被认为是肺部疾病的潜在生物标志物，可用于评估疾病的严重程度及预后。本文总结sRAGE的生物学特点及其在肺部疾病中的作用，为临床提供新的诊治依据。     

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^-1 ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。     

木香烃内酯对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用研究

目的探索木香烃内酯对白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素耐药的逆转作用。方法将木香烃内酯与K562/A02细胞共培养72 h后,采用MTT法检测木香烃内酯对细胞生长的抑制作用。不同浓度木香烃内酯处理K562/A02细胞24 h后,采用Annexin V和PI双染法检测木香烃内酯对细胞的凋亡。不同浓度木香烃内酯与阿霉素共培养72 h后采用MTT法检测木香烃内酯对K562/A02细胞的耐药逆转情况。采用流式细胞仪检测木香烃内酯处理24 h之后K562/A02细胞阿霉素蓄积以及细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果木香烃内酯对K562/A02细胞的生长具有明显抑制作用,呈显著的剂量相关性。与对照组比较,2.5~50μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞存活率显著降低(P0.05、0.01、0.001)。随着木香烃内酯浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加。与对照组比较,不同浓度木香烃内酯组细胞凋亡比例显著升高(P0.05、0.01、0.001)。加入5μmol/L木香烃内酯后,使K562/A02细胞对阿霉素的敏感性提高12倍。木香烃内酯处理后K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积明显增加,呈浓度相关性。与对照组比较,5、10μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积增加显著升高(P0.05)。细胞表面的P-gp的表达并无显著影响。结论木香烃内酯能够抑制K562/A02细胞增殖,诱导K562/A02细胞凋亡,增强阿霉素的化疗敏感性,逆转阿霉素耐药。     

雄黄微生物提取液对K562／ADM细胞P-糖蛋白和多药耐药基因表达的影响

目的：研究雄黄微生物提取液（RBS）诱导K562／ADM细胞凋亡的作用,并探讨其对P-糖蛋白（P-gP）和多药耐药基因（MDRI）表达的影响。方法：采用“微生物浸出”法制备RBS,并以H3AsO3作为阳性对照,AnnexinV—PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞P—gP表达率;逆转录聚合酶链技术（RT-PCR）检测细胞MDRImRNA表达水平。结果：RBS可诱导多药耐药白血病细胞发生典型凋亡,抑制P-gp的表达,下调MDRI mRNA表达水平。在含砷量相同的条件下,RBS诱导效应明显强于H3AsO3。结论：诱导细胞凋亡、下调P-gp／MDRI蛋白的表达,可能是雄黄逆转白血病耐药的重要分子机制。     

洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性

目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制。方法MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,VCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用。结果Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30 μmol·L^-1 Lom使K562/ADM对ADM的IC₅₀值由79.03 μmol·L^-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L^-1。Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响。结论Lom通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性。     

延长洛美利嗪作用时间可增加K562/A02细胞对阿霉素的敏感性

目的：研究洛美利嗪在高浓度、长时间作用于肿瘤细胞时，对多药耐药的逆转作用。探讨洛美利嗪逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法：将不同浓度的洛美利嗪与人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562／A02（耐阿霉素）共孵育24、48或72小时，然后分别向细胞中加入阿霉素，采用MTT法检测细胞毒作用；以流式细胞术测定两种细胞系内罗丹明123的潴留以反映P-糖蛋白的外排功能；利用Fluo-3／AM检测细胞内游离钙离子浓度。结果：细胞与洛美利嗪预温孵后，阿霉素对K562／A02细胞的IC50值减小，细胞内Rh123潴留增多，细胞内游离钙离子浓度明显升高。结论：洛美利嗪高浓度，长时间作用于K562／A02细胞，可以抑制细胞上P-糖蛋白的功能活性，使细胞对化疗药的敏感性增强，其机制可能与升高细胞内钙离子有关。     

Modulation of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in K562 leukemic cells by indole-3-carbinol

Resistance to chemotherapeutic drugs is one of the major problems in the treatment of cancer. P-glycoprotein (P-gp) encoded by the mdr gene is a highly conserved protein, acts as a multidrug transporter, and has a major role in multiple drug resistance (MDR). Targeting of P-gp by naturally occurring compounds is an effective strategy to overcome MDR. Indole-3-carbinol (I3C), a glucosinolates present in cruciferous vegetables, is a promising chemopreventive agent as it is reported to possess antimutagenic, antitumorigenic, and antiestrogenic properties in experimental studies. In the present investigation, the potential of I3C to modulate P-gp expression was evaluated in vinblastine (VBL)-resistant K562 human leukemic cells. The resistant K562 cells (K562/R10) were found to be cross-resistant to vincristine (VCR), doxorubicin (DXR), and other antineoplastic agents. I3C at a nontoxic dose (10 x 10(-3) M) enhanced the cytotoxic effects of VBL time dependently in VBL-resistant human leukemia (K562/R10) cells but had no effect on parent-sensitive cells (K562/S). The Western blot analysis of K 562/R 10 cells showed that I3C downregulates the induced levels of P-gp in resistant cells near to normal levels. The quantitation of immunocytochemically stained K562/R10 cells showed 24%, 48%, and 80% decrease in the levels of P-gp by I3C for 24, 48, and 72 h of incubation. The above features thus indicate that I3C could be used as a novel modulator of P-gp-mediated multidrug resistance in vitro and may be effective as a dietary adjuvant in the treatment of MDR cancers.     

2-氯脱氧腺苷对多药耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的　探讨 2 -氯脱氧腺苷 (2 - CDA)对多药耐药白血病细胞 (K5 6 2 / A0 2 )的毒性作用。方法　细胞毒实验采用 MTT法 ,二药合用时细胞毒性作用采用 Chou- Talalay联合指数法分析。结果　 2 - CDA对 K5 6 2和K5 6 2 / A0 2的 IC50 分别为 (2 3.9± 2 .4) nmol/ L 和 (137.6± 12 .7) nm ol/ L(P<0 .0 5 )。 2 - CDA与柔红霉素 (DNR)联合应用时 ,对 K5 6 2细胞的联合指数分别是 1.0 ,对 K5 6 2 / A0 2细胞为 5 .1。结论　 2 - CDA对敏感白血病细胞具有明显细胞毒性作用。多药耐药白血病细胞对 2 - CDA不敏感。2 - CDA与 DNR联合应用时 ,对敏感白血病细胞的毒性为相加作用 ,对多药耐药白血病细胞的毒性为拮抗作用。     

姜黄素衍生物C15对白血病K562/A02细胞多药耐药的逆转作用

目的: 探讨姜黄素衍生物C15对人白血病K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MOR)的逆转作用及其作用机制。方法: 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)外排泵功能和细胞周期;免疫印迹法检测蛋白表达;P-gp-Glo^TM Assay System试剂盒检测P-gp ATP水解酶(ATPase)活性。结果: C15对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC₅₀)大于50 μmol·L^-1。对K562/A02细胞无明显细胞毒的浓度为2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1的C15逆转对K562/A02细胞对阿霉素(ADR)耐药的倍数分别为2.60,5.39,11.39,对长春新碱(vincristine, VCR)耐药的倍数分别为4.50,18.07,124.35,但是对非P-gp底物的化疗药物顺铂(cisplatin, CIS)和敏感细胞K562基本无逆转效果。2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1 C15可以增加耐药细胞K562/A02胞内罗丹明123(Rh-123)的蓄积量分别为1.93,2.30,2.47倍。C15增加阿霉素(adriamycin, ADR)在K562/A02细胞中的蓄积水平,降低P-gp介导的Rh-123外排速率。2.5,10.0 μmol·L^-1 C15与300 nmol·L^-1VCR联合作用后,可使K562/A02细胞的G2/M期比例从9.36%增加到67.57%和69.38%。C15对P-gp蛋白和ATPase的活性没有抑制作用。结论: C15可能是P-gp的非衣物型抑制剂,且具有逆转K562/A02细胞MDR的作用,该作用与其抑制细胞P-gp的外排泵功能有关。