类风湿关节炎患者Th亚群在其发病机制中的作用。

目的：在单细胞水平上研究类风湿关节炎(RA)患者滑液及外周血中Thl／Th2细胞因子模式，探讨Th亚群在RA发病机制中的作用和意义。方法：15例RA患者的滑液单个核细胞(SFMC)和外周血单个核细胞(PBMC)及lO例正常人的PBMC用PMA离子霉素和莫能菌素刺激培养6h，细胞内细胞因子免疫荧光双标染色后，用流式细胞仪检测Th亚群。结果：与PBMC[Thl，Th2，Th0分别为(8．1&;#177;2．1)％，(2．8&;#177;1．O)％，(1．8&;#177;0．5)％)相比，RA患者SFMC中Thl和Th0的比例明显增高(Thl(29．2&;#177;3．9)％，Th0(4．0&;#177;1．4)％)，而Th2则明显降低[(1．2&;#177;0．6)％]；RA患者和正常人PBMC中，Thl，Th2，Th0差异均无显著性意义[正常人Thl，Th2，Th0分别为(7．3&;#177;2．2)％，(3．4&;#177;1．1)％，(2．1&;#177;0．8)％]。结论：RA患者关节内存在Th1亚群的不平衡，Thl和Th0占明显优势，Th2则明显减少，恢复Thl／Th2平衡对RA的疾病进程和治疗将有重要意义。     

类风湿关节炎患者Th1/Th2细胞因子分泌模式与疾病活动程度的关系

目的:用全血在单个细胞水平上研究类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者Th1/Th2细胞因子分泌模式及其与疾病活动程度的关系。方法:用三色流式细胞术检测20例活动期RA患者的外周血单个核细胞及10例正常人的PBMC细胞内细胞因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的表达情况。结果:RA患者外周血IFN-γ+细胞百分率及IFN-γ+/IL-4+细胞比值比健康人明显增高犤分别为(45.8±10.1)%和(15.2±8.5)%,t=9.07,P<0.01和(10.6±3.8)%和(5.5±3.1)%,t=5.67,P<0.01犦,IFN-γ+/IL-4+比值与患者Stoke指数呈正相关(r=0.8610,P<0.01)。结论:RA患者外周血中细胞因子分泌模式朝Th1偏移,IFN-γ+/IL-4+比值与疾病活动性相关,Th1/Th2平衡在RA发病机制及疾病进程中起重要作用。     

磁珠分选系统和胞内染色法联合分析细胞因子诱导杀伤细胞中Th1/Th2细胞亚群分布特点

目的　评价以磁珠分选系统和胞内染色法联合分析细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)中Th1 /Th2细胞亚群分布特点,探讨胞内染色法的应用价值。方法　体外大规模扩增CIK,利用磁珠分离系统富集纯化CIK中的人白细胞分化抗原(CD)4+T细胞亚群。用胞内染色法分析其Th1 /Th2细胞亚群的分布特点。结果　经磁珠分离法富集的CD4+CIK细胞纯度高达96%,它与外周血单个核细胞(PBMC)相比变化显著,其中Th1 (IFN -γ+IL- 4 )亚群、Th0 (IFN -γ+IL- 4+ )亚群分别从( 1 .18±0. 94)%和( 0. 19 ±0. 16 )%升至( 33 .93 ±6 .38 )%和( 23. 07 ±8. 23 )% (P< 0 .01 ),而Th2(IFN -γIL- 4+ )亚群虽然从( 17 .56±16. 71 )%降至( 10 .21±7. 05 )%,但差异无统计学意义(P>0. 05)。结论　本试验提示CIK具有明显的“Th1优势”;磁珠分选系统和胞内染色法联合测定Th1 /Th2细胞亚群分布的方法简便快捷,结果稳定,适合临床应用。     

类风湿关节炎患者Th1／Th2细胞因子分泌模式与疾病活动程度的关系

目的：用全血在单个细胞水平上研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)患者Th1／Th2细胞因子分泌模式及其与疾病活动程度的关系。方法：用三色流式细胞术检测20例活动期RA患者的外周血单个核细胞及10例正常人的PBMC细胞内细胞因子干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)和白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4)的表达情况。结果：RA患者外周血IFN-γ^+细胞百分率及IFN-γ^+／IL-4^+细胞比值比健康人明显增高[分别为(45．8&;#177;10．1)％和(15．2&;#177;8．5)％，t=9．07，P&;lt;0．01和(10．6&;#177;3．8)％和(5．5&;#177;3．1)％，t=5．67，P&;lt;0．01]，IFN-γ^+／IL-4^+比值与患者Stoke指数呈正相关(r=0．8610，P&;lt;0．01)。结论：RA患者外周血中细胞因子分泌模式朝，Th1偏移，IFN-γ^+／IL-4^+比值与疾病活动性相关，Th1／Th2平衡在RA发病机制及疾病进程中起重要作用。     

类风湿关节炎患者Th细胞亚群的检测及其临床意义

目的：探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血和关节液中Th1、Th2型细胞在患者病情演变中的特点及临床意义。方法：用流式细胞术检测RA患者及健康人外周血单个核细胞（PBMC）和关节液单个核细胞（SFMC）中IFN-γ、IL-4阳性细胞比例。结果：RA患者外周血和关节液中以IFN-γ阳性细胞百分率和IFN-γ阳性细胞/IL-4阳性细胞比值明显增高 早期RA患者以IFN-γ阳性细胞百分率和IFN-γ阳性细胞/IL-4阳性细胞比值增高为主,非早期RA患者以IL-4阳性细胞百分率增高为甚。IFN-γ阳性细胞百分率与血沉、晨僵、休息痛、STOKE指数呈正相关关系。IL-4阳性细胞百分率与类风湿因子显著正相关。结论：RA患者外周血及关节液中存在Th细胞亚群比例失调。早期RA及关节液表现为Th1亚群细胞增多,而非早期RA以Th2亚群细胞增多。Th1、Th1/Th2与RA临床症状及活动指标密切相关,药物干预Th1/Th2失衡是RA治疗新的途径。     

肿瘤病人T细胞核仁嗜银蛋白和辅助性T细胞亚群变化

目的　探讨肿瘤病人外周血单个核细胞 (PBMC)中T细胞核仁嗜银蛋白 (AgNORs)变化和辅助性T(Th)细胞亚群变化的关系及其临床意义。方法　PBMC经多克隆T细胞活化剂刺激 ,以图像分析法检测AgNORs区面积与细胞核仁面积的百分比 (I.S % ) ;PBMC被离子霉素和佛波醇酯活化 5h后 ,以酶联免疫斑点法 (ELISPOT)检测γ干扰素 (IFNγ)和白细胞介素 4(IL 4)产生细胞的频度( % ) ;以离子霉素加佛波醇酯刺激 2 4h ,用ELISA试剂盒检测培养上清液中的IFNγ 和IL 4水平。结果86例肿瘤病人和 44名正常人 ,PBMC中活化T细胞AgNORs表达分别为 ( 4 90± 1 2 0 )I S %和 ( 7 82±1 2 8)I S % ,肿瘤组下降非常显著 (P <0 0 5 ) ;肿瘤组PBMC中Th2细胞频度显著上升 ,Th/Th2比值显著下降 ;同时 ,肿瘤组PBMC产生IFNγ 和IL 4水平发生相应变化 ,变化方式与Th亚群变化相似 ;肺癌转移组与未转移组、复发组与未复发组相比 ,Th1细胞数、Th1/Th2之比和IFNγ 的产生下降非常显著 ;在肿瘤组AgNORs表达与Th1细胞频度、Th1/Th2比值、IFNγ 产生和肿瘤病人生活质量评分呈正相关。结论　肿瘤病人PBMC中T细胞表达AgNORs下降 ,与患者Th1细胞功能下降呈正相关。     

实时定量PCR检测类风湿关节炎滑液单个核细胞MIP-1α mRNA的表达

目的了解类风湿关节炎（RA）患者滑液单个核细胞MIP-1α mRNA表达情况。方法用实时定量PCR技术检测8例活动期RA患者滑液和血清单个核细胞（SFMC和PBMC）中巨嗜细胞炎症蛋白-1α（MIP-1α）mRNA的表达水平。同时检测血清CRP和滑液白细胞数。结果RA患者SFMC MIP-1α mRNA表达水平比自身PBMC表达水平明显增高（P〈0.01），并且与血清CRP和滑液白细胞数呈正相关（r分别为0．9028和0．9120，P〈0．01）。结论 RA认患者可能通过SFMC高表达MIP-1α趋化炎性细胞向滑膜迁移，加重局部炎症反应。     

来氟米特对类风湿关节炎患者外周血Th1/Th2平衡和关节功能的影响

目的:探讨来氟米特对类风湿关节炎(rheumatoidarthrtitis,RA)患者外周血T淋巴细胞亚群和关节功能的影响及其可能的作用机制。方法:收集25例RA患者(RA组)和10例接受来氟米特治疗前及治疗3个月后的RA患者(治疗组)的外周血,对CD4+,CD8+细胞分泌白细胞介素-4(IL-4)和γ干扰素的情况进行检测。选择9例健康志愿者作为对照组。采用细胞内细胞因子染色、三色流式细胞分析法检测单个细胞分泌细胞因子的情况。结果:RA患者和健康对照组的外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞中,分泌(干扰素的细胞群均比分泌IL-4的细胞群多(t=3.534,P<0.01),同健康对照组犤(7.61±3.27)%犦比较,RA组患者外周血中Th1型细胞犤(4.57±2.70)%犦明显减少(t=-2.233,P<0.05)。接受来氟米特治疗后产生γ干扰素的Th1型、Tc1型细胞和产IL-4的Th2型细胞明显减少(分别t=3.709,3.419,3.211,均P<0.01),而Tc2型细胞则无明显增加或减少(t=1.022,P<0.05),各项关节功能指标包括关节肿胀指数、血沉、C-反应蛋白等均显著下降(t=3.466,3.325,3.207,均P<0.01)。结论:氟米特可能通过抑制Th1型和Tc1型的分化、减少Th1/Tc1型细胞因子如γ干扰素的分泌而发挥抗炎和改善关节功能的作用。     

系统性红斑狼疮患者淋巴细胞增殖活性分析

目的:探讨系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞核仁嗜银蛋白(AgNORs)和T细胞亚群及辅助性T细胞亚群(Th)的的关系及其临床意义,指导临床诊断与治疗。方法:PBMC经多克隆T细胞活化剂刺激,以图像分析法检测AgNORs区面积与细胞核仁面积的百分比(I.S%);以微量细胞毒法检测T淋巴细胞亚群水平;以ELISA法检测血清中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4水平以来评价辅助性T细胞亚群活性。结果:(1)13例稳定期和17例活动期系统性红斑狼疮患者PBMC中活化T细胞AgNORs表达分别为(5.14±1.06)I.S%和(3.21±1.40)I.S%,与正常对照组(6.69±1.30)I.S%相比,均显著下降(分别有P<0.05,P<0.01);活动期显著低于稳定期(P<0.01);(2)与稳定组和正常对照组相比,活动期系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞计数(23.5±7.8)%和CD4+/CD8+比值(0.58±0.31)显著降低(P<0.01),CD8计数明显升高,为(37.4±12.1)%(P<0.05);(3)与稳定组和正常对照组相比,活动期SLE患者血清IL-4水平明显升高,为(37.2±2.7)pg/mL,(P<0.05),IFN-γ分泌为(17.9±2.7)pg/mL,较正常对照组明显降低(P<0.05),与稳定期患者无显著差异(P>0.05)。结论:系统性红斑狼疮患者细胞免疫活性低于正常水平;(2)活动期患者血清IL-4分泌水平增高,IFN-γ水平降低,提示Th1类活性降低,在系统性红斑狼疮中存在Th1/Th2的不平衡。     

Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的研究

为了研究Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的变化,探讨Graves病伴血细胞减少症的发病机制,以流式细胞术测定24例患者外周血Th细胞亚群及CD5+B淋巴细胞的数量、B淋巴细胞胞浆内凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,并与18名正常人作对照。结果表明:正常对照组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1比值、CD5+B细胞百分率、Bcl-2表达率分别是(0.39±0.24)%、(0.28±0.15)%、(0.52±0.12)%、(7.89±0.38)%、(36.49±6.79)%;患者组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1比值、CD5+B细胞百分率、Bcl-2表达率分别是(0.81±0.45)%、(6.83±3.02)%、(20.55±6.15)%、(20.89±1.62)%、(80.25±15.56)%,均显著多于正常人对照(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05)。结论:Graves病伴血细胞减少症发病可能与Th1/Th2比例失衡,Th2细胞增多,导致CD5+B细胞数量上升及凋亡减低,自身抗体的产生增加有关。     

Skewing the balance of regulatory T-cells and T-helper 17 cells in breast cancer patients

This study investigated the distribution of interleukin (IL)-17-producing CD4(+) T-cells (T-helper [Th17] cells) in relation to CD4(+)CD25(+)CD127(-) cells (regulatory T-cells [T(reg)]) in tumour-infiltrating lymphocytes (TILs) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from breast cancer patients. The Th17 and T(reg) cells were evaluated by flow cytometry and reported as a percentage of total CD4(+) cells. In TILs from early breast cancer patients (n = 12), the frequency of Th17 cells was significantly higher than in PBMCs (14.5 ± 7.2% versus 6.9 ± 2.1%). In TILs from patients with advanced breast cancer (n = 15), the frequency of Th17 cells was also significantly higher than that in PBMCs (9.1 ± 5.7% versus 3.2 ± 2.3%) but lower compared with early disease. The Th17/T(reg) ratio in TILs was markedly increased in early versus advanced disease. In conclusion, Th17 and T(reg) cell accumulation in the tumour microenvironment of breast cancer occurred in early disease; Th17 cell infiltration gradually decreased and T(reg) cells accumulated with disease progression.     

地塞米松对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中细胞因子分泌及T细胞亚群表达的影响

目的 探讨地塞米松对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素(IL)-17、干扰素(IFN)-γ分泌水平和Th17、Tc17、Th1、Tc1等T细胞亚群表达的影响.方法 SLE患者和健康对照者的PBMCs分空白孔、佛波酯(PMA)/离子霉素(Ionomycin)孔、PMA/Ionomycin+地塞米松(DEX)孔行体外培养,运用四色流式细胞术检测PBMCs表达Th17、Tc17、Th1、Tc1等T细胞亚群的百分比,采用酶联免疫吸附法测定SLE患者和健康对照者血浆及PBMCs培养上清中IL-17、IFN-γ的表达水平.结果 SLE组患者血浆IL-17[138.98(84.82～187.04)ng/L]、IFN-γ[21.92(15.95～27.09)ng/L]含量均高于正常对照组[57.21(47.78～72.12)ng/L,13.43(7.04～17.37)ng/L].无PMA刺激条件下,SLE患者PBMCs培养上清中细胞因子水平、PBMCs中各T细胞亚群的百分比与正常对照组相比差异均无统计学意义(P均＞0.05);加入PMA刺激后,SLE患者PBMCs上清中IL-17的水平[(26.43±10.04)ng/L]和外周血Th17[(2.49±1.49)%]、Tc1[(44.89±16.43)%]细胞的比例均显著高于正常对照组[(18.06±5.42)ng/L,(1.47±0.73)%,(31.41±9.05)%)(P均＜0.05),SLE患者Th1、Tc17细胞百分比与正常对照组相比,差异均无统计学意义(P均＞0.05);地塞米松能明显抑制活化状态下的PBMCs分泌IL-17的水平[(16.72±6.09)ng/L](P＜0.01),且显著下调Th17(1. 34±0.76)%、Tc1(34.62±17.25)%细胞百分比(P均＜0.05),而地塞米松对IL-17的抑制作用更强.结论 SLE患者体内T细胞亚群及其相应细胞因子的表达水平存在明显异常,地塞米松能干扰SLE患者体内细胞因子网络失衡的免疫病理过程,且对IL-17有明显的抑制作用,为临床使用糖皮质激素治疗SLE提供新的理论依据和实验室基础.     

Th17细胞水平的变化与急性髓系白血病发病关系的探讨

目的 研究Th17细胞在急性髓系白血病(AML)患者外周血中的表达水平,并探讨Th17细胞的改变与疾病的相关性.方法 ①用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测AML初诊组、化疗完全缓解或部分缓解组及正常对照组外周血中IL-17、TGF-β1的表达水平.②用流式细胞术分别检测AML初诊组、化疗完全缓解或部分缓解组及正常对照组外周血中Th17细胞所占比例.③用半定量RT-PCR分别检测各组外周血中Th17细胞的相关转录因子IL-17 mRNA的表达水平,并逐层分析比较.结果 AML初诊组和治疗后缓解组IL-17水平、Th17细胞比例及IL-17 mRNA的表达水平分别为(10.502±1.071)ng/L、(0.935±0.140)%、0.262±0.510和(11.345±0.987)ng/L、(1.091±0.159)%和0.307±0.031,均明显低于正常对照组的(16.852±1.198)ng/L、(2.586±0.235)%、0.501±0.060(P＞0.01),AML缓解组Th17细胞比例、IL-17及IL-17 mRNA的表达水平均高于AML初诊组,差异有统计学意义(P＞0.05),AML初诊组和缓解组中TGF-β1的表达水平分别为(29.963±1.588)ng/L、(25.163±1.848)ng/L,明显高于正常对照组(13.366±1.565)ng/L(P＞0.01),且AML初诊组TGF-β1的表达水平高于AML缓解组(P＞0.05).结论 Th17细胞可能与AML的发生发展呈负相关,提示AML患者体内TGF-β1的过度表达可能抑制Th17细胞的分化发育.     

类风湿性关节炎的发生发展与外周血T淋巴细胞亚群及CD4+TH1/TH2细胞功能亚型的关系

背景类风湿性关节炎作为一种自身免疫病其免疫学发病机制目前尚未完全明确.T淋巴细胞、尤其是CD4+ TH1/TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展中可能有重要作用.目的探讨主要参与细胞免疫的CD4+ TH1细胞和辅助体液免疫应答的TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展过程中的作用.设计病例-对照,对比观察.单位武警医学院免疫学教研室.对象选择1999-03/2000-03在天津医科大学总医院内科就诊的类风湿性关节炎患者15例为患者组,男2例,女13例,其中12例受检者类风湿因子阳性,3例为阴性.同期选取健康体检者或本单位工作人员健康者30人为对照组,男4人,女26人.纳入对象均对实验目的知情同意.方法①采用酶联免疫斑点法对两组对象的外周血单个核细胞中CD3+T细胞(总T细胞)、CD4+T细胞和CD8+T细胞进行检测,普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞,计算出阳性细胞的百分率.②采用酶联免疫斑点法检测活化的分泌细胞因子的TH细胞;细胞内有红色斑点的细胞为阳性细胞,分泌γ-干扰素的细胞为TH1细胞,分泌白细胞介素4的细胞为TH2细胞;普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞,计算出TH1细胞、TH2细胞的百分率及TH1/TH2细胞的比值.③采用t检验或x2检验比较数据间差异性.主要观察指标两组对象外周血T淋巴细胞亚群(包括CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞)及CD4+TH1/TH2细胞定量分析结果.结果类风湿性关节炎患者15例和健康者30人均进入结果分析.①两组外周血的总T细胞(即CD3+T细胞)、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率差异不明显(P＞0.05).②患者组外周血的TH1细胞的百分率明显高于对照组[(24.44±5.25)%,(14.93±3.82)%,P＜0.05];而其外周血TH2细胞的百分率及TH1/TH2细胞的比值与对照组相近(P＞0.05).结论TH1细胞介导的细胞免疫可能与类风湿性关节炎的发生发展有关.     

腹腔镜下直肠癌手术对免疫平衡及CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+T细胞的影响

目的 通过分别测定腹腔镜手术和开腹手术直肠癌患者Th1/Th2平衡偏移情况及CD4+CD45R细胞的比例变化,以比较两种术式对直肠癌患者免疫功能的影响.方法 分别采用流式细胞学和酶联免疫吸附法方法 检测行腹腔镜下直肠癌手术和常规开腹手术2组患者术前1 d、术后2、7 d的外周血中CD4+IFN-γ+T和CD4+IL-4+T细胞比率及IFN-γ和IL-4血清浓度,同时检测CD4+CD45RA+T细胞和CD4+CD45RO+T细胞在不同手术影响下的比例变化.结果 开腹组术后2、7 d的Th1细胞[(4.51±1.52)%,(7.26±2.59)%]与术前[(12.06±1.82)%]相比明显减少(P均<0.05),Th2细胞[(6.70±2.41)%,(6.70±2.41)%]与术前[(4.47±1.90)%]相比明显增加(P均<0.05);开腹组术后2、7 d的IFN-γ[(57.15±23.64)ng/L,(72.70±27.31)ng/L]与术前(123.47±32.52)ng/L相比明显下降(P均<0.05),而术后2、7 d的IL-4[(55.55±7.29)ng/L,(57.56±7.13)ng/L]与术前[(41.87±5.83)ng/L]相比明显升高(P均<0.05);腹腔镜组Th1细胞、Th2细胞、IFN-γ和IL-4手术前后数量无明显变化(P均>0.05);术后7 d开腹组CD4+CD45RA+T细胞(35.11±7.82)与术前(31.11±6.72)相比明显增加(P均<0.05),开腹组术后CD4+CD45R O+T细胞(61.21±9.13)较术前(68.11±11.42)减少(P<0.05).结论 腹腔镜下直肠癌手术较开腹手术对机体免疫平衡影响较小,有利于保护直肠癌患者的细胞免疫功能.     

Gender differences in cytokine secretion by human peripheral blood mononuclear cells: role of estrogen in modulating LPS-induced cytokine secretion in an ex vivo septic model.

Clinical studies demonstrate a better outcome of sepsis in females. Elevated estrogen levels and plasma cytokine imbalance occur in septic patients. We propose that gender-different cytokine secretion by the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in sepsis determines the clinical outcome. A 2 x 10(6) PBMC sample from healthy volunteers (10 males and 10 females) was incubated with 1 ng/mL of lipopolysaccharide (LPS), estradiol (E2; 0, 0.03, 0.3, 3.0, 30 ng/mL), or 1 ng/mL of LPS + E2 (0, 0.03, 0.3, 3.0, 30 ng/ml), and supernatant cytokine levels were measured. Tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) and interleukin (IL)-6 production by PBMCs from both sexes was time-dependently stimulated by LPS. At 6 h after LPS challenge, the TNF alpha level of male PBMCs was significantly higher but IL-6 secretion by female PBMCs was higher (two-way ANOVA: P < 0.05). E2 alone stimulated cytokine secretion by male PBMCs. Addition of the same E2 concentration as in sepsis patients' plasma modulated LPS-induced cytokine production. No significant sex differences in LPS-stimulated TNF alpha or IL-6 secretion by PBMCs were found, but IL-10 secretion by male PBMCs was significantly suppressed. This study demonstrated a gender difference in PBMCs responsiveness to LPS and E2 stimulation and E2-modulated cytokine secretion. In this PBMCs model of sepsis, only the supernatant IL-10 level was significantly lower in males. These ex vivo findings may partially explain the mechanism underlying the poorer outcome of male sepsis patients.     

Ⅰ型糖尿病患者外周血辅助性T细胞亚群Th1/Th2细胞平衡研究

目的探讨辅助性T淋巴细胞亚群Th1/Th2在Ⅰ型糖尿病患者免疫学发病机制中的作用.方法应用流式细胞仪单克隆抗体免疫荧光标记法,对32例Ⅰ型糖尿病患者的外周血辅助性T淋巴细胞Th1亚群CD4 CD45RA 、Th2亚群CD4 CD45RO 的表达情况进行研究.结果Ⅰ型糖尿病患者外周血,辅助性T淋巴细胞Th1亚群CD4 CD45RA 表达升高不明显,Th2亚群CD4 CD45RO 表达显著性下降.CD4 CD45RA /CD4 CD45RO 比值明显升高.结论Ⅰ型糖尿病的发生与Th细胞的优势转化密切相关.对Th细胞的优势转化的干预将为临床上自身免疫性糖尿病的治疗开辟新的途径.     

食管鳞状细胞癌患者血清T辅助细胞类细胞因子的表达及其临床意义

目的 探讨食管癌患者血清T辅助细胞(Th1、Th2)类细胞因子的表达及其临床意义.方法 采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测45例食管鳞状细胞癌患者及30名健康体检者外周血Th1[干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-2]、Th2类(IL-4)细胞因子的含量.结果 食管癌患者Th1类细胞因子INF-γ、IL-2表达含量较健康对照组降低[(11.51±2.15)、(16.31±2.27)ng/L,t=18.24,P＜0.01);(10.20±2.10)、(16.92±2.41)ng/L,t=15.31,P＜0.05];Th2类细胞因子(IL-4)较健康对照组升高[(5.30 -0.11)、(2.23±0.29)ng/L,t=5.79,P＜0.05],且其表达趋势与肿瘤的TNM分期有关.结论 食管癌患者体内存在Th1/Th2漂移现象.该现象可能与肿瘤细胞发生免疫逃逸有关.

Abstract：

Objective To study the expression of Th1 and Th2 types cytokines in patients with esophageal squamous cell carcinoma and the clinical significance. Methods The expressions of Th1 ( INF-γ、IL-2) and Th2 (IL-4) types cytokines in cultured peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 30 healthy controls and 45 esophageal squamous cell carcinoma patients were determined by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with the control group, the expressions of Th1 type cytokines, IL-2 and INF-γwere significantly lower in the cultured PBMCs from the cancer patients (tINF-γ= 18. 24 ,tIL-2 = 15.31 ,Ps ＜0. 01 ) ,while the expression of Th2 type cytokines,IL-4 was significantly higher in the cultured PBMCs from the cancer patients ( tIL-4 = 5.79, P ＜ 0. 05 ). The expression changes of the cytokines showed a correlation with TNM (tumou-node-metastasis) stage of the tumor. Conclusion The Th1/Th2 shift existed in patients with esophageal squamous cell carcinoma and it might be one of the underline mechanisms of tumor immune escape.     

骨髓增生异常综合征患者T细胞异常极化导致的负性造血调控

目的研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓T细胞极化状况及其与骨髓上清液中促凋亡因子TNF—α、INF-γ水平及造血细胞凋亡的关系。方法采用流式细胞术检测34例MDS患者骨髓T细胞极化亚群状况，用ELISA法检测骨髓上清液TNF—α、INF-γ水平，并用TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测骨髓造血细胞凋亡状况，分析三者间的相关性。结果①MDS患者骨髓，Th1细胞百分比[（10．1±1．6）％]和Tc1细胞百分比[（24．0±3．6）％]以及Tc1／Tc2值（50．0±11．1）明显高于正常对照[分别为（4．0±0．5）％，（5．8±0．6）％和13．4±2．7]；MDS患者骨髓上清液INF．1浓度[（58．6±21．7）μg／L]和TNF—α浓度[（15．7±3．8）μg／L]较正常对照[分别为0和（0．3±0．2）μg／L]明显升高；MDS患者骨髓造血细胞凋亡指数[（7．8±1．5）％]明显高于正常对照[（2．1±0．3）％，P〈0．05]。骨髓Th1细胞数与骨髓上清液INF-γ和TNF—α浓度呈正相关（r值分别为0．38和0．39，P〈0．05），并与造血细胞凋亡指数呈正相关（r=0．33，P〈0．05）。骨髓上清液INF-γ，和TNF—α浓度与造血细胞凋亡也呈正相关（r值分别为0．74和0．73，P〈0．01）。②难治性血细胞减少伴多系发育异常（RCMD）组（18例）Th1、Tc1细胞百分比，Tc1／Tc2值较正常对照明显升高（P值均〈0．01），T细胞向Ⅰ型反应极化；RCMD伴环形铁粒幼细胞增多（RCMD—RS）（4例）、RAEB—1（5例）、RAEB-2组（7例）T细胞未显示异常极化。③IPSS低危组病例Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常升高，而高危组T细胞未见异常极化。④染色体核型正常的RCMD患者骨髓Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常对照明显升高。而核型异常组T细胞未见异常极化。结论MDS患者骨髓中Th1、Tc1细胞比例增高，Th1／Th2、Tc1／Tc2平衡向Ⅰ型反应极化，其中以RCMD组、IPSS低危组和染色体核型正常组患者的T细胞I型反应极化明显。骨髓造血细胞过度凋亡与Th1细胞以及INF-γ和TNF—α水平呈正相关，提示Th1细胞通过分泌INF-γ和TNF-α导致造血细胞过度凋亡。     

A novel immunogen to modulate cytokine production and promote immune system reconstitution in HIV-AIDS

This 'proof of concept' study was implemented in anticipation of identifying and testing a novel antigen of human origin as a potential immunogen in a paradigm that emphasizes immunomodulation and immune system reconstitution as requisites to the development of an effective human immunodeficiency virus (HIV)-acquired immune deficiency syndrome vaccine. Fifteen HIV-infected, highly active antiretroviral therapy (HAART) naive, otherwise healthy male seropositive patients were stratified by [CD4+] into 3 groups of 5 patients: group 1 >500/mm; group 2 > 250/mm but <500/mm; and group 3 < 250/mm. Five healthy male subjects were used as controls. Replicate peripheral blood mononuclear cell (PBMC) [H]thymidine uptake phytohemaglutinin-stimulated proliferation studies, and serum cytokine assays were carried out in the presence or absence of Kveim antigen at dilutions ranging from 0.001 to 100 μg/mL. Serum cytokines [interleukin-2 (IL-2), IL-4, IL-6, interferon gamma, and tumor necrosis factor alpha] were assayed using standardized methodology. Nonparametric statistical analyses and linear regression analysis were used to test for statistical significance and strength of associations. PBMCs harvested from HIV-infected patients and incubated, ex vivo, demonstrated reproducible, antigen concentration-dependent changes in cytokine production over a range of antigen concentrations (0.001-100 μg/mL) in contrast to antigen-naive PBMCs and controls. Significant correlations were demonstrated between antigen concentration and the amount of cytokines secreted. The magnitude of the cytokine response and the patterns of cytokine secretion were HIV group-specific and could be used to identify and distinguish between the 3 groups of HIV-infected subjects. A shift toward the production of type 1-like (Th1) cytokines characteristically seen in systemic sarcoidosis and associated with effective HAART was seen when patterns of cytokine secretion were compared between antigen exposed and antigen-naive PBMCs. PBMCs harvested from seropositive HIV-infected patients and exposed to the Kveim antigen have the following properties: (1) They demonstrate proliferation and exhibit an antigen concentration-dependent secretion of cytokines. The magnitude of the cytokine response can be used to identify and distinguish between groups of seropositive patients stratified by [CD4+]. (2) These PBMCs secrete cytokines in patterns suggestive of a shift to a type 1-like (Th1) response characteristic of HAART and sarcoidosis as opposed to the type 2-like (Th2) cytokine profile characteristic of HIV-acquired immune deficiency syndrome.