黄芪多糖对大鼠正加速度引起咬肌成肌细胞损伤的保护作用

目的：探讨高正加速度（＋Gz）暴露下黄芪多糖对 SD 大鼠咬肌成肌细胞的影响。方法：原代培养的 SD 大鼠成肌细胞至第3代（P3）,取 P3代细胞随机分为5组,对照组（常规培养）,＋9 Gz 组,黄芪多糖浓度分别为0、19．53、78．13、312．5 mg／L 的处理组。培养72 h,给予＋9 Gz 加速度暴露。用 TUNEL 法检测成肌细胞凋亡率,RT-PCR 法检测 Bcl-2及 Bax 的表达。结果：与对照组比较,正加速度处理组细胞凋亡率增加,Bax 表达增加,Bcl-2表达降低;黄芪多糖各浓度组与加速度处理组比较,细胞凋亡率降低,Bax 表达降低,Bcl-2表达增加,但中浓度组、高浓度组抑制细胞凋亡的作用弱于低浓度组。结论：黄芪多糖能减轻高正加速度对成肌细胞的损伤,降低细胞凋亡率。其机制与调节成肌细胞 Bax,Bcl-2蛋白表达有关。     

黄芪多糖对牙周膜细胞增殖与结构的形态学影响

目的探讨黄芪多糖水溶液对人牙周膜细胞增殖、分化及结构的影响。方法体外培养人牙周膜细胞,检测在黄芪多糖质量浓度为0.08、0.1、0.2、0.4 mg·mL-1的培养基中细胞增殖与结构。结果当黄芪多糖质量浓度为0.2 mg·mL-1时,甲基噻唑基四唑（MTT）法所测吸光度值显著高于对照组（P<0.05）,而在这一质量浓度下,牙周膜细胞碱性磷酸酶的表达明显高于对照组,同时细胞能保持良好的表面结构和超微结构。结论适宜质量浓度黄芪多糖水溶液在短期内对体外牙周膜细胞的增殖具有一定的促进作用。     

交变应力对大鼠翼外肌成肌细胞增殖活性的影响

目的探讨不同交变应力作用下,大鼠翼外肌成肌细胞增殖活性的变化,为交变应力下翼外肌组织的改建提供必要的基础实验数据。方法在自行研制的脉动式细胞力学系统基础上,将大鼠翼外肌成肌细胞在膜交变应力培养小室内进行培养,分别施加2.5、5.0、10.0 kPa交变力学刺激于不同频率组,3H- TDR检测成肌细胞增殖活性,并将结果进行统计学处理分析。结果高频组不同大小的交变应力都有促成肌细胞增殖的趋势,与空白组比较具有明显的促增殖作用（P<0.05）;在交变应力作用12 h后,不同频率组间比较的规律与6 h后基本一致,但是较6 h具有更大的增殖活性变化。低频组组间的增殖活性变化规律基本与高频组一致,但低频组有更大的促增殖效应。结论低频率比高频率具有较高的促成肌细胞增殖活性;随着交变应力作用时间的延长,成肌细胞增殖活性在较低应变范围内（≤5.0 kPa）随应变的加大而增加,较大应变具有较小的成肌细胞增殖活性增加趋势。     

黄芪多糖对犬骨髓基质干细胞增殖及超微结构的影响

目的探讨黄芪多糖（APS）对诱导培养的犬骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖、分化成骨作用及超微结构的影响。方法用瑞氏- 姬姆萨染色、改良Gomori钙- 钴法、茜素红染色法检测BMSCs分化成骨的能力。用四唑盐（MTT）比色和酶动力学方法测定不同浓度和时间的APS对诱导培养的BMSCs增殖影响以及超微结构的改变。结果诱导条件下BMSCs具有成骨细胞活性,瑞氏- 姬姆萨染色呈深蓝色,改良Gomori钙- 钴法将细胞及矿化结节染成黑色,茜素红染色法见细胞及矿化结节成红色。第1、3天时,低浓度（0.005 mg/mL）APS可促进诱导培养的BMSCs增殖;而第5天时,高浓度（50 mg/mL）APS则明显抑制诱导培养的BMSCs增殖。第5天,透射电镜下,0.005 mg/mL APS组细胞线粒体、粗面内质网增多,细胞外基质分泌增加;50 mg/mL APS组细胞发生退变,粗面内质网和线粒体明显减少,且二者明显肿胀、变性、膜结构破坏。结论短期低浓度APS能促进诱导培养的BMSCs的代谢和蛋白质的合成,有利于细胞的增殖和向成骨分化。     

EGF及胰岛素对SD大鼠成肌细胞增殖作用的研究

目的:进行表皮生长因子(epithelium growth factor, EGF)、胰岛素(insulin)对体外培养SD大鼠骨骼肌成肌细胞增殖影响的研究。方法：切取新生SD大鼠四肢骨骼肌，经酶消化、纯化后进行体外培养，分别绘制不同条件下成肌细胞的生长曲线，评价其体外增殖能力。结果：在体外培养条件下EGF及胰岛素有明显的促进成肌细胞增殖的作用。结论：EGF、胰岛素能促进成肌细胞的体外增殖，可为组织工程化人工面肌构建的研究提供足够、增殖力强的种子细胞。     

黄芪多糖对正畸所致牙根吸收的实验研究

目的:探讨黄芪多糖对大鼠正畸所致牙根吸收及牙周组织改建的影响。方法:将48只雄性Wistar大鼠(8周龄)随机分为3组,即黄芪多糖组、阴性对照组和空白组。建立大鼠正畸牙移动模型的当天,黄芪多糖组局部注射200 mg/kg黄芪多糖,以后每隔3 d注射等量黄芪多糖,阴性对照组相同时间点注射等量生理盐水。正畸加力14 d后处死,测定牙齿移动距离,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察牙周组织改建,扫描电镜观察实验牙根吸收状况并测量吸收面积比,免疫组化染色检测压力侧肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果:扫描电镜观察显示黄芪多糖组牙根近中面存在较少的吸收陷窝,吸收面积比为(8.56±0.91)%,阴性对照组牙根近中面出现较大面积的吸收陷窝,吸收面积比为(27.36±3.42)%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪多糖组第一磨牙近中移动距离略大于阴性对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色显示黄芪多糖组压力侧TNF-α的表达弱于阴性对照组,差异有统计学意义(P<...     

黄芪多糖对实验性阿弗他溃疡模型大鼠血清TNF-α的影响

目的：探讨TNF-α与复发性阿弗他溃疡（recurrent aphthous ulcer,RAU）发病机制的关系以及观察黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对RAU模型大鼠血清中TNF-α含量的影响。方法：通过免疫方法建立SD大鼠RAU动物模型,将大鼠随机分为5组：正常对照组（A）、阴性对照组（B）、APS低（C）、中（D）、高（E）剂量组。灌胃治疗20d后运用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组SD大鼠血清中TNF-α的表达水平,并提取大鼠口腔黏膜做组织病理学观察。结果：阴性对照组（B）RAU大鼠血清中TNF-α的表达水平显著高于正常对照组（A）（P〈0.05）,连续灌胃20d后,APS各治疗组（C～E）大鼠血清中TNF-α的含量下降,较阴性对照组（B）有显著性差异（P〈0.05）,且高剂量（300mg/kg）APS对TNF-α表达水平的抑制作用较中（200mg/kg）、低（100mg/kg）剂量APS明显。结论：RAU发病可能与血清中TNF-α的表达异常有关,而体内应用APS可以通过剂量依赖方式有效地抑制RAU大鼠血清中TNF-α的表达。     

局部注射黄芪多糖对大鼠正畸牙保持阶段BMP-2表达的影响

目的:探讨局部注射黄芪多糖对大鼠正畸牙保持阶段牙周组织改建和骨形成蛋白2(BMP-2)表达的影响。方法:48只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为8组,每组6只,即空白对照组(1组),阴性对照组(1组),实验组(6组)。利用50 g牵引力近中移动右侧上颌第一磨牙,建立大鼠正畸牙移动模型,加力21 d。实验组于拆除装置前1 d开始将10 mg/L黄芪多糖溶液局部注射于右上第一磨牙远中颊侧黏骨膜下,每1次/3 d,每次50 μL;阴性对照组每3 d注射等量生理盐水。分别于1、3、7、14、21、28 d后处死,测量正畸牙复发距离,采用HE染色观察牙周组织变化,免疫组化染色检测牙周组织中BMP-2的表达。结果:实验组牙周膜宽度保持较好,除1 d组外,相同时间的实验组复发距离小于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。在整个保持阶段,对照组远中侧BMP-2表达强度逐渐减少,实验组远中侧BMP-2表达强度逐渐增大。除1 d组外,相同时间的实验组BMP-2表达强度显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:大鼠正畸牙保持阶段,局部注射黄芪多糖能够增加牙周组织中BMP-2的表达,从而加速牙槽骨的改建,有利于正畸后牙齿的保持。     

黄芪多糖对成骨细胞增殖分化和结构的影响

目的探讨黄芪多糖对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化以及结构的影响。方法体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞,检测其在质量浓度分别为0.08、0.1、0.2、0.4g·L-1的黄芪多糖培养基中的增殖和分化与结构。结果当黄芪多糖的质量浓度为0.1g·L-1时,甲噻唑四唑氮法所测其光密度值和碱性磷酸酶活性高于对照组,成骨细胞能保持良好的表面结构和超微结构。结论适宜质量浓度的黄芪多糖水溶液在短期内对体外成骨细胞的增殖与分化具有一定的促进作用。     

低氧对大鼠颏舌肌成肌细胞分化的影响

目的:通过观测低氧环境对体外培养大鼠颏舌肌成肌细胞分化及低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响,探讨低氧引起颏舌肌损伤的机制以及HIF-1α在其中的作用。方法:根据环境氧浓度不同,将体外培养的原代大鼠颏舌肌成肌细胞分为正常氧浓度组(NC)(21%)和低氧组(HG)(1%),分别诱导分化0 d、1 d、3 d、6 d。采用RT-PCR及Western blotting检测生肌调节因子(MyoD)、肌源性决定因子(myogenin)、肌球蛋白重链(MHC)以及HIF-1α的mRNA及蛋白表达;倒置显微镜下观察成肌细胞分化的形态变化。结果:在颏舌肌成肌细胞分化过程中,两种氧状态下HIF-1αmRNA表达均没有显著变化(P>0.05),但蛋白表达逐渐上调;低氧对MyoD、myogenin、MHC的mRNA(P<0.05)和蛋白表达有显著的抑制作用,致肌管形成延迟;低氧使HIF-1αmRNA(P<0.05)和蛋白显著上调。结论:低氧环境可能是通过上调HIF-1α表达抑制大鼠颏舌肌成肌细胞的分化,从而抑制颏舌肌损伤的修复。     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶的影响

目的:研究ADAM28反义核酸(AS-ODN)对人牙囊细胞(HDFCs)增殖和碱性磷酸酶(AKPase)活性的影响。方法:采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法和酶动力学方法,检测ADAM28反义核酸对牙囊细胞增殖、分化和影响碱性磷酸酶活性的可能机制。实验数据采用单因素方差分析的q检验(SNK)进行统计学分析。结果:ADAM28反义核酸成功转染人牙囊细胞,MTT和AKPase活性检测显示:ADAM28AS-ODN组细胞增殖和AKPase活性均显著低于S-ODN组和空白对照组,其中MTT检测的组间P值分别为0.0002、0.0001,P均<0.01;AKPase检测的组间P值分别为0.0007、0.0003,P均<0.01,即ADAM28反义核酸可显著抑制HDFCs的增殖和AKPase的活性。结论:ADAM28可能通过参与Notch信号途径来促进牙囊细胞的增殖和分化。     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性的影响

目的 探讨不同力值、不同时段体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性及功能状态的影响。方法 分离培养大鼠髁突软骨细胞至第三代，利用四点弯曲细胞力学加栽仪进行体外周期性单轴压应力加裁，力值为2000和4000μ strain，时间0、15、30、60、120和240min；采用流式细胞计量术和MTT四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下增殖活性的变化。结果 2000μ strain周期性单轴压应力作用120min后，细胞增殖活性逐步增强，SPF增加（P〈0．001）；4000μstrain周期性单轴压应力作用60min后，髁突软骨细胞SPF出现了一明显下降，相反G2期细胞比例增高（P〈0．001）；120min后S期、G2细胞比例开始恢复，240minSPF增加（P〈0．001）。加力后1、2、3天，实验组细胞的增殖活性与对照组相比无统计学差异。结论 2000ttstrain周期性单轴压应力刺激能促进大鼠髁突软骨细胞增殖活性逐步增强；而4000μ strain周期性单轴压应力能引起细胞增殖活性早期发生变化，表现为先抑制后促进。两组细胞增殖活性变化均为暂时性、可恢复的。     

大鼠泪腺上皮细胞体外培养及生物学特性研究

目的通过组织细胞培养方法获得生物学性状稳定的SD大鼠泪腺上皮细胞,提供用于组织工程构建泪腺的种子细胞。方法分离纯化、培养SD大鼠泪腺上皮细胞。倒置显微镜观察细胞生长情况;对第5代泪腺上皮细胞进行细胞相关分泌片（cell-associated SC）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth-actin）和波形丝蛋白（vimentin）的免疫化学定性检测;透射电子显微镜观察第2、3和6代泪腺上皮细胞。结果第5代泪腺上皮细胞对细胞相关SC呈现出广泛的阳性表现,对波形丝蛋白、α-平滑肌肌动蛋白的阳性率较低。透射电镜观察到第2、3代泪腺上皮细胞表现功能活跃的状态,而第6代细胞则发生退变表现。结论成功体外培养了SD大鼠泪腺上皮细胞,第2、3代细胞可作为组织工程构建泪腺的种子细胞。     

中间普氏菌内毒素对人牙周膜细胞增殖的时间效应和细胞周期的影响

目的 :观察中间普氏菌内毒素 (Pi)对离体培养的人牙周膜细胞增殖的时间效应和细胞周期的影响。方法 :采用细胞培养技术、噻唑盐比色测定法 (MTT)和流式细胞仪技术。结果 :MTT法结果表明 ,加入10 μg/mLPi内毒素 3h后 ,即明显抑制人牙周膜细胞的增殖 (P <0 .0 5 ) ,且抑制作用随时间的延长而增强。流式细胞仪结果表明 ,在 10 μg/mLPi内毒素作用后 6和 12h ,DNA合成前期细胞所占百分比 (G1% )有所增高 ,而DNA合成期细胞所占百分比 (S % )降低。作用 2 4h后S期细胞数量增加 ,G1期细胞数量下降。结论 :Pi内毒素对人PDLC有直接毒害作用 ,可能是内毒素抑制静止态的G1期细胞进入S期 ,从而抑制细胞的增殖。     

钙调神经磷酸酶-T细胞核因子信号通路在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨钙调神经磷酸酶（CaN）-T细胞核因子（NFAT）信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法 构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素（CsA）作为对比。采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测成肌细胞凋亡情况,实时聚合酶链式反应检测CaN和NFAT mRNA的表达情况,蛋白质印迹法检测NFAT3的蛋白含量。结果 随加力时间的延长,细胞凋亡逐渐增加,CaN亚基CnA、CnB及NFAT3的mRNA表达及NFAT3蛋白含量逐渐升高;加入 CsA后,细胞凋亡减少,CnA、NFAT3的mRNA表达及NFAT3的蛋白含量明显减少。结论 周期性张应力可以诱导成肌细胞发生凋亡;CaN-NFAT信号通路可能参与了周期性张应力诱导的成肌细胞凋亡。     

羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌细胞的抑制作用及端粒酶活性的影响

目的 :观察体外羟基喜树碱、平阳霉素单独和联合应用对人舌癌Tca 8113细胞的生长抑制及端粒酶活性的影响。方法 :采用MTT法、软琼脂克隆形成法、透射电镜观察法、流式细胞术 ,TRAP PCR ELISA法研究。结果 :羟基喜树碱、平阳霉素单用及合用对Tca 8113细胞均有很好的抑制作用 ,且以合用效果最强 ,羟基喜树碱、平阳霉素使Tca 8113细胞的克隆形成率降低 ,超微结构、细胞周期发生明显变化 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性。结论 :羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌Tca 8113细胞在体外有很好的抑制作用且联合应用效果更佳。     

甲状旁腺素相关蛋白对小鼠颌骨来源成骨细胞增殖分化的影响

目的观察甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对体外培养小鼠颌骨来源的成骨细胞增殖和分化的影响。方法用出生1~2 d小鼠的颌骨,分离培养出成骨细胞,用PTHrP处理,分间歇或连续两种给药方法处理细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,以碱性磷酸酶含量测定和矿化结节计数检测细胞的分化。结果两种给药方式MTT增殖结果均高于对照组,但连续给药组碱性磷酸酶含量和钙化结节计数与对照组无明显差异,间歇给药组则均高于对照组。结论PTHrP间歇给药具有促进颌骨来源成骨细胞增殖和分化的作用,而连续给药则只能促进其增殖,对分化影响不明显。     

不同静压力对大鼠髁突软骨细胞生物学特性的影响

目的探讨不同静压力对髁突软骨细胞生物学特性的影响。方法对培养到第3代的新生SD大鼠髁突软骨细胞加载12、24、36 kPa的静压力,1 h后立即收集样本,同时设不加载力的对照组,用免疫组织化学技术对样本细胞进行染色,用病理图像分析仪分析细胞胞浆中胶原表达强度的变化。结果对于对照组、12、24 kPa组,随着压力的增加,髁突软骨细胞表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原及蛋白多糖（ PG）增加。与24 kPa组相比,36 kPa组髁突软骨细胞表达Ⅰ型胶原及PG减弱,而Ⅱ、Ⅲ型胶原表达则增加。结论适当的压力刺激可能会使髁突软骨细胞分化更加成熟,但是过大的应力则可能导致髁突软骨细胞生物学特性减弱,从而表现出去分化的某些特征。     

牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 :研究外源性牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响。方法 :采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞 ,用AlamarBlue摄入法检测不同浓度的牛血浆纤维粘连蛋白对大鼠成骨细胞增殖的影响 ,ELISA方法测定碱性磷酸酶活性的改变。结果 :AlamarBlue摄入法结果显示牛血浆纤维粘连蛋白能够促进大鼠成骨细胞的增殖 ,当浓度为 40 μg/ml时 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,当浓度为 5 0μg/ml时作用差异极显著 (P <0 .0 1) ,ELISA方法结果显示牛血浆纤维粘连蛋白能够增加大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性 ,各组与对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并有明显的剂量依赖性。结论 :一定浓度的牛血浆纤维粘连蛋白有促进大鼠成骨细胞增殖分化的作用