lncRNA MALAT1靶向调控miR-146b-5p影响膀胱癌细胞侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)影响膀胱癌细胞侵袭和迁移的机制。方法:在膀胱癌BIU-87细胞中转染MALAT1 siRNA,以real-time PCR方法测定转染效果,Transwell法测定侵袭及迁移能力,Western blot法检测细胞中上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(vimentin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的变化。生物信息学软件预测MALAT1与miR-146b-5p有靶向互补位点,利用双萤光素酶报告系统鉴定靶向关系。用real-time PCR方法检测下调MALAT1后BIU-87细胞中miR-146b-5p表达的变化。将MALAT1 siRNA和miR-146b-5p inhibitor共转染至BIU-87细胞中,用上述方法分析细胞侵袭、迁移及vimentin、E-cadherin和MMP-2蛋白表达的变化。结果:转染MALAT1 siRNA可明显下调BIU-87细胞中MALAT1的表达水平(P<0.05)。敲减MALAT1表达后,BIU-87细胞的侵袭和迁移能力下降,细胞中vimentin和MMP-2蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高。MALAT1靶向调控miR-146b-5p的表达,敲减MALAT1的表达可以提高BIU-87细胞中miR-146b-5p的水平。miR-146b-5p inhibitor可以明显逆转敲减MALAT1的表达对BIU-87细胞侵袭、迁移能力和vimentin、E-cadherin、MMP-2蛋白表达的影响。结论:下调MALAT1可靶向促进miR-146b-5p表达,抑制膀胱癌细胞侵袭、迁移能力和EMT。     

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.     

miR-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因PD-L1参与卵巢癌增殖和侵袭的机制研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)参与卵巢癌增殖和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-195-5p靶向STAT3。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+STAT3组和STAT3组。通过质粒转染技术过表达miR-195-5p和STAT3。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞活力、侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证过表达miR-195-5p对肿瘤生长、STAT3和PD-L1的影响。结果 miR-195-5p直接靶向STAT3。过表达miR-195-5p抑制STAT3 mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),过表达STAT3显著逆转miR-195-5p对STAT3的抑制作用(P0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P0.05),STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P0.05),并且mimic+STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于mimic组(P0.05)。荷瘤裸鼠实验显示miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著低于对照组(P0.05)。miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤组织中STAT3和PD-L1蛋白水平显著低于对照组(P0.05)。结论 miR-195-5p可通过靶向STAT3抑制PD-L1的表达并抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和免疫抑制反应。     

miR-106b-5p通过靶向MMP-9调控HTR-8/SVneo细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-106b-5p对HTR-8/SVneo细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其与基质金属蛋白酶-9(MMP-9的靶向关系。方法 收集80例子痫前期（PE）及30例正常孕妇胎盘组织。选取HTR-8/SVneo细胞，分为Vector组、MMP-9组、Scramble组、si-MMP-9组、miR-106b-5p组、si-miR-106b-5p组、miR-NC组、NC组、miR-106b-5p+si-NC组及miR-106b-5p+si-MMP-9组。CCK-8实验检测增殖能力，Transwell实验检测侵袭能力，划痕实验检测迁移能力，荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞MMP-9基因mRNA及miR-106b-5p表达水平，Western blot检测细胞MMP-9蛋白表达水平，TargetScan在线网站预测miR-106b-5p与MMP-9结合位点，双萤光素酶报告基因实验验证miR-106b-5p与MMP-9的靶向关系。结果 轻度、重度PE孕妇胎盘组织MMP-9基因mRNA、蛋白及miR-106b-5p表达水平低于正常孕妇（P<0.01）。重度PE孕妇胎盘组织MM...     

LncRNA LUCAT1介导的miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在甲状腺乳头状癌发展中的调控作用及机制

目的 探究lncRNA LUCAT1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响,并进一步探究miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在其中发挥的作用。方法 RT-qPCR检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中LUCAT1、miR-199b-5p和MAPKAPK3表达;生物信息学预测miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3结合。将TPC-1细胞分为sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+inhibitor NC组、sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor组和sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor+sh-MAPKAPK3组;Western blot检测各组细胞MAPKAPK3蛋白表达水平;CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot方法检测各组细胞EMT相关蛋白表达水平。结果 甲状腺乳头状癌组织中LUCA...     

miR-24-3p 靶向MMP-16 对鼻咽癌5-8F 细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的 影响

目的:探究miR-24-3p靶向MMP-16对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的影响。方法:体外培养鼻咽癌5-8F细胞,并分为空白组(Control)、阴性对照组(mimic-nc)和目的基因组(miR-24-3p mimic);RT-PCR检测NPC患者肿瘤样本和miR-24 mimic转染5-8F细胞后miR-24-3p表达情况;Transwell检测细胞侵袭情况,划痕检测细胞迁移情况。生物信息学预测miR-24与MMP-16的靶向关系并荧光素实验验证;Western blot检测miR-24 mimic转染5-8F后,MMP-16的表达情况。裸鼠右前肢皮下注射转染miR-24 mimic的5-8F细胞,RT-PCR检测miR-24表达;30 d后取出肿瘤组织检测重量;免疫组化检测MMP-16含量。结果:与NPC患者肿瘤样本相比,癌旁组织miR-24-3p表达较高(P0.05);miR-24-3p mimic组5-8F细胞侵袭能力显著降低(P0.05);miR-24-3p mimic组5-8F细胞迁移能力显著降低(P0.05);荧光素酶报告实验表明miR-24-3p序列上存在MMP-16结合位点;miR-24-3p mimic组MMP-16表达显著降低(P0.05);miR-24-3p过表达可显著降低裸鼠体内肿瘤质量、MMP-16表达及MMP-16阳性率(P0.05)。结论:miR-24-3p可靶向作用于MMP-16抑制NPC 5-8F细胞增殖、侵袭和迁移。     

circAGFG1对非小细胞肺癌生物学行为的影响机制研究

目的 探讨环状RNA(circRNA)AGFG1通过靶向微小RNA(miR)-374a-5p/血管内皮生长因子C(VEGFC)轴对非小细胞肺癌（NSCLC）生物学行为的影响机制。方法 qRT-PCR检测55例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织以及人支气管上皮细胞系（BEAS-2B）、人NSCLC细胞系（HCC827、H1975、A549、H1299）中circAGFG1、miR-374a-5p、VEGFC mRNA表达水平。以A549细胞为研究对象,设置对照组、circAGFG1小干扰RNA(si circAGFG1)组及阴性对照（si NC）组、si circAGFG1+miR-374a-5p抑制物（miR-374a-5p inhibitor）组以及si circAGFG1+抑制物对照组（inhibitor NC）组。qRT-PCR检测各组A549细胞中circAGFG1、miR-374a-5p、VEGFC mRNA表达水平;CCK-8及Transwell实验分别检测细胞活力及迁移、侵袭能力;Western blot检测增殖蛋白Ki-67、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及VEGFC...     

抑制miR-23a-3p表达对人白血病细胞株HL-60侵袭和迁移的调节作用

目的探讨抑制miR-23a-3p表达对人白血病细胞株HL-60侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法转染miR-23a inhibitor到HL-60细胞抑制miR-23a-3p的表达。HL-60细胞分为3组:HL-60组(阴性对照组)、scramble组(转染对照组)和miR-23a inhibitor组。qRT-PCR技术检测MMP-9和VEGF mRNA水平,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。Western blot法检测MMP-9和VEGF蛋白表达。结果转染scramble后HL-60细胞miR-23a-3p表达无明显变化。转染miR-23a inhibitor后HL-60细胞miR-23a-3p表达显著下降(P0.01)。scramble组与阴性对照组每个视野下的侵袭细胞数目差异无统计学意义。miR-23a inhibitor组每个视野下的侵袭细胞数目显著低于阴性对照组(P0.01)。scramble组与阴性对照组细胞迁移无明显差异。与阴性对照组相比,miR-23a inhibitor组细胞迁移显著降低(P0.01)。转染scramble不会影响MMP-9和VEGF的表达。miR-23a inhibitor组MMP-9和VEGF的mRNA水平显著低于阴性对照组(P0.01)。与阴性对照组相比,miR-23a inhibitor组MMP-9和VEGF的蛋白水平显著下降(P0.001)。结论抑制miR-23a-3p表达可减弱人白血病细胞株HL-60的侵袭和迁移。     

miR-502-3p 通过靶向结合 CBL 抑制卵巢癌增殖并诱导凋亡

目的 探究微小 RNA 502-3p (micro RNA 502-3p, miR-502-3p) 通过靶向结合 Casitas B 细胞淋巴 瘤 (Casitas B-cell lymphoma, CBL) 参与卵巢癌增殖和凋亡的机制。 方法 下载 GSE66957、 GSE119056、 TCGA_ OV 卵巢癌相关数据矩阵, 分析 miR-502-3p、 CBL 与卵巢癌的关系; 构建过表达 miR-502-3p、 CBL 的 SKOV3 和 HO8910 细胞系, 分别采用细胞计数试剂盒 ( cell counting kit 8, CCK-8)、 克隆形成实验、 流 式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况; 通过荷瘤裸鼠实验, 观察过表达 CBL 对肿瘤生长的影响; 验证 miR502-3p 与 CBL 的靶向关系。 结果 生物信息学分析显示, 卵巢癌组织中 CBL 水平高于癌旁组织, miR-502- 3p 水平低于癌旁组织, CBL 水平与患者预后、 细胞增殖基因表达有关 (P< 0. 05)。 miR-502-3p 与 CBL 存在 靶向关系, 与 Vector 组比较, CBL 组肿瘤的体积及重量增加 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-502-3p 组 SKOV3、 HO8910 细胞中 CBL 蛋白表达、 细胞活力、 克隆数降低, 细胞凋亡率升高 (P< 0. 05), 但 CBL 可逆转上述细胞变化。 结论 miR-502-3p 可通过靶向下调 CBL 抑制卵巢癌细胞的增殖, 并诱导其凋亡。     

miR-135b-3p调控XAF1表达影响甲状腺癌细胞的迁移、侵袭和放射增敏性

目的探讨miR-135b-3p对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响以及其可能的调控机制。方法培养正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、甲状腺癌细胞K1和TPC-1,RT-qPCR检测细胞中miR-135b-3p表达,Western blot检测细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)表达。转染anti-miR-135b-3p至TPC-1细胞抑制miR-135b-3p表达,Transwell、Western blot及克隆形成实验分别检测抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移和侵袭、E-cadherin和MMP-2蛋白表达及对TPC-1细胞放射敏感性的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-3p与XAF1之间的靶向调控关系。结果与Nthy-ori 3-1细胞相比,K1和TPC-1细胞中miR-135b-3p表达水平显著升高(P<0.05),XAF1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-135b-3p表达可抑制TPC-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),促进TPC-1细胞E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MMP-2蛋白表达(P<0.05),增强TPC-1细胞的放射敏感性(P<0.05)。miR-135b-3p靶向负调控XAF1表达。抑制XAF1表达可降低抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移、侵袭及放射敏感性的影响。结论miR-135b-3p通过下调XAF1表达促进甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低其放射增敏性,是甲状腺癌的潜在治疗靶点。     

miR-196a通过靶向NR6A1降低宫颈癌Hela细胞生存和运动能力

目的探究微小型RNA-196a(miR-196a)对宫颈癌Hela细胞生存和运动能力的影响和作用机制。方法RT-PCR检测正常宫颈上皮HcerEpic细胞和宫颈癌Hela细胞、CaSki细胞中miR-196a和核受体NR6A1的mRNA水平;阴性对照miR-NC和miR-196a inhibitor转染Hela细胞,分别记为NC组和miR-196a inhibitor组,免疫印迹检测NR6A1蛋白的表达,生物信息学和荧光素酶报告实验分析和验证miR-196a和NR6A1的靶向调控关系;阴性对照质粒pcDNA和过表达质粒pcDNA-NR6A1转染Hela细胞,分别记为pcDNA组和pcDNA-NR6A1组,免疫印迹检测NR6A1蛋白表达;将miR-196a inhibitor和pcDNA-NR6A1单独或联合转染Hela细胞,分别记为miR-196a inhibitor组、pcDNA-NR6A1组和inhibitor+NR6A1组,CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫印迹检测Ki-67、Caspase-3、VEGF和MMP-9的表达。结果与HcerEpic细胞比较,Hela细胞和CaSki细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达水平均较高(P<0.01),Hela细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达变化最为显著(P<0.05);miR-196a inhibitor组Hela细胞中NR6A1蛋白表达显著降低(P<0.01),pcDNA-NR6A1组NR6A1的蛋白表达显著升高(P<0.01);miR-196a inhibitor能显著降低Hela细胞增殖倍数和Ki-67表达水平(P<0.05),同时还能提高Hela细胞凋亡率和Caspase-3表达(P<0.01);此外,miR-196a inhibitor还能减少侵袭细胞数,降低Hela细胞划痕闭合率并抑制VEGF和MMP-9的表达(P<0.01);NR6A1能显著减弱miR-196a inhibitor对Hela细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及对Ki-67、Casapse-3、VEGF和MMP-9表达的调控作用(P<0.01)。结论miR-196a inhibitor能通过靶向抑制NR6A1表达降低宫颈癌Hela细胞的生存和运动能力。     

miR-129-5p靶向KLK7对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制

目的 探讨高表达miR-129-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR方法检测卵巢癌SKOV3细胞与人正常卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达。在卵巢癌SKOV3细胞中瞬时转染miR-129-5p模拟物及无意义序列,采用CCK8法及Transwell实验检测各组细胞的增殖能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR检测miR-129-5p和KLK7的相对表达水平;Western blot检测各组细胞中KLK7蛋白表达;Targetscan 7.2和双荧光素酶实验分析miR-129-5p与KLK7的靶向关系。结果 miR-129-5p在卵巢癌SKOV3细胞中的表达低于人正常卵巢上皮细胞(P<0.05),过表达miR-129-5p降低SKOV3细胞中KLK7 mRNA和蛋白的表达,Targetscan 7.2网站分析及双荧光素酶实验证实KLK7为miR-129-5p的靶基因,过表达miR-129-5p抑制SKOV3细胞增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 过表达miR-129-5p可通过靶向调控KLK7抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭。     

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平.通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系.结果 与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33'UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33'UTR的萤光素酶活性无影响.结论 下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡.     

LncRNA ZFAS1作为ceRNA吸附miR-541-3p调控胃癌侵袭转移北大核心CSCD

目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。     

长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响

目的：探讨长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响情况。方法：qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中H19的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后肺癌细胞侵袭能力的变化;划痕实验检测沉默H19后肺癌细胞迁移能力的变化;双荧光素酶报告基因检测H19与miR-107的相互作用;qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中miR-107的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后miR-107对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测沉默H19后miR-107肺癌细胞迁移能力的影响;裸鼠皮下成瘤检测沉默H19后miR-107对肺癌成瘤大小以及体积的影响。Western blot检测沉默H19后Notch通路蛋白的表达情况。结果：与癌旁组织相比,肺癌组织中H19表达明显增高;肺癌细胞A549中H19表达水平最高;沉默H19可以抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力;H19能与miR-107的3′UTR特异性结合;与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-107表达明显降低;沉默H19后,抑制miR-107可以促进肺癌细胞侵袭和迁移能力;与H19-siRNA组相比,H19-siRNA+miR-107-inhibitor组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显增大。沉默H19后Notch通路蛋白表达情况相应下调。结论：H19在肺癌发生发展过程中起重要作用,H19可以靶向调节miR-107通过Notch信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移能力。     

荷瘤小鼠卵巢癌细胞miRNA和髓源性抑制细胞的检测及相关性分析

目的检测卵巢癌荷瘤小鼠癌组织miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平和外周血和脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)的数量,并分析它们的相关性。方法 12例卵巢癌荷瘤小鼠的癌组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平,流式细胞术检测上述荷瘤小鼠中外周血和脾脏中MDSC的表达。采用Spearman法分析MDSC和microRNA的相关性。结果与正常小鼠相比,荷瘤小鼠外周血和脾脏中的MDSC明显增加。miR-21a-5p、miR-218-5p和miR-222-3p在癌组织中含量高于癌旁组织,相反miR-155a-5p和miR-494-3p在癌组织中的表达低于癌旁组织。miR-222-3p与MDSC的数量无相关性,miR-494-3p的水平与MDSC的数量负相关,miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p在癌组织与癌旁组织的表达差值与MDSC的数量呈正相关。结论卵巢癌荷瘤小鼠癌组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-494-3p水平和外周血及脾脏中MDSC的数量有一定的相关性。     

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论 miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-127-3p 靶向MAPK4 对肝癌HepG2 细胞株生物学特性的影响

目的:探究miR-127-3p与MAPK4的靶向关系及其对肝癌HepG2细胞生长转移能力的影响。方法:生物信息预测miR-127-3p与MAPK4间靶向关系,荧光素酶实验验证, qRT-PCR检测两者在肝细胞中的基因表达。miR-127-3p mimic及pcDNA-MAPK4(pc-MAPK4)分别或同时转染HepG2细胞,qRT-PCR检测miR-127-3p表达,BrdU及Hoechst检测细胞增殖及凋亡,Transwell及划痕实验检测侵袭及迁移,Western blot (WB)检测Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、MMP-9、VEGF、MAPK4、MAPKAPK5、HSPB1表达。miR-127-3p mimic转染HepG2细胞后,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录肿瘤体积,免疫组化及Tunel检测其增殖凋亡水平,WB检测MMP-9及MAPKAPK5表达。结果:与HL-7702比较,HepG2中miR-127-3p表达下调而MAPK4上调。HepG2中,miR-127-3p mimic上调miR-127-3p并下调MAPK4表达及MAPK4 wt荧光素酶活性,pc-MAPK4上调MAPK4并减弱miR-127-3p mimic的作用;miR-127-3p mimic减少BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,增加凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,pc-MAPK4增加BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,减少凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,减弱miR-127-3p mimic的抑增殖促凋亡作用;miR-127-3p mimic减少侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达,pc-MAPK4增加侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达并减弱miR-127-3p mimic的抗侵袭迁移作用;miR-127-3p mimic降低MAPKAPK5及HSPB1磷酸化比值,pc-MAPK4升高其比值并减弱miR-127-3p mimic的影响。miR-127-3p mimic减小HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤体积,减少组织中Ki67阳性细胞、MMP-9表达及MAPKAPK5磷酸化比值并增加凋亡细胞。结论:miR-127-3p靶向MAPK4可抑制肝癌HepG2细胞生长及转移。     

利多卡因通过LncRNA H19/miR-671-5p分子轴调控胃癌细胞增殖、迁移及侵袭北大核心CSCD

目的:探讨利多卡因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对LncRNA H19/miR-671-5p的调控机制。方法:体外培养胃癌细胞AGS,使用不同浓度的利多卡因处理细胞;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR检测H19及miR-671-5p的表达量;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-671-5p的靶向关系;将pcDNA-H19及其阴性对照pcDNA转染至AGS细胞,使用利多卡因处理细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果:与Con组相比,利多卡因不同剂量可明显降低细胞活力和Ki-67、PCNA、N-cadherin蛋白水平及H19的表达量(P<0.05),并可减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高E-cadherin蛋白水平及miR-671-5p的表达量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可靶向结合miR-671-5p;H19过表达可明显逆转利多卡因对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:利多卡因可能通过抑制H19表达及促进miR-671-5p表达从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

miR-551b-3p在胃癌组织中低表达并抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-551b-3p在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用real-time PCR的方法检测60例胃癌组织及其对应的癌旁组织中miR-551b-3p的表达量,使用miR-551b-3p模拟物(miR-551b-3p mimic)转染胃癌细胞系HGC-27,CCK-8法检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell法检测细胞侵袭。结果 1)miR-551b-3p在胃癌癌症组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.05)。2)过表达miR-551b-3p mimic可以明显减弱胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-551b-3p在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。