鱼类溶菌酶和组织蛋白酶研究进展

溶菌酶和组织蛋白酶在鱼类先天性免疫系统中发挥重要作用。溶菌酶是一种具有生物活性的、能水解粘多糖的无毒、无公害小分子碱性酶,参与机体多种免疫反应,在抵抗外来病原细菌、真菌、病毒或肿瘤入侵中起重要作用。组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,参与机体的多种生理和病理活动,目前在细胞凋亡中的作用日益受到重视。本综述主要介绍近年来鱼类溶菌酶和组织蛋白酶在生物学功能、基因克隆、组织分布及重组蛋白功能活性的新研究进展。     

组织蛋白酶B在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性研究

运用原位水解电泳、免疫印迹和免疫组织化学等方法系统研究了组织蛋白酶B（HCB）在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性变化规律．研究显示,HCB的表达和活性随着胚胎发育的进行逐渐下降;整个幼虫阶段都没有HCB的表达和活性;整个蛹和成虫阶段虽然都有HCB的表达,但HCB的活性只能在发育晚期的蛹和成虫组织中检测到．这些现象表明,HCB的表达和活化属于翻译后控制,同时与棉铃虫的个体发育和组织分化有着密切的关系、     

棉铃虫组织蛋白酶B在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

以棉铃虫（Helicoverpa armigera）组织蛋白酶B作外源基因重组构建克隆载体,自重组菌株HCB-DH10Bac、Histag-HCB-DH10Bac中提取穿梭质粒,脂质体法转染草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf21细胞,转染液再感染细胞,收集感染3～4d的上清液,提取芽生病毒的DNA,PCR法鉴定外源HCB基因,感染上清进行SDS-PAGE、Western-blotting、蛋白酶活性检测．结果：感染上清中的芽生病毒的DNA作模板扩增出预期的1700bp片段,SDS-PAGE、westem-blotcing检测均在28ku处有明显表达产物,且表达产物有蛋白水解活性．     

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB／c小鼠，选择血清抗体滴度高的免疫小鼠，取其脾细胞和Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合．经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞，共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞3株，分别命名为9D5，100E2和100H6．以ELISA法和Western blotting法对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定，其中9D5和100E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B，而100H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B．     

组织蛋白酶L及其酶学特性研究

组织蛋白酶L很难通过常规的肌动球蛋白提取方法完全去除.由琼脂糖凝胶6B凝胶层析图谱显示,组织蛋白酶L的活性主峰明显偏离肌动球蛋白主峰,表明该酶是肌动球蛋白非结合型酶.凝胶柱层析后测定L型组织蛋白酶粗酶液(Lmix)的活性,结果表明Lmix的热稳定性与pH和温度密切相关,其最适pH为5.0,最适温度为45℃.在最适pH5.0时,Lmix的活性随NaCl浓度的增加而增大.专一性底物及酶激活剂、抑制剂影响研究表明,Lmix为内含巯基的半胱氨酸型组织蛋白酶.     

胱抑素C和组织蛋白酶B轴对β淀粉样肽聚集和降解的影响

淀粉样蛋白沉积疾病是由错误折叠的蛋白在细胞内外聚集而引起的一类蛋白质构象类疾病.淀粉样肽β(Amyloid β,Aβ)被认为是引起阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)的致病蛋白,Aβ是由淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein, APP)经一系列分泌酶切割而产生的,由于切割方式不同产生多种不同的肽段类型.人胱抑素C(Human cystatin C,HCC)是一种普遍存在于人体体液和组织液中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂.HCC可与可溶性的Aβ结合,它与Aβ的原纤维共定位于AD病人的脑部病灶组织,表明它具有一定的神经保护作用.组织蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)是一种半胱氨酸蛋白酶,主要存在于脑内胶质细胞的溶酶体中.Aβ含量的增加可以刺激胶质细胞释放Cat B,对Aβ浓度进行调节,但Cat B在中枢神经系统中的Aβ前体蛋白处理和Aβ42代谢中发挥的作用仍有待确定.本文阐述了HCC-Cat B轴可能在AD进程的不同阶段发挥了不同的作用的观点,以期为AD的预防和治疗提供有价值的信息.     

组织蛋白酶L抑制剂抗骨质疏松作用的研究进展

组织蛋白酶L的小分子抑制剂能有效地抑制骨吸收,抗骨质疏松作用明显。这些小分子抑制剂主要包括肽基环氧化物、肽基重氮甲烷、肽醛和肽基卤甲烷,此外肽腈、肽基迈克尔受体等的研究近年来也得到人们的关注。     

钙蛋白酶和钙蛋白酶抑制蛋白系统在雄性生殖调控中的研究进展

钙蛋白酶（calpain）是一族钙离子依赖性的、水解半胱氨酸的蛋白酶,钙蛋白酶抑制蛋白（cal-pastatin）是钙蛋白酶的特异性抑制蛋白.钙蛋白酶-钙蛋白酶抑制蛋白系统在多种细胞中发挥作用,本文就国内外对该系统在雄性生殖调控中的作用的研究情况作一概括,为人们进一步了解该系统奠定基础.     

细胞凝集素的生物学特性及应用研究进展

细胞凝集素(Lectin)是一类具有糖结合专一性，可促使细胞凝集的蛋白质，由于它对糖的特异结合性决定了它在动植物体内具有重要而特殊的生物学功能．利用这些功能，凝集素在临床疾病防治、机体生理活动调控以及生物工程等方面展示出了十分广阔的应用前景．     

基质金属蛋白酶-1基因多态性在牙周炎中的研究进展

基质金属蛋白酶-1可以降解牙周基质的主要成分-1型胶原，在牙周炎的病理过程中起着重要作用。近年来研究表明在基质金属蛋白酶-1的启动子区存在基因多态性，其对基质金属蛋白酶-1基因表达的影响与结缔组织降解性疾病如牙周炎的易感性和严重程度存在联系。本文将就基质金属蛋白酶-1基因多态性对基因表达的影响及其调控机制和在牙周炎中的研究进展做一综述。     

溶酶体蛋白酶cathepsin B参与介导前列腺癌PC-3细胞凋亡

细胞凋亡是多细胞生物清除多余、损伤或有潜在危险细胞的一种主要生理机制.蛋白水解酶是细胞凋亡研究的重要对象,其中大部分工作都集中在探索caspases的功能和调控上.近年来,越来越多的证据显示一些非caspases蛋白酶如位于溶酶体中的cathepsins特别是cathepsin B(CTSB)参与细胞凋亡过程.溶酶体cathepsins既可以与caspases协同作用,也可以不依赖于caspases独立执行凋亡功能.选取人前列腺癌PC-3细胞株作为研究对象,通过检测PC-3细胞对TNFα、D-sphingosine两种凋亡诱导剂和caspases、cathepsins抑制剂的应答反应,以及细胞凋亡过程中溶酶体、线粒体的结构变化,证实了D-sphingosine引起PC-3细胞死亡的效应主要通过释放溶酶体中蛋白酶CTSB实现,CTSB和caspases均参与介导TNFα诱导的PC-3细胞凋亡过程,并且很可能在不同的凋亡信号通路中发挥作用.     

基因疗法研究的新进展

指出基因疗法是分子生物学与医用分子遗传学结合的产物,介绍了基因疗法临床应用研究进展,展望了基因疗法的前景,特别强调了上海复旦大学新近取得的基因研究重大突破在推动基因疗法快速发展中的作用。     

介孔固体研究进展

介绍了介孔固体的特征、制备方法及其应用     

Studies on the sructure, mechanism of green fluorescent protein and its application

The green fluorescent protein (GFP) from jellyfishAequorea victoria has unique superiority as a kind of biological label. GFP has been widely used in all fields of biology based on the recent studies on its structure, characteristic and mechanism of bioluninescence.     

蛋白质工程的研究进展及前景展望

简介了蛋白质工程的由来和实施工程的目标,论述了蛋白质工程取得的若干研究进展,并展望了其未来发展趋势。     

富勒烯化合物研究进展

介绍富勒烯的发现过程、独特的结构特征,综述了富勒烯及其化合物的结构特点、物理和化学性质,并预测了该类化合物应用前景.     

乙型肝炎病毒x基因蛋白转导载体的构建

乙型肝炎病毒X蛋白在细胞转化和肝癌的发生发展中具有重要作用.为了深入研究X蛋白的致癌机理构建了pTAT-GFP-X载体.该研究以克隆在真核表达载体pCMV-X质粒中的x基因为模板,设计了x基因的PCR引物,采用PCR方法扩增x基因,回收PCR产物,以XhoI和EcoRI酶切位点将PCR产物连接到蛋白转导系统pTAT-GFP载体中,再用XhoI和EcoRI酶对筛选的重组子进行酶切鉴定,获得了510bp的目的片段,表明已成功地将目的片段克隆在pTAT-GFP载体中.经DNA序列分析检测,显示克隆的x基因无突变.经SDS-PAGE和Westernblot检测证实,将重组质料pTAT-GFP-X转化致大肠杆菌BL21中,可表达pTAT-GFP-X融合蛋白.该pTAT-GFP-X载体蛋白转导系统的构建,为进行X蛋白的蛋白转导实验奠定了基础.pTAT-GFP-X融合蛋白具有穿透细胞膜进入细胞的能力,进而在细胞内发挥作用,与转基因不同,无需细胞内基因表达的过程,使得X蛋白的定量实验成为可能,X蛋白的蛋白转导实验更有助于探讨x基因的致癌机理.