骨髓间充质干细胞移植大鼠缺血心肌后GATA-4mRNA的表达

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植于大鼠缺血心肌后,心脏早发育基因GATA-4 mRNA的表达。方法设模型组、假手术组和空白对照组,其中模型组采用"冠脉结扎法"建立大鼠急性心肌梗死(AMI)模型。收集从SD雄性大鼠胫骨和股骨骨髓中分离、培养、鉴定后的MSCs,密度调至3×106/100μL悬液,移植于缺血心肌边缘组织的3个位点直接注入共100μL的MSCs细胞悬液,假手术组和空白对照组均在与模型组相同注射部位的3个位点直接注入共100μL的MSCs细胞悬液,28 d后处死大鼠进行相关实验样本处理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心肌组织中GATA-4 mRNA的表达。结果 MSCs移植模型组和假手术组的大鼠心肌中存在GATA-4 mRNA的表达;而空白组的心肌中未检出GATA-4 mRNA的表达,对其IOD值半定量分析,模型组高于假手术组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论 MSCs在进入缺血心肌环境后,细胞内的心肌特异转录过程被再次激活,确立了MSCs向心肌细胞分化的方向。     

外泌体对过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化能力促进作用的研究

目的　探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）通过外泌体促进BMSCs向心肌细胞分化的能力。方法　2016年1—6月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠10只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的BMSCs,并加入基因开启剂多西环素（DOX）。采用ExoQuick-TC提取分泌的外泌体。将GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养（A组）、空载体-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养（B组）、BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养（C组）、BMSCs单独培养（D组）及小鼠心肌细胞单独培养（E组）72 h,采用荧光染色定性检测和反转录聚合酶链式反应（qPCR）定量检测肌钙蛋白T（cTnT）、α肌动蛋白（α-actin）、Connexin 43、肌间线蛋白（Desmin）的表达。结果　免疫荧光定性检测结果显示,A组GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养72 h可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;B、C、D组可见细胞核被DAPI染为蓝色,没有表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;E组可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin。qPCR法检测结果显示,5组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;其中E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较A组升高;A组和E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较B组、C组和D组升高（P<0.05）。结论　过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体可以有效促进BMSCs向心肌细胞分化。     

GATA4基因修饰骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的: 研究锌指转录因子(GATA4)基因修饰骨髓间充质干细胞（MSCs）对心肌梗死大鼠心功能的影响,为进一步探讨其机制提供依据。方法: 构建GATA4-pEGFP基因质粒,体外分离培养大鼠MSCs,利用脂质体将质粒转染入MSCs。40只SD大鼠制备大鼠心肌梗死模型,于术后10 d测定心功能指标。将模型鼠随机分为MSCs 组和DMEM组,每组各20只。MSCs 组将GATA4-pEGFP基因修饰的MSCs植入心肌梗死后10 d大鼠心肌梗死区,DMEM组同时注射等体积无血清DMEM于心肌梗死区。移植注射后4周,检测左心室射血分数（LEVF）和左室缩短分数（FS）。结果: 体外分离培养的MSCs呈梭形或条形,贴壁生长 。 GATA4-pEGFP重组基因质粒转染MSCs 2周后,可见细胞中有绿色荧光蛋白表达。移植4周后,MSCs组大鼠LEVF（85%±7%）明显高于DMEM组(47%±4%)（P<0.01）; MSCs组大鼠FS(52%±6%)明显高于DMEM组(35%±8%)（P<0.01）。结论: GATA4基因修饰的MSCs移植能够改善心肌梗死大鼠心功能。     

大鼠骨髓间充质干细胞转染GATA-4的表达及鉴定

目的基因修饰间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是增加细胞抗缺氧的新方向。文中通过建立稳定的基因重构MSC细胞模型研究GATA-4转染骨髓MSC的特征及鉴定,为GATA-4修饰的MSC应用于急性心肌梗死等心肌疾病的治疗提供有效的技术手段。方法分离、培养及纯化新生大鼠MSC,用流式细胞仪进行鉴定。将培养第3代的MSC用pMSCV逆转录病毒表达系统转染GATA-4基因(MSCGATA-4),对照组为空质粒组(MSCNull)。用RT-PCR、Western blot印迹和免疫组化鉴定转染的效果。结果大鼠MSC表面抗原CD45和CD44表达阴性,CD31表达弱(<3%),CD90表达强阳性,其阳性率达95%。MSCGATA-4组GATA-4 mRNA和蛋白表达明显高于对照组MSCNull。MSCGATA-4组GATA-4和GFP都显示阳性,而对照组只表达GFP。结论 GATA-4成功转染到MSC,这将为研究GATA-4对MSC抗缺氧作用奠定基础。     

骨髓间充质干细胞向心肌诱导过程中GATA-4和Nkx2.5基因的表达

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌诱导分化过程中,心肌转录因子GATA.4和Nkx2.5基因表达的变化规律,探讨其分子生物学机理.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代以10 pmol/L 5-氮杂胞苷(5-aza)诱导.分别于第1、2、3、4周收集细胞,免疫细胞化学法和Western blot法检测肌钙蛋白I(troponinI,TnI)表达·RT-PCR法分析GATA-4和Nkx2.5基因的表达.结果 诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周开始出现TnI阳性细胞,第1周开始即有GATA-4和Nkx2.5基因表达,逐渐增强,第3周达到高峰,持续到第4周.结论 GATA·4和Nkx2.5基因表达在骨髓同充质干细胞向心肌样细胞诱导过程中逐渐增强,可能参与调控心肌细胞的分化过程.     

骨髓间充质干细胞与心肌细胞再生和心脏修复

长期以来，心肌细胞被认为是不可能发生损伤修复的。但是，近年来随着干细胞移植的兴起，这一观念发生了改变，许多研究已证实心肌可通过多种途径发生再生和修复，缺血心肌的再生和修复已成为心血管病研究领域的一大热点。而骨髓问充质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）是存在于骨髓基质中的一种非造血系干细胞，它不但能够在体外扩增，而且具有多向分化的潜能，可通过诱导分化为心肌细胞，促进血管新生等多种途径参与心肌的再生和修复，虽然其作用机制还有待进一步探讨，但这也将为治疗心肌梗死等缺血性心脏病开辟一条新的途径。本将对BMSCs与缺血心肌细胞再生和修复的研究进展作一综述。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠损伤心肌的修复效果

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对心肌梗死大鼠损伤心肌的修复效果,为进一步提高BMSCs移植治疗心肌梗死的疗效提供实验依据.方法 将22只大鼠参照Olivette方法制作心肌梗死模型,共16只进入实验终点,随机分为2组:对照组(C组,n=8)梗死区注射P BS;骨髓间充质干细胞移植组(M组,n=8)梗死区注射BMSCs.术后喂养4周,行心脏彩超,取心脏组织,荧光显微镜观察BMSCs的分布、分化及梗死区毛细血管密度.结果 标记CM-Dil和cTnT免疫组织化学染色双重阳性的心肌样细胞在梗死区分布.与C组相比,M组大鼠左室收缩末期内径(LVEDd)、左室舒张末期内径(LVEDs)、射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)均有明显改善(P＜0.05),毛细血管密度明显增加(P＜0.05).结论 BMSCs可在心肌梗死的大鼠心脏分化为心肌样细胞,提高梗死区毛细血管密度,改善心功能.     

骨髓间充质干细胞和心肌梗死

近年来冠心病的发病率和死亡率居高不下,探求新的更为理想的治疗心肌梗死的方法,也一直是研究的热门课题,虽然成果显著,但现有的治疗方法,如药物、溶栓、经皮冠脉内成形和支架植入术(PTCA S)以及外科手术等,都有一定的局限性和并发症.     

骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的实验研究进展

干细胞是一类未充分分化的可自我复制与多向分化的多潜能细胞。按照发生学来源及细胞发育的各个阶段可将干细胞分为胚胎干细胞（embryonicstemcells,ESCs）和成体干细（adultstemcells,ASCs）。目前骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）治疗心肌梗死已经成为一种新的治疗趋向,在治疗应用方面有着巨大的潜力,但其可行性仍存在争议。     

骨髓间充质干细胞对脊髓损伤的修复

脊髓间充质干细胞(MSCs)是近年来对脊髓损伤(SCI)修复研究的热点。移植的MSCs能向损伤部位自主移行,并分泌神经营养物质和细胞因子,促进损伤脊髓修复和神经功能恢复,显著改善SCI患者的神经功能缺失。通过查阅近年来国内外相关文献,对MSCs生物学特性、移植治疗SC I的实验研究、治疗机制进行讨论和分析,为SCI及相关研究提供参考资料。     

骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中肝细胞相关转录因子的表达

目的 观察体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中肝细胞相关转录因子的表达和分布.方法 从大鼠骨髓中分离间充质干细胞,体外诱导分化为肝细胞.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 比较肝细胞分化过程中转录因子肝细胞核因子4α(HNF4α)、CCAAT增强子结合蛋白α和β(C/EBPα和C/EBPβ)在诱导分化组和对照组中的表达水平;免疫荧光染色方法 检测HNF4α在细胞中的表达定位.结果 在肝细胞分化成熟过程中,转录因子HNF4α和C/EBPα的mRNA表达水平在诱导分化早期的细胞中显著高于对照组细胞,而C/EBPβ mRNA表达水平在分化成熟的细胞中显著高于对照组细胞(P<0.05).免疫荧光染色结果 显示,HNF4α定位于分化细胞核内.结论 在肝细胞分化过程中,转录因子HNF4α、C/EBPα和C/EBPβ呈特征性时序表达,表明骨髓间充质干细胞在向肝细胞分化时,肝细胞相关转录因子的表达与细胞分化的启动和维持密切相关.     

移植时机对骨髓间充质干细胞修复梗死心肌的影响

目的:观察心肌梗死后不同炎症微环境对骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后在大鼠梗死心肌中的定位、存活及分化情况,探讨细胞治疗的最佳时间窗. 方法:建立大鼠左冠状动脉结扎的心肌梗死模型,心肌梗死后1 h及1,2,4,8 wk分别取心脏进行组织学观察;将经过4',6-二脒-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)标记的同种骨髓间充质干细胞在心肌梗死后1 h及1,2,4,8 wk移植到心肌梗死边缘区(每组n=10),对照组心肌梗死后1 h注射等量培养基(n=10). 心肌梗死后不同时间点采集心脏标本进行HE染色观察炎症反应的变化,细胞移植治疗各组在心肌梗死后8 wk测定心脏功能、心脏瘢痕面积以及免疫组化染色鉴定细胞分化情况. 结果:分离纯化的大鼠MSCs经流式细胞术鉴定为CD44 CD90 /CD34-CD45-CD31-,心肌梗死后1 wk梗死相关区的炎症反应较强,2 wk时减弱, 4～8 wk时瘢痕完全形成并出现左室重塑. 1 wk移植组未发现有移植细胞存活, 左室心功能及瘢痕面积百分比与对照组相似,1 h及2,4 wk细胞移植组心肌组织冰冻切片中可观察到大量标记细胞存在,并向周围迁移分布,免疫组化显示阳性标记细胞desmin, ctnI 阳性,左室血流动力学指标及瘢痕面积百分比与对照组比较均有改善(P<0.05), 2 wk的左室收缩末压力、左室最大上升速率及瘢痕面积百分比的改善优于1 h组和4 wk移植组(P<0.05). 结论:心肌梗死后炎症反应强烈, 不利于移植细胞的存活,而在炎症减弱的瘢痕修复早期尽早进行MSCs移植可能对于细胞的存活及心功能的恢复较为有利.     

骨髓间充质干细胞与细胞心肌成形术的研究进展

通常认为哺乳动物心肌细胞是终末分化细胞，不能再生。心肌细胞坏死后．心脏纤维组织增生，心室重塑，心功能下降，最终发展成慢性心力衰竭。再灌注治疗，不能修复及逆转已坏死的心肌细胞，慢性心衰患的远期生存率低，预后差。     

自体骨髓间充质干细胞心肌移植治疗急性心肌梗死的实验研究

目的：观察骨髓间充质干细胞（BMSC） 植入猪急性心肌梗死（AMI） 区的转归及治疗作用.方法：选择10只体重35～45 kg的家猪,经导管应用球囊封堵前降支动脉,建立心肌梗死模型,将存活的9只动物随机分为2组：（1）实验组5只,取骨髓分离BMSC体外培养扩增,建立模型2周后,通过心肌注射的方法将自体骨髓BMSC 移植至AMI 区;（2）对照组4只动物注射等量生理盐水.4 周后比较2组的生存率、心功能变化、心肌功能性蛋白质表达的差异.结果：BMSC移植后,实验组动物心功能得到明显改善,梗死区室壁运动速度加快,局部室壁厚度加快,心肌移植细胞部位表达连接蛋白GATA-4等心肌功能性蛋白质.结论：骨髓BMSC 经冠脉转运在心肌微环境下可向心肌细胞分化,并能改善心功能.     

过表达GCNF诱导骨髓间充质干细胞凋亡的相关研究

目的研究过表达生殖细胞核因子(GCNF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的可能机制。方法通过过表达GCNF腺病毒上调BMSCs中GCNF表达水平,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,MTT检测细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡,Caspase3/8/9检测细胞凋亡蛋白活性。结果 BMSCs细胞中GCNF过表达后,GCNF蛋白亚细胞定位于细胞核,细胞活力降低,凋亡通路被激活。结论腺病毒GCNF过表达能降低大鼠BMSCs细胞活力,增加其凋亡水平。     

骨髓间充质干细胞对心肌梗死治疗的研究进展

骨髓间充质干细胞拥有心肌再生的能力,移植后能够产生心肌样细胞,促进血管生成,分泌多种生长因子与细胞因子。本文总结了心肌修复的分子机制,探讨了心肌梗死后心肌潜在的再生能力,回顾了以往研究中干细胞移植对心肌梗死后心肌修复的治疗效果,为制定临床策略提供了新的思路。     

骨髓间充质干细胞对心肌梗死治疗的研究进展

骨髓间充质干细胞拥有心肌再生的能力,移植后能够产生心肌样细胞,促进血管生成,分泌多种生长因子与细胞因子。本文总结了心肌修复的分子机制,探讨了心肌梗死后心肌潜在的再生能力,回顾了以往研究中干细胞移植对心肌梗死后心肌修复的治疗效果,为制定临床策略提供了新的思路。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一种具有多向分化潜能和自我复制功能的非造血干细胞。BMSCs移植在治疗急性心肌梗死方面已经表现出传统治疗方法无可比拟的优越性。BMSCs可以在梗死的心肌中分化形成有功能活化的心肌、血管、内皮等组织,从而改善心脏的功能。但对于BMSCs移植的最佳治疗途径、最佳治疗时机、评价手段和长期安全性等仍存在着质疑。随着细胞生物工程技术的发展,BMSCs移植将成为血管成形术后另一种治疗心肌梗死的突破性的治疗方法。