干扰锌代谢对癫痫小鼠易感性、学习记忆和海马神经元损伤的影响研究

目的　研究氯碘羟喹预处理干扰锌代谢对癫痫小鼠的癫痫易感性、学习记忆和海马神经元损伤的影响。 方法　72只CD-1小鼠随机分为对照组、癫痫组和氯碘羟喹组。氯碘羟喹组腹腔注射氯碘羟喹10 mg·kg-1·d-1,对照组和癫痫组给予等量生理盐水。连续注射1周后,癫痫组和氯碘羟喹组腹腔注射匹罗卡品300 mg/kg建立癫痫模型,对照组予以等量生理盐水。在给予匹罗卡品后90 min内观察动物的癫痫发作率、潜伏期和发作级别;第7 天取材,利用金属自显影技术结合图像分析观察锌在海马的分布变化,尼氏染色观察海马神经元形态变化,酶联免疫吸附法检测血清和脑脊液中S-100β和神经元特异性烯醇化酶（neuronspecificenolase, NSE）蛋白的表达;1个月后利用Mirror水迷宫实验检测逃避潜伏期和目标象限停滞时间。 结果　与癫痫组相比,氯碘羟喹组的癫痫发作率和发作级别明显增高,潜伏期明显缩短;海马锌含量明显降低;神经元数量显著增多,损伤减轻;血清和脑脊液中的S-100β和NSE蛋白水平明显降低;逃避潜伏期缩短,目标象限停滞时间延长,P<0.01。 结论　氯碘羟喹能减轻锌在癫痫小鼠海马的聚集,提高癫痫易感性,抑制神经元的损伤,提高小鼠学习记忆功能。     

氯碘羟喹抑制癫痫小鼠海马神经元凋亡的实验研究

目的研究氯碘羟喹对癫痫持续状态模型小鼠海马神经元凋亡的影响。方法 18只CD1小鼠随机分为3组:对照组(Con)给予腹腔注射生理盐水;癫痫持续状态组(SE)给予腹腔注射匹罗卡品(300mg/kg);氯碘羟喹治疗组(Cli)在腹腔注射匹罗卡品(300mg/kg)后30min给予腹腔注射氯碘羟喹(15mg/kg·d)。每天观察动物的行为学变化,于7d后取海马组织。应用尼氏染色和TUNEL染色检测氯碘羟喹对癫痫持续状态小鼠海马神经元凋亡的影响。结果癫痫持续状态组动物萎靡,自发性痫性发作频繁;氯碘羟喹治疗组动物萎靡状态明显改善,自发性痫性发作次数明显减少。尼氏染色和TUNEL染色发现,与癫痫持续状态组相比,氯碘羟喹治疗组能改善海马神经元的细胞损伤,降低凋亡阳性细胞百分比(<0.01)。结论氯碘羟喹能抑制癫痫持续状态小鼠海马神经元凋亡。     

β-蜕皮甾酮对匹罗卡品致痫小鼠海马神经元凋亡相关基因表达的影响

目的观察β-蜕皮甾酮(20-hydroxyecdysone)对小鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响。方法将30只CD-1小鼠随机分成正常组、造模组、β-蜕皮甾酮治疗组。用锂-匹罗卡品腹腔注射法诱导小鼠癫痫持续状态,造模成功后72h,采用尼氏染色观察各组小鼠海马区神经元数目和形态的变化,免疫组化法和Westernblot法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax的表达。结果模型组小鼠CA1区部分细胞肿胀,锥体细胞排列紊乱,细胞形态不规则,药物治疗组较模型组细胞数目增多,细胞排列有所改善。免疫组化和Westernblot结果可见细胞凋亡因子Bax表达模型组高于正常对照组,药物治疗组低于模型组;抑制细胞凋亡因子Bcl-2表达模型组高于正常对照组,药物治疗组高于模型组。结论β-蜕皮甾酮(20-HE)可能通过降低Bax,提高Bcl-2蛋白的表达,减轻癫痫发生后对大脑的损害。     

氯碘羟喹对癫痫小鼠海马神经元凋亡和学习记忆功能的保护作用

目的 研究氯碘羟喹对癫痫小鼠海马神经元凋亡和学习记忆功能的保护作用。 方法 采用匹罗卡品癫痫小鼠模型。实验动物根据给药方式分3组：对照组（生理盐水）、癫痫组（匹罗卡品+生理盐水）、氯碘羟喹组（匹罗卡品+氯碘羟喹）。金属自显影技术观察海马锌的分布;尼氏染色观察海马神经元形态和数量;免疫印迹检测海马Bcl-2和Bax表达;ELISA检测海马Caspases-9和Caspases-3表达;动物行为学观察自发性癫痫发作次数、发作级别和发作持续时间;T迷宫和Y迷宫检测学习记忆能力。 结果 氯碘羟喹组小鼠海马锌显著减少;神经元损伤减轻,细胞数量增多;Bcl-2表达增多,Bax、Caspases-9和Caspases-3表达减少,Bcl-2/Bax值增大;癫痫发作次数减少,发作级别降低,发作持续时间缩短,学习记记能力增强（P<0.01）。 结论 氯碘羟喹能保护小鼠海马神经元,改善学习记忆功能。     

氯化锂匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马神经元GPER1表达的变化

目的:观察G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)在癫痫大鼠海马神经元中表达的变化。方法:成年雄性SD大鼠分成对照组(control)和癫痫组(epilepsy),利用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品方法制备癫痫模型,分别在1、2、3、7、14 d和28 d,利用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,利用尼氏染色观察大鼠海马神经元形态变化;利用免疫组化和Western Blot技术观察GPER1在海马的表达。结果:水迷宫结果显示,与Control组相比,造模14 d的大鼠逃逸潜伏时间明显延长(P 0. 05),穿越目标象限区域的次数较Control组显著降低(P 0. 05)。尼氏染色结果显示:与Control组相比,造模1 d和2 d的大鼠CA1及CA3区锥体细胞层细胞及DG区颗粒细胞层细胞体积缩小,细胞间距增加,尼氏染色减弱;造模3和7 d的大鼠细胞体积明显缩小,细胞间隙明显增大,尼氏染色加深,CA1及CA3细胞数量明显减少;造模14 d和28 d的大鼠神经元体积逐渐向正常恢复,但仍较Control组小。免疫组化结果显示:GPER1免疫阳性细胞以海马锥体细胞和齿状回颗粒细胞为主,主要分布在细胞膜。与Control组相比,造模2 d和3 d的大鼠海马CA1及CA3区GPER1表达增加(P 0. 05),7 d后增加最明显(P 0. 01),14、28 d后表达下降;在DG区,造模3 d及7 d的大鼠GPER1表达增加(P 0. 05),14 d后表达下降(P 0. 05),28 d大鼠无显著差异。Western Blot结果显示:与Control组比较,造模2 d和3 d的大鼠GPER1相对表达量开始增高,7 d后明显增高(P 0. 05),14 d及28 d的大鼠表达降低。结论:GPER1在海马神经元的表达随着神经元损伤的加重而增高,随着神经元损伤的恢复逐渐降低,提示其表达变化与神经元的损伤与修复有关。     

匹罗卡品致痫大鼠脑内NF-κB及COX-2的表达

为探讨癫痫大鼠脑内核转录因子NF-κB及炎性因子环氧化酶-2(COX-2)的表达,本研究采用匹罗卡品(30mg/kg)诱导大鼠癫痫发作后,通过免疫组织化学和Westernblot方法,对癫痫大鼠脑内,主要是海马NF-κB和COX-2的表达进行了观察。结果显示:匹罗卡品诱导大鼠癫痫发作后,大鼠脑内尤其是海马神经元的胞浆和胞核内NF-κBp65免疫反应阳性增强,核移位增多,蛋白产物表达增多;COX-2免疫反应阳性明显增强,蛋白产物表达增多。以上结果提示,癫痫发作后可引起核转录因子NF-κB的活化及炎性因子COX-2的高表达。     

马桑内酯致痫大鼠海马神经元丢失及化学性质的研究

为观察癫痫发作过程海马神经元丢失细胞的主要死亡方式 ,用马桑内酯建立慢性致痫大鼠模型 ,以 Nissl染色、免疫组化、TUNEL法以及后二者相结合的技术 ,对海马神经元及其中的抑制性神经元的丢失进行了分区观察、统计、分析。结果发现 :致痫组海马各区神经元较对照组明显减少 ,不同区域减少程度不同 ,以齿状回减少最为明显 ;免疫组化结果显示 ,致痫组的抑制性神经元 GABA-IR神经元、PV-IR神经元、CB-IR神经元在海马各区有不同程度的减少 ,其中 GABA-IR神经元减少最明显。在海马各区所有丢失的神经元中 ,三种抑制性神经元所占的比例不同 ;并在海马各区均可见到 TUNEL -GABA、TUNEL-PV、TU NEL-CB双重反应阳性神经元。提示 :马桑内酯所致的癫痫发作 ,可引起海马神经元丢失 ,且不同区域丢失的程度不同 ,丢失的神经元可能以凋亡方式为主 ;海马抑制性神经元 GABA-IR、PV-IR、CB-IR神经元在癫痫发作过程中也有不同程度的丢失 ,丢失很可能也是以凋亡形式为主     

低频经颅磁刺激对锂-匹罗卡品致痫大鼠痫性发作的影响

目的：探讨低频经颅磁刺激（TMS）对癫痫大鼠痫性发作的影响。方法：对50只大鼠进行TMS,根据不同刺激频率将大鼠随机分为5个组（每组10只）：0Hz组（假刺激组）、0．3Hz组、0．5Hz组、0．8Hz组、1．0Hz组,分组进行低频重复TMS预处理后,制作氯化锂一匹罗卡品癫痫模型,观察各组造模后70min内痼性发作的潜伏期和痫性发作行为表现。结果：0．3Hz组、0．5Hz组、0．8Hz组及1．0Hz组的痫性发作潜伏期[分别为（16．30±3．10）min、（18．60±3．50）min、（16．40±3．60）min和（15．90±4．10）mini,均比0Hz组[（12．80±3．20）mini延长,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,其中0．5Hz组最长;0．5Hz组大鼠出现的痫性行为表现为点头和（或）甩尾、须动和（或）头面抽动、前肢和（或）后肢抽动、全身抽动、窜动的次数均比0．3Hz组、0．8Hz组、1．0Hz组少,整体发作程度轻,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：适量的低频的TMS可延缓癫痫发作潜伏期、减少癫痫发作次数以及减轻癫痫发作程度,具有抗痢作用。     

雄激素对快速老化小鼠海马神经元凋亡及超微结构的影响

目的:探讨雄激素对快速老化小鼠海马神经元凋亡及超微结构的影响.方法:7月龄雄性快速老化小鼠(SAMP8)随机分为假手术对照组、去势组及去势 雄激素补允治疗组.十一酸睾酮(TU)剂量为37.4 mg·kg-1·15 d-1.雄激素补充治疗45 d后,通过Nissl染色观察海马神经元数量和形态的变化;TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;透射电镜观察超微结构的改变.结果:去势组海马神经元数量明显减少,凋亡数量和凋亡率显著增加,超微结构病理变化严重.雄激素补充治疗后,观察结果与假手术对照组相比无统计学意义.结论:去势后雄激素缺乏可导致海马神经元异常凋亡增加,数目减少,结构受损.雄激素补充治疗可减轻神经元损伤,这可能是其改善SAMP8小鼠学习记忆功能作用机制之一.     

黄体酮对戊四唑致痫大鼠海马内GABA能神经元影响的形态学研究

本实验采用免疫组织化学方法,研究了黄体酮对戊四唑(PTZ)致痫大鼠的发作情况和海马内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的影响,旨在从形态学角度探讨黄体酮对抗癫痫作用的可能机制。实验中采用成年去卵巢(OVX)雌性SD大鼠,随机分成空白对照、实验对照和实验给药3组。空白对照组和实验对照组经腹腔注射生理盐水(NS),实验给药组经腹腔注射黄体酮,每天一次。3 d后,空白对照组经腹腔注射NS,实验对照和实验给药组经腹腔注射PTZ致痈。注射PTZ 1 h后,灌流固定,取脑,做振动切片。取含背侧海马的脑片,ABC法免疫组化染色。图象分析计数海马齿状回门区内GABA免疫阳性细胞数。结果:(1)实验给药组大鼠均未出现癫痫发作;(2)三组间齿状回门区内GABA免疫阳性细胞数存在显著差异(P<0.01);实验给药组的GABA免疫阳性细胞数明显增加(P<0.05)。结果显示,黄体酮可对抗PTZ致痫的行为发作和门区GABA能中间神经元的损伤,并提示黄体酮可能具有增强GABA能系统的作用。     

氯碘羟喹对脑缺血沙土鼠海马神经元的保护作用

目的研究金属螯合剂氯碘羟喹(Clioquinol,CQ)对沙土鼠全脑缺血再灌注后海马CA3区锥体细胞的保护作用。方法无创动脉夹夹持沙土鼠双侧颈总动脉制备脑缺血模型,腹腔注射CQ 3d,应用金属自显影技术检测CQ对沙土鼠海马游离锌离子的螯合作用,TUNEL和caspase-3原位杂交分析CQ对脑缺血沙土鼠海马神经元凋亡的影响。结果脑缺血CQ处理组沙土鼠海马金属自显影阳性反应明显低于脑缺血溶剂对照组,脑缺血CQ处理组沙土鼠海马TUNEL和caspase-3阳性细胞数量明显低于脑缺血溶剂对照组。结论 CQ对沙土鼠海马游离锌离子有明显的螯合作用,可能与其对脑缺血再灌注损伤的保护作用有关。     

抑制JNK信号通路对致痫后海马神经元损伤的保护作用

目的：探讨抑制C—Jun氨基末端激酶通路（JNK）对减轻癫痫持续状态（SE）大鼠海马神经元损伤的作用和机制。方法：建立氯化锂-匹罗卡品SE模型,其中24只鼠为单纯模型组;另24只鼠为抑制组,即在注射氯化锂-匹罗卡品之前,预先用特异抑制剂SP600125作侧脑室注射。另用6只鼠作正常对照,不制模,用生理盐水代替氯化锂一匹罗卡品,用二甲基亚砜（DMS0）溶液代替SP6001250。3组都在不同时间点用免疫组化法检测海马CA1区磷酸化JNK（P—JNK）的表达,并将抑制组与模型组、对照组相比较,观察组织病理学改变。结果：正常对照组JNK极少活化;模型组在SE后30min时点JNK在海马神经元强烈激活,2h时达到高峰,6h后明显减少;抑制剂组JNK激活明显减少。模型组海马CA1区可见到神经元发生变性和坏死,抑制剂组这种变化则较轻。结论：SE后JNK信号转导（transduction）通路被激活,并可致发作后海马神经元损伤;抑制剂SP600125则抑制JNK信号转导通路,对海马神经元起一定保护作用。     

匹罗卡品诱发癫痫持续状态大鼠模型的改良和鉴定

目的 对匹罗卡品诱发的癫痫持续状态大鼠模型进行改良和鉴定.方法 SD大鼠(6 ～ 8周,雌性)注射氯化锂、丁溴东莨菪碱、匹罗卡品诱发癫痫持续状态,分别在急性期和慢性自发癫痫形成期接受脑电监测和海马病理学检查.结果 行为学上急性期匹罗卡品组(PISE)出现Racine分级的IV级或以上发作,慢性自发癫痫形成期每周可见自发...     

癫痫大鼠海马内凋亡神经元超微结构的研究

目的　为揭示海人酸癫痫模型海马内神经元的死亡机制。　方法　选用海人酸诱导的癫痫大鼠模型,对海马内凋亡神经元的超微结构进行观察。　结果　电镜下,实验组大鼠海马齿状回门区和ＣＡ１区内可见散在的凋亡神经元,凋亡神经元主要表现为核周染色体的聚集和凝结成块,其核膜表现为皱缩和扭曲,在晚期凋亡的神经元有时可见核膜破裂。凋亡神经元胞浆内的细胞器保持完整。　结论　凋亡参与了海人酸诱发癫痫发作后海马内神经元的死亡过程。     

甘松对青霉素致痫大鼠行为学表现及脑电图的影响

目的：观察甘松对青霉素致痫大鼠的疗效。方法：将50只Wistar大鼠随机分为5组,每组10只,分别为正常对照组（Ⅰ组）和4个青霉素致痼模型组,即单纯模型组（Ⅱ组）、用甘松预处理组（Ⅲ组）、用丙戊酸钠预处理组（Ⅳ组）和用甘松合并丙戊酸钠预处理组（Ⅴ组）。甘松预处理组灌服甘松62．5mg／（kg·d）,丙戊酸钠预处理组灌服丙戊酸钠0．64mg／（kg·d）,甘松合并丙戊酸钠预处理组灌胃剂量为甘松62．5mg／（kg·d）加丙戊酸钠o．32nag／（kg·d）,正常对照组和单纯模型组灌服等体积的生理盐水。每组大鼠每天灌胃一次,连续14d。灌胃第14天除正常对照组外其余4组大鼠腹腔注射青霉素500万U／kg诱导大鼠急性癫痫发作,观察和比较各组大鼠行为及脑电图变化。结果：与单纯模型组比较,甘松预处理组、丙戊酸钠预处理组、甘松合并丙戊酸钠预处理组可延长癫痫大鼠惊厥发作潜伏期,明显减轻大鼠痫性发作程度,改善大鼠大脑皮层脑电图,其中以甘松合并丙戊酸钠预处理组最为明显。结论：甘松对青霉素致痫大鼠具有一定的抗癫痫作用,与丙戊酸钠联用有协同作用。     

马桑内酯对大鼠海马神经元细胞内游离钙离子浓度的影响

以荧光探针Fluo-3/AM为胞浆内游离钙特异性指示剂,通过激光扫描共聚焦显微镜动态监测急性分离SD大鼠(出生后7～14 d)海马神经元细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的变化情况,以了解钙离子及钙通道在癫痫发病中的作用,探讨马桑内酯(coriaria lactone, CL)调节神经细胞内钙稳态的机理.实验发现,CL能使急性分离大鼠海马神经元[Ca2 ]i增加;nifedipine和低浓度NiCl2虽可延迟,但不能完全阻断这种作用.除促使电压依赖的T-、L-型钙离子通道开放外,CL尚可通过其他途径增加海马神经元内[Ca2 ]i,改变细胞兴奋性而致痫.     

银杏叶对小鼠海马神经元超微结构的影响及抗衰老作用

目的 研究银杏叶提取物对小鼠海马神经元超微结构的影响及抗衰老作用。方法 取小鼠海马作实验材料，用定量体视学方法观察两组小鼠在不同时期海马神经元胞体，胞核，核仁等形态参数的变化，然后对结果用逐步回归的方法进行分析。结果 随着鼠龄的增加，细胞核体积逐渐减少。神经元损失较多，而银杏叶组上述变化较不明显。结论 银杏叶提取物可以影响小鼠海马神经元的超微结构，具有抗衰老作用。     

阿米洛利对癫痫大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨阿米洛利对癫痫(epilepsy)大鼠海马神经元损伤的保护作用及作用机制.方法:40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(control)、癫痫组(epilepsy)、左乙拉西坦治疗组(levetiracetam)和阿米洛利治疗组(amiloride),每组各10只.利用氯化锂-匹鲁卡品法建立癫痫大鼠模型,ami...     

锂-匹罗卡品致颞叶癫痫小鼠模型的建立及苔藓纤维出芽的实验研究

目的探讨腹腔注射锂-匹罗卡品建立小鼠颞叶癫痫(EP)模型方法及其行为学改变与苔藓纤维出芽的关系。方法小鼠腹腔注射锂-匹罗卡品建立颞叶EP模型,应用ZnSe金属自显影技术(AMG)检测3d、7d、15d、30d及60d的苔藓纤维出芽情况。结果锂-匹罗卡品注射后,约40%的小鼠呈现癫痫持续状态,并出现慢性自发发作。形态学检查发现海马齿状回分子层苔藓纤维出芽,并且随着时间的延长,苔藓纤维出芽逐渐增多。结论腹腔注射锂-匹罗卡品小鼠模型是一种理想的颞叶EP动物模型,苔藓纤维出芽可作为判断SE模型是否成功的形态学标准。     

海马内微量注射硫酸镁对马桑内酯诱发大鼠痫样放电的影响

目的和方法:采用皮层应用或海马内注射马桑内酯的方法致痫大鼠,用钙离子选择性微电极检测了致痫动物皮层、海马细胞外Ca2+浓度的变化,观察了海马CA2区注射硫酸镁对致痫大鼠脑电图和皮层、海马诱发电位的影响.结果:马桑内酯致痫时,皮层、海马细胞外Ca2+浓度分别降低了0.61 mmol·L-1和0.74 mmol·L-1,海马内注射硫酸镁能明显地抑制致痫动物皮层、海马诱发电位和脑电图痫样放电.结论: 镁盐的上述作用可能与抑制Ca2+流入神经元内有关.