GHRP-6对心衰模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号通路调节作用

目的:观察GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心脏功能的调节作用和其对PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路的影响。方法:建立GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞的保护模型,比较PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473在正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内的表达。流式细胞术(FCM)检测模型组与正常对照组和假手术组大鼠心肌细胞的凋亡率。结果:在大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内,模型组大鼠心肌细胞的PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473阳性表达量较正常对照组和假手术组显著降低(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞的分别比较,GHRP-6治疗组大鼠心肌细胞的阳性表达量显著升高(P<0.05)。模型组大鼠心肌细胞的Caspase-9和Caspase-3阳性表达量较正常对照组和假手术组显著增高(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组分别比较,GHRP-6治疗组阳性表达量显著降低(P<0.05)。FCM结果显示,模型组大鼠心肌细胞与正常对照组和假手术组比较,凋亡率显著升高(P<0.05);GHRP-6治疗组与模型组比较,凋亡率明显降低(P<0.05)。相关程度分析显示,PI3K p110α与Akt p-Thr308、p-Ser473蛋白阳性表达量均呈中度正相关;Akt p-Thr308、p-Ser473与Caspase-9蛋白阳性表达量均呈中度负相关;Caspase-9与Caspase-3蛋白阳性表达量呈高度正相关。结论:GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9/Caspase-3信号转导通路,抑制心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡,是其实现心肌细胞保护作用机制之一。     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

miR-124基于PI3K/Akt通路对脓毒症大鼠肾组织炎症和氧化应激的影响

目的探讨微小RNA-124(miR-124)基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)通路对脓毒症大鼠肾组织炎症和氧化应激的影响。 方法将72只SD大鼠均分为假手术组(不做任何处理)、模型组(造模成功后不做任何处理)、miR-124-agomir组(miR-124高表达腺病毒载体处理)、agomir-NC组(阴性对照空载体处理)、LY294002组(PI3K/Akt抑制剂处理)、miR-124-agomir+LY294002组(miR-124高表达腺病毒载体和PI3K/Akt抑制剂处理)。除假手术组外,其余各组均采用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症肾损伤模型,并于造模成功后按各组相应给药处理。观察各组大鼠行为变化、肾组织炎症细胞浸润现象；检测各组大鼠肾功能指标、肾组织细胞凋亡、肾组织miR-124、PI3K/Akt通路蛋白表达水平、氧化应激相关蛋白、炎症因子及凋亡相关蛋白的表达。 结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织坏死及炎症细胞浸润现象严重,血清肌酐和血尿素氮水平、细胞凋亡率、磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、磷酸化核转录因子(p-NF)-κB p65/NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α、NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白、Caspase-3表达升高(P＜0.05),miR-124、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化氢酶蛋白表达降低(P＜0.05)。与模型组比较,miR-124-agomir组大鼠肾组织上述指标变化明显改善(P＜0.05)；LY294002组大鼠肾组织上述指标变化进一步加重(P＜0.05)。miR-124-agomir+LY294002组大鼠逆转miR-124-agomir组上述指标(P＜0.05)。 结论miR-124通过抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡来改善脓毒症大鼠肾损伤进程,其机制可能与激活PI3K/Akt通路,诱导Nrf2/HO-1途径活化有关。     

晚期糖基化终末产物抑制大鼠外周血单个核细胞及成骨细胞增殖的作用机制

目的: 探索核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)干预大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及下颌成骨细胞(osteoblasts,OB)后的作用机制,为进一步研究糖尿病所致牙周组织炎症的临床治疗提供一定的实验基础和理论依据。方法: 采用经典的制备方法获得AGEs,体外分离培养大鼠OB、PBMCs。应用CCK-8活力测试检测AGEs不同浓度、不同时间对细胞活力的影响。采用Western blot及qRT-PCR检测NF-κB、PI3K/PKB以及MAPK信号通路相关基因的表达变化。结果: 体外成功分离并培养出PBMCs和OB,PBMCs和OB的细胞活力与AGEs的作用浓度、时间以及二者交互作用均显著相关,随着AGEs刺激浓度及时间的增加,PBMCs和OB活力显著降低(P<0.001)。AGEs刺激可显著增加PBMCs 中NF-κB的表达,并使肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量增加(P<0.01);抑制NF-κB通路后,TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01)。AGEs刺激OB后,随着作用时间的延长,NF-κB p65、JNK、p38磷酸化和非磷酸化蛋白显著升高(P<0.05),而IκB磷酸化蛋白表达显著升高的同时还伴有非磷酸化蛋白表达下降(P<0.01)。在mRNA水平,NF-κB p65、JNK、p38的表达显著升高,IκB mRNA表达显著下降(P<0.05);而Akt不论是磷酸化及非磷酸化蛋白表达,还是在mRNA水平的表达,差异均无统计学意义(P>0.05);加入MAPK信号通路抑制剂后,NF-κB p65、p38、JNK磷酸化和非磷酸化蛋白表达较只加了AGEs组均显著降低,IκB磷酸化蛋白显著降低,非磷酸化蛋白显著升高(P<0.05);qRT-PCR结果发现,与只加了AGEs组相比,加入JNK通路阻断剂后IκB表达显著升高(P<0.05),NF-κB p65、p38、JNK的表达呈下降趋势,但差异不具有统计学意义(P>0.05);与只加了AGEs组相比,加入p38信号通路阻断剂后NF-κB p65、p38、JNK的表达显著降低(P<0.05),IκB表达显著升高(P<0.05);而Akt改变在蛋白水平和mRNA水平依然未见统计学意义(P>0.05)。结论: AGEs能够抑制PBMCs和OB的增殖,NF-κB和MAPK信号通路很有可能参与调控过程,但与PI3K/PKB信号通路无关。     

盐酸小檗碱对肝星状细胞自噬和凋亡的影响*

目的 研究盐酸小檗碱对肝星状细胞（HSCs）自噬和凋亡的影响。方法 取指数生长期HSC-LX2细胞,实验分组：溶剂对照组（1‰ DMSO）、盐酸小檗碱5?μg/ml组、盐酸小檗碱10?μg/ml组和盐酸小檗碱20?μg/ml组。盐酸小檗碱干预24?h。流式细胞术检测细胞凋亡、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3） 阳性细胞荧光强度。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Caspase-3、与Bcl-2相互作用的肌球蛋白样卷曲螺旋蛋白1（Beclin1）、自噬相关基因5（Atg5）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）mRNA的表达,Western blotting检测Beclin1、Atg5、Akt、p-Akt、JNK及p-JNK蛋白的表达。结果 与溶剂对照组比较,不同盐酸小檗碱浓度干预组HSC-LX2凋亡增加（P?<0.05）,Caspase-3 mRNA表达增加（P?<0.05）,Caspase-3阳性细胞荧光强度及蛋白活性升高（P?<0.05）;Beclin1、Atg5 mRNA及蛋白水平下降（P?<0.05）;Akt、JNK mRNA水平下降（P?<0.05）,Akt、p-Akt、JNK、p-JNK蛋白水平下降（P?<0.05）。结论 盐酸小檗碱可能通过抑制Akt信号通路促进凋亡,通过抑制JNK信号传导途径抑制自噬。     

基于NF-κB/JNK信号通路研究他克莫司对脊髓损伤模型大鼠的调节作用

目的探究他克莫司对大鼠脊髓损伤的治疗作用及其对NF-κB/JNK信号通路的调节作用。方法实验大鼠随机分为三组(n=15):假手术组、模型组、他克莫司治疗组;采用Allen’s法建立脊髓损伤动物模型。造模后给予实验大鼠他克莫司(0. 3 mg/kg),连续给予21 d。分别在第0、1、7、14、21天进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)脊髓损伤的行为学评分测试。采用HE染色观察实验大鼠脊髓损伤状态并测定脊髓组织中抗氧化酶活性;采用RT-PCR测定脊髓组织中的IL-4 mRNA和TGF-βmRNA表达量;采用Western blot实验测定脊髓组织中NF-κB/JNK信号通路相关蛋白表达。结果他克莫司能够显著性改善脊髓损伤大鼠的BBB评分(P0. 05),升高SOD、CAT、GPX酶活性并降低MDA含量(P0. 05);并减少脊髓神经元的异常凋亡,降低脊髓组织中IL-4 mRNA、TGF-βmRNA表达和NF-κB p-p65/NF-κB p-p65和p-JNK/JNK蛋白表达量的比值(P0. 05)。结论他克莫司能够显著性改善脊髓损伤,其可能是通过抗氧化、抗炎反应、抗脊髓神经元凋亡,以及抑制NF-κB/JNK信号通路活化而发挥作用的。     

清热活血组分对急性脑梗死火毒证大鼠NF-κB炎症信号通路调控作用研究?

目的：探究清热活血组分治疗急性脑梗死火毒证的协同增效作用机制。方法采用腹腔注射角叉菜胶以及线栓法致大脑中动脉闭塞( MCAO)的方法建立急性脑梗死火毒证模型,SD大鼠随机分为正常组( N)、假手术组( S)、脑缺血再灌注模型组( I)、苦碟子注射液治疗组( A)、血栓通注射液治疗组(B)、苦碟子注射液(1.8 mL/kg)+血栓通注射液(20 mg/kg)治疗组(C)、苦碟子注射液(1.8 mL/kg)+血栓通注射液(80 mg/kg)治疗组(D)、苦碟子注射液(7.2 mL/kg)+血栓通注射液(20 mg/kg)治疗组( E),共8组。通过TTC染色观测各组大鼠脑梗死面积比变化;Western Blot方法检测梗死侧大脑皮层中NF-κB p65及IKKβ的蛋白表达情况;采用Real-TimePCR方法检测梗死侧大脑皮层中NF-κB p65及IKKβ mRNA的表达情况。结果①各治疗组较模型组大鼠的脑梗死面积均有所减小(P<0.05),其中清热活血组脑梗死面积比较模型组有显著改善(P<0.01)。3个清热活血组较苦碟子组和血栓通组差异无统计学意义。②模型组与正常组相比,其NF-κB p65、IKKβ蛋白均呈高表达( P<0.01),而各个给药组NF-κB p65、IKKβ蛋白表达较模型组有所下降。C、E组大鼠患侧大脑皮层中NF-κB p65蛋白表达较模型组明显下降( P<0.01);而苦碟子治疗组和血栓通治疗组NF-κB p65蛋白表达虽然较模型组有所减少( P<0.05),但相对C组、E组下降不明显。3个清热活血组与苦碟子治疗组、血栓通治疗组相比较NF-κB p65的蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。 C、D、E组较苦碟治疗组IKKβ蛋白表达下降较明显(P<0.01)。另外,3个清热活血组IKKβ的蛋白表达较血栓通组有统计学意义( P<0.01);C、E组较苦碟子治疗组IKKβ蛋白表达亦有统计学意义( P<0.01)。③模型组NF-κB p65、IKKβ mRNA的表达均较正常组上调,正常组的表达仅为模型组的0.37、0.48倍。各给药组NF-κB p65、IKKβ mRNA表达均较模型组降低,其中D组NF-κB p65、IKKβ mRNA的表达较模型组有差异( P<0.05);E组IKKβ mRNA的表达较模型组有差异( P<0.05);而E组NF-κB p65 mRNA的表达较模型组有明显差异( P<0.01)。结论清热活血联合应用组可通过抑制急性脑梗死炎症反应NF-κB信号通路中的关键因子IKKβ、NF-κB p65基因和蛋白的表达,对急性脑梗死的治疗发挥协同增效作用。     

内质网应激与PI3K/Akt和ERK1/2通路在大鼠宫腔粘连治疗中的作用

目的 探讨内质网应激与PI₃K/Akt和ERK1/2信号通路在宫腔粘连治疗中的作用机制。方法 将18只SD雌鼠随机分为对照组(不做任何处理)、模型组(机械损伤法构建大鼠宫腔粘连模型)及治疗组(造模后当天开始皮下注射17β-雌二醇10μg,连续7天)。通过HE及Masson染色观察大鼠子宫病理形态,免疫组化法检测CD31的表达。采用Western blot法测定子宫内质网应激凋亡相关蛋白及Akt/p-Akt和ERK/p-ERK蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜腺体数量减少,纤维化面积明显增加,CD31的表达明显降低(P＜0.01);模型组大鼠子宫组织中GRP78和CHOP蛋白表达显著升高,而Akt、p-Akt和ERK、p-ERK蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P均＜0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠子宫内膜腺体数量增加,纤维化面积降低,CD31的表达明显增加(P＜0.05);治疗组大鼠子宫组织中GRP78和CHOP蛋白含量显著减少(P＜0.05),Akt、p-Akt和ERK、p-ERK蛋白表达有所增加(P＜0.05)。结论 17β-雌二醇可改善子宫内膜的纤维化,促进子宫内膜血管增生,其作用机制可能与内质网应激及PI₃K/Akt和ERK1/2信号通路相关。     

rhEPO对高氧肺损伤Akt、GSK-3β表达的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对新生大鼠高氧肺损伤蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶(GSK-3β)表达的影响。方法:实验采用Wistar新生大鼠120只,随机分为三组:空气对照组、高氧模型组和高氧+rhEPO治疗组,每组各40只。建立高氧模型后,空气组新生大鼠暴露于室内正常的空气中,高氧组及治疗组新生大鼠暴露于氧气浓度≥85%的高氧模型玻璃箱中。于高氧暴露实验的第1天开始,治疗组每天接受rhEPO(800 IU/kg)腹腔注射治疗,取肺组织进行W/D测定,运用Western blotting测定肺组织中Akt和GSK-3β蛋白及它们的磷酸化表达水平。结果:①肺组织W/D比值结果:高氧暴露第1天,各组W/D比值无明显变化;高氧第3天、第7天、第14天时,高氧组与空气组比较,W/D比值增加,且随着高氧时间延长W/D比值增加,治疗组与高氧组比较,W/D比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。②Western Blotting结果:与空气对照组比较,高氧组p-Akt/Akt、GSK-3β、Bcl-2/Bax表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与高氧组比较,治疗组中p-Akt/Akt、p-GSK-3β/p-GSK-3β/GSK-3β、Bcl-2/Bax蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO通过增强Akt、GSK-3β蛋白的表达,抑制肺细胞凋亡,对高氧肺损伤起保护作用。     

氨溴索对胃内容物吸入性肺损伤中c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的探讨氨溴索对大鼠胃内容物吸入后损伤肺组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法 40只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、损伤组、SP600125组和氨溴索组,每组10只。复制大鼠胃内容物吸入性肺损伤动物模型,SP600125组术前给予尾静脉注射JNK特异性抑制剂SP600125(3 mg/100 g),氨溴索组于损伤发生后2 h给予尾静脉注射氨溴索(50 mg/kg)。检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞计数与丙二醛(MDA)活性、肺组织湿/干重比值(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)活性变化。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中JNK、磷酸化JNK(p-JNK)及诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白表达。光镜下观察肺组织结构变化。结果与对照组比较,损伤组BALF中性粒细胞计数与丙二醛(MDA)活性、肺组织W/D及MPO活性显著增加(均P0.05);p-JNK与i NOS蛋白表达均显著增高(均P0.05);肺组织出现明显病理组织学损伤。与损伤组比较,SP600125组和氨溴索组BALF中性粒细胞计数与MDA活性、肺组织W/D及MPO活性显著下降(均P0.05);p-JNK与i NOS蛋白表达显著下降(均P0.05);肺组织病理学损伤减轻。Western blot结果显示各组大鼠肺组织中JNK蛋白表达差异无统计学意义。结论 JNK参与胃内容物吸入性肺损伤炎症反应。氨溴索可能通过抑制JNK信号通路、抑制i NOS表达发挥抗炎、抗氧化保护作用。     

核因子κB在大鼠双侧后肢缺血再灌注致肺损伤中的表达及意义

目的: 探讨核因子κB(NF-κB)在大鼠双侧后肢缺血再灌注(I/R)致肺损伤中的表达及意义. 方法:建立大鼠双侧后肢I/R模型:48只大鼠随机分为假手术组(Ⅰ组,n=8)、缺血组(Ⅱ组,n=8)、缺血再灌注组(Ⅲ组,n=32).Ⅱ组在缺血4 h末,Ⅲ组分别于再灌注4,12,24,48 h切取双肺,应用半定量RT-PCR和Western blot方法检测肺组织NF-κB p65/ IκBβ的mRNA和蛋白产物表达. 结果:Ⅲ组各时点NF-κB p65mRNA表达较Ⅰ、Ⅱ组增加,再灌注后12 h达高峰.p65蛋白产物表达亦逐渐增加,12 h达高峰,持续到术后48 h;IκBβ的mRNA和蛋白表达在I/R后同样开始增加,24 h的表达量最多.结论:NF-κB/IκBβ系统的激活可能在骨骼肌I/R所致肺损伤中发挥重要作用.     

欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其机制研究

目的 探讨欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其作用机制。方法 将32只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、欧前胡素30?mg/kg组、欧前胡素60?mg/kg组。用欧前胡素预处理,脂多糖诱导进行模型复制,7?h后收集小鼠肺组织。测量肺湿/干重比,采用苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理学改变,检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活力及活性氧类（ROS）的水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）,Western blotting检测小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、核转录因子κB（NF-κB）p65及基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠肺组织损伤评分、肺组织ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平升高（P?<0.05）,TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平升高（P?<0.05）;与模型组比较,欧前胡素组能够减轻肺组织损伤,降低肺损伤评分（P?<0.05）,降低小鼠肺组织中ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平（P?<0.05）,降低TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平（P?<0.05）;与欧前胡素30?mg/kg组比较,欧前胡素60?mg/kg组小鼠肺损伤评分、肺组织ROS水平、Akt及NF-κB p65蛋白磷酸化水平、TNF-α的释放及MMP-9蛋白表达水平降低（P?<0.05）,PI3K蛋白磷酸化水平及IL-1β的释放差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 欧前胡素对脂多糖诱导的急性肺损伤有保护作用,其作用机制可能与脂多糖诱导的急性肺损伤中ROS被抑制,以及ROS介导的PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究南葶苈子水提液对心力衰竭模型大鼠心室重构的影响

目的观察南葶苈子水提液对压力后负荷性心衰模型大鼠心室重构的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR信号通路在其中的作用。方法雄性SD大鼠15只,按随机数字表法分为正常组、模型组和南葶苈子组,每组5只。SD大鼠心力衰竭动物模型建立后,正常组及模型组大鼠给予5mL·kg~(-1)·d~(-1)生理盐水灌胃,葶苈子组大鼠给予南葶苈子水提液10g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,共4周。4周后处死大鼠,测定各组大鼠心室肥厚指数;HE染色法和电镜观察心室组织病理变化;Western blot检测各组大鼠左心室心肌组织Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果南葶苈子组大鼠心室肥厚指数较模型组降低[(0.0033±0.0002)比(0.0037±0.0001),P0.05];HE染色和电镜显示,南葶苈子组心肌纤维排列不规则和心肌细胞肥厚程度较模型组减轻;Western blot证实,南葶苈子组大鼠Bcl-2/Bax蛋白表达灰度值较模型组上调[(0.75±0.20)比(0.54±0.18),P0.05];Caspase-3/GAPDH蛋白表达灰度值较模型组下调[(1.31±0.22)比(1.62±0.26),P0.05];p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白表达灰度值较模型组上调[p-Akt/Akt:(1.50±0.18)比(1.18±0.21),P0.05;p-mTOR/mTOR:(1.36±0.32)比(1.16±0.12),P0.05]。结论南葶苈子水提液能改善压力后负荷性心衰模型大鼠心室重构,其作用机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞凋亡有关。     

紫檀芪对肺纤维化大鼠NF-κB/TGF-β1/smad 3信号通路的影响

[目的]通过观察紫檀芪(pterostilbene)对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠NF-κB/TGF-β1/smad 3信号通路的影响,探讨紫檀芪治疗肺纤维化的作用机制。[方法]选用健康雄性SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、强的松组、紫檀芪高、低剂量组,每组各10只。采用博莱霉素气管内注射法诱导肺纤维化模型。于给药后第28天留取标本,HE染色进行肺组织病理学观察;酶联免疫法(ELISA法)测定各时期血清中核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;用免疫组化技术检测TGF-β1及smad3的表达。[结果]与正常组比较,模型组大鼠TGF-β1/smad3含量及NF-κB表达明显升高。与模型组比较,紫檀芪组、泼尼松组大鼠肺组织中NF-κB/TGF-β1/smad 3蛋白表达明显降低。紫檀芪高剂量组大鼠TGF-β1、smad3、NF-κB表达较强的松组减弱。[结论]紫檀芪能够减轻博莱霉素导致的大鼠肺纤维化程度,其作用机制与调控NF-κB/TGF-β1/smad3信号转导蛋白表达有关。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶、磷酸肌醇3-激酶和缺氧诱导因子2α表达的变化

目的 探讨大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)形成过程中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和缺氧诱导因子2α(HIF-2α)表达的变化.方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和低氧3天、7天、14天、21天组(H3、H7、H14、H21组),每组8只,低氧组复制HPH大鼠模型.测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、管壁面积与血管总面积比值(WA%)、管腔面积与血管总面积比值(LA%);免疫组织化学或Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化P38(p-P38)、磷酸化Akt(p-Akt);原位杂交和免疫组织化学检测HIF-2α的表达.结果与对照组比较,H7组大鼠mPAP开始上升 (P<0.05),H14组达高水平并维持于此水平.缺氧14天后出现肺血管重塑,RVH I改变.与对照组比较,p-ERK和p-Akt在H3组表达上升 (P＜0.05),且在H3组、H7组、H14组和H21组肺小动脉内膜、中膜表达均为阳性.而p-P38、p-JNK蛋白在对照组与低氧组表达均不明显.HIF-2α mRNA在对照组表达弱阳性,在H14组表达升高.HIF-2α蛋白在对照组表达不明显,H7组表达达高峰,H14组和H21组维持在高水平.相关分析表明p-ERK和p-Akt均与HIF-2α蛋白(内膜)和mPAP、RVHI呈正相关(P＜0.01).结论 p-ERK、p-Akt与HIF-2α均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用.p-ERK和p-Akt可能通过在蛋白表达水平上调HIF-2α,进而上调下游目标基因,从而参与HPH发生发展.     

谷氨酰胺对克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症的抑制作用

目的 探讨谷氨酰胺对克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症的抑制作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为3组,正常组、模型组、谷氨酰胺组,通过气管滴入克雷伯杆菌建立大鼠肺炎模型,谷氨酰胺组在造模前1d即腹腔注射10 mL/kg谷氨酰胺,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药7d,大鼠脱颈处死,取肺组织及血清进行检测.称量记录右肺湿重及干重(W/D),HE染色检测肺组织病理形态,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织匀浆及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量,RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)p65和NF-κ:B抑制蛋白(IκBα) mRNA表达,Western blot检测NF-κB p6和IκBα蛋白表达.结果 与模型组比较,谷氨酰胺组能降低W/D比值5.98±0.29 vs.4.32±0.33(P＜0.05)],减轻肺组织充血水肿、炎性细胞浸润,改善肺组织形态,抑制血清和肺组织匀浆中TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌(P＜0.05),并抑制NF-κB p65和kBα磷酸化水平(P＜0.05).结论 谷氨酰胺能抑制克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症,与抑制NF-κB信号通路有关.     

基于NF-κB/NLRP3信号轴探讨大血藤对CIA大鼠的治疗作用及机制

目的  考察大血藤对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的症状改善作用和机制。 方法   建立大鼠CIA模型,持续观察大鼠体质量、关节肿胀度、关节炎指数,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平;Western blot法检测大鼠关节滑膜RANKL、p-IκB-α、NF-κB/p65、p-NF-κB/p65、NLRP3、Caspase-1表达。 结果   模型组大鼠自第2周出现体质量增长的趋势明显减缓(P < 0.01),而关节炎指数和关节肿胀度均显著增加(P < 0.05),大鼠关节有红肿进而不能负重状态,而大血藤能显著改善CIA大鼠相关症状,表现为降低足肿胀、关节炎指数评分以及改善体质量数据。与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平以及关节滑膜RANKL、p-IκB-α、NF-κB/p65、p-NF-κB/p65、NLRP3、Caspase-1表达显著升高(P < 0.01), 而大血藤中、高剂量组上述指标较模型组显著降低(P < 0.05, P < 0.01)。 结论   大血藤能改善CIA大鼠的炎症反应,延缓病理进展,其机制可能与降低促炎因子的释放及抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。      

基于β2AR2/βarrestin2/NFκB通路的地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的 探讨地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠β2肾上腺素受体(β2AR)/β抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及心肌凋亡的影响。方法 60只大鼠随机分为假手术组（Sham组）,心肌缺血再灌注模型组（MIRI组）,地佐辛高、中、低剂量组（20、10、5 mg/kg）,每组12只。地佐辛各剂量组在造模前30 min经股静脉注射相应剂量的地佐辛,Sham组和MIRI组给予等量生理盐水,采用手术结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。再灌注2 h后,检测各组大鼠心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末（LVEDP）,评价心脏功能;并检测血清中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;HE染色观察左心室组织学变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达;Western blot检测心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα、NF-κB p65蛋白表达。结果 心肌组织病理学可见,Sham组心肌纤维完整、排列整齐,MIRI组心肌严重受损,局部肌纤维横纹消失,大量炎性细胞浸润;与Sham组相比,各治疗组明显好转。与Sham组相比,MIRI组大鼠HR、LVSP、Bcl-2/Bax比值、心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα蛋白表达显著降低,各治疗组较MIRI组明显升高（均P＜0.05）;与Sham组相比,MIRI组LVEDP、血清CK、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达、心肌细胞凋亡率显著升高,各治疗组较MIRI组明显降低（均P＜0.05）。结论 地佐辛可抑制炎症反应,减少心肌细胞凋亡,对MIRI大鼠具有保护作用;其作用机制可能与上调β2AR、β-arrestin2、IκBα的表达,降低NF-κB p65表达有关。     

原花青素对CIA大鼠足爪组织中NF-κB/p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响

目的研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)大鼠足爪组织中核转录因子NF-κB/p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α等水平的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型,免疫组化法检测足爪组织中NF-κB/p65蛋白的表达,ELISA法检测CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量。结果原花青素能剂量依赖性地下调NF-κB/p65蛋白的表达,降低CIA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平。结论原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF-κB/p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平有关。     

芪白平肺胶囊通过抑制PI3K/Akt通路促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的 从细胞水平探讨芪白平肺胶囊通过磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3- kinasePI3K/蛋白激酶B（protein kinas B, Akt）通路对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs）凋亡的影响。方法 采用组织贴块法分离培养大鼠PASMCs,制备含药血清作用于低氧诱导的大鼠PASMCs,将细胞分为常氧组、低氧组、低氧＋芪白平肺胶囊含药血清组、低氧＋芪白平肺胶囊含药血清组＋LY294002组。采用细胞计数试剂盒检测芪白平肺胶囊含药血清对低氧诱导的大鼠PASMCs活性的影响;蛋白免疫印迹法检测芪白平肺胶囊含药血清单独及加入LY294002对Akt、磷酸化Akt(phosphorylated- Akt,p- Akt）、B淋巴细胞瘤2（B cell lymphoma/leukemia- 2,Bcl- 2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶- 3（cysteine containing aspartate protein hydrolase- 3,Caspase- 3）蛋白表达水平的影响;Hoechst 33258染色观察芪白平肺胶囊含药血清对低氧诱导的大鼠PASMCs凋亡的影响。结果 20%芪白平肺胶囊含药血清能明显降低低氧诱导的大鼠PASMCs的活力（P＜0.05）,并显著上调Caspase- 3蛋白的表达水平（P＜0.05）,下调Bcl- 2、p- Akt蛋白的表达水平（P＜0.05）。加入LY294002后p- Akt蛋白的表达水平下降,且Bcl- 2表达水平下降,Caspase- 3蛋白表达水平上调（P＜0.05）。结论 芪白平肺胶囊可能通过抑制PI3K/Akt信号通路促进低氧诱导的大鼠PASMCs凋亡,减缓低氧性肺动脉高压的进程。