CISD2在乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭的影响

目的检测CDGSH铁硫结构域2 (CDGSH iron sulfur domain 2, CISD2)在乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭的影响。方法选取46乳腺癌组织及10例对应的癌旁正常组织,免疫组织化学方法与Western blot方法检测乳腺癌和癌旁组织中CISD2蛋白的表达。应用化学合成小干扰RNA技术沉默人乳腺癌MCF-7细胞中CISD2基因的表达,Western blot实验验证基因沉默效率。采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后MCF-7细胞的增殖和侵袭情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中CISD2蛋白表达的平均光密度值明显上调, siRNA能够明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞CISD2的表达。CISD2基因沉默后,人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力和侵袭能力显著降低,P0.01。结论 CISD2可能是治疗乳腺癌的潜在靶点。     

人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及迁移能力的影响

目的探讨人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及迁移能力的影响。方法将人骨肉瘤细胞U2-OS分为阴性对照组(Control组)和实验组(CK药物组),MTT方法与CCK-8方法检测细胞活性及增殖能力,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测侵袭相关蛋白MMP-9及MMP-2的表达。结果CK能够显著降低U2-OS细胞体外活性及生存率(P0.05);细胞划痕实验及Transwell法证明CK可抑制U2-OS体外迁移能力(P0.05);CK处理后U2-OS细胞的MMP-9及MMP-2表达水平下调(P0.05)。结论人参皂苷CK对骨肿瘤细胞U2-OS的抑制作用与下调MMP-9及MMP-2表达水平相关。     

低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖

目的:阐述低强度脉冲超声（LIPUS）对骨肉瘤细胞增殖的调控作用和机制,探索低强度脉冲超声治疗骨肉瘤的潜在价值。方法:在时间梯度实验中,将MG-63细胞分为LIPUS组和Control组,对LIPUS组加载1、6、12、18和24 h的低强度脉冲超声,CCK-8检测各组细胞增殖活力,Western Blots检测24 h低强度脉冲超声对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。在机制实验中,将MG-63细胞分为Control组、LY294002组、LIPUS组和LIPUS+740Y-P组,对各组施加对应的干预措施后使用CCK-8检测各组细胞增殖能力,Western Blots检测各组增殖相关蛋白PCNA和Cyclin D1的表达情况。所有数据重复3次后使用单因素方差分析统计。结果:加载低强度脉冲超声18和24 h后,LIPUS组的细胞增殖活力较对照组显著降低（P<0.010, P<0.001）,这些结果表明LIPUS可抑制MG-63细胞的增殖。LIPUS可抑制p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的表达（P<0.001）,即抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,而不影响PI3K、AKT和mTOR的表达。使用LIPUS就如同使用PI3K的抑制剂（LY294002）一样,可以抑制MG-63细胞的增殖（P<0.001）,在使用PI3K的激动剂740Y-P后,可逆转LIPUS对MG-63细胞增殖的抑制（P<0.001）。这些结果表明LIPUS可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖。结论:低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖,它可能是单独或联合放化疗治疗骨肉瘤的有效方法之一。     

沙利度胺抑制骨肉瘤细胞U2OS迁移和侵袭

目的观察沙利度胺对人骨肉瘤细胞U2OS迁移和侵袭的作用,并初步探讨其作用机制。方法分别用不同浓度沙利度胺处理人骨肉瘤细U2OS,采用划痕实验检测沙利度胺对细胞迁移的影响,Transwell小室检测沙利度胺对细胞侵袭的影响,q RT-PCR检测不同浓度沙利度胺作用于细胞后VEGFA、HIF1α和OPN基因的变化,蛋白免疫印迹检测沙利度胺对细胞VEGF、HIF1和OPN蛋白的作用。结果 50、100、200μg/m L沙利度胺作用于U2OS后,划痕实验中沙利度胺组细胞迁移距离明显少于对照组,沙利度胺作用12 h,其迁移距离分别为24 h对照组的(62.36±12.41)%、(57.89±11.23)%和(49.47±6.90)%;作用24 h,其迁移距离分别为24 h对照组的(62.36±12.41)%、(57.89±11.23)%和(49.47±6.90)%。侵袭实验中显示沙利度胺组穿膜细胞数量对比对照组减少,其比率分别为(83.49±2.10)%、(70.64±2.86)%和(50.46±1.59)%。q RTPCR显示50、100、200μg/m L沙利度胺作用于U2OS 24 h后VEGFA、HIF-1α和OPN表达与对照组比较降低,VEGFA m RNA表达量分别为(2.50±0.25)%、(11.75±0.2)%和(6.51±0.01)%;HIF-1αm RNA表达量分别为(34.33±0.42)%、(46.33±1.06)%和(42.60±1.46)%;OPN表达量分别为(86.33±1.8)%、(52.07±1.29)%和(40.06±1)%。蛋白免疫印结果显示VEGFA、HIF-1α和OPN表达与对照组比较降低:与对照组VEGFA表达量1.06±0.06相比,药物组分别为0.88±0.01、04±0.02和0.62±0.01;与对照组HIF-1α表达量0.71±0.01对比,药物组分别为0.69±0.01、0.49±0.01和0.39±0.01;与对照组OPN表达量1.07±0.01对比,药物组分别为1.04±0.01、0.96±0.01和0.6±0.01。结论沙利度胺抑制骨肉瘤细胞U2OS迁移侵袭,其机制与降低细胞内VEGFA、HIF-1α和OPN有关。     

下调HMGA2基因表达对改善骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验研究

目的:研究HMGA2表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中的作用,为基因靶向治疗提供理论依据。方法:采用基于DNA的shRNA表达载体HMGA2-shRNA,稳定转染人骨肉瘤U2OS细胞,下调其HMGA2表达水平,并应用RT-PCR技术检测其对HMGA2基因的沉默效果;经Cell Counting Kit-8(CCK8)测定、Hoechst33342染色荧光显微镜观察及Boyden小室法分别检测细胞增殖、凋亡及迁移情况;实时定量RT-PCR检测mRNAs表达水平。结果:稳定转染靶向HMGA2的shRNA可特异性下调U2OS细胞HMGA2 mRNA表达水平;其作用结果使细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,自发凋亡率及Caspase 3和Caspas 9基因表达水平显著升高。结论:HMGA2基因异常表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中起重要作用,靶向HM-GA2的基因治疗可能为骨肉瘤治疗带来新希望。     

沉默TRIM23基因抑制骨肉瘤细胞的增殖

目的 探讨TRIM23基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响.方法 应用Western blot实验检测TRIM23基因在骨肉瘤细胞中的表达;应用shRNA质粒转染骨肉瘤细胞系U2OS,通过MTT与平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;应用Westernblot实验检测U2OS细胞Akt/P53/P21通路的表达改变.结果 TRI...     

镁合金对人骨肉瘤细胞U2OS生物学行为影响及机制研究

目的 探讨镁合金(Mg-Ag、Mg-Cu)对骨肉瘤细胞U2OS增殖、侵袭及迁移能力影响的机制.方法 腐蚀实验评价Mg、Mg-Ag与Mg-Cu合金的降解速率;不同材料(Mg、Mg-Ag与Mg-Cu)浸提液处理组细胞的MTT及平板克隆形成实验检测骨肉瘤细胞增殖能力;Transwell侵袭与迁移实验评估细胞侵袭增殖能力;We...     

吴茱萸碱抑制人骨肉瘤HOS细胞的增殖并促进其凋亡

目的探讨吴茱萸碱对骨肉瘤HOS细胞株增殖凋亡的影响及其可能的机制。方法通过利用0、1、2、4、8μmol/L浓度吴茱萸碱处理HOS细胞24、48 h后,利用CCK-8法检测HOS细胞活性。用3μmol/L的吴茱萸碱处理HOS细0、24、48 h后,利用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒染色观察HOS细胞细胞核染色质的形态。用3μmol/L吴茱萸碱处理0、24、48 h后,利用流式细胞仪检测HOS细胞的凋亡率。3μmol/L吴茱萸碱处理0、24、48 h后,Westernblot检测HOS细胞内Caspase 3、Bcl-2蛋白的表达变化情况。结果 2~8μmol/L的吴茱萸碱可抑制HOS细胞的细胞活性,抑制其增殖,呈剂量-时间依赖性。8μmol/L处理48 h后细胞存活率为0.453±0.071,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Hoechst-33258染色观察可见凋亡细胞染色质颜色发白,呈固缩状或者碎裂状染色质,染色质着色不均匀,核形态各异。流式细胞仪检测3μmol/L吴茱萸碱处理HOS细胞0、24、48 h后的凋亡率分别为(5.32±1.62)%、(10.85±1.49)%和(12.47±0.59)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。吴茱萸碱可上调HOS细胞内的Caspase 3蛋白的表达,同时下调Bcl-2蛋白的表达,与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吴茱萸碱可降低人骨肉瘤HOS细胞的细胞活性,抑制其体外增殖,诱导其发生凋亡,其机制可能与其上调Caspase 3蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

siRNA沉默TAp73对骨肉瘤细胞的增殖和侵袭力的作用研究

目的　探讨通过siRNA沉默细胞TAp73蛋白表达对骨肉瘤Saos-2细胞的增殖、周期以及侵袭力的作用研究。 方法 以骨肉瘤Saos-2细胞系为研究对象,设计合成沉默TAp73的siRNA片段,转染入Saos-2细胞,用Western-blot法检测干扰后TAp73蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力。 结果 Western-blot检测显示siRNA对TAp73蛋白表达有显著下调作用;CCK-8检测实验组细胞增殖明显(P<0.05);细胞周期检测显示细胞处于DNA合成期（S期）的细胞比例上升;穿过人工基底膜的细胞数量也明显增加,由（84.17±1.35）增加为（92.67±2.80 ）(P<0.05)。 结论 抗癌基因TAp73在骨肉瘤的增殖、凋亡和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为控制肿瘤增殖和转移的关键性因素。     

骨肉瘤细胞中Plk1的表达和定位

目的构建真核表达载体GFP-hPlk1并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以pcDNA3.1-hPlk1为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk1基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用激光共聚焦扫描显微镜观察GFP-hPlk1在U2OS细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hPlk1蛋白。结果 hPlk1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hPlk1融合蛋白表达,分子质量Mr约为93 000Da。GFP-hPlk1在骨肉瘤细胞U2OS中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk1蛋白。结论成功地构建了GFP-hPlk1真核表达质粒,并在骨肉瘤细胞U2OS中表达。     

miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖

 目的:探讨过表达微小RNA（microRNA-7,miRNA-7）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,也称Akt）通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降（P<0.01）;real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论: 过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。     

BTG2 inhibits the proliferation and metastasis of osteosarcoma cells by suppressing the PI3K/AKT pathway

B cell translocation gene 2 (BTG2) has been reported to be a potential tumor suppressor in many types of tumors. However, the roles and molecular mechanisms of BTG2 in osteosarcoma progression are still unknown. In this study, we investigated the role of BTG2 in proliferation and metastasis of osteosarcoma and the underlying mechanism. BTG2 expression levels were measured in fresh osteosarcoma tissues and cell lines. The effects of BTG2 on cell proliferation, migration and invasion were explored by MTT, transwell assays, western blot, and in vivo tumorigenesis in nude mice. We found that BTG2 was down-regulated in human osteosarcoma tissues and cell lines. Overexpression of BTG2 inhibited the proliferation and migration/invasion of human osteosarcoma cells in vitro, it also markedly inhibited xenograft tumor growth in vivo. Furthermore, BTG2 significantly decreased the expression of phosphorylated PI3K and AKT in osteosarcoma cells. Taken together, our data indicate that BTG2 might suppress the tumor growth and metastasis via PI3K/AKT signaling pathway, implying that BTG2 may serve as a potential molecular target for the treatment of osteosarcoma.     

Pentoxifylline inhibits hepatic stellate cells proliferation via the Raf/ERK pathway

Pentoxifylline (PTX), which is a xanthine derivative, is a well-known suppressor of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) production in inflammatory cells and has also been shown to inhibit collagen synthesis in hepatic stellate cells (HSCs) in vitro. The present study aimed to evaluate the effects of PTX on proliferation in HSCs as mediated by the Raf/MEK/extracellular-signal-regulated kinase (ERK) signaling pathway. The rat hepatic stellate cell line T6 and activated primary rat HSCs were used in this study. The proliferation rate of the cells treated with 1 mM PTX significantly decreased compared with that of the control in T6 cells (78.3 ± 6.03% at 12 h, 61.0 ± 7.55% at 24 h, and 44.7 ± 2.08% at 48 h, p < 0.05). PTX (1 mM) also decreased the fraction of the HSC population in the S and G2/M-phases of the cell cycle in primary activated rat HSCs. The Raf-1 inhibitor GW5074 and the ERK inhibitor U0126 had inhibitory effects that were similar to those of PTX on HSC proliferation. In addition, PTX inhibited the phosphorylation of Raf-1 (p-Raf-1) and ERK (p-ERK) in a dose- and time-dependent manner in HSCs. These data provide evidence that PTX suppresses HSC proliferation via the Raf/MEK/ERK pathway.     

Cyclooxygenase-2 inhibitors induce anoikis in osteosarcoma via PI3K/Akt pathway

COX-2, an inducible enzyme, is associated with inflammatory diseases and carcinogenesis. Overexpression of COX-2 occurs in many human malignancies, including osteosarcoma. In our study, we reported that Celecoxib, a cyclooxygenase-2 inhibitor, induces apoptosis in human osteosarcoma cell line MG-63 via down-regulation of PI3K/Akt. PI3K/Akt plays an essential role in the cell/extracellar matrix (ECM) and cell/cell adhesion. We hypothesize that COX-2 inhibitors induce anoikis in osteosarcoma via PI3K/Akt, resulted in lack of correct attachment and the down-regulations of β-catenin, TrkB and E-cadherin, which play an essential role in the cell/extracellar matrix (ECM) and cell/cell adhesion. Meanwhile, apoptosis also be disclosed, such as DNA fragments and apoptotic bodies, activation of caspase-8, 9 and cleavage of PARP. With wortmannin, a specific PI3K inhibitor can simulate the effect of COX-2 inhibitors. If our hypothesis is correct, COX-2 inhibitors could cut down the occurrence of metastasis and facilitate the patient who may benefit from addition of COX-2 inhibitors to standard cytotoxic therapy.     

Gab2在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及意义

目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Gab2)在人骨肉瘤细胞系中的表达及其与人骨肉瘤细胞侵袭转移的关系。方法:应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染给人骨肉瘤U2-OS细胞,采用Western blotting和RT-PCR法检测转染后Gab2的蛋白和mRNA表达水平;体外细胞趋化运动实验和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:Gab2在人骨肉瘤U2-OS细胞系中高表达,且转染Gab2 siRNA后的细胞(Si Gab2/U2-OS)中Gab2蛋白及mRNA的表达水平低于转染scramble siRNA细胞(Scr/U2-OS)和U2-OS;趋化运动实验发现在10μg/L表皮生长因子(EGF)的诱导下Si Gab2/U2-OS细胞的迁移能力较U2-OS和Scr/U2-OS细胞明显下降,差异有统计学意义(P0.01);Si Gab2/U2-OS细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量均比Scr/U2-OS细胞和U2-OS细胞少,Si Gab2/U2-OS细胞的体外侵袭能力显著降低(P0.01)。结论:利用siRNA干扰技术降低Gab2的表达对人骨肉瘤U2-OS细胞的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。