P38 MAPK信号通路在漆树酸改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase, P38 MAPK)信号通路在漆树酸改善苯肾上腺素(phenylephrine, PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用。方法:原代培养新生小鼠心肌细胞,PE诱导心肌细胞肥大。按随机数字表法将细胞分为空白对照组、溶剂对照组、PE组、PE+漆树酸组、PE+漆树酸+P38抑制剂组和PE+P38抑制剂组。收集干预48 h后的乳鼠心肌细胞进行以下检测:Western blot检测p-P38、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetylated histone H3 at lysine 9, H3K9ac)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)的蛋白表达水平,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)法验证p-P38与H3K9ac蛋白之间的相互作用,RT-qPCR检测肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C, MEF2C)mRNA表达水平,免疫荧光染色观察小鼠心肌细胞表面积。结果:West...     

促红细胞生成素抑制TGF-β诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖

目的 探讨促红细胞生成素在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖中的作用.方法 培养大鼠CFs.实验分为对照组(control)、TGF-β刺激组(TGF-β终浓度为5μg/L)和重组人促红细胞生成素(rhEPO,5 000 U/L)干预组:1h后加入TGF-β.24 h后计数细胞并采用MTT法观察细胞增殖;免疫细胞化学及Western blot法检测α-SMA表达,观察细胞转化;羟脯氨酸定量检测细胞胶原含量;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及MMP-2、MMP-9表达.结果 与对照组比较,TGF-β使细胞明显增殖(P＜0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成(P＜0.05)、α-SMA表达(P＜0.05)、细胞MMP-2、MMP-9表达增多(P＜0.05).使用重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预后,CFs增殖、α-SMA表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成较TGF-β组均显著降低(P＜0.05),MMP-2、MMP-9表达进一步增多(P＜0.05).结论 生理剂量EPO可抑制TGF-β诱导的大鼠CFs增殖、转化及胶原的合成,促进胶原降解.     

Epo-受体产品抑制促红细胞生成素诱导高血压

明尼苏达大学的Jong Y．Lee博士及其同事在8月的《高血压》（Hypertension，2007；50：439-445．）上报道，基因工程产品促红细胞生成素结合蛋白（Epo-bp）和抗Epo-bp抗体可以预防促红细胞生成素诱导的高血压，不影响红细胞压积。     

视黄醇结合蛋白1通过激活TAK1促进大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大

目的：探究视黄醇结合蛋白1(retinol binding protein 1, Rbp1)在大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大中的功能和机制。方法：本研究通过联合分析基因表达数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）中的小鼠心肌肥厚基因芯片数据,寻找在心肌肥厚发生过程中的关键调控因子,构建该基因过表达及敲减腺病毒并感染大鼠乳鼠原代心肌细胞,利用血管紧张素II(angiotensin II, Ang II)诱导大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大模型,研究目的基因对大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的影响,应用Western blot及RT-qPCR探究目的基因调控大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的分子机制。结果：在小鼠心肌肥厚心脏组织中Rbp1的表达显著上调（P<0.01）,体外细胞实验显示与对照组相比,Rbp1过表达组的大鼠乳鼠原代心肌细胞面积显著增大,心肌肥厚标志基因心钠肽（atrial natriuretic peptide, Anp）和肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7, Myh7)的表达显著升高（P<0.01）,证实Rbp1过表达能促进Ang II诱导的大...     

促红细胞生成素的信号传导及其生物学作用的研究进展

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)与其受体结合后,能够激活多条信号途径,使细胞核内特定基因转录发生改变,从而发挥作用。近年来的大量研究证明,EPO除了在血液系统发挥作用外,在神经系统,心血管系统,肝脏,肾脏,肿瘤等也发挥着重要作用,尤其在神经系统,心血管系统具有重要的保护作用。     

促红细胞生成素通过P13-K／Akt信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素11（AngⅡ）诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13-K／Akt）信号途径和-氧化氮合酶（NOS）的作用。方法：应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、AngⅡ、P13-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L—NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的-氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、P—Akt、内皮型-氧化氮合酶（eNOS）和诱生型-氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果：AngⅡ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs增殖。在给药后第4d,和单纯的AngⅡ相比,浓度为5&#215;10。U／L、1&#215;10^4U／L和2&#215;10^4U／LEPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24．4％、41．5％和50．5％。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用P13-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L—NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制AngⅡ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了cNOS蛋白表达,而L—NAME对cNOS没有影响。结论：EPO可剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活P13-K／Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

促红细胞生成素联合粒细胞集落刺激因子对大鼠缺氧心肌细胞的保护效应研究

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠缺氧心肌细胞的保护机制.方法 采用胰酶消化大鼠心肌细胞并传代,用150 μmol/L浓度的CoCl2处理心肌细胞,模拟缺氧条件.采用流式细胞仪检测不同EPO+ G-CSF浓度下心肌细胞的凋亡和坏死水平.筛选出最适浓度后,将实验组分为对照组、缺氧组、缺氧+ EPO组、缺氧+G-CSF组和缺氧+EPO+ G-CSF组,Western blot法检测乏氧诱导因子(HIF)-1α、P53、PARP蛋白的表达变化.结果 心肌细胞在10 U/mLEPO+200 ng/mL G-CSF培养下,心肌细胞凋亡和坏死水平最低,故认为是最适浓度(F=14.73、11.95,P ＜0.05).和对照组相比,HIF-1α、P53和PARP蛋白在各实验组中表达水平均升高,HIF-1α以缺氧组升高最显著(F=22.65,P＜0.05),P53以缺氧+EPO+ G-CSF组升高最显著(F =25.18,P＜0.05).除对照组外,PARP蛋白在实验组中呈现逐渐降低趋势(F=17.48,P＜0.05).结论 EPO-G-CSF能降低缺氧的心肌细胞凋亡、坏死和DNA损伤,其机制可能与HIF-1α、P53、PARP蛋白表达相关.     

促红细胞生成素对压力负荷过重小鼠心肌具有保护作用

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对压负荷过重引起的左心室重构是否具有保护作用。方法采用主动脉弓缩窄术(TAC)的方法建立小鼠模型,小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(TAC-PBS)和治疗组(TAC-EPO)。术后8周,测定红细胞压积与左心室(LV)重量,苏木精-伊红染色测定心肌细胞的横截面积,马松染色与狼星红染色测定心肌间质纤维化的面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,绘制小鼠生存曲线。结果与Sham相比,模型组和治疗组左心室重量均显著升高,给予EPO治疗后,红细胞压积明显增加(P0.01),但是心肌细胞的横截面积无明显变化(P0.05)。与模型组相比,EPO治疗可显著改善TAC小鼠生存率,减少心肌纤维化及TUNEL阳性心肌细胞数量(P0.05)。结论EPO对压负荷过重引起的左心室重构和过早死亡具有保护作用。     

重组人促红细胞生成素抑制内皮细胞凋亡的实验研究

目的：探讨重组人促红细胞生成素（Recombinant human eryfhropoietin,rHuEPO)对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endotheilial cells,HUVECs)凋亡的影响。方法：实验分为四组;第一组仅用LPS处理;第二组预先用rHuEPO孵育后再用LPS处理;第三组只用rHuEPO处理;对照组用无血清的M199培养。用流式细胞仪DNA分析检测细胞凋亡。结果：与对照组相比,LPS处理后的细胞DNA亚二倍体含量显著增加（P＜0．05）,预先用rHuEPO处理后则可显著降低LPS的这种作用（P＜0．05）。结论：rHuEPO抑制了LPS诱导的内皮细胞凋亡,这种保护作用可能是rHuEPO诱导内皮细胞生长和血管生成的一个重要因素。     

促红细胞生成素对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1表达影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠肾间质纤维化发动蛋白．1（Drp-1）表达的影响。方法81只sD大鼠,分为假手术组、对照组和EPO组,每组各27只。EPO组、对照组采用单侧输尿管结扎并剪断建立肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎和剪断;EPO组予EPO皮下注射;假手术组和对照组给予等量生理盐水皮下注射。各组于术后7、14和21d取动脉血分离血清检测血肌酐和尿素氮水平。取梗阻侧肾组织行苏木精．伊红和Masson染色,观察肾脏病理学变化。用免疫组化方法检测肾组织Drp一1的表达。结果@EPO组各时点血清肌酐和尿素氮水平显著低于对照组（P〈0．01）,但高于假手术组（P〈0．05）。②EPO组各时点肾组织病理改变较对照组明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均低于对照组（P均〈0．05）,但高于假手术组（P〈0．05）。③EPO组肾组织的Drp．1表达显著低于对照组（P〈0．05）,但高于假手术组（P〈0．05）。结论Drp-1在大鼠肾间质纤维化肾组织中表达增加,参与。肾脏纤维化过程;EPO可以通过抑制Drp一1表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。     

继发性红细胞增多症患者血清促红细胞生成素水平的变化

目的 检测继发性红细胞增多症患者血清促红细胞生成素（EPO）的水平,探讨其改变的临床意义.方法 选择32例继发性红细胞增多症患者、15例真性红细胞增多症患者和30例健康者,采用夹心酶联免疫法测定其血清EPO.结果 继发性红细胞增多症患者EPO水平（中位数41.50mIU/mL）明显高于真性红细胞增多症患者（中位数9.60mIU/mL）和健康对照组（中位数15.30mIU/mL）,差异有统计学意义（U值分别为68.5和106.5,P值均＜0.01）;根据受试者操作特性曲线（ROC曲线）分析,曲线下面积为0.839,EPO检测继发性红细胞增多症的临界值为22.43 mIU/mL时,其敏感度为71.88％、特异性为82.22％;在继发性红细胞增多症患者中,血清EPO水平与RBC呈显著正相关（r=0.825,P＜0.01）,与Hb呈正相关（r=0.772,P＜0.01）.结论 EPO水平增高可能与继发性红细胞增多症的发生发展相关;EPO是直接反映继发性红细胞增多症的一项敏感、特异的指标,可作为继发性红细胞增多症诊断的辅助指标.     

促红细胞生成素通过PI3-K/Akt信号通路抑制血管紧张素II诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的： 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3-K/Akt）信号途径和一氧化氮合酶（NOS）的作用。方法: 应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的一氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果: Ang Ⅱ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CFs增殖。在给药后第4 d,和单纯的Ang Ⅱ相比,浓度为5×103 U/L、1×104 U/L和2×104 U/L EPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24.4％、41.5%和50.5%。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用PI3-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L-NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制Ang Ⅱ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了eNOS蛋白表达,而L-NAME对eNOS没有影响。结论: EPO可剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

促红细胞生成素的神经保护作用

EPO主要的生理功能是调节红细胞生成，而研究发现EPO系统在神经系统的广泛分布，提示其可能对中枢神经系统具有重要作用。EPO还对缺血缺氧神经系统具有保护作用并具有临床应用前景。EPO发挥神经保护作用主要通过活化特异性受体、激活下游的多种信号转导通路及通过多种可能的作用机制发挥缺氧神经保护作用。     

促红细胞生成素的神经保护作用

促红细胞生成素 (EPO)是一个调节血细胞生成的细胞因子 ,近来发现EPO在大脑中广泛存在 ,具有神经保护作用 ,其保护机制为抗神经细胞凋亡、抗氧化、抗炎症和维持脑血管结构和功能正常。EPO神经保护作用具有时间、剂量依赖性。     

促红细胞生成素对β淀粉样蛋白诱导大鼠海马损伤的保护作用以及对大鼠学习记忆的影响

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠脑损伤的保护机制。方法:采用大鼠海马内注射β淀粉样蛋白制作AD模型。将SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组及EPO处理组。Aβ1-40大鼠海马内注射造模,在生理盐水对照组大鼠行脑室立体定向注射生理盐水,EPO处理组则行脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)。观察手术后7 d海马CA1区细胞凋亡变化,及缺血造模后4周大鼠学习和记忆力的变化。结果:EPO处理组大鼠海马CA1区凋亡细胞较生理盐水对照组减少(P<0.01),EPO处理组大鼠学习记忆能力明显高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:EPO可以抑制Aβ1-40诱导海马CA1区细胞凋亡,保护AD大鼠学习记忆功能。     

靶肌肉注射促红细胞生成素对大鼠周围神经再生的作用

目的探讨靶肌肉注射人重组促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin，rh-EP0）对大鼠坐骨神经损伤后神经再生的作用。方法选用健康雄性SD大鼠12只，制备大鼠右侧坐骨神经钳夹损伤模型。实验动物随机分为2组，每组6只，EPO组：靶肌肉注射rh-EPO2500U／kg；对照组：注射同体积的生理盐水。术后第7d、14d、21d观察坐骨神经功能指数（SFI），第21d组织学观察脊髓腰膨大（L4～L6）、夹伤远端坐骨神经、损伤侧腓肠肌组织并作图象分析测定脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、髓鞘厚度、轴突直径和腓肠肌肌细胞横截面积等指标。结果术后第7d两组SFI无显著性差异，术后第14d、21dEPO组SFI恢复程度明显大于对照组，差别有显著性意义（P〈0．05）；术后第21d损伤侧脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、髓鞘厚度、轴突直径和腓肠肌肌细胞横截面积等指标，EPO组均优于对照组（P〈0．01，P〈0．05）。结论靶肌肉注射rh-EPO能促进周围神经再生和功能恢复。     

重组人促红细胞生成素对小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的影响

目的初步观察外源性细胞因子重组人促红细胞生成素（NEPO）对小鼠胚胎干细胞（ESC）向心肌细胞分化的影响。方法将NEPO加到细胞培养基中配成终浓度分别为0．5、1．O、5．0U／ml的诱导分化液，分别在分化第8、12天观察ESC自发及在rhEPO诱导情况下心肌细胞分化率；在分化第7天应用RT-PCR检测自发分化组及NEPO诱导组心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2．5mRNA的相对表达。结果在分化第8、12天rhEPO诱导（1．0U/ml）心肌细胞分化率分别显著高于对应分化天数的自发心肌细胞分化率（0．11±0．02对0．05±0．01，P〈0．05；0．86±0．02对0．65±0．05，P〈0．05）；与自发分化组比较．NEPO干预（1．0U／ml）上调GATA-4、Nkx2．5mRNA的相对表达。结论外源性rhEPO早期干预能够促进ESC向心肌细胞分化。     

促红细胞生成素防治早产儿贫血的疗效观察

目的观察重组人类促红细胞生成素(rhEPO)防治早产儿贫血的疗效.方法将45例早产儿随机分为治疗组30例、对照组15例.治疗组给予rhEPO 400IU/kg,每周2次,皮下注射,用药4w;对照组未用rhEPO;两组患儿均给每天口服铁,按元素铁6mg/(kg·d)计算,口服维生素E25mg/d,维生素C 0.2g/d.结果①两组在生后Hb、RBC、HCT均有下降,治疗组下降程度较轻,治疗结束后两组差异均有非常显著性意义(P＜0.01);②治疗后治疗组Ret较对照组显著升高,两组差异有非常显著性意义(P＜0,01);③血清铁蛋白水平(SF)在用药期间治疗组明显低于对照组,治疗结束后,治疗组血清SF上升,两组比较无显著性差异(P＞0.05);④治疗组贫血发生率(15.3%)较对照组(40%)明显减少,两组差异有显著性意义(P＜0.05);⑤治疗组体重增长指标高于对照组,两组差异有显著性意义(P＜0.05).结论rhEPO能有效防治早产儿贫血,且用药安全,无明显副作用.     

HO-1/CO系统抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的 探讨血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)系统对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,随机分为:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+氯化血红素(hemin)(HO-1诱导剂)组和AngⅡ+锌原卟啉-9(ZnppIX)(HO-1抑制剂)组.用real-time PCR及Western blot检测心肌细胞HO-1mRNA和蛋白的表达,比色法测定细胞培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 AngⅡ组心肌细胞HO-1 mRNA、蛋白、COHb含量和细胞凋亡均明显高于对照组(P＜0.05),AngⅡ+hemin组HO-1mRNA、蛋白、COHb含量进一步升高(P＜0.05),而细胞凋亡回降(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05),AngⅡ+ZnPPIX组仅细胞凋亡湿著升高(P＜0.05),其他指标无显著变化.结论 HO-1/CO系统对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用.     

促红细胞生成素对慢性肾性贫血患者红细胞CR1分子表达的影响

重组人促红细胞生成素(rhEPO)可促进红细胞生成,已被广泛用于肾性贫血的治疗[1] 。红细胞上的1型补体受体(CR1)其主要的免疫功能是清除循环中免疫复合物(CIC) ,并可将携带抗原给T细胞增强其免疫应答,参与免疫调节作用[2 ] 。为此,我们采用ELISA法,测定了rhEPO治疗前后2 8例肾性