中华眼镜蛇毒组分抗白血病作用的实验及初步临床应用研究

目的：研究眼镜蛇组分对白血病细胞的直接作用及临床疗效。方法：应用ＭＴＴ法检测眼镜 毒组分对ＨＬ６０等９株白血病细胞系的毒性作用及量效关系;初步观察静脉滴注眼镜蛇毒组分治疗８例恶性血液病患者的效果。结果：眼镜蛇毒组分对９株人白血病细胞系均有明显的抑制作用,ＩＣ５０为０．００６～４．４０μｇ／ｍｌ,且呈较好的量效关系（ｒ为０．６６～０．９９;Ｐ〈０．２～０．００１）。初步的临床观察结果显示,一疗程后８     

Bcl-2、Bax和Fas、FasL与急性白血病的关系

随着研究工作的不断深入 ,越来越多的资料显示与细胞恶性增殖和分化受阻一样 ,细胞凋亡异常在大多数恶性肿瘤的发病学上有重要地位。在恶性肿瘤的发病过程中 ,细胞凋亡异常的发生机制几乎涉及到细胞凋亡信号途径的所有方面 ,其中研究最深入、广泛的是凋亡抑制基因和凋亡活化基因的异常 ,下面就介绍一下凋亡抑制基因Ｂｃｌ- 2和凋亡活化基因Ｂａｘ以及Ｆａｓ、ＦａｓＬ与急性白血病 (ＡＬ)的关系。1　Ｂｃｌ 2Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ和Ｃｒｏｓｅ[1] 在绝大多数非霍奇金滤泡状Ｂ细胞淋巴瘤中发现存在染色体易位ｔ(14;18) ,该异位导致定位于 18号…     

抗细胞凋亡基因BcL-2和Bax与卵巢肿瘤的关系

研究抗凋亡基因ＢｃＬ－２和凋亡基因Ｂａｘ与卵巢肿瘤发生及预后的关系。方法：通过免疫组化方法,用抗ＢｃＬ－２和Ｂａｘ的抗体检测７２份卵巢肿瘤标本ＢｃＬ－２和Ｂａｘ的表达产物,并以正常卵巢１２份做对照。结果正常久巢组织中ＢｃＬ－２和Ｂａｘ的阳性检出率为零。在良性及恶性肿瘤组织中ＢｃＬ－２的阳性检出率分别为１８／３０、６／４２,良恶性之间差异有显著性;Ｂａｘ的阳性检出率分别为５／３０、２２／４２,良恶性     

自发性高血压大鼠细胞凋亡相关基因蛋白的研究

目的：研究自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞Bax和Bcl-2基因蛋白表达的变化及其与心肌细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组化和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测Bax和Bcl-2基因蛋白及凋亡细胞。结果：(1)心肌细胞凋亡和Bax基因蛋白表达在1月龄SHR组(NLVH组)和18～20月龄SHR组(CHF组)显著增高且Bax基因蛋白表达与心肌细胞凋亡呈显著正相关(P均＜0.01)。(2)在10月龄SHR组(LVH组),心肌细胞凋亡显著降低但Bcl-2基因蛋白表达显著增高且Bcl-2基因蛋白表达与心肌细胞凋亡呈显著负相关(P均＜0.01)。(3)NLVH组和CHF组Bcl-2/Bax比例显著降低,但LVH组Bcl-2/Bax比例显著增高且Bcl-2/Bax比例与心肌细胞凋亡呈显著负相关(P均＜0.01)。结论：SHR心肌细胞Bax和Bcl-2基因蛋白表达及心肌细胞凋亡存在动态变化,且Bax基因蛋白表达上调可能与SHR心肌细胞凋亡增加和CHF相关而Bcl-2基因蛋白表达上调则可能与SHR心肌细胞凋亡减少和LVH有关。因此,Bax和Bcl-2基因蛋白表达的动态变化可能在SHR心肌细胞凋亡和心脏重构中起重要作用。     

中华眼镜蛇毒组分C与传统TACE化疗药体外抑制人肝癌细胞株作用的差异

目的：研究中华眼镜蛇毒组分Ｃ（Ｆｒａｃｔｉｏｎ Ｃｆｒｏｍ Ｎａｊａ Ｎａｊａ Ａｃｔｒａ Ｖ ｅｎｏｍ,ＦＣ）体外对人肝癌细胞株的细胞毒作用和机理,并与传统肝动脉插管栓塞／灌注化疗（Ｔｒａｎｓｃａｔｈｅｔｅｒ Ａｒｔｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ,ＴＡＣＥ）药进行比较。方法：应用ＡＴＴ法、流式细胞仪等方法,观察ＦＣ人肝癌细胞株（Ｂｅｌ－７４０２）、人支气管上皮细胞株（ＨＢＥ１６）     

中华眼镜蛇毒心脏毒素—13对猪离体冠脉的作用

探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化获得的心脏毒素－１３对离体冠脉血管平滑肌的作用和机制。用离子交换和凝胶过滤法从中华眼镜蛇毒中分离纯化出心脏毒素。以不同浓度ＣＴＸ－１３分别作用于猪冠脉环，观察记录其所诱发的血管环收缩。普萘洛尔，哌唑嗪和尼群地平分别与冠脉环预作用５ｍｉｎ，再分别给予不同浓度的ＣＴＸ－３，观察记录其收缩强度的变化。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ诱导多药耐药白血病细胞K562/A02凋亡

目的 :研究中华眼镜蛇毒组分CⅡ (FCⅡNNAV)对多药耐药白血病细胞K5 6 2 /A0 2的抑制作用及机制。方法 :应用MTT法、荧光显微镜法、流式细胞仪法 ,观察FCⅡNNAV单用及联合阿霉素 (ADM)体外对K5 6 2 /A0 2的毒性作用、凋亡作用及对Bcl 2表达的影响。结果 :FCⅡNNAV单用对耐药K5 6 2 /A0 2及敏感K5 6 2细胞均有抑制作用 ,IC50 分别为 (0 .75± 0 .0 1) μg/mL和 (0 .6 7± 0 .11) μg/mL。FCⅡNNAV联合ADM体外对细胞K5 6 2 /A0 2有较强的协同抑制作用。荧光显微镜、流式细胞仪检测FCⅡNNAV能明显诱导细胞K5 6 2 /A0 2凋亡 ,凋亡率呈剂量依赖性增加。流式细胞仪检测发现FCⅡNNAV能使细胞K5 6 2 /A0 2的Bcl 2表达下调 ,表达率呈剂量依赖性减少。结论 :FCⅡNNAV对细胞K5 6 2 /A0 2及细胞K5 6 2均有较强的抑制作用 ,且抑制作用与剂量呈正相关 ,并与抗癌药ADM有较强协同作用。FCⅡNNAV能明显诱导K5 6 2 /A0 2细胞凋亡 ,其机制可能与Bcl 2表达下调有关。     

姜黄素对原代急性髓性白血病细胞凋亡及调控蛋白Mcl—1、Bax、Bak表达的影响

为探讨姜黄素诱导急性髓系白血病（AML）原代细胞凋亡的作用及其机制,采用流式细胞术作细胞周期分析并检测Sub-G1峰值,SABC法检测Bcl-2家族Mcl,Bax和Bak蛋白表达。结果显示姜黄素不影响初治AML原代细胞周期进展,但使Sub-G1峰值升高（P＜0．05）。在初治AML原代细胞,同样处理可下调Mcl-1表达、上调Bax和Bak表达,且结果有显著性差异,提示姜黄素可诱导初治AML患者原代细胞凋亡,Bcl-2基因家族成员参与姜黄素诱导白血病细胞凋亡。     

Bcl-2、Bax基因表达改变与禁食诱导的脂肪细胞凋亡研究

目的：研究禁食对大鼠体重及外周脂肪湿重的影响,探讨禁食减脂减重与脂肪细胞凋亡的关系。方法：禁食48h,用DNA提取物凝胶电泳证实脂肪细胞凋亡的存在,逆转录（RT）－PCR探讨Bcl-2与Bax基因的表达。结果：（１）禁食能明显降低大鼠体重,组间比较具有显著的统计学意义（P＜0．001）（2）禁食能减少外周脂肪组织湿重,但统计学意义不显著（P＞0．05）;（3）DNA提取物凝胶电泳结果证实脂肪细胞发生了凋亡;（4）外周脂肪组织中Bcl-2基因表达减少,Bax表达增加（5）生殖器周脂肪组织对细胞凋亡的敏感性高于腹膜后。结论：降低Bcl-2与Bax的比值,诱导脂肪细胞凋亡可能是禁食减脂减重的重要机制。     

眼镜蛇毒组份M对血液流变学的影响

静脉注射眼镜蛇毒M组份（0．07mg／kg和0．1mg／kg）可使家兔和狗的全血粘度和血浆粘度降低，对家兔红细胞压积和红细胞电泳时间无影响。M组份在体内外均能抑制ADP和花生四烯酸所诱导的血小板聚集。     

中华眼镜蛇毒F组分对血小板活化时α颗粒膜蛋白的影响

目的：观察中华眼镜蛇毒F组分对血小板α－颗粒膜蛋白表达的影响，确定F组分是否具有抑制血小板活化的功能。方法：实验分成对照组，凝血酶组和各给药组（凝血酶＋F组分），应用酶免疫吸附法（ELISA）测定健康成年人血浆中的α－闰膜蛋白（GMP－140）含量的变化。结果：凝血酶能引起血浆中的GMP－140含量明显升高，中华眼镜蛇毒F组为100、30μg/ml明显降低凝血酶引起的血浆GMP－140含量升高，并呈现一定程度的剂量依赖关系，两组比较P＜0．05），结论：中华眼镜蛇毒F组分能够抑制激动剂引起的血小板活化。     

中华眼镜蛇毒纤溶组份的纤溶活性及其机制研究

目的：研究中华眼镜蛇（NajaNajaatra）蛇毒中单一纤溶活性组份对人纤维蛋白和纤维蛋白原的降解作用及其机制。方法：使用剩余可凝纤维蛋白原测定法和酶联纤维蛋白原溶解试验研究该纤溶活性组份对人纤维蛋白原的降解作用；使用纤维蛋白平板法和酶联纤维蛋白溶解试验研究它对人纤维蛋白的降解作用；对它的纤溶机制研究使用的是纤维蛋白溶解酶原激活物活性测定法。结果：该活性组分对人纤维蛋白和纤维蛋白原有直接的降解作用。其活性大约是粗毒的10倍。该活性组份仅降解纤维蛋白原的Aa链，对它的印链和了链没有作用。该组分对人纤维蛋白溶解酶原没有激活作用。结论：从中华眼镜蛇毒中提取的单一纤溶活性组分是一种新的能够直接降解人纤维蛋白和纤维蛋白原的酶类。     

中华眼镜蛇毒活性组分抑血管内皮细胞增殖和黏附实验研究

目的:研究眼镜蛇毒在抗血管生成方面的生物活性。方法:采用Sephadex阳离子交换柱和分子筛分离中华眼镜蛇毒原毒,以MTT法评价和筛选分离各蛋白峰对培养内皮细胞的抑生长活性;MTT快速测定法测定活性峰对内皮细胞与纤维蛋白原(Fbg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响。结果:经两步分离后从中华眼镜蛇毒中获得一可特异性抑制内皮细胞生长的活性蛋白峰,该活性组分可抑制内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fbg和Matrigel等3种物质的作用从1.2μg/ml浓度起即有抑制效应(P<0.05),且均呈浓度依赖性;组分对细胞黏附Fbg和Hatrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P<0.05)。结论;眼镜蛇毒中可能含有可抑制血管生成的活性物质,在抗血管生成方面有良好的研究价值。     

眼镜蛇毒抗血栓形成的实验研究

本研究采用眼镜蛇毒的粗毒稀释液对正常人血浆进行血小板聚集功能、凝血象、体外血栓形成、血栓弹力图等体外试验研究，观察到眼镜蛇毒能明显地点延长PT、KPTT、RvvCT、TT、AT，有效地抑制血小板的聚集和体外血栓形成，并加速血浆凝块在尿素中的溶解，提示眼镜蛇毒有显著的抗血栓形成作用，且其抑制效应与浓度相关，随剂量增大而增强，从而为临床应用提供了丰富的实验室依据。     

中华眼镜蛇毒组分对神经胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的:探讨中华眼镜蛇毒卡迪(KD)中进一步分离纯化的10个组分KD Ⅰ-l、KD Ⅰ-1 H、KD Ⅰ-2、KDQ Ⅰ-2、KDⅡ、KDⅡ-2、KDⅡ-3,KDⅢ-1,KDⅢ-2和KDⅢ-2'对神经胶质瘤细胞U251的抑制作用.方法:采用MTT法和台盼蓝拒染法观察各组分对U251细胞增殖的影响.结果:在l～100 μg/mL的浓度范围内用MTT法筛选出3个具有显著抑制作用的组分KD、KDⅡ-3和KDⅢ-1.对以上3种组分再次细分浓度后(5、10、30、50、80、100 μg/mL)的MTT结果显示以上三种组分仍然具有显著的抑制作用.选取了KDⅢ-1和KDⅡ-3进一步细分浓度后(1、3.75、7.5、15、30 μg/mL)的MTT结果显示KDⅢ-1和KDⅡ-3组分在7.5 μg/mL时的抑制率分别为63.94%和62.15%,且2种组分在1～30 μg/mL呈现剂量效应关系(r=0.694,P＜0.05;r=0.732,P＜0.05).半数抑制浓度分别为6.65 μg/mL和10.54 μg/mL.KDⅡ-3的生长曲线显示药物的各个浓度(1、3.75、7.5、15、30 μg/mL)对肿瘤细胞均有抑制作用,以24 h的抑制作用最为明显.在7.5～15 μg/mL浓度范围内呈现明显抑制作用.结论:分离纯化的10组分对U251细胞有不同程度的抑制作用,尤以KDⅡ-3的抑制作用最为显著,并有明显的剂量效应关系.     

广东产眼镜蛇毒及其组份C对小鼠的抑瘤作用研究

本文进行了体内和体外实验，体内实验通过腹腔注射及灌胃给药，发现广东产眼镜蛇毒及其组份C对小鼠实验性肝癌及S-180肉瘤均有明显抑瘤作用，但口服给药剂量须达到腹腔注射给药剂量的50倍，才能产生相似的药效;体外实验中原毒及其组份C的抑癌作用量效关系明显，剂量增大肿瘤生长缓慢甚至完全不生长;在一定剂量范围内，组份C的抑瘤作用较原毒强。结果表明，广东产眼镜蛇毒及其组份C有抗实验性肝癌及S-180的作用。     

中华眼镜蛇毒C组分诱导U251细胞凋亡及P53基因表达的实验研究

目的以人神经胶质瘤细胞系U251为实验对象，研究中华眼镜蛇毒c组分诱导细胞凋亡的机制。方法将中华眼镜蛇毒c组分分为1．5ug/mL（A组），3ug/mL（B组），4．5ug／mL（C组），15ug／mL（D组）和30ug／mL（E组）5个浓度组，以顺铂（DDP）40ug／mL为阳性对照组，另设一阴性对照组，观察光镜下细胞的形态变化，采用DNA凝胶电泳检测法，观察FC诱导细胞凋亡的情况；采用SP免疫组化法和R．T—PCR法检查P53基因的表达。结果中华眼镜蛇毒c组分对U251细胞具有诱导凋亡的作用．FC诱导U251细胞凋亡率与药物浓度密切相关（P〈0．01）。使用FC前后，P53表达有显著增高。结论FC有诱导U251细胞凋亡的作用，但其诱导凋亡依赖于P53基因的改变。