小肠杯状细胞在大鼠休克后肠黏膜重建中的作用

目的观察大鼠失血性休克复苏后小肠杯状细胞在肠黏膜重建过程中的作用。方法SD大鼠49只,每只重250～300g,分实验和对照两组,实验组再分为6个组,分别为休克复苏后1、3、6、12、24和36h组;各组留取回肠黏膜,观察休克复苏后早期不同阶段肠黏膜的形态改变、杯状细胞数量变化和肠三叶因子-3(TFF3)的含量。结果休克后肠黏膜明显损伤,3h始肠黏膜出现损伤后修复现象,表现为杯状细胞聚集于损伤的肠黏膜表面;12h后大部分黏膜细胞被杯状细胞覆盖,杯状细胞呈过分泌现象;24h肠黏膜表面细胞连续性得到恢复。黏膜杯状细胞数量24h内从243±13下降到157±9,下降了35.4%(r=-0.910,P<0.01);36h组细胞数量明显回升,但仍低于对照组(t=4.01,P<0.01)。TFF3含量在12h前明显升高,24h有所下降,但仍高于对照组(t=3.24,P<0.05)。结论杯状细胞可能在肠黏膜损伤后的重建过程中起关键作用;TFF3的高表达可能是促进肠黏膜早期重建的重要因素。     

下胸段硬膜外阻滞对失血性休克-复苏大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的探讨下胸段硬膜外阻滞对失血性休克-复苏大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡的影响。方法健康成年雄性SD大鼠64只,3月龄,体重280~320 g,硬膜外置管成功,随机分为四组,每组16只:假手术组(Sham组)、休克-复苏组(HSR组)、下胸段硬膜外注射生理盐水+休克-复苏组(NS组)、下胸段硬膜外阻滞+休克-复苏组(TEA组)。Sham组仅行硬膜外置管,不实施失血性休克,其余三组均采用改良Chaudry法制备失血性休克-复苏模型,放血前30 min TEA组硬膜外注射0.075%罗哌卡因100μl/kg,NS组注入等量生理盐水,HSR组不给予硬膜外注射。复苏后2 h采用化学反应法测定肠黏膜丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用TUNEL、免疫组化法分别测定肠黏膜细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白含量。结果与Sham组比较,HSR组、NS组和TEA组肠黏膜Chiu评分、MDA含量、Bax蛋白含量、上皮细胞凋亡指数明显增高(P0.05),SOD活性明显降低(P0.05)。与HSR组和NS组比较,TEA组Chiu评分、MDA含量、Bax蛋白含量、上皮细胞凋亡指数明显降低(P0.05),SOD活性和Bcl-2蛋白含量明显升高(P0.05)。结论下胸段硬膜外阻滞可增强肠黏膜抗氧化、抗凋亡能力,从而抑制黏膜上皮氧化应激和细胞凋亡,保护肠黏膜屏障功能,以促进失血性休克-复苏后生存。     

M细胞在急性胰腺炎肠黏膜屏障中的作用

目的 明确M细胞在急性胰腺炎时细胞因子TNF-α、1L-18的表达情况,探索M细胞在肠黏膜屏障功能中的町能作用.方法 SD大鼠,随机分为急性胰腺炎6、12、24、48 h组及对照组,每组10只,建立大鼠急性胰腺炎模型,收集标本.检测血清淀粉酶、谷丙转氨酶的变化,鲎试剂法检测血清内毒素变化,ELISA法检测血清内细胞因子TNF-α、IL-18的变化,检测肠系膜淋巴结细菌移位情况,观察同肠黏膜病理形态学改变,LCM、RT-PCR法检测M细胞中TNF-α mRNA、IL-18mRNA的表达,免疫荧光双重染色法观察M细胞中TNF-α、IL-18的表达.结果 (1)血淀粉酶在胰腺炎6、12、24 h组升高,48 h组下降.(2)血清内毒素在急性胰腺炎12、24、48 h组升高,6 h组无明显升高,肠系膜淋巴结细菌移位菌落数在急性胰腺炎各时间点均升高.(3)血清TNF-α在急性胰腺炎组6、12、24 h组升高,48 h组下降到正常水平,血清IL-18在胰腺炎各时间点均升高,在24 h达到最高水平.(4)病理检查发现,在急性胰腺炎组随着时间延长回肠黏膜水肿逐渐加重.(5)免疫荧光双重染色结果显示,在急性胰腺炎组的各时间段M细胞TNF-α蛋白表达均为阳性,在6 h、12 h和24 h组M细胞内的IL-18蛋白表达呈明显阳性,对照组阴性.(6)在急性胰腺炎组各时间TNF-αmRNA的表达量均高于对照组.从术后6h开始升高并达到一个平台期,在12 h和24 h维持在较高水平,到术后48 h TNF-αmRNA的表达量较前下降但仍高于对照组.在6 h、12 h IL-18 mRNA的表达升高,48 h下降.结论 在急性胰腺炎,肠黏膜屏障功能受到不同程度损害,M细胞合成TNF-α、IL-18增加,M细胞可能在肠道黏膜免疫反应中发挥一定作用,但还需进一步研究.     

休克大鼠小肠杯状细胞参与肠粘膜重建的形态学观察

目的观察大鼠失血性休克复苏后小肠杯状细胞在参与肠粘膜重建过程中的形态学变化。方法SD大鼠35只,每只重250～300g,随机分为实验和对照两组,实验组再分为休克复苏后1h、3h、6h、12h组;各组留取回肠粘膜,观察休克复苏后早期不同阶段肠粘膜的形态改变、杯状细胞数量变化。结果休克后1h可见肠粘膜明显损伤,3h起肠粘膜呈现损伤后重建现象,可见杯状细胞聚集于损伤的肠粘膜表面,12h后大部分粘膜细胞被呈过分泌状态的杯状细胞覆盖,肠粘膜表面细胞连续性得到恢复;肠粘膜杯状细胞数量在肠粘膜重建过程内呈下降趋势。结论肠粘膜损伤后早期的重建过程中杯状细胞可能起关键作用。     

烧伤后肠黏膜细胞外基质与细胞凋亡关系的实验研究

目的　探讨烧伤后大鼠肠黏膜细胞凋亡与细胞外基质的关系。　方法　 30只Wistar大鼠随机分为烧伤后 6、12h,1、3、5d组及正常对照组 ,每组 5只。检测肠黏膜上皮细胞凋亡数、cas pases 3酶活性、细胞外基质成分 (层粘连蛋白、Ⅳ型胶原 )含量 ,并作相关分析。　 结果　烧伤后大鼠肠上皮凋亡细胞数、caspases 3的活性较正常对照组明显升高 (P <0.0 5或 0 .0 1) ,大鼠肠黏膜层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量较正常对照组下降 ( P <0.0 5或 0 .0 1)。直线相关分析结果 :烧伤后肠黏膜层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量变化与细胞凋亡数呈显著的负相关 (r =- 0.5 75, - 0.6 13,P <0 0 5 )。　 结论　烧伤后大鼠肠黏膜细胞凋亡增加 ,且与细胞外基质的变化相关。     

肠组织血红素加氧酶-1在失血性休克复苏大鼠肠粘膜损伤中的作用

失血性休克是创伤及外科手术中较常见的并发症，此时发生全身血流再分布，导致肠道血流量减少，绒毛顶部的粘膜细胞缺血、缺氧、坏死和脱落，复苏时的再灌注可加重肠粘膜损伤，导致肠粘膜屏障受损，肠道内大量细菌向肠腔外迁移，此过程称为细菌移位，可触发全身炎性反应和多器官功能衰竭。血红素加氧酶（HO）作为血红素代谢过程中的起始酶和限速酶，包括3种同工酶：HO-1、HO-2和HO-3，其中只有HO-1是诱导型酶。HO-1表达上调可减轻失血复苏大鼠肝损伤。HO-1在失血性休克复苏时肠粘膜损伤中的作用有待进一步探讨。本研究拟评价肠组织HO-1在失血性休克复苏大鼠肠粘膜损伤中的作用。     

失血性休克再灌注对早期肠黏膜显微结构的影响

目的观察失血性休克再灌注后肠黏膜屏障功能损伤及其病理改变和超微结构变化。方法16只家兔随机分为2组（n=8）：假手术组（A），休克再灌注组（B）。采用失血性休克再灌注模型。检测灌注后0．5、2、4h血清磷脂酶A2（PLA2）、一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）值；实验结束后取回肠末端黏膜测MDA和组织钙含量；分别通过光镜和电镜观察肠黏膜结构的变化。结果B组血清NO相对A组降低明显。而PLA2、MDA显著升高。B组肠黏膜MDA和组织钙含量有明显升高（P〈0．05）；光镜和电镜观察表明B组肠黏膜损伤明显重于A组。结论失血性休克再灌注使肠道经历缺血缺氧和再灌注损伤，导致肠黏膜生理结构被破坏。     

慢性心理应激对失血性休克大鼠小肠黏膜上皮及集合淋巴小结细胞凋亡的影响

<正>肠黏膜屏障是机体屏障系统的重要组成部分,肠黏膜屏障机械屏障、免疫屏障、化学屏障和生物屏障组成。各屏障具有不同的结构、不同的分子调控     

烧伤休克犬肠黏膜血流量动态监测方法的研究

目的：建立一种可动态监测实验动物肠黏膜血流量的方法。方法：8只成年雄性Beagle犬,无菌手术行十二指肠造口置管和动、静脉置管术,24h后给予丙泊酚短时静脉麻醉,凝固汽油燃烧制成35%TBSAⅢ度烧伤模型,烧伤后30 min按Parkland公式进行静脉液体复苏,在烧伤前和烧伤后2、4、8、24、48、72 h共7个时间点将激光多普勒血流仪（LDF）的光纤探头通过造口置入十二指肠腔,测量十二指肠黏膜血流量（DMBF）,同时采用张力测定法测量胃黏膜二氧化碳分压（PgCO2）,采用热稀释法测量心排血量（CO）,统计学方法分析DMBF测量值与PgCO_2和CO的相关性。结果：所有十二指肠造口术均一次成功,动物死亡率为零。烧伤后2 h DMBF下降了24%,随后逐渐恢复,至72 h仍较伤前降低16%;PgCO2伤后迅速升高,伤后2 h较伤前升高138%,然后缓慢降低,72 h仍较伤前升高67%;而CO变化不明显。烧伤后动物DMBF与PgCO2呈负相关并有统计学意义（r =-0.8075,P〈0.05）,DMBF与CO无统计学相关性（r=0.1171,P〉0.05）。结论：本实验所建立的肠黏膜血流量监测法简便易行,测量结果符合动物烧伤后病程生理变化,可信度较高,适用于犬、猪等大型动肠黏膜血流量的连续监测。     

失血性休克大鼠血管扩张刺激磷蛋白磷酸化在肠屏障功能障碍中的作用

目的 观察失血性休克大鼠血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化在肠屏障功能障碍中的作用.方法 采用40只Wister大鼠,观察不同休克时相点(1、2、4 h)VASP磷酸化和肠屏障功能变化(以小肠黏膜组织形态、血浆D-乳酸含量反映),及VASP磷酸化激动剂环磷腺苷(cAMP)对休克2 h肠屏障功能的影响.结果 (1)正常组VASP磷酸化水平很低(0.021 ±0.004),休克1 h时增高(0.145 ±0.011)(P＜0.01),2 h后降低(0.108 ±0.010)(P＜0.01);休克1 h肠屏障功能变化不明显,2 h后肠屏障功能显著降低.(2)VASP磷酸化激动剂cAMP可增强休克2 h小肠上皮组织VASP磷酸化(0.169 ±0.030)(P＜0.01),减轻肠屏障功能损伤.结论 VASP磷酸化可能对失血性休克大鼠肠屏障功能有保护作用.     

生脉注射液对肠粘膜再灌注损伤保护作用机制的实验研究

目的探讨生脉注射液(SM)对休克再灌注期间肠粘膜的保护作用及机制.方法利用兔休克复苏模型,21只家兔随机分为SM组(A组)、单纯复苏组(B组)和对照组组(C组).分别于实验前(S0)、休克1h(S1)、及再灌注1h(R1)、3h(R3)观察乙状结肠粘膜内pH(pHi)、肠氧摄取率(ERO2)、肠粘膜一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)及钙(Ca2+)含量、肠粘膜病理病理形态学变化.结果A组R1和R3时肠pHi及肠ERO2明显高于B组相应值,肠粘膜NO、MDA及Ca2+含量低于B组(均为P＜0.05),而B组复苏期间肠pHi维持在S1时的低水平状态,肠ERO2显著降低,肠粘膜NO、MDA及Ca2+含量均明显高于A组和C组;光镜下肠粘膜损伤A组显著轻于B组且病理分级与肠pHi负相关(r=-0.841,P＜0.05).结论SM对休克再灌注期间肠粘膜的保护作用机制为增加肠粘膜灌注及氧合、抑制肠粘膜NO活性、清除氧自由基及减轻钙超载.     

Gene damages of mitochondrial DNA encoding cytochrome oxidase of intestinal epithelial cells in hemorrhagic shock rats

Objective: To investigate the detrimental effects of hemorrhagic shock on the structure and function of mitochondria DNA (mtDNA) encoding cytochrome oxidase genes in intestinal epithelial cells. Methods: Wistar rats were used and divided into two groups: hemorrhagic shock group and control group. Hemorrhagic shock model of rats was utilized in this experiment. The mtDNA was extracted from the intestinal epithelial cells and amplified by polymerase chain reaction (PCR) with different primers of cytochrome oxidase (COX I, COX II and COX III). The products of PCR were directly sequenced. Results: Hemorrhagic shock could result in the point mutagenesis in mitochondrial genome encoding cytochrome oxidase (COX I and COX II). There were 4, 4, 22, 16, 35 point mutations in COX I from 5545 to 6838 bp in 5 shocked rats. There were five point mutations in COX II from 7191 to 7542 bp at the site of t7191c, t7212c, a7386g, a7483g, c7542g in 1 shocked rat. There was no mutation found in COX III. Conclusions: Hemorrhagic shock could significantly induce the damage of the gene of cytochrome oxidase encoded by mtDNA.     

IL-18对胰腺炎肠黏膜M细胞的影响

目的 探讨IL-18对胰腺炎肠黏膜M细胞功能的影响.方法 SD大鼠随机分为:IL-18治疗6 h组、12 h组、24h组,胰腺炎6 h组、12 h组、24 h组及对照组.检测血清IL-27、TNF-α、淀粉酶、谷丙转氨酶、总胆红素、内毒素等水平.检测肠系膜淋巴结移位细菌菌落数.病理切片,观察肠黏膜和胰腺组织学形态.采用二苇免疫荧光染色,观察小肠淋巴滤泡相关上皮内M细胞TNF-α、NF-кB、IL-27情况.激光捕获显微切割获取肠黏膜M细胞,检测小肠淋巴滤泡相关上皮内M细胞TNF-α、NF-кB mRNA的表达水平.结果 血TNF-α在AP组升高,在IL-18 6 h组、12 h组升高,但在IL-18 24 h组下降.IL-27在AP组均升高,在IL-18 6 h组上升,在IL-18 24 h组下降至阴性对照组水平.IL-18各组TNF-α表达增加.NF-кB在AP组和IL-18组的表达增加,以IL-18组更明显.IL-27蛋白在AP组和IL-18组的表达均增加.小肠淋巴滤泡相关上皮内M细胞TNF-α mRNA的表达在AP各组及IL-18组均高于对照组(P<0.05),IL-18 6 h组和IL-18 24 h组均高于AP组(P<0.05),并随时间逐渐升高.NF-кB mRNA的表达在IL-18组均高于AP组(P<0.05),且以术后12 h达高峰,24 h有所下降.结论 IL-18可能引起M细胞细胞因子的变化,对M细胞功能产生影响,进一步影响肠黏膜屏障的功能.     

异丙酚对大鼠肠缺血再灌注时肠粘膜细胞凋亡的影响

目的评价异丙酚对大鼠肠缺血再灌注（I／R）时肠粘膜细胞凋亡的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组（n=8），假手术组（S组）仅分离肠系膜上动脉（SMA）；肠缺血再灌注组（I／R组）阻断SMA1h；异丙酚组（P组）阻断SMA前30min腹腔注射异丙酚100mg／kg。于再灌注3h处死大鼠，取回肠末端组织，电镜及TUNEL法观察肠粘膜上皮细胞凋亡情况，并计算肠粘膜上皮细胞凋亡指数；测定肠粘膜超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及神经酰胺（CER）含量，RT-PCR法测定肠粘膜鞘磷脂酶（SMase）mRNA表达。结果与S组比较，I／R组肠粘膜SOD活性降低，MDA含量、CER含量、肠粘膜上皮细胞凋亡指数及SMasemRNA表达升高（P〈0．05或0．01）；与I／R组比较，P组MDA含量、CER含量、肠粘膜上皮细胞凋亡指数及SMasemRNA表达降低，S01）活性升高（P〈0．05或O．01）。I／R组肠粘膜SOD活性与CER含量呈负相关（r＝-0．775，P〈0．01），肠粘膜上皮细胞凋亡指数与CER含量呈正相关（r=0．852，P〈0．01）；P组肠粘膜上皮细胞凋亡指数与CER含量呈正相关（r=0．782，P〈0．01）。结论异丙酚可抑制大鼠肠缺血再灌注时肠粘膜上皮细胞凋亡，可能与清除氧自由基、下调SMasemRNA表达、减少CER生成有关。     

The effect of various resuscitative regimens on hemorrhagic shock in puppies

Since shock secondary to hemorrhage is not infrequently encountered in the pediatric patient, a puppy model was devised to help measure and monitor cardiovascular and metabolic changes that occur before and after resuscitation from hypovolemic shock (mean arterial pressure of 50 mm Hg for 1 hr). Three resuscitation protocols were compared: whole blood (replacement: shed) 1:1, 5% albumin in Ringer's lactate 1:1, and Ringer's lactate 3:1. All dogs survived the experiment and responded similarly during the shock period. Thermal dilution cardiac output rose in all groups after resuscitation; however, in the Ringer's lactate and 5% albumin groups, cardiac output was statistically greater than that observed in the blood group. In all groups, pH and blood pressure approached but did not return completely to baseline levels after resuscitation. In addition, early resuscitation demonstrated a further decrease in pH (“hidden acidosis”) before it began to return toward normal as resuscitation progressed. This study suggests that the infusion of large volumes of Ringer's lactate or 5% albumin in Ringer's lactate are equally efficacious in the treatment of hemorrhage. However, 5% albumin seems to be preferable because it allows infusion of a smaller quantity of electrolyte solution with equivalent physiologic benefits.     

右美托咪定对失血性休克患者肾功能的影响

目的探讨术中使用右美托咪定对失血性休克患者肾功能的影响。方法选择本院拟行急诊全麻下手术治疗的失血性休克患者60例,男27例,女33例,年龄18~69岁,ASAⅢ或Ⅳ级。将患者随机分为两组:右美托咪定组(D组)和对照组(C组),每组30例。两组患者均在手术止血的同时积极进行容量复苏治疗,D组在麻醉诱导后切皮前给予右美托咪定0.5μg/kg,给药时间10min,随后以0.4μg·kg~(-1)·h~(-1)的速率静脉输注至术毕前30min,C组给予等容量的生理盐水。分别于切皮前即刻(T_1)、术毕即刻(T_2)、术毕24h(T_3)、术毕72h(T_4)时采集静脉血样,检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)浓度、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量,计算并比较T_4时血清Scr浓度和T_3时HMGB1含量较T_1时的变化幅度(ΔScr和ΔHMGB1),并记录患者T_1、T_2时MAP、HR等血流动力学指标和剩余碱(BE)、乳酸(Lac)等动脉血气结果。结果与T_1时比较,T_2时两组MAP、CVP和BE明显升高,HR和Lac明显降低(P0.05),组间比较无统计学差异。与T_1时比较,T_3、T_4时D组血清Scr浓度明显降低(P0.05);D组ΔScr明显小于C组(P0.05)。两组患者各时点血清BUN浓度差异无统计学意义。与T_1时比较,T_4时D组血清NGAL含量明显减少(P0.01);T_4时D组血清NGAL含量明显少于C组(P0.05)。与T_1时比较,T_2时两组患者血清HMGB1含量明显减少(P0.05);T_3时C组血清HMGB1含量明显增加(P0.01);T_3时C组血清HMGB1含量明显多于D组(P0.05);C组ΔHMGB1明显大于D组(P0.05)。结论右美托咪定可抑制缺血-再灌注后血清促炎因子HMGB1含量的增加,有利于失血性休克患者肾功能的恢复。