HVHF及CVVHDF治疗MODS犬的疗效比较

目的:探讨高容量血液滤过(HVHF)和连续性静-静脉血液透析滤过(CVVHDF)对多脏器功能障碍综合征(MODS)犬治疗中的疗效。方法:采用二次打击建立犬MODS模型,18只犬随机分MODS组(n=6)、CVVHDF组(n=6)和HVHF组(n=6),CVVHDF组及HVHF组分别给予CVVHDF及HVHF治疗24 h;MODS组不给予治疗。于术前(T1),内毒素注射前(T2),内毒素注射完毕后0 h(T3)、3 h(T4)、6 h(T5)、9 h(T6)、12 h(T7)、18 h(T8),24 h(T9)留取血标本,ELISE法测定血浆中CD14、LPS、IL-1β、IL-4、HMGB-1、TGF-β浓度。MODS组、CVVHDF组及HVHF组建模后24 h处死前取肺、心、肝、肾、脑组织器官,Western Blot法检测各脏器组织CD14、HMGB-1蛋白表达。结果:CVVHDF及HVHF治疗后LPS、CD14、IL-1β、IL-4、HMGB-1浓度水平均进行性下降,在T6~T9显著低于MODS组(P0.01),而TGF-β浓度水平则进行性升高,在T5~T9显著高于MODS组(P0.01),治疗过程中CVVHDF及HVHF组间差异无统计学意义(P0.05)。CVVHDF及HVHF治疗后,各组织中CD14、HMGB-1蛋白表达均有所降低,其中CVVHDF组肝脏及脑组织CD14蛋白表达显著低于MODS组(P0.01),CVVHDF组肺脏、肾脏及脑组织HMGB-1蛋白表达显著低于MODS组(P0.01),HVHF组肺脏、心脏、肝脏及脑组织CD14蛋白表达显著低于MODS组(P0.01),HVHF组各脏器HMGB-1蛋白表达均显著低于MODS组(P0.01),CVVHDF组及HVHF组在各脏器CD14、HMGB-1蛋白表达差异未见统计学意义(P0.05)。结论:CVVHDF及HVHF均可削弱血循环中LPS、CD14、HMGB-1、IL-1β和IL-4等炎症介质的峰值浓度,重建免疫平衡,重建免疫系统内稳状态;均可下调肺脏、心脏、肝脏、肾脏及脑组织中CD14、HMGB-1蛋白表达,有效遏制过度的炎症反应,从而防治MODS。     

连续性血液透析滤过对多器官功能障碍犬CD14+单核细胞表面白细胞抗原DR的影响

外周血单核细胞对多器官功能障碍综合征(MODS)的炎性反应和免疫反应均起重要作用.单核细胞表面白细胞抗原DR(HLA-DR)表达和机体免疫功能密切相关.本研究通过观察连续性静脉-静脉血液透析滤过(CVVHDF)治疗MODS犬CD14+单核细胞HLA-DR的动态变化,以期阐明CVVHDF治疗MODS对机体免疫系统的影响及其疗效机制.     

严重烧伤后细胞免疫改变及其与高迁移率族蛋白B1的相关性

目的 探讨严重烧伤患者T细胞免疫功能的变化规律及其与高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的相关性.方法 采集35例烧伤体表总面积>30%的患者静脉血样,根据是否并发多器官功能障碍综合征(MODS)分组(MODS组13例、非MODS组22例),采集患者伤后第1、3、5、7、14、21、28大的外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆HMGB1水平;观察外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测CD4+/CD8+T细胞的比值.结果 严重烧伤患者伤后第1天血浆HMGB1水平即明显升高,其中伤后第1、7、21、28天MODS组HMGB1显著高于非MODS组(P<0.05).两组间比较,外周血T淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生能力、CIM4+/CD8+T淋巴细胞比值在伤后第1、14、21、28天MODS组显著低于非MODS组(P均<0.05).大面积烧伤患者伤后血浆HMGB1含量与细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞增殖活性、IL-2含量、CD4+/CD8+T细胞比值呈显著负相关(P<0.05).结论 大面积烧伤后T淋巴细胞免疫功能紊乱与患者并发MODS密切相关,严重烧伤患者血浆HMGBI水平的持续升高对机体细胞免疫功能异常具有显著影响.     

连续性血液净化对脓毒症急性肾损伤患者单核细胞CD14~+ HLA-DR表达的影响

目的:探讨脓毒症合并急性肾损伤(AKI)患者在经过CVVH治疗后促炎介质和单核细胞CD14+HLA-DR的表达与肾功能改善的关系。方法:对我科2016年06月～2018年06月共35例脓毒症合并AKI患者住院患者进行观察,分为肾功能改善组和未改善组,两组患者分别在CVVH治疗前和第5天、第15天抽取血,送检项目包括血肌酐、TNF-α、IL-6、外周血单核细胞CD14+HLA-DR的表达。记录患者肾功能改善及ICU死亡情况。结果:(1) CVVH治疗5 d后,肾功能改善组TNF-α水平在治疗后下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P 0. 05)。与未改善组TNF-α组间比较差异有统计学意义。(2)两组患者CVVH治疗前单核细胞CD14+HLA-DR表达差异无统计学意义,治疗5 d后肾功能改善组单核细胞CD14+HLA-DR比治疗前表达增强,差异有统计学意义(P 0. 05)。而肾功能未改善组未显示出差异有统计学意义。结论:脓毒症AKI经过CVVH治疗后血浆TNF-α、单核细胞CD14+HLA-DR可能参与了细胞免疫调节的作用,并可能与脓毒症AKI肾功能恢复有关。     

多器官功能障碍小鼠高迁移率族蛋白1释放对单个核细胞免疫相关指标的影响

目的 分析多器官功能障碍综合征(MODS)小鼠血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)含量的变化与外周血中单个核细胞免疫相关指标变化的关系,观察MODS发生、发展中HMGB1释放的规律及其对细胞免疫功能的影响.方法 腹腔注射酵母多糖复制小鼠MODS模型,用Westernblot法检测病程不同阶段血清HMGB1含量、流式细胞术测定外周血单核细胞表面组织相容性复合体-Ⅱ类分子(MHC-Ⅱ类分子,IAb)的表达量及T淋巴细胞亚群的比值(CD4+/CD8+).结果 在酵母多糖所致小鼠MODS模型中,当血清HMGB1含量升高时,外周血单核细胞IAb表达量及CD4+/CD8+比值下降;当血清HMGB1含量回复接近正常时,单核细胞IAb表达量及CIM4+/CD8+比值也趋于恢复正常.结论 在MODS的发生、发展过程中,HMGB1可能通过影响血中单个核细胞MHC-Ⅱ类分子(IAb)表达及T淋巴细胞的活性参与免疫调节过程,导致免疫失衡或免疫抑制.     

免疫调理对结石性梗阻性黄疸术后感染并发症的防治作用

目的 探讨免疫调理对梗阻性黄疸患者术后感染并发症的防治作用及作用机理.方法 采用前瞻、随机、单盲、对照临床研究分析40例结石性梗阻性黄疸患者.患者按随机原则分为对照组和治疗组各20例.对照组给予常规治疗.治疗组给予常规治疗联合使用蛋白酶抑制剂和胸腺肽α1(常规治疗+免疫调理),免疫调理疗程为7d.分别观察治疗前及治疗后1、3、5、7及14 d淋巴细胞计数和CD14+单核细胞人白细胞DR抗原(HLA-DR)水平等相关免疫学指标动态变化,同时收集临床术后感染资料.结果 治疗组发生感染并发症2例,发生率10％.对照组发生感染并发症6例,发生率30％.两组感染并发症发生率差异有统计学意义(P＜0.01).治疗组淋巴细胞计数及CD14+单核细胞HLA DR水平在术后3d较对照组显著升高,并持续至治疗后14 d(P＜0.05).结论 免疫调理可以升高淋巴细胞计数和CD14+单核细胞HLA-DR水平,从而改善免疫麻痹,临床上可有效降低梗阻性黄疸患者术后感染并发症发生率.     

丙泊酚对肺癌根治术患者T淋巴细胞可诱导协同刺激分子的影响

目的 观察丙泊酚复合雷米芬太尼麻醉对肺癌根治术患者T淋巴细胞可诱导协同刺激分子(ICOS)的影响.方法 择期行肺叶切除术肺癌患者20例,年龄40～70岁.随机均分为丙泊酚组(P组)和异氟醚组(Ⅰ组).于麻醉诱导前即刻(T0)、诱导后10 min(T1)、切皮后1 h(T2)、术后1h(T3)及24 h(T4)采集静脉血,用流式细胞仪测定血浆CD4+ICOS+和CD8-ICOS+表达率,用放射免疫法测定血清白细胞介素(IL)-6、IL-10的浓度.结果 与T0时比较,P组T3时CD4+ICOS+、CD8+ICOS+、IL-6浓度升高,T2～T4时IL-10浓度均升高(P＜0.05);与Ⅰ组比较,P组在T4时CD4+ICOS+、CD8+ICOS+升高,T3时IL-10升高(P＜0.05).结论 丙泊酚可以促进ICOS的表达,可以增强肺癌根治术患者的细胞免疫功能.     

晚期肺癌患者化疗前后细胞免疫功能及T细胞分泌细胞因子的变化

目的:探讨晚期肺癌患者化疗前后外周血中T细胞免疫功能及其分泌细胞因子水平的变化.方法:通过流式细胞仪检测57例晚期肺癌患者和22例健康体检者CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在外周血单核细胞(PBMC)中所占比例以及外周血CD4+T细胞分泌细胞因子水平的变化.结果:晚期肺癌患者化疗前CD4+T细胞在PBMC中所占比例、CD4+T细胞与CD8+T细胞比值均低于健康人(P＜0.001),化疗后均较化疗前明显升高(P＜0.01或P＜0.001):化疗前CD8+T细胞在PBMC中所占比例高于健康人(P＜0.001),而于化疗后较化疗前明显下降(P＜0.05).治疗前后患者血清中CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-y、TNF-α、IL-2)和Th2细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)水平均无明显变化(P＞0.05).结论:化疗能够增加肺癌患者外周血中CD4+T细胞所占比例,但对Th1、Th2所分泌的相关细胞因子水平影响不大.     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织T细胞浸润的影响

目的 探讨霉酚酸酯(MMF)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠T淋巴细胞在肾脏组织浸润的影响.方法 30只雄性Wistar大鼠(鼠龄2～3个月),随机分为正常对照组、糖尿病模型组和MMF治疗组[15mg·(kg·d)-1].观察16周后,检测大鼠血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肾肥大指数(肾重KW/体重BW)和24h尿蛋白定量(24Upro).用流式细胞仪方法检测肾组织中CD3+、CD4+T淋巴细胞以及细胞因子TNF-α、IFN-y的含量,免疫组化法测肾组织中CD4+、CD8+T细胞的表达.结果 与对照组相比,糖尿病(DM)组大鼠BG、BUN、Scr、Kw/Bw、24Upro等指标均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).通过流式细胞仪检测,糖尿病大鼠肾脏内CD3+、CD4+T细胞以及由CD4+T细胞产生IFN-γ、TNF-α均显著上调(P＜0.01),通过免疫组化肾脏内CD4+、CD8+T细胞均显著升高(P＜0.01).除血糖、肾肥大指数外,治疗组上述指标均比糖尿病组低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 霉酚酸酯通过抑制T淋巴细胞在糖尿病大鼠肾脏组织中的浸润从而下调炎症因子的表达发挥肾脏保护作用.     

清瘟败毒散联合高容量血液滤过对脓毒症患者T淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨清瘟败毒散联合高容量血液滤过(HVHF)治疗脓毒症的临床疗效及其对T淋巴细胞亚群的影响。方法:61例脓毒症患者随机分为对照组(29例)和治疗组(32例),两组均予常规治疗,治疗组同时予清瘟败毒散联合HVHF治疗,观察患者治疗前后CRP、PCT、IL-6、TNF-α等炎症指标以及APACHE-Ⅱ评分的变化,采用流式细胞仪检测外周血CD+3、CD+4、CD+8水平的变化,并测算CD+4/CD+8比值,以评价机体细胞免疫功能的变化情况。结果:与对照组相比,治疗组患者CRP、PCT、IL-6、TNF-α水平的下降以及APACHE-Ⅱ评分的改善更加明显(P0.05);CD+4水平及CD+4/CD+8比值明显升高,CD+8水平明显降低(P0.05);CD+3水平也有所升高,但差异无统计学意义。结论:清瘟败毒散联合HVHF治疗能够极大地清除炎症介质,改善机体细胞免疫功能,从而提高脓毒症患者的临床疗效。     

Effect of high volume hemofiltration on CHOP protein from a canine model of multiple organ dysfunction syndrome

Objective To observe the effect of high volume hemofiltration (HVHF) on the expression of CCAAT enhancer binding protein(CHOP) during the treatment of multiple organ dysfunction syndrome (MODS). To investigate the role of CHOP protein act in apoptosis pathway mediated by the endoplasmic reticulum stress. Methods Twelve Beagle dogs were subjected to hemorrhagic shock plus resuscltation and endotixemia to establish MODS model, then they were randomly divided into two groups: HVHF group (n=6) and MODS group (n=6). After endotoxin injection completed, the HVHF group received HVHF treatment for 24 hours; MODS group did not receive. Vivo experiments: Blood samples were obtained at different time points(before operation, 0 h, 6 h, 12 h, 24 h after the injection of endotoxin). The dogs were killed and the tissue samples from lung, liver and kidney were took, then the expression of CHOP mRNA was determined. Vitro experiments: human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were induced by two groups’ blood samples to establish the apoptosis model. Gene expression, protein quantification and cell apoptosis rate were determined before and after the interference. Results Vivo experiments: The levels of CHOP mRNA from lung, liver and kidney had no significant difference between the two groups (P＞0.05). Vitro experiments: (1)The expression of CHOP mRNA: Compared with MODS group, the expression levels of CHOP mRNA were significantly decreased in HVHF group at 6 h, 24 h after the injection of endotoxin (P＜0.05). Compared with before, the expression levels of CHOP mRNA in the two groups were both significantly decreased after CHOP siRNA interference (P＜0.05). (2)The expression of CHOP protein: Compared with MODS group, the expression levels of CHOP protein were significantly decreased in HVHF group at each time points (P＜0.05). Compared with before, the expression levels of CHOP protein in the two groups were both significantly decreased after CHOP siRNA interference(P＜0.05). (3)Endothelial cell apoptosis rate: Compared with the preoperative rate, the two group’s endothelial cell apoptosis rate was decreased significantly at each time points(P＜0.05). Compared with MODS group, the endothelial cell apoptosis rate was significantly decreased in HVHF group at each time points(P＜0.05). Compared with before, the endothelial cell apoptosis rate in the two groups was both significantly decreased after CHOP siRNA interference(P＜0.05). Conclusion In the treatment of MODS process, HVHF can reduce endothelial cell apoptosis which may be related to the inhibition of CHOP mRNA expression and protein synthesis.     

连续性血液透析滤过对多器官功能障碍犬器官功能和细胞因子的影响

观察连续性血液透析滤过（CVVHDF）对多器官功能障碍综合征(MODS)犬器官功能和细胞因子的影响，并探讨CVVHDF治疗MODS的机制。 方法 15只Beagle犬采用失血性休克+复苏灌注+内毒素血症复制MODS模型，随机分为CVVHDF组(n=8)和MODS组(n=7)。内毒素注射完毕后CVVHDF组接受CVVHDF治疗12 h；MODS组未接受CVVHDF治疗。检测各时间点动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、Scr、BUN的水平。ELISA检测血浆TNF-α、IL-6、IL-10浓度。 结果 CVVHDF治疗后血浆IL-6、IL-10显著下降, 在3、6、9及12 h时间点显著低于MODS组，差异均有统计学意义（P < 0.01）；血浆TNF-α浓度无明显变化，两组间各时间点差异无统计学意义。超滤液中检出IL-6、TNF-α，筛选系数分别为0.27±0.13、0.1±0.1，但未能检出IL-10。CVVHDF组各主要器官功能均明显改善, 平均动脉压基本保持在正常水平，尤其在6、9及12 h时间点显著高于MODS组，差异均有统计学意义（P < 0.01）。PaO2逐渐升高，与MODS组在3、6、9及12 h时间点比较，差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 连续性血液透析滤过能有效降低血浆IL-6、IL-10水平,使抗炎反应和促炎反应两方面趋于动态平衡；能明显改善内毒素诱导的低血压，提高动脉血氧分压。     

高容量血液滤过联合机械通气对犬海水型呼吸窘迫综合征的作用

目的 建立稳定的海水型呼吸窘迫综合征（SW-RDS）犬模型,探讨高容量血液滤过（HVHF）联合机械通气（MV）对海水淹溺后发生SW-RDS的疗效。 方法 采用健康杂种犬10只,随机分为2组：（1）单纯MV组（n=5）：实验犬在模型成功后行MV;（2）HVHF+MV组（n=5）：模型成功后在MV的基础上联合HVHF。两组均连续观察4 h。在气管插管成功稳定15 min后（基础状态）、成模、治疗60 min、120 min、180 min、240 min时记录平均动脉血压（MAP）、心率（HR）、中心静脉压（CVP）,进行动脉血气分析,采集静脉血标本以测血浆渗透浓度;另于基础状态、成模、治疗120 min、240 min采集静脉血标本以测炎性介质（IL-8、IL-6、TNF-α）;实验结束后取肺组织标本行光镜及电镜检查。 结果 （1）在治疗4 h后两组实验犬均存活。（2）血氧分压（PaO2）及氧饱和度（SaO2）均有所上升,HVHF+MV组较MV组改善更明显（P < 0.05）;HVHF+MV组pH、实际碳酸氢根 (AB)、剩余碱（BE）较MV组显著改善（P < 0.05）,恢复至基础状态水平。（3）两组在治疗4 h过程中MAP、HR、CVP均保持稳定,治疗240 min后MAP、HR、CVP与成模时比较差异无统计学意义;两组间相同时间点比较差异亦无统计学意义。（4）MV组在治疗4 h过程中,血浆渗透浓度保持稳定,与成模时比较差异无统计学意义。HVHF+MV组在治疗240 min后血浆渗透浓度较MV组同时间点显著升高（P < 0.05）,较同组成模及治疗180 min时亦显著升高（P < 0.01）。（5）HVHF+MV组血浆炎性介质（IL-8、IL-6、TNF-?琢）在治疗240 min后与MV组同时间点比较显著减少（P < 0.01）;MV组治疗240 min后IL-8、TNF-?琢较成模型时比较明显升高（P < 0.05）。（6）肺组织病理提示,HVHF+MV组肺组织炎性反应、水肿、肺泡上皮损伤等情况较MV组有所改善。 结论 HVHF+MV能明显改善犬SW-RD的低氧血症及纠正酸中毒。HVHF可有效清除循环血炎性介质及多余的水分,从而改善肺组织病理。HVHF对犬SW-RD的mABP、HR、CVP无显著影响。     

The changes of atrial muscle RAS and ACE2-Ang(1-7)-Mas axis in MODS dogs treated by CVVHDF and the mechanism

Objective To observe the members’ dynamic change of renin-angiotensin system(RAS) and angiotensin converting enzyme 2(ACE2)-Ang(1-7)-Mas axis during the continuous veno-venous hemodiafiltration (CVVHDF) treating the dogs with multiple organ dysfunction syndrome (MODS), and to investigate the efficacy mechanism on cardiac function. Methods Dogs were subjected to hemorrhagic shock plus resuscitation and endotoxemia to establish MODS model, then they were randomly divided into 2 groups: CVVHDF group (n=8) and MODS group (n=6). After endotoxin injection completion, the CVVHDF group received CVVHDF for 12 h, MODS group didn't. Radioimmunoassay, euzymelinked mmunosorbent assay (ELISA) were used to detect the content of renin, AngⅠ, AngⅡ, Ang (1-7). Real-time PCR was used to detect the expression of renin mRNA and ACE2 mRNA. Western blotting was used to detect the protein content of renin, AngⅡ, ACE2 and Ang (1-7). Results (1) Organ function: Compared with the MODS group, the vital signs, heart, lung and renal function were significantly ameliorated in the CVVHDF group, the difference had statistical significance (P＜0.05). (2) RAS changes: To detect index from the level of organs, genetic and molecular in arterial tissue, the results displayed that the content of renin, AngⅠ, AngⅡ, the expression of renin mRNA, the protein content of renin, AngⅡ in CVVHDF group were lower than that in MODS group, the difference had statistical significance (P＜0.01). (3)ACE2-Ang(1-7)-Mas axis's changes: Using the same methods above to detect corresponding indicators, the results displayed that the content of ACE2, Ang(1-7), the expression of ACE2 mRNA and the protein content of ACE2, Ang(1-7) in CVVHDF group were significantly improved than that in MODS group, the difference had statistical significance (P＜0.01). Conclusions In the process of CVVHDF treating MODS, the ACE2-Ang(1-7)-Mas axis plays the role which antagonizes the RAS system, and to protect the cardiac function. This research may be important for MODS’ clinical rescue.     

经HBx转染后的肾小管上皮细胞对T细胞激活、分化的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virus x,HBx)转染人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)后其对T细胞激活、分化的影响.方法 分4组:实验组(即转染HBx质粒的HK-2细胞+CD4+T细胞)、阴性对照组(即转染HBx空载质粒的HK-2细胞+CD4+T细胞)、单独培养组(即CD4+T细胞)和空白对照组(未处理HK-2细胞+CD4+T细胞).体外培养HK-2,用分子克隆的方法构建pcDNA3.1-myc-HBx质粒,采用脂质体转染法瞬时转染HK-2细胞,实时荧光定量PCR及Western印迹法验证HBx在HK-2细胞中的表达.免疫磁珠法分选健康志愿者外周血CD4+T细胞,分别与HK-2细胞共培养,流式细胞术检测HK-2细胞共刺激分子CD40的表达、CD4+T细胞CD40配体(CD40L)表达及细胞周期情况,ELISA检测各组细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ及Th2型细胞因子IL-4水平.结果 HK-2细胞经转染pcDNA3.1-myc-HBx质粒后,可高表达HBx.转染HBx基因后HK-2细胞CD40表达显著上调(P＜0.01);与对照组相比,实验组CD4+T细胞表面CD40L表达也显著增加(P＜0.01),S期与G2/M期细胞数之和增多(P＜0.01),培养上清中IFN-γ水平升高(P＜0.05),IL-4水平降低(P＜0.05).结论 肾小管上皮细胞经HBx转染后,其共刺激分子表达上调,并促进CD4+T细胞增殖,诱导CD4+T细胞向Th1方向分化.由此推测,乙肝相关性肾炎肾组织免疫损伤所导致病变的持续进展也可能与此因素的参与相关.     

不同肠内营养液与生长激素联合应用对烫伤大鼠炎性反应的影响

目的 了解标准肠内营养(EN)、肠内免疫营养(EIN)液与重组人生长激素(rhGH)联合应用对烫伤大鼠炎性反应的影响. 方法 将128只SD大鼠按随机数字表法分为EN、EIN、EN+rhGH、EIN+rhGH组,每组32只.将大鼠制成总面积30%TBSA的Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后1、4、7、10 d抽取各组大鼠静脉血,检测血清内毒素、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;切取大鼠肝组织检测其CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达.另取8只SD大鼠作为对照组,检测上述指标. 结果 伤后各组各时相点大鼠血清内毒素、IL-6、TNF-α水平以及肝组织中的CD14 mRNA、TNF-α mRNA表达均高于对照组(P＜0.01).伤后4、7、10 d,EIN组和EN+rhGH组血清内毒素、IL-6、TNF-α水平以及肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA表达均低于EN组(P＜0.05或P＜0.01);伤后10 d,EIN+rhGH组血清内毒素[(0.37±0.07)EU/mL]、IL-6[(289±49)ng/L]、TNF-d[(1.87±0.32)μg/L]水平以及肝组织CD14 mRNA(0.39±0.05)、TNF-α mRNA(0.47±0.03)表达均低于EIN组[(0.48±0.08)EU/mL、(364±53)ng/L、(2.50±0.48)μg/L、0.67±0.06、0.66±0.05,P＜0.05或P＜0.01]. 结论 EN、EIN液与rhGH联合应用可减轻大鼠烫伤后的炎性反应,且rhGH具有明显的协同作用.     

鞘内注射米诺环素对骨癌痛大鼠脊髓水平酸敏感离子通道蛋白1a表达的影响

目的 探讨鞘内注射米诺环素对骨癌痛(bone cancer pain,BCP)大鼠脊髓水平酸敏感离子通道蛋白1a(acidsensing ion channel 1a,ASIC1a)表达的影响. 方法 选择雌性SD大鼠(体重180～220 g),采用随机数字表法分为4组:假手术+生理盐水组(Ⅰ组)、假手术+米诺环素组(Ⅱ组)、BCP+米诺环素组(Ⅲ组)和BCP+生理盐水组(Ⅳ组).①于造模前1d及造模后3、5、7、10、14、18d测定大鼠(每组选8只)自由行走痛行为评分,同时测定大鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawalmechanical threshold,PWMT)至14 d;②于造模前1d及造模后3、5、7、10、14、21 d同一时段随机处死大鼠(每组选4只),取腰段脊髓,采用Western blot法检测ASIC1a的表达;③于造模后1、3、7、14、21 d,采用免疫荧光技术观察大鼠(每组选4只)患侧脊髓ASIC1a和小胶质细胞标记物[离子钙接头蛋白分子1(ionized calcium binding adapter 1,Iba-1)]免疫反应阳性产物的共表达. 结果 ①与Ⅰ组和Ⅱ组比较,造模后14、18dⅢ组、Ⅳ组自由行走痛行为评分明显升高(P＜0.01);造模后5d时Ⅲ组、Ⅳ组PWMT开始下降(P＜0.01),至7、14 d维持在低水平(P＜0.01);与Ⅳ组比较,Ⅲ组PWMT在造模后7、10、14 d均较高(P＜0.05).②与Ⅰ组和Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组从造模后3d开始ASIC1a表达上调(P＜0.01),于14 d达到高峰(P＜0.01);与Ⅳ组比较,Ⅲ组在造模后5、7、10、14、21 d ASIC1a表达量均较低(P＜0.05).③与Ⅰ组和Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组在造模后3、7、14、21 d脊髓背角ASIC1a阳性细胞数和活化的小胶质细胞数均较高(P＜0.05),未发现双标细胞;与Ⅳ组比较,Ⅲ组大鼠脊髓ASIC1a阳性细胞数和活化的小胶质细胞数均明显降低(P＜0.01). 结论 大鼠BCP的形成和维持可能与ASIC1a有关;鞘内注射米诺环素可以减轻大鼠的机械性痛觉过敏,其作用可能是通过抑制脊髓ASIC1a的表达实现的.     

生长抑素对腹腔疾病引起的严重脓毒症双向免疫调节作用的研究

目的 探讨生长抑素对严重腹腔脓毒症患者免疫炎性反应紊乱及预后的影响.方法 将2005年6月至2009年6月收治的53例年龄＞18岁、急性生理和慢性健康状况(APACHEⅡ)评分＞15分的严重腹腔脓毒症患者随机分为生长抑素组(n=23例)和经典治疗组(n=30例),选取同期年龄匹配的15名健康体检者作为对照组.经典治疗组给予经典拯救脓毒症运动治疗;生长抑素组在经典拯救脓毒症运动治疗的基础上联合运用14肽生长抑素(生长抑素)6 mg/24 h持续给药,连续7 d.观察比较患者入院时(d1)及治疗后第3天(d3)、第7天(d7)和第14天(d14)血清白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和T细胞亚群CD4+、CD8+和CD4+/CD8+以及APACHEⅡ评分的动态变化和28 d病死率.结果 与对照组比较,严重腹腔脓毒症患者血清IL-10和TNF-α水平明显升高(P＜0.05),CD4+、CD8+和CD4+/CD8+明显降低(P＜0.05);与经典治疗组同期比较,生长抑素组d7、d14、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+明显升高(P＜0.05),IL-10和TNF-α均明显下降(P＜0.05);生长抑素组d3、d7、d14的APACHE-Ⅱ评分较经典治疗组明显降低(P＜0.05);28 d内机械通气时间、ICU停留时间有所缩短,28 d病死率有所下降,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 严重腹腔脓毒症患者全身炎症反应和免疫抑制同时存在;生长抑素具有抗炎和免疫增强双向调节作用.     

CD14基因启动子区-159位点多态性在重度烧伤患者中的分布及意义

目的 了解CD14基因启动子-159C/T基因多态性与严重烧伤患者CD14 mRNA表达及血浆可溶性CD14(sCD14)水平的关系.方法 2004年6月-2006年6月,选择2个笔者单位收治的烧伤总面积大于或等于30%TBSA的患者77例,分别于伤后1、3、5、7、14、21、28 d抽取患者静脉血,采用PCR-限制性片段长度多态性法检测血浆CD14-159C/T基因多态性,酶联免疫吸附测定法、RT-PCR法检测患者血浆sCD14的含量及白细胞CD14 mRNA表达.结果 77例患者的CD14基因C-159T基因型中,CC纯合子型7例占9.1%、TC杂合子型49例占63.6%、TT等位基因纯合子型21例占27.3%,T等位基因和C等位基因分布频率分别为59.1%和40.9%.经检验表明,此研究群体达到了Hard-Weinberg平衡.7例CC纯合子型患者中并发脓毒症3例占42.9%,49例TC杂合子型并发该症38例占77.6%,21例TT等位基因纯合子型并发该症15例占71.4%.3例CC纯合子型脓毒症患者中,1例出现MODS;38例TC杂合子型脓毒症患者19例出现MODS占50.0%;15例TT等位基因纯合子型脓毒症患者10例出现MODS占66.7%.伤后7～21 d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者外周血CD14 mRNA表达明显高于CC纯合子型患者(P＜0.05或P＜0.01).伤后7d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者CD14 mRNA表达达高峰,分别为1.18±0.25、1.15±0.35.烧伤后TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者血浆中sCD14含量较高,伤后5 d CC纯合子型患者血浆sCD14含量(85±46)μg/L显著低于TC杂合子型患者[(134±43)μg/L,P＜0.01];伤后21、28 d TC杂合子型、TT等位基因纯合子型患者sCD14含量明显高于CC纯合子型患者(P＜0.01).结论 大面积烧伤后CD14基因启动子-159位点多态性TT基因型可能是烧伤感染患者发生MODS的主要基因标志物之一.携带TT基因型的烧伤脓毒症患者并发MODS概率高于其他基因型.