过氧化物酶体增殖激活物受体γ配体诱导肾癌细胞的凋亡

目的 观察过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)配体对肾癌细胞凋亡的影响.方法 通过ELISA方法 观察0～100 μmol/L浓度的吡格列酮和曲格列酮(TZDs)对肾癌细胞786-0、A498及正常肾细胞HK-2、HMCC凋亡的影响,Heochst 33342荧光染色、DNA片段化分析检测70.00 μmol/L吡格列酮或80.00 μmol/L曲格列酮处理后肾癌细胞的凋亡,Western blot观察TZDs处理后肾癌细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达变化及Caspase-3活性的改变.结果 超过50.00 μmol/L的TZDs可诱导肾癌细胞出现凋亡,LC_(50)值分别为65.11 μmol/L(曲格列酮/786-O)、67.73 μmol/L(吡格列酮J/786.0)、63.91 μmol/L(曲格列酮/A498)和78.12 μmol/L(吡格列酮/A498),但对正常肾细胞没有影响.荧光染色显示80.00 μmol/L的吡格列酮及70.00 μmol/L的曲格列酮处理后肾癌细胞明显凋亡,伴随bcl-2蛋白的表达水平降低和bax蛋白的增加,Caspase-3的活性明显增强,在48 h可达到基础值的3.5-4.5倍.结论 激活PPARγ可以诱导肾癌细胞的凋亡,PPARγ有可能成为肾细胞癌新的治疗靶点.     

过氧化物酶增殖物激活受体γ活化抑制肝癌细胞迁移的研究

目的 研究过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)对肝癌细胞迁移的影响,并探讨其机制.方法 应用伤口愈合实验观察PPARγ的合成配体曲格列酮和罗格列酮对肝癌细胞系BEL-7402迁移的影响;应用免疫荧光化学、RT-PCR和Western Blotting分析探讨其中的机制.结果 曲格列酮和罗格列酮均能抑制肝癌细胞的迁移活动,其原因是由于该两种药物激活PPARγ通路且具有配体依赖性.结论 PPARγ活化能够抑制肝癌细胞的迁移.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对前列腺上皮细胞作用的研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人类前列腺上皮细胞株RWPE-1的表达和对前列腺细胞凋亡过程的影响.方法 用免疫细胞化学和免疫荧光法检测PPARγ在RWPE-1细胞的表达.细胞分对照组和实验组,实验组细胞采用PPARγ激动剂罗格列酮处理,分别检测2组细胞中凋亡执行酶Caspase 3/7的活性,采用免疫细胞化学方法检测Bax表达,采用阳离子染料JC-1观察线粒体膜电位变化.采用SPSS 13.0软件对实验数据进行统计分析,组间均数比较采用独立样本t检验,α=0.05.结果 PPARγ在人类前列腺上皮细胞株RWPE-1表达,主要定位于细胞核和核周.实验组Caspase 3/7活性[(10 636±1032)RLU]明显高于对照组[(5936±620)RLU],差异有统计学意义(P＜0.01).实验组Bax表达显著增加,对照组累计吸光度(A)值为6017±563,实验组为8250±694,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).线粒体膜电位检查发现,对照组呈黄绿色荧光,实验组呈绿色荧光,表明实验组线粒体膜电位发生去极化改变.结论 PPARγ激动剂能够诱导前列腺上皮细胞凋亡,这一过程涉及Bax和线粒体膜电位改变,提示PPARγ可能通过调控前列腺细胞的凋亡过程参与BPH发病.     

过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂罗格列酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ2的激动剂罗格列酮对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法 取新生SD大鼠颅骨进行原代培养,经碱性磷酸酶ALP染色和矿化结节检测鉴定为成骨细胞。实验分为6组:取第3代细胞接种至96孔板,根据加入罗格列酮的浓度的不同分为A、B、C、D、E、F组(浓度分别为0、1、2、5、10、20 μmol/L),A组为对照组,B～F组为实验组。每组5个复孔,经罗格列酮作用24h后,应用噻唑蓝(MTT)比色法和PNPP法检测大鼠成骨细胞增殖和ALP活性的变化。结果 作用24h后,6种浓度罗格列酮对大鼠成骨细胞增殖作用均无影响,且组间差异无统计学意义(F=1.335,P＞0.05);但各实验组大鼠成骨细胞ALP活性均较对照组降低,并具浓度依赖性,组间差异有统计学意义(F=82.304,P＜0.01)。结论 一定剂量的罗格列酮对大鼠成骨细胞无明显促增殖作用,但却明显抑制了大鼠成骨细胞的分化,表明罗格列酮可影响成骨活性,提示PPARγ2参与了机体的成骨过程,在骨质疏松的发病中发挥一定了的作用。     

过氧化物酶体增殖物活化的受体γ对肝星状细胞作用机制的研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对肝星状细胞(HSC)生物学特性的影响及其作用机制。方法用MTT法和流式细胞仪检测对照组、罗格列酮组、GW9662+罗格列酮组、GW9662组大鼠肝星状细胞的增殖和凋亡情况;采用RT-PCR方法检测各组PPARγ及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用免疫组织化学法和Western blot法检测PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达;结果罗格列酮组的肝星状细胞增殖率MTY(0．49±0．06)较对照组(1．00±0．045)、GW9662组(0．89±0．043)和罗格列酮+GW9662组(0．78±0．049)明显减弱,凋亡率明显增高(P<0．05);罗格列酮组PPARγmRNA表达(1．63±0．179)显著高于对照组(0．46±0．021)、GW9662组(0．41±0．01)和罗格列酮+GW9662组(0．45±0．20)(P<0．05),罗格列酮组Ⅰ型前胶原mRNA表达(0．32±0．02)与对照组(1．61±0．09)、GW9662组(1．81±0．22)和罗格列酮+GW9662组(1．37±0．01)相比显著降低(t值分别为15．59,14．68,8．07,P<0．01);其他各组之间PPAR-γ和Ⅰ型前胶原mRNA的表达差异无统计学意义(P>0．05)。PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达所得结果与RT-PCR结果相一致。结论PPARγ特异性激动剂罗格列酮可以增加PPARγ的表达。抑制HSC表达Ⅰ胶原,抑制HSC增殖,诱导HSC凋亡,PPARγ配体对于缓解肝脏纤维化具有一定的作用。     

罗格列酮对OLETF大鼠各组织中过氧化物酶体增殖体激活受体γ基因表达的干预作用

目的观察自发性Ⅱ型糖尿病OLETF大鼠糖尿病模型出现的时间,罗格列酮对过氧化物酶体增殖体激活受体(PPAR)γ基因表达的干预作用。方法OLETF大鼠随机分成糖尿病对照组和罗格列酮干预组,8周龄时,干预组以罗格列酮每日3mg/kg体重灌胃,直至40周龄。行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),鉴定糖尿病发病情况。应用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术分析PPARγmRNA在糖尿病大鼠各组织中的表达水平及罗格列酮对PPARγ基因的影响。结果至40周龄,对照组糖尿病累积发病率92.5%,糖耐量异常发生率7.5%。干预组糖尿病的累计发病率仅为28.6%,糖耐量异常发生率7.5%,显著低于对照组(P<0.01)。实时荧光定量结果表明:PPARγ在大鼠各组织中均有分布,对照组大鼠各组织中以脂肪表达量最高2.71±0.14(单位:1010拷贝数/100mg组织),是其他组织的10～100倍;其次为血管、胰腺、肾脏、肺脏,分别为1.15±0.10、2.58±0.064、1.52±0.12、4.67±0.088(单位:109拷贝数/100mg组织);心、肝、脾、肌肉中的拷贝数最低分别为7.77±0.11、4.31±0.12、1.51±0.21、2.70±0.087(单位:108拷贝数/100mg组织);干预组各组织中PPARγmRNA的表达量均比对照组高,且在血管、胰腺、肌肉、肾脏组织中差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功建立了以OLE     

冻结肩病理改变及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ激动剂治疗作用的研究

背景:冻结肩是一种以肩关节疼痛和活动受限为主要特征的疾病,目前病因不明,治疗效果欠佳。目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肩关节囊纤维化及炎症反应等病理改变的影响,以及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂对大鼠冻结肩的治疗作用,为临床治疗冻结肩提供新思路。方法:利用TGF-β1诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)异常纤维化,PPAR-γ激动剂三萜类化合物(CDDO-IM)作为治疗药物,检测细胞增殖、迁移情况及细胞外基质蛋白的表达情况。向SD大鼠的肩关节腔注射TGF-β1过表达的腺病毒构建大鼠冻结肩模型。2周后,其中一半大鼠用罗格列酮灌胃饲养2周,作为罗格列酮治疗组。检测大鼠肩关节活动度,利用ELISA检测关节腔炎症因子,HE染色和免疫组织化学法检测大鼠肩关节囊组织细胞外基质蛋白的表达情况。结果:在细胞实验中,TGF-β1组的增殖率为83.6%,TGF-β1+CDDO-IM组增殖率为19.3%(P<0.01);TGF-β1组的迁移率为84.9%,TGF-β1+CDDO-IM组迁移率为44.1%(P<0.05);TGF-β1能够诱导HSF增殖、迁移及异常纤维化。动物实验成功构建了TGF-β1诱导的大鼠冻结肩模型,免疫组织化学结果提示,罗格列酮能够抑制大鼠冻结肩的炎症形成,减少基质蛋白生成,重塑纤维组织结构。结论:冻结肩的病理改变主要是纤维细胞异常增生,炎症细胞浸润,纤维结构紊乱,而PPAR-γ激动剂可以缓解大鼠冻结肩关节僵硬,减弱炎症反应,抑制异常纤维化。     

过氧化物酶增殖物活化受体γ对肝肿瘤细胞生物学行为影响的实验研究

目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ在肝肿瘤细胞株中的表达,结合配体对其生长的影响,并初步探讨其机制。方法RT-PCR及Westen blot检测肝肿瘤细胞株中PPARγ的表达;MTT法检测PPARγ活化对肝肿瘤细胞生长的影响,Annexin V-FITC、DAPI染色、流式细胞仪、RT- PCR分别研究PPARγ对肝肿瘤细胞凋亡、细胞周期、周期调节因子影响。结果人类肝肿瘤细胞株SMMC-7721、Hep G2、Hep 3B在mRNA及蛋白水平均表达PPARγ;PPARγ/活化配体曲格列酮、吡格列酮作用肝肿瘤细胞株48 h后在25、50μmol/L浓度时显示明显的生长抑制作用,流式细胞仪显示细胞周期中G_0/G_1期显著延长,S期明显减少,曲格列酮10、25、50μmol/L作用SMMC-7721 48 h后,Cyclin D1的表达明显下调,P21~(WAF1/CIP1)的表达则明显上调,P27~(KIP1)未见明显变化。PPARγ配体在25、50μmol/L浓度时可诱导SMMC一7721凋亡。结论PPARγ在SMMC-7721、Hep G2、Hep 3B中存在表达;PPARγ配体对于肝肿瘤细胞株有明显的生长抑制作用,其生长抑制作用可能是通过下调Cyclin D1,上调P21~(WAF1/CIP1)表达,产生细胞周期阻滞及促进细胞凋亡而实现。     

过氧化物酶增殖物激活受体γ对大鼠肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPARγ）对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖与凋亡的影响。方法 常规培养大鼠HSC，经系列浓度的PPARγ天然配体（15-d-PGJ2）或合成配体（GW7845）作用后，通过噻唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态，应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot探讨PPARy配体诱导凋亡的分子机制，透射电镜观察HSC形态学变化。结果15-d-PGJ2和GW7845可通过抑制细胞增殖同时诱导凋亡而抑制HSC生长，且呈剂量依赖效应（各实验组与对照组比较，P＜0．01）；PPARy活化可显著抑制HSC中bcl-2基因表达（同时在转录和转录后水平），且此抑制作用可被PPARγ特异性拮抗剂GW9662部分或完全逆转，说明此种抑制效应确由PPARγ所介导；电镜观察亦显示明显的细胞凋亡发生。结论PPARγ活化可显著抑制HSC增殖，并通过下调bcl-2基因表达而诱导凋亡，提示PPARγ可作为逆转肝纤维化治疗的新的有效靶点。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂对人肾间质成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂在抗肾间质纤维化方面的潜在作用.方法原代培养正常人肾间质成纤维细胞(HFB),PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和PPARγ激动剂TZDs(曲格列酮和齐格列酮)作用细胞24至72 h.应用台盼蓝染色进行活细胞计数,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖情况,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期.结果在PPARγ激动剂作用下,HFB的活细胞数较对照组明显减少(P＜0.05).MTT检测发现PPARγ激动剂能明显抑制H邝细胞增殖(P＜0.05).流式细胞技术检测,PPARγ激动剂处理组细胞凋亡明显,与对照组比较差异有显著性意义.凋亡率分别是对照组(3.49±0.60)%,15d-PGJ2组(14.07±0.24)%,齐格列酮组(13.46±0.81)%,曲格列酮组(14.78±1.17)%,与对照组比较,各用药组P分别＜0.01,＜0.01,＜0.05.PPARγ激动剂处理48～72 h后用流式细胞仪观察到G0/G1细胞数明显增加,与对照组比较差异显著(P均＜0.01).结论PPARγ激动剂可以促进HFB细胞凋亡,通过G1期停滞抑制其增殖,提示PPARγ可能作为防止肾间质纤维化的一个潜在的治疗靶目标.     

过氧化物酶增殖物活化受体γ活化对胰腺癌细胞周期停滞的诱导作用

目的　探讨过氧化酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞周期停滞中的调节作用。方法　胰腺癌细胞系SW1990经 10 μmol/LPPARγ配体 15 脱氧 前列腺素J2 (15d PGJ2 )、2 0μmol/L维甲酸受体α(RXRα)配体 9 顺式 维甲酸 (9 cis RA)及其联合培养 4 8h后 ,应用流式细胞仪研究细胞周期的改变 ;通过逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测细胞周期G1期调节因子p2 7Kip1、p2 1Waf1的表达。 30只雌性裸鼠皮下接种 1× 10 7SW1990细胞。 2周后待肿瘤可触及时 ,将其随机分为对照组和干预组 ,后者予以PPARγ激动剂罗格列酮处理。 11周后处死裸鼠并取下移植瘤 ,应用RT PCR检测罗格列酮对p2 7Kip1、p2 1Waf1mRNA表达的影响。应用免疫组化观察移植瘤组织中p2 7Kip1、p2 1Waf1及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达。结果　流式细胞术检测提示 15d PGJ2 、9 cis RA及其联合应用可引起细胞周期G1期停滞 ,S期比例下降。RT PCR结果显示 ,同对照组相比 ,15d PGJ2 组、9 cis RA组、联合应用组中p2 7Kip1表达明显增强 ,p2 1Waf1表达无明显改变。体内实验也证实罗格列酮仅上调移植瘤组织中p2 7Kip1mRNA的表达 ,而对p2 1Waf1mRNA表达水平无影响。免疫组化显示p2 7Kip1、p2 1Waf1蛋白仅表达于治疗组裸鼠移植瘤组织中 ,在对照组无表     

大鼠颅脑损伤后细胞凋亡及纳络酮的抗凋亡作用

目的 探讨颅脑损伤后神经细胞凋亡的时相特点及其药物调控作用。方法 采用原位末端标记法（TUNEL）结合流式细胞术对外伤组、伤后纳络酮治疗组及对照组大鼠伤侧大脑皮质的细胞凋亡情况进行定量分析。结果 凋亡细胞从伤后24h开始逐渐增多，伤后3－5d发展到项峰，此后逐渐下降；是纳络酮治疗组各时相点凋亡细胞数均明显低于外伤组。结论 外伤后第3－5天是细胞凋亡的高峰期，纳络酮具有显著的抗凋亡作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂心肌保护作用机制的研究进展

背景过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs）主要参与和能量代谢及炎症反应相关的基因转录。其1亚型除作为治疗2型糖尿病的降糖靶点外,在心肌缺血／再灌注损伤（myocardial ischemia／reperfusion injury,MI／RI）中也具有关键作用,是减轻MI／RI、维持心脏功能的重要因子。目的探究过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator-activatedreceptor-γ,PPAR-γ）激动剂在MI／RI中心肌保护作用的相关机制。内容从PPAR-γ及其激动剂和相关实验研究等方面进行综述,PPAR-y激动剂能够通过依赖和不依赖PPAR-γ两条途径减少心肌梗死面积,改善心脏功能,发挥减轻MI／RI的作用,其中涉及抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种重要保护机制。趋向深入研究PPAR激动剂减轻MI／RI的具体机制可为临床提供新的心肌保护策略。     

靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ基因siRNA载体的构建

目的构建靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA载体。方法根据siRNA设计原则,在PPAR-γmRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(677-695和497-515);体外合成对应发卡样DNA片段,退火后加A处理,先将其克隆入T载体,再亚克隆入siRNA载体pRNAT-U6.2,对插入序列进行DNA序列分析。结果　发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸,退火后,电泳可见明亮靶条带;T7/SP6作为引物进行PCR扩增,筛选得到阳性克隆pGEM-T-SP- PAR-γ1和pGEM-T-SPPAR-γ2。PCR扩增鉴定得到阳性亚克隆pRNAT-U6.2-SPPAR-γ1和pRNAT- U6.2-SPPAR-γ2,测序证实插入序列与设计完全一致。结论成功构建2个PPAR-γ基因靶向性siRNA载体pRNAT-U6.2-SPPAR-γ;为PPAR-γ基因沉默的研究提供实验工具。     

过氧化物酶体增殖因子活化受体γ在直肠癌组织中的表达及其意义

目的应用组织芯片技术探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)在直肠癌中的表达状况及其意义。方法利用组织芯片技术构建直肠癌组织芯片,采用免疫组织化学SP法检测80例直肠癌组织、16例良性腺瘤组织和16例正常直肠组织中PPAR-γ蛋白的表达并分析其与分化程度等临床和病理指标以及生存率的关系。结果80例直肠癌标本中PPAR-γ表达阳性57例(71.3%),16例良性腺瘤中4例(25.0%)、16例正常直肠标本中1例(6.3%),差异有统计学意义(X~2=29.76,P<0.01)。直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的PPAR-γ表达程度差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移、3年生存率的PPAR-γ表达程度差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPAR-γ蛋白在直肠癌组织中呈高表达,其表达与直肠癌临床病理特征和生物学行为有密切关系,检测PPAR-γ蛋白,对诊断直肠腺癌、判断其恶性程度及预后均有一定参考价值。     

槲皮素通过抑制己糖激酶抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促进其凋亡

目的 观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 选用槲皮素12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μmol/L为实验浓度梯度,采用噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞检测技术检测人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性;应用免疫细胞化学及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞中已糖激酶蛋白及mRNA的表达.结果 槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,以上各浓度抑制率分别为10.1％、20.4％、35.6％、59.8％、70.2％;诱导细胞凋亡率分别为9.7％、15.2％、22.6％、31.7％、42.3％:100 μmol/L槲皮素作用HepG2细胞48 h前后已糖激酶蛋白表达的灰度值分别为128.33±13.27、193.18±12.36;与β-肌动蛋白(β-actin)mRNA表达的吸光度(A)值分别为0.3747±0.1356、0.2058±0.1172.结论 槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过抑制己精激酶的表达来促进细胞凋亡.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对人肝癌细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的 检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人肝癌、癌旁和正常肝组织的表达,探讨激活或抑制PPARγ在肝癌细胞株生长和凋亡中的作用及其机制.方法 应用免疫组织化学方法检测20例肝癌、癌旁和正常肝组织中PPARγ的表达,Western blot检测2种肝癌和1种正常肝细胞株中PPARγ表达;PPARγ激动剂15dPGJ2和拮抗剂T0070907分别干预培养的2种肝癌细胞株,噻唑蓝(MTT)检测细胞生存率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性变化.结果 肝癌组织中PPARγ表达高于癌旁和正常肝组织(P＜0.05),PPARγ主要在肝癌细胞质中表达;肝癌细胞株PPARγ表达比正常肝细胞株高(P＜0.05);15dPG-J2抑制肝细胞增殖而T0070907则促进肝癌细胞增殖(P＜0.05).15dPG-J2可使肝癌HepG2和SMMC7721细胞G0/G1期细胞比例由(42.5±0.9)%和(49.0±3.8)%增高至(61.0±2.0)%和(67.5±2.2)%,(P＜0.05),S期由(30.5±0.3)%和(43.0±2.5)%降低至(6.6±1.1)%和(25.1±2.0)%(P＜0.05).而且,15dPG-J2可明显促进两种肝癌细胞凋亡,凋亡率分别增加约24.4%和22.4%,并可增强细胞Caspase-3活性(P＜0.05);Caspase抑制剂Z-VAD-FMK则可逆转15dPG-J2对肝癌细胞的促凋亡作用.结论 PPARγ在肝癌细胞中表达升高,其表达主要位于细胞质中,为无活性状态.PPARγ激动剂可活化PPARγ和Caspase通路,抑制肝癌细胞生长,促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in human liver cancer tissue and cells, and to explore the effects and mechanisms of PPARγ on growth and apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells. Methods The expression of PPARγ in 20 cases of liver cancer, tumor adjacent tissue, normal liver, one liver cell line and two liver cancer cell lines were detected by immunohistochemistry or Western blotting. Two incubated malignant cell lines were exposed to PPARγ agonist 15dPGJ2 or antagonist T0070907, cell viability was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay and cell cycle distribution and apoptosis were examined by flow cytometry (FCM). Consequently, the activity of caspase-3 following treatments of 15dPGJ2 or T0070907 was observed by the commercial Caspase-3 Activity Kit. Results The expression of PPARγin liver cancer was higher than that in adjacent and normal liver tissue ( P ＜ 0. 05) and PPART was predominantly expressed in the cytoplasm. Further,the expression of PPARγwas higher in hepatoma cell line than that in normal liver cell line (P＜ 0.05 ). PPARγ agonist 15dPG-J2 inhibited the proliferation while the antagonist T0070907 induced the growth of hepatoma cells (P ＜ 0. 05). G0/G1 phase of HepG2 and SMMC772 cells was blocked by 15dPG-J2, and the ratio were raised from (42.5 ±0.9)% and (49.0 ±3.8)% to (61.0 ±2. 0)% and (67.5 ±2. 2)% ,respectively. Meantime,S phase ratio were decreased from (30. 5 ± 0. 3 ) % and (43.0 ± 2. 5 ) % to ( 6. 6 ± 1. 1 ) % and ( 25. 1 ± 2. 0 ) %. Further, 15 dPG-J2 facilitated significant apoptosis in those cell lines and the increased apoptosis ratio were 24. 4% and 22. 4% respectively.Accordingly,the activity of Caspase-3 induced by 15dPGJ2 were 21-and 23-fold higher than those in control groups (P ＜ 0. 05 ). The Caspase inhibitor Z-VAD-fmk expectedly reversed the apoptosis induced by 15dPGJ2 in HepG2 and SMMC772 cells. Conclusion The expression of PPARγ increases in human hepatoma predominantly in cytoplasm with its inactivated form. 15dPG-J2 ,an agonist of PPART inhibits growth and induces apoptotic in hepatoma cells through activation of PPARγ pathway and the consequent Caspase3 signal.     

促凋亡因子Omi/HtrA2对凋亡抑制蛋白表达及A549细胞凋亡的影响

目的观察Omi／HtrA2对凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响和对肺癌A549细胞凋亡的影响。方法将构建的携带绿色荧光蛋白（GFP）和Omi／HtrA2基因的表达载体（PEGFP-N1-Omi）转染至人肺腺癌A549细胞中，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测Omi／HtrA2对XIAP转录和表达的影响，流式细胞仪检测Oml／HtrA2协同顺铂作用于A549细胞后该细胞的凋亡变化。结果Omi／HtrA2基因转染组XIAP的mRNA表达水平下降37％（P〈0．05），XIAP的蛋白表达水平下降69％（P〈0．05），顺铂诱导后，基因转染组细胞凋亡率为（36．00±1．95）％，显著高于对照组的细胞凋亡率（17．00±1．12）％（P〈0．05）。结论Omi／HtrA2通过抑制XIAP的抗凋亡作用可协同顺铂促进A549细胞凋亡。     

百里醌对人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的抑制作用

目的 探讨百里醌对体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的影响及其机制.方法 百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞计数CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot检测SaOS-2细胞中Caspase-3、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Smac的表达.结果 不同浓度(20、40、80μmol/L)百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞存活率分别为(75.5±4.2)%、(62.1±6.7)%和(52.5±4.9)%;细胞早期凋亡率分别为(8.1±0.7)%、(13.2±1.1)%和(20.2±1.7)%;百里醌作用后,SaOS-2细胞出现典型凋亡的形态学改变;百里醌可明显上调Caspase-3和Smac在SaOS-2细胞中的表达,而显著抑制XIAP的表达.结论 百里醌具有抑制体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长和促进细胞凋亡的作用,可能是通过上调人骨肉瘤SaOS-2细胞中Caspase-3和Smac的表达和下调XIAP的表达而实现.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effect of thymoquinone on the growth of human osteosarcoma cell line SaOS-2 in vitro.Methods After human osteosarcoma SaOS-2 cells were treated with different concentrations of thymoquinone, the proliferation was measured by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. The flowcytometry (FCM) was used to determine apoptosis of SaOS-2 cells. The morphological changes of SaOS-2 cells were observed under the fluorescence microscopy after DAPI staining. Western blotting was used to detect the protein expression of Caspase-3, X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) and Smac.Results Thymoquinone obviously suppressed proliferation of SaOS-2 cells in a dose-dependent manner, and the apoptosis rate was (8.1±0.7)%, (13.2±1.1)% and (20.2±1.7)% respectively when the concentrations of thymoquinone exposed were 20, 40 and 80 μmol/L. After treatment with thymoquinone, the expression of Caspase-3 and Smac was up-regulated in SaOS-2 cells, and thymoquinone treatment significantly decreased the XIAP levels in SaOS-2 cells.Conclusion Thymoquinone has the anti-tumor effect on the human osteosarcoma SaOS-2 cells in vitroprobably by up-regulating the expression of Caspase-3 and Smac and down-regulating the expression of XIAP.