人参皂苷F2干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡

本研究探讨了人参皂苷F2对H_2O_2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。利用试剂盒测定凋亡细胞Caspase-6和Caspase-9活性水平,应用WesternBlot检测凋亡细胞中Bcl-2凋亡家族(Bcl-2和Bax)与Caspase凋亡家族(CleavedCaspase-3和Cleaved PARP)的蛋白表达量。H_2O_2损伤细胞后,Caspase酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L F2预处理损伤细胞后,Caspase-6和Caspase-9活力呈浓度依赖性降低(p0.05),当F2浓度达到20μmol/L时,Caspase-6活性降低了6.83 U/mg protein,Caspase-9活性降低了5.88U/mgprotein;CleavedCaspase-3和CleavedPARP蛋白表达量显著低于损伤组(p0.05),随着F2浓度的升高,Cleaved Caspase-3表达量分别下降至280.90%、232.46%、185.26%,Cleaved PARP表达量随着F2浓度升高而降低至110.36%、85.85%、61.95%;F2高浓度组的Bcl-2/Bax比值(73.94%)较损伤组比显著提升(p0.05)。表明人参皂苷F2可以抑制凋亡蛋白Caspase的活性,降低Bax促凋亡蛋白与Caspase家族上、中、下游蛋白的表达,通过调控Caspase级联反应抑制H_2O_2刺激引起的细胞凋亡。     

罗汉果粗提物抑制H2O2诱导MIN6细胞的ROS生成及凋亡

探讨罗汉果粗提物（Momordica grosvenorii extract,MGE）对H2O2诱导MIN6细胞凋亡及氧化损伤的保护作用及机制。以不同浓度的H2O2诱导MIN6细胞建立氧化损伤模型,根据细胞活力选择最适的诱导浓度。采用MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞活性氧ROS水平和细胞凋亡率;Western blot方法对凋亡相关因子进行检测。结果表明,罗汉果粗提物（0~200 μg/mL）对MIN6细胞活性几乎无影响,因此选取200 μg/mL罗汉果粗提物进行后续实验。200 μg/mL罗汉果粗提物能显著逆转过氧化氢导致的细胞活力降低（p<0.05）。流式细胞术结果显示,与单用H2O2相比,罗汉果粗提物可以显著下调H2O2导致的ROS水平升高（p<0.05）,且抑制H2O2诱导的MIN6细胞的凋亡。Western blot结果也表明罗汉果粗提物能部分逆转H2O2引起的PCNA表达降低,Bax表达增高（p<0.05）。综上所述,罗汉果粗提物可以抑制H2O2诱导MIN6细胞的ROS生成及细胞凋亡,该研究结果可为将罗汉果开发为防治糖尿病功能食品提供实验依据。     

葡萄籽原花青素对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的拮抗作用

目的： 探讨葡萄籽原花青素（ g r a p e s e e d p r o a n t h o c y a n i d i n , G S P E ） 对顺铂（cis-diamminedichloroplatinum,CDDP）诱导人胚肾细胞HEK293凋亡及相关凋亡基因的影响,并探讨可能的机制。方法：体外培养正常HEK293细胞,噻唑蓝法测定GSPE、CDDP分别对HEK293细胞生长的影响以及GSPE对CDDP诱导HEK293细胞毒性的保护作用,流式细胞仪测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡率的变化,Western blotting测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：GSPE对CDDP所致HEK293细胞毒性具有拮抗作用,可减轻CDDP所致HEK293细胞凋亡,减弱Bax表达、增强Bcl-2表达。结论：GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与GSPE降低促凋亡基因Bax,升高抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

山楂原花青素下调Traf6/NF-κB信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的：探讨山楂原花青素（hawthorn procyanidins,HPC）诱导肝癌细胞Huh-7增殖和促进其凋亡的机制。方法：体外常规培养Huh-7细胞株和过表达Traf6基因Huh-7细胞株,配制0、5、10、20、40、80μg/mL不同质量浓度的HPC,采用细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒检测HPC对Huh-7细胞和过表达Traf6基因Huh-7细胞增殖的抑制作用,并选40μg/mL作为HPC实验质量浓度;利用实时定量聚合酶链反应检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB?p65、Bax和Caspase-3的mRNA表达水平;利用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB p65、Bax和Caspase-3蛋白表达水平;利用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测HPC对Huh-7细胞凋亡的影响。结果：HPC质量浓度大于20μg/mL时可以明显抑制Huh-7细胞增殖,并随HPC质量浓度升高Huh-7细胞的相对存活率显著降低（P<0.05）;Traf6蛋白过表达可以促进Huh-7细...     

基于网络药理学预测人参皂苷F2 减肥作用的靶标及通路

人参皂苷F2具有抗癌、护肝、抗炎、降脂等多种生理功能,但是其关于减肥的作用机制尚不明确。本研究利用网络药理学方法预测人参皂苷F2减肥作用的潜在靶点和作用通路,借助PubChem、GeneCards数据库收集人参皂苷F2、肥胖靶点信息,通过共享靶点,利用Cytoscape等平台构建并分析人参皂苷F2-靶点-肥胖网络。结果表明,人参皂苷F2减肥作用共涉及35个潜在靶点,其中关键靶点包括MAPK1、VEGFA、CASP3等,GO富集提示潜在靶点主要参与代谢、结合、组成细胞组分等生物学过程,通过EGFR抗酪氨酸激酶抑制剂信号通路、P13K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路等方式发挥减肥作用。网络药理学成功预测了人参皂苷F2减肥作用的多靶点、多通路模式,为后续深入探讨其作用机制提供理论依据和研究方向。     

熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究

为了探究熊猫豆的抑制肿瘤活性及其诱导Caco-2凋亡的机制,采用80%丙酮浸提法制备熊猫豆粗提物,通过MTT法测定其对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、酶联免疫分析等技术与方法检测细胞周期、DNA及凋亡相关蛋白相对表达量的变化。结果发现,与空白对照组相比,0.1~1.0 mg/m L熊猫豆丙酮提取物对Caco-2细胞增殖有明显的抑制作用,且呈现剂量效应关系,IC50为0.72 mg/m L。0.4、0.6、0.8 mg/m L熊猫豆丙酮提取物处理72 h后的Caco-2细胞,可以观察到典型的凋亡细胞的梯状DNA条带,细胞周期G1期延长,Cyt C、caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均有显著上升。熊猫豆丙酮能够抑制结肠癌细胞Caco-2增殖,这种抑制作用是通过阻滞细胞周期和诱导线粒体通路介导的细胞凋亡实现的。     

NF-κB和Caspase-3在金雀异黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用研究

采用MTT法、形态学观察和琼脂糖凝胶电泳法检测了金雀异黄素(genistein,Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的生长和凋亡诱导作用,并采用免疫组化法和WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞NF-κB、Caspase-3蛋白的表达情况。结果显示:Gen可抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制NF-κB蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结果提示:Gen抑制NF-κB蛋白表达、增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一。     

茶多酚体外诱导白血病细胞凋亡

目的:为研发天然抗白血病新药,研究茶多酚主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外诱导细胞凋亡的作用。方法:采用体视显微镜、DNA凝胶电泳及透射电镜技术,观察EGCG对体外诱导人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)凋亡的影响及其诱导凋亡的最佳作用时间和最佳作用浓度。结果:发现EGCG实验组中,HL-60细胞生长被显著抑制,DNA凝胶电泳中可见DNA条带,其细胞超微结构明显改变。当250μg/ml EGCG作用细胞6h时,其诱导细胞凋亡的作用最明显。结论:EGCG可体外诱导HL-60细胞凋亡,可能是抗白血病的侯选药。     

中草药提取物抑制H_2O_2诱导人皮肤细胞凋亡的初步研究

建立了过氧化氢(H2O2)诱导人皮肤成纤维细胞损伤及凋亡模型,并研究几种具有抗氧化作用的复方中草药提取物对细胞损伤及凋亡的影响。采用MTT、Hoechst染色及TUNEL等方法检测过氧化氢诱导细胞后以及加入中草药提取物后细胞的存活率、细胞形态以及细胞凋亡的状况。实验结果显示:在浓度为0.8 mmol/L,作用时间6 h,过氧化氢能诱导人皮肤成纤维细胞损伤和凋亡(p<0.05);而抗氧化类中草药复方提取物等物质能够显著提高过氧化氢诱导的细胞存活率的降低,并能明显减少凋亡细胞的数量(p<0.05),表明其对过氧化氢导致的细胞损伤和凋亡作用具有一定的抑制和防护作用。     

不同生理状态下人参总皂苷对HepG2细胞CYP2B6 mRNA和蛋白表达的影响

本文研究人参总皂苷在正常和炎症状态下对HepG2细胞CYP2B6 mRNA和蛋白表达的影响。采用索式提取法提取人参总皂苷,Real-Time PCR及Western Blot技术检测细胞中CYP2B6 mRNA和蛋白表达。结果显示,正常状态下人参总皂苷低(15 g/mL)、中(60 g/mL)与高(240 g/mL)剂量均显著诱导CYP2B6 mRNA表达(p0.05),中、高剂量均显著诱导CYP2B6蛋白的表达(p0.05)。使用LPS孵育细胞制造炎症模型,LPS对CYP2B6 mRNA表达无影响,但显著诱导CYP2B6蛋白的表达(p0.05)。使用人参总皂苷和LPS共同孵育细胞后,炎症状态下人参总皂苷中、高剂量对CYP2B6 mRNA的表达仍有显著诱导效果(p0.05),低和中剂量则均能显著诱导CYP2B6蛋白的表达,但高剂量则对CYP2B6的蛋白表达则呈现抑制作用(p0.05)。提示炎症状态能够改变人参总皂苷对CYP2B6 mRNA和蛋白的表达,因此联合用药时,应考虑不同生理状态下人参对代谢性药物相互作用的影响。     

1,3-DCP通过激活线粒体凋亡通路诱导HepG2细胞凋亡

本研究以HepG2细胞为模型,考察1,3-二氯丙醇（1,3-DCP）对HepG2细胞凋亡的影响和机制,为1,3-DCP肝毒性机制研究提供实验依据。结果发现,1,3-DCP在160～640μg/mL浓度范围内,作用于HepG2细胞8h,就可以降低细胞活性,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体膜电位下降,细胞内ROS的增高,[Ca2+]i增高,并呈剂量依赖性。从而说明,通过线粒体凋亡通路诱导肝细胞凋亡是1,3-DCP的肝毒性机制之一。      

枸杞多糖对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖(LBP)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞(HEK293)凋亡的影响,并探讨其可能机理。方法：体外培养HEK293,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察LBP对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,流式细胞仪检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡率的变化：Western blotting检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：LBP能够拮抗CDDP诱发的细胞毒性,并且随着质量浓度的不同而产生变化。 流式细胞仪检测表明随着LBP质量浓度的增加,细胞凋亡率随之减少;Western blotting表明,加入LBP后能够使Bax基因的表达减少而Bcl-2基因的表达增加。结论：LBP对CDDP诱导人胚肾细胞凋亡有抑制的作用,其作用机理可能与其下调Bax及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

黑参皂苷的提取纯化及其对MGC-803细胞凋亡的影响

为了探究黑参皂苷的抗肿瘤作用,将生晒参在高温高湿条件下制备成黑参,采用乙醇超声辅助法提取皂苷,并用大孔树脂纯化,液相质谱联用技术（liquidchromatograph-massspectrometer,LC-MS）测定人参和黑参的皂苷类成分。采用MTT法、流式细胞术、蛋白质印迹法（Western Blot）探讨黑参皂苷对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及诱导其凋亡机制。经大孔树脂纯化后黑参皂苷含量为89.02%。LC-MS分析黑参具有14种单体皂苷,其中Rg3、Rg5为稀有皂苷。在对MGC-803细胞活性方面,人参皂苷24 h的IC50为296.64 μg/mL,黑参皂苷为141.25 μg/mL,且用浓度为200 μg/mL的黑参皂苷处理细胞24 h后,其凋亡率为66.96%,线粒体膜电位下降至23.45%,活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平升高至74.65%。Western Blot结果表明黑参皂苷处理组Bax、Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9的表达量均增加,Bcl-2的表达量降低。研究表明,制备的黑参产生了稀有皂苷。黑参皂苷有更强的抗肿瘤活性,细胞凋亡机制是通过Bax、Bcl-2蛋白表达的改变导致线粒体膜电位降低,释放Cyt-C,Caspase-3、Caspase-9被激活而裂解使胃癌MGC-803细胞发生凋亡。     

羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和诱导细胞凋亡研究

以黑脉羊肚菌多糖为原料,研究羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞MDA-MB-231（以下简称MDA）增殖和凋亡的影响。结果表明：在无细胞毒性范围内,羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞MDA的增殖,半数有效浓度（median effective concentration,EC50）值为0.096 mg/mL,同时人乳腺癌细胞MDA表现出多种细胞凋亡的形态学变化。免疫印迹检测实验结果显示,羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达,促进Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达,同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值,并呈现出剂量依赖效应。说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞MDA增殖,促进细胞凋亡。     

灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的细胞学观察

目的：研究灵芝肽(Ganoderma lucidum peptides,GLP)在体外对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法：HepG2细胞用含不同浓度GLP培养基培养12、24、36、48、60h,GLP分为5个浓度梯度,分别为0.25、0.5、1、2、4mg/ml,采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞生长抑制作用,用可见光显微镜、荧光显微镜观察细胞形态学变化、激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：MTT法显示灵芝肽能显著抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且存在浓度及时间依赖性。镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变：细胞染色质浓缩,细胞体积缩小、核固缩深染、细胞膜出泡、凋亡小体形成;LSCM观察到胞内钙离子浓度明显增加。结论：0.25～4.0mg/ml的GLP体外可显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,存在量效关系和时效关系,能诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并且提示细胞内钙离子浓度的升高可能是细胞凋亡的机制之一。     

人参酶解物中的皂苷成分及其对髓源抑制性细胞的作用研究

本文建立了同时测定人参酶解物中12种人参皂苷的高效液相色谱检测方法,探索人参提取物及酶解物主要皂苷成分差异,并以酶解前后的人参提取物作为对象,探讨其对髓源抑制性细胞(Myeloid derived suppressed cell,MDSC)的影响。人参提取物和酶解物的总皂苷含量差异不明显,而酶解物中12种人参皂苷和稀有皂苷含量(Rh1、F1、F2、Rg3、CK和Rh2)均显著高于人参提取物;稀有皂苷含量增加了4.48倍,尤其是酶解后转化生成了大量的F2和少量的F1、CK和Rh2等稀有皂苷。人参提取物及酶解物均能显著抑制MSC2细胞增殖和降低结肠癌荷瘤小鼠脾脏中的MDSC细胞比例。其中人参酶解物效果更佳,相对人参提取物,对MSC2细胞增殖抑制率提高30.00%和MDSC细胞比例降低40.50%。人参酶解物含有丰富的稀有皂苷,具有更高的生物活性,能够有效改善肿瘤微环境,从而加强了抗肿瘤能力。     

纳豆抗氧化肽对H2O2诱导HEK293细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 评价纳豆肽的抗氧化能力以及对氧化应激HEK293细胞的保护效果。方法 首先以DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力为指标,测定酶解得到纳豆肽粗品的抗氧化能力。利用超滤技术对纳豆肽进行分离,测定分离后各组分在不同浓度下对DPPH及ABTS+清除活性。将活性最强的两个组分作为纳豆抗氧化肽,测定它们对H2O2诱导氧化损伤HEK293细胞抗氧化酶含量的影响,评价其对氧化损伤HEK293细胞的保护效果。结果 纳豆肽粗品在8 mg/mL时具有良好的DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力,初步证实了其抗氧化潜力。超滤后得到了相对分子质量分别大于30 kDa、10~30 kDa、3~10 kDa、小于3 kDa的四个纳豆肽组分,其对DPPH及ABTS+清除活性均随着浓度的增加呈现上升趋势,特别是在8 mg/mL时,相对分子质量为3~10 kDa和小于3 kDa组分表现出最强的抗氧化活性,将这两个组分作为纳豆抗氧化肽继续研究。后续的细胞试验表明,这两个组分能够显著提高氧化应激下HEK293细胞的存活率。在50~300μg/mL的剂量范围内,小于3 kDa组分的纳豆抗氧化肽可使细胞存活率恢复至未损伤时的水平,而3~10 kDa组分也使损伤细胞的存活率提高了40.8%。同时,纳豆抗氧化肽均能提高氧化损伤HEK293细胞中的SOD、GPX和CAT等抗氧化酶的含量,小于3 kDa组分和3~10 kDa组分的纳豆抗氧化肽分别使SOD含量提高了49.52%和50.80%,GPX含量提高了49.52%和50.81%,CAT含量提高了93.64%和91.97%。结论 纳豆抗氧化肽可以有效地缓解H2O2诱导的HEK293细胞的氧化应激损伤,为纳豆抗氧化肽的应用提供理论依据。     

人参总蛋白对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制研究

对人参水溶性总蛋白对β-淀粉样蛋白所致人神经母细胞瘤SH-SY5Y损伤的影响及其作用机制进行研究。使用25μmol/L老化后Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞建立阿尔兹海默病体外模型;用人参水溶性总蛋白(6.25、12.5、25μg/mL)预保护SH-SY5Y细胞12 h,随后加入25μmol/L的Aβ_(25-35)共同孵育24 h;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、抑制活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位变化;紫外分光光度法检测三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C释放以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达。结果显示SH-SY5Y细胞经Aβ_(25-35)诱导后,细胞活力显著降低,凋亡程度严重增加(P0.000 1);不同浓度的人参总蛋白可以挽救Aβ_(25-35)诱导所致细胞活力降低和凋亡程度增加,并呈现浓度依赖性;人参总蛋白预处理可以降低Aβ_(25-35)诱导的线粒体超氧化物升高,ROS产生,显著抑制Aβ_(25-35)损伤导致的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)降低和三磷酸腺苷水平的下降;人参总蛋白可抑制Aβ_(25-35)所致的细胞色素C向胞质的释放,下调Bax表达、上调Bcl-2表达。     

陈皮酚类化合物调控AHR和NF-κB通路抗苯并芘诱导的肺上皮细胞损伤

本文研究了苯并芘(Bap)诱发肺上皮细胞炎性损伤的作用机制及陈皮中的酚类化合物的抗炎活性及作用机制。通过从陈皮中分离出来酚类化合物并用于抗Bap诱导的人肺上皮II型细胞(A549)损伤的活性研究,检测Bap对细胞炎症因子、NF-κB、芳基烃受体(AHR)通路相关蛋白表达的影响及陈皮酚类化合物对Bap造成损伤的保护作用。本文从陈皮中分离得到6个酚类化合物,研究表明,其中aspidin BB可降低3.74%由Bap诱导的A549细胞凋亡。aspidin BB可抑制Bap诱导的NO及炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)分泌,分别降低了49.22%、26.79%、37.86%和42.94%。Westernblotting结果显示,aspidinBB可抑制Bap诱导的AHR和NF-κB相关蛋白的激活,增强A549细胞的抗炎作用。因此得出陈皮酚类化合物aspidin BB可通过减少Bap诱导的炎性因子分泌,调控AHR、NF-κB通路发挥抗炎及抗氧化损伤的功能。     

原花青素B2诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

本研究旨在探讨原花青素B2（procyanidin B2,PCB2）对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及其机制。采用噻唑蓝法分析PCB2在不同浓度和不同处理时间下对MCF-7细胞存活率的影响;通过激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2＋浓度变化并观察Hoechst 33342染色后的细胞凋亡形态;采用流式细胞分析仪检测PCB2对MCF-7细胞凋亡率、周期、胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平及线粒体膜电位变化的影响;通过Western blot检测PCB2对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达量的影响。结果表明,当浓度在10～80 μmol/L范围内时,PCB2能显著降低MCF-7细胞的存活率（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,处理24、48、72 h时对MCF-7细胞存活率的半抑制浓度分别为114.82、57.15 μmol/L和55.64 μmol/L。PCB2能显著增加MCF-7细胞凋亡率、胞内ROS水平（P＜0.05）、细胞核荧光强度,并破坏Ca2＋平衡,同时显著降低线粒体膜电位（P＜0.05）,并将细胞周期阻滞在G0/G1期进而诱导细胞凋亡。PCB2可上调Bax、细胞色素c、Caspase-12和Caspase-3蛋白的相对表达水平,下调Bcl-2蛋白相对表达水平。综上可知,PCB2具有抗肿瘤作用,其机制与激活线粒体和内质网介导的凋亡通路、周期阻滞和细胞内ROS水平增加有关。