PRX2和AKRIBl0在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义

目的：探讨PRX2和AKR1B10在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义。方法90只C57BL/6J雄性小鼠随机分为实验组（60只）和正常对照组（30只）,用DEN/CCl4/乙醇诱发小鼠肝癌。于第4周、第8周、第12周、第16周和第20周5个时点处死小鼠,观察其肝脏病理组织的改变,应用实时荧光定量PCR法、免疫组化SP法分别检测小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA及蛋白质的表达水平。结果①实验诱发小鼠肝癌过程中的第4周见肝细胞肿胀,炎细胞浸润,肝脏呈炎症病变;第8周见肝组织炎症病变加重,出现纤维组织增生及肝细胞再生;第12周见肝组织呈不典型增生;第16周有典型假小叶形成;第20周可见典型的小鼠肝癌病理改变。②化学诱癌的第4周至第20周实验组小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA和蛋白质的表达均高于正常对照组（P〈0.05）,且两者的表达水平随着时间的延长,均呈逐步升高的趋势;至第20周肝癌形成时,实验组两者的表达均显著高于癌前各时间点（P〈0.05）。③在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中,PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA的表达水平呈正相关（r=0.674,P=0.05）。结论在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中PRX2和AKR1B10的高表达是化学诱发小鼠肝癌形成的早期事件,PRX2和AKR1B10可能在化学诱发小鼠肝癌的发生、发展和促进过程中起重要作用。     

明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响

目的：研究明日叶查尔酮（Ashitabe chalcone,AC）对小鼠H22肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响。方法：将50只荷H22肝癌小鼠随机分为AC不同剂量实验组（5、20、40 mg/kg）,阴性对照组和环磷酰胺（cytoxan,CTX）阳性对照组,共5组,每组10只。AC实验组小鼠每天分别按不同的剂量灌胃,阴性对照组小鼠给予生理盐水灌胃,CTX组隔天腹腔注射CTX 20 mg/kg,10d后处死小鼠,取瘤组织测定瘤质量、抑瘤率,并采用免疫组化法检测各组小鼠肿瘤细胞Caspase-3和Bax蛋白的表达,用MTT法检测各组小鼠肿瘤细胞增殖活性。结果：阴性对照组小鼠肿瘤细胞Caspase-3和Bax阳性细胞表达率分别为5.00%和4.68%,AC 40mg/kg剂量组分别为38.52%和35.76%,均高于阴性对照组（P〈0.05）;阴性对照组肝癌细胞增殖活性为1.135±0.032,AC 40 mg/kg剂量组为0.716±0.018,低于阴性对照组（P〈0.05）。AC 20、40 mg/kg剂量组平均瘤质量均明显低于阴性对照组（P〈0.05）。结论：明日叶查尔酮可上调Caspase-3和Bax蛋白的表达且具有抑制肿瘤细胞增殖作用。     

IL -6、IL -8和 IL -10与放射性肺损伤相关性研究

目的：观察BALB/C小鼠肺组织照射后白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和白细胞介素-10（ IL-10）三种细胞因子的表达水平,探讨其与放射性肺损伤的相关性。方法雄性BALB/C鼠,体重25 g左右,随机分为照射组（R）和对照组（C ）,R组：30只,C组：10只,照射组采用6MV-X照射,小鼠肺组织常规照射,总剂量为25 Gy/5次,小鼠在照射12 w后被处死,对照组在同样的条件下处理,假照射。分别取R组及C组小鼠右肺组织,经蜡块包埋、切片后,经HE染色观察小鼠肺组织病理变化,采用免疫组化方法检测R组及C组中小鼠肺组织IL-6、IL-8和IL-10的表达水平。结果免疫组化示IL-6、IL-8和IL-10三种细胞因子主要在巨噬细胞及炎细胞内表达,结果显示R组小鼠肺组织照射12 w后IL-6和IL-8的表达水平高于C组,差异有统计学意义（P＜0．05）,IL-10的表达水平低于C组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论小鼠肺组织受照12 W后,病理变化提示出现肺损伤,参考免疫组化结果,细胞因子IL-6、IL-8和IL-10与放射性肺损伤相关。     

五色灵芝提取液与环磷酰胺小鼠灌胃抑瘤作用的观察

目的：探讨五色灵芝提取液与环磷酰胺（CTX）合用对小鼠移植性动物肿瘤的抑制作用。方法：小鼠随机分成四组,每组10只。阴性对照组以生理盐水（NS）20ml/（kg.d）灌胃,阳性对照组以环磷酰胺（CTX）20mg/（kg.d）灌胃。第1实验组：灵芝液组20g/（kg.d）灌胃;第2实验组：灵芝液20g/（kg.d）＋环磷酰胺（CTX）20mg/（kg.d）灌胃。各组均于接种后24小时开始灌胃给药,连续10天。均于末次给药后24小时处死,计算抑瘤率。结果：各组抑瘤率分别是：第一实验组为（47.41-60.42）%,第二实验组为（78.02-80.23）%。各实验组的抑瘤作用与阴性对照组相比较,差异均有显著性意义（P〈0.001）。灵芝液与环磷酰胺（CTX）联合组与单用灵芝液组或单用环磷酰胺（CTX）组比较,差异均有显著性意义（P〈0.05）。结论：五色灵芝提取液与环磷酰胺（CTX）联合使用具有协同抑瘤作用。     

长期摄入酒精对大鼠生精细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察长期摄入酒精对大鼠生精细胞增殖和凋亡的影响,以探讨酒精致生精功能障碍的机制。方法：40只健康雄性成年SD大鼠随机分为3个不同酒精剂量的实验组（2.7、4.5、7.5g/kg）和1个对照组（蒸馏水）,共4组。各组每日分别灌胃给予受试物,连续13周,末次给予受试物24h后处死大鼠。在光镜下观察睾丸组织形态学,采用原位末端标记（TUNEL）法检测睾丸生精细胞凋亡,用流式细胞术（FCM）检测生精细胞凋亡率和计数各级生精细胞。用Western blot检测睾丸中Caspase-3以及核增殖抗原PCNA的表达。结果：光镜观察显示酒精组,尤其是7.5g/kg剂量组动物睾丸出现生精细胞核固缩、变性等细胞凋亡形态学改变,曲细精管腔中脱落细胞增多,且随酒精剂量的增加生精细胞的损伤加重。酒精4.5、7.5g/kg剂量组生精细胞凋亡率明显升高,FCM检测单倍体和四倍体细胞群计数下降（P〈0.05或P〈0.01）,PCNA表达降低（P〈0.05）,Caspase-3表达明显增强（P〈0.05或P〈0.01）。结论：长期摄入酒精可以诱导生精细胞凋亡增加和PCNA表达减弱,这可能是酒精致生精功能障碍的机制之一。     

睡莲花烟花苷对半乳糖胺致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究睡莲花烟花苷对D-半乳糖胺（D-Gal）所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法：将60只昆明小鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照联苯双酯组,烟花苷（25、50和100 mg/kg）给药组,共6组,每组10只。阳性对照联苯双酯组和烟花苷给药组按10 mL/kg每日灌胃给药1次,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃7 d,末次给药1 h后,正常组小鼠腹腔注射生理盐水0.02 mL/g,其他各组腹腔注射D-Gal（800 mg/kg,按0.02 mL/g）造模。造模8 h后摘眼球取血,测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白细胞介素IL-1β（IL-1β）、白细胞介素（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（INF-γ）水平。颈椎脱臼处死小鼠,摘取肝脏、脾脏称取质量,计算脏器系数,取0.3 g肝组织制备匀浆,检测肝匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）及一氧化氮（NO）含量。并取肝左叶距边缘0.5 cm处小块组织,进行肝组织病理学检查。结果：与模型组比较,烟花苷在（50、100 mg/kg）剂量时,小鼠血清ALT和AST水平均显著降低（P均 < 0.01）,血清中促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α和INF-γ水平降低（P < 0.05）;肝脏、脾脏系数降低（P < 0.05）,肝匀浆中SOD和GSH活力均显著升高（P均 < 0.05）,MDA和NO含量均显著降低（P均 < 0.05）;肝病理检查结果显示与模型组比较,烟花苷各剂量组肝细胞损伤程度明显减轻,炎性细胞浸润显著减少,其中烟花苷50和100 mg/kg组较25 mg/kg组受损程度较轻、修复情况较好。结论：烟花苷对D-Gal致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用与促进抗氧化酶、抑制促炎因子的表达有关。     

海藻色素糖蛋白对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究麒麟菜海藻色素糖蛋白（seaweed pigment glycoprotein,SPG）对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：将不同浓度SPG与小鼠H22肝癌细胞共同培养,用MTT法测定癌细胞增殖活性。建立H22移植瘤小鼠肝癌模型,随机分为SPG高、中、低剂量组,对照组及环磷酰胺组。实验组小鼠每天分别给予不同剂量（100、50、10mg/kg）的SPG灌胃,连续10d,对照组同法给予等量生理盐水,环磷酰胺组小鼠腹腔注射20mg/kg环磷酰胺,隔日一次。各组小鼠均于末次给受试物后24h处死,取肿瘤组织用免疫组化法检测各组Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：SPG高剂量组瘤细胞增殖活性（0.545±0.002）明显高于对照组（0.404±0.008）（P〈0.05）;SPG高剂量组Bcl-2和Bax蛋白阳性表达率分别为16.78%和38.1%,对照组分别为65.16%和4.68%,两组间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：SPG具有抑制小鼠H22肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠诱导肝癌模型的建立

目的建立绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）转基因小鼠肝癌模型,观察GFP蛋白在诱癌过程中荧光的变化。方法采用二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DENA）／四氯化碳（CCk,乙醇／DENA诱导肝癌共20周,实验组50只和对照组10只均为GFP转基因小鼠。每周监测小鼠体重的变化;常规HE染色动态观察病理组织学;第4、12、16周处死小鼠取肝组织制作冷冻切片观察荧光表达,并以石蜡HE染色观察病理变化;第20周时处死小鼠取其肝肿物进行原代培养,观察肿瘤细胞中荧光表达和分布。结果实验组GFP转基因小鼠死亡15只,死亡率30％（15／50）。对照组10只小鼠未发生死亡。GFP转基因小鼠在诱癌的第4、12、16、20周依次出现肝炎,肝硬化、癌前病变和癌变等。荧光显微镜下观察到诱癌开始前、第4周、第12周和第16周肝脏组织的冷冻切片有GFP蛋白的表达,诱癌第20周肝肿物原代培养中肿瘤细胞的细胞质和细胞核中有GFP蛋白表达。结论本实验成功建立GFP转基因小鼠肝癌发生的动物模型,可动态观察肝癌细胞中GFP蛋白的表达。     

小鼠肝再生过程中MnSOD作用的初步研究

目的：研究肝切除术后小鼠肝再生过程中锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的表达及其活性的变化,探讨MnSOD在肝再生中的作用。方法：采用经典小鼠肝切除模型,将38只雄性BALB/c小鼠,随机分为30%肝切除组（30% PH组）18只,70%肝切除组（70% PH组）18只,以及对照组2只。2个肝切除组分别于术后6 h和1、2、3、5、7 d这6个时间点随机各抽取3只小鼠处死,对照组小鼠在行假手术后即处死。取肝组织,制备冰冻切片使用DHE染色法在激光共聚焦显微镜下检测活性氧（ROS）水平,实时荧光定量PCR检测小鼠肝组织中MnSOD mRNA表达水平,Western blot检测小鼠肝组织中MnSOD蛋白的表达水平,采用MnSOD试剂盒检测小鼠肝组织中的MnSOD活性。结果：肝切除术后,与对照组相比,30% PH组小鼠肝组织ROS水平在术后6 h和1 d增加,MnSOD mRNA表达水平增加（P < 0.05）,MnSOD蛋白含量无显著变化（P > 0.05）;MnSOD的活性在术后第1和2天较高,第3和5天较低,第7天恢复。70% PH组小鼠肝组织ROS水平在术后第1~5天均升高,MnSOD mRNA的水平先下降后逐渐恢复,MnSOD的蛋白含量降低,MnSOD的活性在术后第6小时和1天增加,第2~7天均处于降低状态（P均 < 0.05）。结论：在肝切除术后小鼠的肝再生过程迅速启动,尤其是在70% PH后肝细胞迅速增殖,并在术后一段时间逐渐恢复到静息状态,其机制可能与MnSOD含量和活性的下调从而导致ROS升高有关。     

黄连素改善小鼠结肠腺癌恶病质实验研究

目的通过小鼠结肠腺癌恶病质模型实验探索传统中药提取物黄连素改善恶病质状态的作用及机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分成5组,每组8只。即非荷瘤健康对照组、肿瘤恶病质组、黄连素低剂量干预组、黄连素中剂量干预组、黄连素高剂量干预组,使用小白鼠结肠腺癌细胞株CT-26皮下注射BALB/c小鼠,构建荷瘤小鼠肿瘤恶病质模型。黄连素低、中、高剂量干预组小鼠分别给予黄连素12.5 mg/（kg·d）、25 mg/（kg·d）、50mg/（kg·d）灌胃,连续15天。健康对照组、肿瘤恶病质组给予等量生理盐水灌胃。观察低、中、高剂量黄连素对恶病质小鼠的体质量、摄食量、饮水量以及血清中三酰甘油、血糖及总蛋白、白蛋白水平的影响,并比较各组肿瘤组织炎性细胞因子白细胞介素1（interleukin-1,IL-1）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平以及肝、肾组织形态。观察不同剂量黄连素纠正恶病质的疗效及对肝肾的保护作用。结果与肿瘤恶病质组比较,黄连素干预各组能抑制癌症恶病质小鼠体质量下降,增加小鼠的摄食量、饮水量（均P〈0.05）;可升高血中总蛋白、白蛋白、血糖浓度,降低血清中三酰甘油的异常升高（均P〈0.05）;可降低肿瘤组织中的IL-1、IL-6及TNF-α表达水平（均P〈0.05）;可改善肝、肾组织形态。结论黄连素能有效改善小鼠结肠腺癌恶病质状态,以黄连素中、高剂量组疗效更佳,其机制可能与其有效降低细胞因子（IL-1、IL-6及TNF-α）表达相关。     

Decreased Sensitivity to Phalloidin of Normal-looking Rat Hepatocytes after Short-term 2-Acetylaminofluorene Feeding

Male F344/DuCrj rats were fed a diet containing 0.02% 2-acetylaminofluorene (2-AAF) for 1 or 3 weeks, and then fed a basal diet for 2 days, 2 weeks, 8 weeks, 22 weeks or 36 weeks. Hepatocytes were isolated from the liver by collagenase perfusion, and their sensitivity to phalloidin, in terms of the formation of multiple cytoplasmic blebs, was examined. The sensitivity of gamma-glutamyltransferase (GGT)-negative hepatocytes decreased on the 22nd and 36th weeks after withdrawal of 2-AAF feeding, and that of GGT-positive cells decreased on the 36th week. Induction of a small number of foci positive for the placental form of glutathione S-transferase (GSTP) was observed in the liver of all rats on the 8th, 22nd and 36th weeks after the withdrawal of the carcinogen. However, the total area of the foci was estimated to account for less than 0.2% of liver tissues even on the 36th week. Therefore, the decrease in phalloidin sensitivity of hepatocytes, particularly of GGT-negative hepatocytes, on the 22nd and 36th weeks after 2-AAF withdrawal is suggested to be a result of a decrease in the sensitivity of otherwise normal-looking hepatocytes, which may be precursors of the cells forming the preneoplastic foci.     

Decreased sensitivity to phalloidin of normal-looking rat hepatocytes after short-term 2-acetylaminofluorene feeding

Male F344/DuCrj rats were fed a diet containing 0.02% 2-acetylaminofluorene (2-AAF) for 1 or 3 weeks, and then fed a basal diet for 2 days, 2 weeks, 8 weeks, 22 weeks or 36 weeks. Hepatocytes were isolated from the liver by collagenase perfusion, and their sensitivity to phalloidin, in terms of the formation of multiple cytoplasmic blebs, was examined. The sensitivity of gamma-glutamyltransferase (GGT)-negative hepatocytes decreased on the 22nd and 36th weeks after withdrawal of 2-AAF feeding, and that of GGT-positive cells decreased on the 36th week. Induction of a small number of foci positive for the placental form of glutathione S-transferase (GSTP) was observed in the liver of all rats on the 8th, 22nd and 36th weeks after the withdrawal of the carcinogen. However, the total area of the foci was estimated to account for less than 0.2% of liver tissues even on the 36th week. Therefore, the decrease in phalloidin sensitivity of hepatocytes, particularly of GGT-negative hepatocytes, on the 22nd and 36th weeks after 2-AAF withdrawal is suggested to be a result of a decrease in the sensitivity of otherwise normal-looking hepatocytes, which may be precursors of the cells forming the preneoplastic foci.     

金龙蛇方对人胃癌MKN-45裸小鼠原位移植瘤生长转移及多种粘附分子蛋白表达的影响

目的:通过观察金龙蛇方及拆方对裸鼠人胃癌模型中转移和多种相关粘附分子表达的影响,探讨其抗胃癌转移的机制。方法:50只动物随机分为消痰组、散结组、金龙蛇组、5Fu组和对照组,建立人胃癌MKN45裸鼠原位种植模型,造模后第3天开始给药,对照组给予生理盐水0.2mL/d,腹腔注射,5Fu组给予5Fu稀释液0.2mL/周,腹腔注射,中药组分别给予消痰方、散结方、金龙蛇方0.2mL/d灌胃。第6周实验结束,观察肿瘤生长及转移情况,肝脏称质量。瘤组织及转移脏器行免疫组化检测Ecad、CD44v6、GMP140、ICAM1等蛋白的表达。结果:金龙蛇方及拆方可以明显抑制裸鼠人胃癌MKN45原位种植瘤的生长,减少肝脏转移,不同程度下调肿瘤细胞CD44v6、GMP140蛋白的表达。结论:金龙蛇方可以下调多种异质性粘附分子蛋白的表达,可能是其抗胃癌转移的机制之一。     

Combination therapy of murine liver cancer with il-12 gene and HSV-TK gene

Interleukin-12 (IL-12), produced by antigen-presenting cell, is a heterodimeric cytokine that has multiple immune regulatory functions, various studies have shown that IL-12 has multiple anti-tumor effects and anti-metastatic properties for many tumors.[1] Suicide gene approaches are also widely investigated recently, the gene products are capable of converting the non-toxic pro-drug to the active cytotoxic agent. The most commonly used suicide gene and pro-drug is the herpes simplex virus th…     

IL-12恢复并促进氟尿嘧啶抑制的T细胞免疫功能

背景与目的:目前,氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)仍然是临床上广泛应用的肿瘤化疗药物之一.白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)的生物学功能是促进Th1细胞分化以及诱导CD8 T细胞γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的产生.本研究进一步探讨5-FU对正常人外周血T细胞介导免疫应答的抑制机制,以及IL-12是否能够恢复由5-FU引起的免疫抑制功能.方法:观察5-FU对正常人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及肝癌细胞株HepG2增殖和活性的影响.另外,PBMCs在anti-CD3或antiCD3 anti-CD28刺激的条件下,加入不同浓度5-FU(0.20～50.00 μg/ml)共同培养,ELISA法检测培养上清中IFN-γ的水平.PBMCs预先加入或不加入5-FU共同培养后,再分别加入anti-CD3 anti-CD28刺激,利用流式细胞术分析T细胞亚群表达细胞因子IFN-γ和IL-2以及细胞活化分子CD25表达的变化.Anti-CD3 anti-CD28、IL-12、5-FU不同配伍组合与PBMCs共培养后收集上清液,ELISA法检测IFN-γ水平,然后利用流式细胞术检测T细胞亚群IFN-γ表达的变化.结果:5-FU抑制PBMCs和HepG2细胞的增殖,同时以浓度依赖方式抑制正常人PBMCs IFN-γ的产生(P=0.024).T细胞亚群分析的结果表明,加入5-FU组与未加入5-FU组相比,表达IFN-γ的CD4 T细胞百分率从2.1%下降到0.7%,CD8 T细胞百分率从3.9%下降到2.2%;表达IL-2的CD4 T细胞百分率从2.5%下降到0.7%,CD8 T细胞百分率从0.4%下降到0.2%;同时这两种细胞亚群CD25的阳性率和平均荧光密度都明显降低.anti-CD3 anti-CD28组,加入IL-12前表达IFN-γ的CD4 和CD8 T细胞百分率分别为1.1%和3.2%,加入IL-12后分别为1.6%和4.1%;anti-CD3 anti-CD28 5-FU组,加入IL-12前表达IFN-γ的CD4 和CD8 T细胞百分率分别为0.5%和1.1%,加入IL-12后分别为1.0%和2.5%.结论:5-FU抑制肿瘤细胞增殖的同时也抑制正常人的免疫功能,IL-12能够恢复并促进由5-FU抑制的T细胞免疫功能.     

白细胞介素—12基因与HSV—TK基因联合治疗小鼠肝癌的研究

目的　观察白介素１２（ＩＬ１２） 基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶＴＫ） 基因联合治疗小鼠肝癌的疗效。方法　将ＩＬ１２ 基因和ＨＳＶＴＫ 基因分别转导入小鼠肝癌ＭＭ４５Ｔ－Ｌｉ 细胞,获稳定表达的ＭＭ４５Ｔ－ＬｉＩＬ１２ 和ＭＭ４５Ｔ－ＬｉＴＫ。于Ｂａｌｂｃ 小鼠皮下接种ＭＭ４５Ｔ－Ｌｉ 细胞２ ×１０５ ,待肿瘤长至０－５～１－０ ｃｍ 时,将ＭＭ４５Ｔ．ＬｉＴＫ细胞与经６０ Ｃｏ 照射的ＭＭ４５Ｔ．ＬｉＩＬ１２ 细胞混合,行瘤内注射治疗,于治疗次日,腹腔注射Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ４０ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １） ,连续注射１０ 天。按同样方法观察对远侧接种的肿瘤的治疗作用,并通过细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ） 活性检测及免疫组化染色,探讨其抗肿瘤机制。结果　ＭＭ４５Ｔ．ＬｉＩＬ１２ 与ＨＳＶＴＫＧＣＶ 联合治疗,肿瘤体积显著缩小,生长受到抑制,疗效显著优于单独治疗组（ Ｐ＜ ０．０１） 。有６０％ 小鼠的肿瘤完全消退,且观察２ 个月无肿瘤生长。两者联合治疗,对远侧肿瘤也具有明显的抗肿瘤作用（ Ｐ＜０．０５） 。ＭＭ４５Ｔ．ＬｉＩＬ１２ 与ＨＳＶＴＫＧＣＶ系统联合诱导的小鼠ＣＴＬ明显高于单     

化学诱导小鼠肝癌模型中CD133的动态变化

目的:检测肝癌干细胞标志CD133在化学诱导C57BL/6J小鼠肝癌过程中各时期的动态变化.方法:通过化学法[二乙基亚硝胺(diethylnirtosamine,DEN)/四氯化碳(carbon tetrachloride,CC14)/乙醇]诱发50只C57BL/6J雄性小鼠肝癌,对照组为45只正常C57BL/6J雄性小鼠.观察小鼠成瘤情况和生长状态,对每2周定期处死小鼠获得的组织标本分别进行病理学切片观察,并采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学法、蛋白质印迹法和FCM法分别检测CD133 mRNA和蛋白的表达情况.结果:化学诱导20周后,成功诱发出小鼠肝癌.实时荧光定量PCR和FCM检测结果显示,第8周后诱癌组小鼠肝组织中CD133的表达高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.001);随着诱癌时间的增加,CD133的表达量呈上升趋势,第16周时诱癌组CD133的表达明显高于前期诱癌组(P＜0.001).蛋白质印迹法检测结果显示,诱癌组CD133蛋白从第4周起出现弱表达,随着诱癌时间的递增,CD133蛋白表达量逐渐增多.免疫组织化学检测结果显示,诱癌组第8周CD133出现弱阳性,第16周出现中等阳性,第20周出现强阳性;而正常对照组无表达.结论:肝癌干细胞标志CD133参与了肝癌的发生、发展全过程,随着诱癌进展其表达量逐渐增加.     

转染CD40配体的卵巢癌细胞株OVHM抗卵巢癌肝转移机制的研究

目的 探讨转染CD40配体(CIMOL)的卵巢癌细胞株OVHM(CD40L-OVHM)体内抗卵巢癌肝转移的可能机制.方法 6～8周龄的C57BL/6N×C3H/He杂交一代(B6C3F1)雌性小鼠5只,经小鼠脾脏内接种OVHM,应用HE染色法验证小鼠肝脾转移模型是否建立成功.将OVHM细胞、空载体DNA-pMKITneo-OVHM细胞和CD40L-OVHM细胞接种于B6C3F1小鼠的脾脏,应用流式细胞术,分析荷瘤小鼠脾细胞CD11c分子的表达情况;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测荷瘤小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性;应用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测荷瘤小鼠外周血血清中干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-4和IL-10的含量,并且观察小鼠脾脏和肝脏的成瘤情况及小鼠生存时间.结果 经病理学证实,卵巢癌肝脾转移动物模型建立成功.CD40L-OVHM组中小鼠脾细胞CD11c阳性细胞率明显高于OVHM组和转染空载体DNA-pMKITneo-OVHM组.CD40L-OVHM组小鼠脾脏内CTL的特异性杀伤活性明显增强,小鼠外周血血清中IFN-γ、TNF-α和IL-12的含量明显升高,而IL-4和IL-10的含量则明显降低,与OVHM组和转染空载体DNA-pMKITneo-OVHM组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).CD40L-OVHM组小鼠的肝脏和脾脏重量均明显低于OVHM组和转染空载体DNA-pMKITneo-OVHM组,并且小鼠的生存期也明显延长(P<0.05).结论 转染CD40L cDNA的卵巢癌细胞可促进脾脏树突状细胞(DC)的成熟和分化,增强脾脏CTL的特异性杀伤活性,诱导Th1型细胞因子的分泌,抑制Th2型细胞因子的分泌,这可能是CD40L基因体内抗卵巢癌肝转移的机制之一.     

Pharmacodynamics of fish oil: protective effects against prostate cancer in TRAMP mice fed with a high fat western diet

Numerous epidemiological studies suggest that frequent consumption of fish would decrease certain major inflammatory-related chronic diseases including cancer. Aims: To investigate the cancer chemoprotective effect of fish oil (FO) in Transgenic Adenocarcinoma of Mouse Prostate (TRAMP) mice fed a FO diet (10% Menhaden fish oil; FO group) versus a 20% high fat diet (HF group; typical of a Western diet), both with a total content of 20% fat and equal calories. Methods: For each diet, two experimental arms were performed. The mice were put on diet at 8th or 12th week of age for periods of 14 and 10 weeks, the experiments being terminated when the mice reached 22 weeks of age. The animals were monitored weekly for health, and upon necropsy were examined for whole body metastasis, and prostate tissues were confirmed with histopathology. Results: At the end of the study, the FO group had significantly reduced prostate tumor weight (p<0.05) compared to the HF group. The incidence of palpable tumors and carcinomas was also lowered. Finally, there was no metastasis found in the FO group, whereas in the HF group, 16.7% of the mice were found to have metastases. Conclusions: This is the first study showing the beneficial effects of FO against prostate cancer having a HF diet, suggesting potential beneficial effects of FO in humans consuming HF in their diet.