神经细胞黏附分子在胶质细胞系源性神经营养因子保护多巴胺能神经元中的作用

目的研究神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）在胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）保护1-甲基-4-苯基-1．2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）损伤的多巴胺（dopamine，DA）能神经元中的作用。方法以原代培养的小鼠腹侧中脑神经细胞作为观察对象，实验分4组：空白对照组、加邢组（在无血清培养基内加入10μmol／L MPTP）、GDNF＋MPTP组（在无血清培养基内加入GDNF保护的基础上，再加入加MPTP、抗-NCAM＋GDNF＋MPTP组（在无血清培养基内加入NGAM封闭抗体阻断GDNF保护作用的基础上，再加入MPTP）。采用免疫细胞化学染色技术，观察各组酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）、钙结合蛋白D28K（calbindin D28K，CB）表达的变化。结果MPTP组TH阳性神经元胞体明显小于空白对照组；CB阳性神经元数目减少，有统计学意义。GDNF＋MPTP组TH阳性神经元胞体与MPTP组有明显差别；CB阳性神经元数目与MPTP，组有显著性差异。抗-NCAM＋GDNF＋MPTP组上述指标与MPTP组无显著性差异。结论NCAM参与了GDNF保护DA能神经元的作用，该保护作用可能是通过增加CB的表达而完成的。     

经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究

目的 研究经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neumtrophic factor，GDNF）对帕金森病（Parklnson disease，PD）模型小鼠中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法 利用1-甲基-4-苯基1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）制备成年小鼠PD模型，通过单侧纹状体定位注射GDNF，取中脑黑质节段，做连续冠状石蜡切片，结合免疫组织化学染色方法，观察各组酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）、钙结合蛋白（calbindin D28k，CB）的表达，光镜观察并细胞计数，统计学分析。结果 在模型制备的第4,6天，单侧纹状体定位注射GDNF后，小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量显著多于注射PBS组。结论 经纹状体注射GDNF对成年PD小鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用，且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关。     

人胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞保护多巴胺能神经元的实验研究

目的 构建一种可分泌人胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的基因工程细胞,并探讨其在基因治疗帕金森病中的可能作用。方法 克隆含Kozak序列的人GDNF cDNA,并将其转染至人类神经母细胞瘤细胞系SH－SY5Y细胞,用RT－PCR方法筛选阳性细胞克隆,将此工程细胞与大鼠原代多巴胺能神经元共培养,免疫组织化学检测多巴胺能神经元。结果 （1）基因工程细胞可防止多巴胺能神经元退变死亡,与对照组比较,最多增加了95．4％,P＜0．01。（2）工程细胞可抵抗MPP^ 对多巴胺能神经元的毒性损伤作用,与对照组相比,细胞数目增加了9．5－10．8倍,P＜0．01。结论 首次构建了可分泌人GDNF的工程细胞,其对多巴胺能神经元具有明显的营养保护作用,其在帕金森病的基因治疗中可能具有重要的应用价值。     

脑源性神经营养因子在脑室注射脂多糖大鼠黑质多巴胺能神经元变性中的作用

目的观察脑室内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠黑质多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法健康雄性SD大鼠48只,采用抽签法将大鼠随机分为LPS实验组和0.9%氯化钠注射液(NS)对照组,经大鼠右侧脑室一次性注射LPS20μL(1.25g/L)或0.9%氯化钠注射液20μL。给药后2周、4周、12周、24周用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色观察黑质多巴胺能神经元的变化,免疫组化及酶联免疫吸附实验(enzyme immunoassay system,ELISA)检测黑质纹状体系统BDNF表达的变化。结果①TH免疫组织化学染色结果显示,大鼠黑质多巴胺能神经元数目在LPS给药后期减少,24周时LPS实验组大鼠黑质TH阳性神经元数量为NS对照组的75.4%(P<0.01);②BDNF免疫组化结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质部位BDNF阳性细胞的表达较NS对照组高,而到12周和24周时其表达比NS对照组明显下降。ELISA检测结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质纹状体内BDNF表达是NS对照组的186.3%(P<0.01),而12周和24周时分别是NS对照组的42.3%(P<0.01)和61.0%(P<0.05)。结论脑室内注射LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元变性,这一病变过程呈慢性迟发性。该模型大鼠黑质TH阳性神经元变性丢失前即出现黑质纹状体系统BDNF表达减少,提示BDNF表达减少可能是黑质多巴胺能神经元变性丢失的原因之一。     

重组胶质细胞源性神经营养因子腺病毒保护小鼠中脑多巴胺能神经元

目的：观察携带大鼠来源的胶质细胞源性神经营养因子(rGDNF)的重组腺病毒在小鼠帕金森模型中有无保护中脑多巴胺(DA)能神经元对抗神经毒素甲基-苯基-四氢吡啶(MPTP)损伤的作用。方法：将LacZ重组腺病毒(Ad-LacZ)通过脑立体定位仪注入小鼠单侧纹状体，分别于注射后24h、72h、10d和30d灌流取脑做X-Gal染色，观察报告基因在小鼠脑内的表达情况；将rGDNF重组腺病毒(Ad-rGDNF)通过脑立体定位仪注入小鼠单侧纹状体。两者均于72h后给予MPTP损伤中脑DA能神经元，1周后用高压液相色谱分析纹状体中DA、3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果：Ad-LacZ注射后24h表达较弱，72h逐渐增强，10d仍可见到较强表达，30d则逐渐减弱。LacZ基因的表达范围比较局限，胶质细胞和神经元都能被感染，并且未见明显的腺病毒载体引起的细胞毒性作用。注射Ad-rGDNF侧纹状体DA含量较MPTP损伤组和MPTP Ad-LacZ组显著升高，而未注射侧无明显升高。此外，DA主要代谢产物DOPAC和HVA的含量也明显升高，而DOPAC／DA、HVA／DA比值则明显降低。结论：Ad-rGDNF能显著保护中脑DA能神经元对抗MPTP的损伤。     

神经营养因子对体外培养多巴胺能神经元营养作用比较研究

目的：比较5种神经营养因子对体外培养多巴胺能（DA）神经元营养作用差别。方法：在培养孕14－16d大鼠胚胎黑质神经元中加入5种神经营养因子（NTF）。采用免疫组化染色及计算机图像的分析系统对培养细胞进行观察。结果：脑源性神经营养因子（BDNF）、血小板源性生长因子（PDGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)能促进中脑DA神经元发育,提高神经元及长突起神经元存活率。BDNF在整个培养期都有较强营养作用,PDGF在早期、bFGF在中期有轻度作用,神经生长因子（NGF）和白细胞介素－6（IL－6）则无作用。结论：体外DA神经元培养过程中,BDNF有较强的神经营养作用,PDGF和bFGF次之,NGF和IL－6无作用。     

胶质细胞源性神经营养因子

胶质细胞源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ) ,1933年始由大鼠胶质瘤细胞系Ｂ4 9中分离出来 ,是一种含有134个氨基酸残基的同二聚体蛋白质 ,分子量为33— 35ＫＤ ,7个保守的半胱氨酸残基在分子中的位置与转化生长因子—β(ＴＧＥ—β)超家族相同 ,因而被看作是ＴＧＦ—β超家族的一员 ,人和大鼠的ＧＤＮＦｍ93%的同源性〔1〕。ＧＤＮＦ在神经系统中有广泛的分布 ,ＲＴ—ＰＣＲ法显示ＧＤＮＦ的ＲＮＡ定位于接受多巴胺 (ＤＡ)能神经之投射的纹状体、苍白球腹侧区、嗅结节、梨状区 ,在非ＤＡ能脑区的小脑原基、出生前脊髓背梭、新生大鼠丘脑、基底前…     

神经干细胞联合胶质细胞源性神经营养因子脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对脑内移植神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的存活、分化及对帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）模型大鼠的治疗作用.方法：采用原代培养胚胎14.5天的胎鼠腹侧中脑NSCs,单独或经GDNF预处理后移植入PD模型大鼠的纹状体,观察NSCs在纹状体的分化情况,以及PD模型大鼠旋转行为的变化.结果：联合GDNF移植NSCs比单纯移植的NSCs较多的转化为多巴胺能神经元,并能够改善PD模型大鼠的旋转行为.结论：GDNF可以促进中脑来源的NSCs向多巴胺能神经元转化,并对PD模型大鼠有较好的治疗作用.     

GDNF对大鼠多巴胺能神经元CB表达的影响

目的研究胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line—derived neurotrophic factor，GDNF）对损伤的多巴胺（dopamine，DA）能神经元的保护作用和神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）在这一保护过程中的影响。方法以培养的新生大鼠中脑脑片损伤模型和在体帕金森病（Parkinson disease，PD）模型作为观察对象。实验分3组：对照组（在无血清培养基内加入PBS或在体黑质内注射PBS）、GDNF组（在无血清培养基内加入GDNF或在体黑质内注射GDNF）、NCAM阻断组（在无血清培养基内于加入GDNF 30min前加anti—NCAM或在体黑质内注射GDNF 30min前注射anti—NCAM阻断NCAM）。采用免疫组织化学染色技术和Western blot技术，观察各组钙结合蛋白D28K（calbindin D28K，CB）表达的变化。结果GDNF组黑质中CB阳性神经元数目及表达的量明显多于对照组，差别有统计学意义。NCAM阻断组上述指标与GDNF组相比无显著性差异。结论GDNF可能通过增加CB的表达而保护受损的DA能神经元，但NCAM可能未参与这一作用。     

不同浓度GDNF诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化研究

目的观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞(NSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化的影响。方法取新生鼠脑组织体外分离培养NSCs,第2代NSCs诱导培养基中分别加入0、5、10、20 ng/mL GDNF进行诱导。用逆转录-聚合酶链反应检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶(TH)mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定NSCs,检测NSCs向DA能神经元分化率。结果各诱导组均表达TH mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较,GDNF诱导组TH阳性细胞率均明显升高(P<0.05);且10、20ng/mL GDNF诱导组升高幅度明显高于5 ng/mL GDNF诱导组(P<0.05),10、20 ng/mL GDNF诱导组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论从新生鼠脑组织分离出NSCs。不同浓度的GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,GDNF浓度从10ng/mL提高到20 ng/mL时TH阳性细胞率无明显变化。     

GDNF对PD模型大鼠黑质神经祖细胞和神经元前体细胞增殖及分化的影响

目的 探讨胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）对帕金森病（PD）模型大鼠黑质内神经祖细胞和神经元前体细胞增殖和分化的影响.方法 大鼠右侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine, 6-OHDA）建立模型,行为学分析筛选PD动物模型.将动物模型分为4组：动物模型对照组（右侧黑质内不注射）;PBS组（右侧黑质内注射PBS）;GDNF组（右侧黑质内注射GDNF）;EGF＋GDNF组（右侧黑质内注射EGF＋GDNF）.动物继续存活21天.免疫组织化学染色方法检测黑质内酪氨酸羟化酶（TH）、Ⅲ型β-微管蛋白（Tuj1）、巢蛋白（Nestin）免疫反应阳性细胞,光镜下观察并进行细胞计数,统计学分析处理数据.用Western blot方法分析黑质TH、Tuj1、Nestin蛋白的表达,蛋白条带用图象处理仪扫描,用LabWorks软件分析处理.结果 在GDNF组及EGF＋GDNF组大鼠出现显著的行为学功能恢复的同时,其TH反应阳性神经元数量和TH蛋白表达均显著高于对照组,且能同时检测到这里有Tuj1反应阳性细胞及Tuj1蛋白表达.但仅在EGF＋GDNF组检测到Nestin反应阳性细胞及Nestin蛋白表达.结论 GDNF能促进PD模型大鼠黑质内神经元前体细胞向多巴胺能神经元方向分化.     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经元的保护作用

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤后运动神经元的保护作用。 方法 :大鼠分为假手术组、生理盐水 (NS)组和 GDNF组 ,改良 Allen法撞击致伤 T1 2 脊髓 ,蛛网膜下腔分别给予 NS和 GDNF,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片 ,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶 (Ch E)和酸性磷酸酶 (ACP)活性 ,并结合计算机进行图像分析。结果 :GDNF组较 NS组 Ch E活性显著增加 ,ACP活性显著降低 ;2 1d时 NS组的 ACP及 Ch E活性均高于及低于假手术组 ;GDNF组与假手术组 Ch E和 ACP活性差别不显著。 结论 :GDNF对脊髓损伤后的前角外侧核运动神经元有一定的保护作用     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用

目的:观察外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响.方法:利用Nystrm法制备大鼠胸髓压迫损伤模型.蛛网膜下腔置管至损伤局部,连续1周给予GDNF.应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经中丝(NF)免疫组化活性的变化来评价外源性GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响.结果:脊髓损伤后4周GDNF治疗组GFAP表达较对照组明显减少,NF标记轴突数显著多于对照组,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端0.5 cm.结论:外源性GDNF局部给药能减少胶质细胞增生,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复.     

LPS-induced Degeneration of Dopaminergic Neurons of Substantia Nigra in Rats

In order to investigate the neurotoxieity of lipopolysaccharide (LPS) on the dopaminergic neurons of substantia nigra and the pathogenesis of Parkinson disease, LPS was stereotaxically infused into substantia nigra (SN). At different dosages and different time points with 5μg LPS, the damage of the dopaminergic neurons in SN was observed by using tyrosine-hydroxylase (TH) immunohistochemical staining. The results showed that 14 days after injection of 0.1μg to 10μg LPS into the rat SN, TH-positive (TH ) neurons in the SN were decreased by 5%, 15%, 20%, 45%, 96% and 99% respectively. After injection of 5μg LPS, as compared with the control groups, TH^ neurons began to decrease at 3rd day and obviously decrease at 14^th day, only 5% of total cells, and almost disappeared 30 days later. The results suggested that LPS could induce the degeneration of dopaminergic neurons in the SN in a dose- and time-dependent manner.     

汉族人胶质细胞源性神经营养因子前体cDNA的核苷酸序列分析及其功能研究

目的：对汉族人胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）前体ｃＤＮＡ进行核苷酸旬分析及功能研究。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法扩增汉族人ＧＤＮＦ前体ｃＤＮＡ,利用昆虫杜状病毒表达系统（ＢＥＳ）表达此前体ｃＤＮＡ,原代培养中脑多巴胺能神经元对表达产物进行活性测定。结果：汉族人ＧＤＮＦ前体ｃＤＮＡ为截短的５５５ｂｐ的转录体,其在昆虫细胞中的分泌表达产物能促进多巴胺能神经元的存活和分化。结论：汉族人ＧＤＮＦ前体ｃ尤     

胶质源性神经营养因子对损伤的培养大鼠背根神经节的作用

目的　应用体外培养海人藻酸 (KA)兴奋性毒素损伤的细胞模型 ,研究 GDNF对损伤的背根节神经元的不同作用 ,为进一步研究 GDNF对神经元作用机制 ,表达产生及检测方法提供思路 .方法　采用原代培养的方法 ,用 N1无血清分离培养背根节神经元 ,再用 5μm ol· L- 1 KA作用 6～ 8h ,加上含有 GDNF的无血清培养基 ,继续培养 2 4h,然后用MTT法检测反映细胞的活性 ,胎盘蓝染色记数、细胞总蛋白测定以及形态学观察突起的生长状况 .结果　 1细胞活性 A值 :GDNF+KA(0 .0 32 8± 0 .0 0 6 ) ,KA(0 .0 2 85± 0 .0 0 75 ) ,GDNF (0 .0 398± 0 .0 0 2 ) ,Blank(0 .0 41± 0 .0 0 2 ) (P<0 .0 5 ) ;2活细胞数相应为 GDNF+KA (6 0± 4.4) ,KA(35 .7±2 .2 ) ,GDNF (5 9.3± 3.6 ) ,Blank (5 7.7± 2 .9) ;3细胞的总蛋白分别为 GDNF+KA (70 .3± 9.2 ) (P<0 .0 1) ,KA (49.0± 3.7) ,GDNF (75 .0± 7.3) ,Blank (6 8.0± 5 .5 ) (P<0 .0 1) ;4突起长度 :实验组与对照组不明显 ,GDNF组与空白对照组不明显 .结论　在正常无血清体外培养情况下 GDNF对DRG神经元作用不明显 ,在 KA兴奋性毒素损伤后 ,对细胞的活性、存活及总蛋白合成有明显的保护作用 ,但对突起的生长则没有明显的促进作用 .     

GDNF及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元的作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响.方法 取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion, SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor, GDNF),并选取不同方法溶解多聚-D-赖氨酸(poly-D-lysine, PDL)包被培养盖片,观测交感神经元的存活和突起生长状况.结果 用0.01 mol/L硼酸溶解的PDL进行包被,细胞存活和突起生长最好,且神经元分散好,优于其他各组;GDNF对培养交感神经元的存活、突起生长具有显著的促进作用,且与其浓度存在量效关系,但它并不能阻止培养前5 d存活神经元数量的减少.结论 用0.01 mol/L硼酸溶解PDL包被是一种良好的生长底物处理方法,GDNF能促进离体培养的交感神经元的存活和突起生长.