TNF-α对人脐静脉内皮细胞活性及PD-L1蛋白表达的影响

目的 研究外源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性及程序性死亡因子配体PD-L1蛋白表达的影响,探讨动脉粥样硬化的免疫机制.方法 体外培养HUVECs,加入不同浓度TNF-α持续刺激48 h,CCK-8法检测450 nm波长处吸光度值(OD值),计算细胞生长存活率.选同代细胞重复培养并干预,Western blot方法检测细胞PD-L1蛋白表达.使用SB203580阻断p38MAPK通路后再用TNF-α干预HUVECs,比较各组细胞PD-L1蛋白表达.结果 实验组HUVECs在450 nm波长处的吸光度值较空白对照组明显降低(P＜0.05),细胞存活率依次下降.实验组细胞PD-L1蛋白表达随TNF-α浓度增高逐渐降低(P＜0.05).TNF-α单独刺激组PD-L1蛋白表达较TNF-α与SB203580共刺激组明显降低(P＜0.05),SB203580阻断效应明显.结论 TNF-α可明显抑制HUVECs细胞活性,并降低PD-L1蛋白表达,p38MAPK通路可能参与了这一过程.     

阿托伐他汀抑制肺炎嗜衣原体诱导人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1

目的观察阿托伐他汀在肺炎嗜衣原体感染人脐静脉内皮细胞过程中对细胞间粘附分子-1表达的影响。方法用HEP-2细胞培养Cpn，随后用Cpn感染人脐静脉内皮细胞，同时加入阿托伐他汀，观察内皮细胞表面ICAM-1的表达情况。结果Cpn能感染体外培养的人脐静脉内皮细胞，且阿托伐他汀能抑制Cpn诱导其表达ICAM-1。结论Cpn可能是动脉粥样硬化的始动因子之一，阿托伐他汀在预防心血管病事件中，非调脂机制可能是其重要机制。     

烟草烟雾对大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达的影响

[目的]探讨不同剂量与时程的烟草烟雾对大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1(ICAM-1)mRNA表达的影响。[方法]雄性Wistar大鼠50只随机分为5组,每组10只：长期大量吸烟组、长期少量吸烟组、短期大量吸烟组、戒烟组、正常对照组、建立大鼠被动吸烟模型,原位杂交结合显微图像分析系统检测大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA的表达情况。[结果]与对照组比较①吸烟大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达增加。②戒烟大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达下调。[结论]烟草烟雾使大鼠脑血管内皮细胞ICAM—1mRNA表达增加,二者存在时效与量效关系。     

内皮细胞微粒对人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响

目的:探讨内皮细胞微粒(Endothelial microparticles,EMPs)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管细胞粘附分子-1(Vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间粘附分子-1 (Intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的影响.方法:取生长良好的第4、5代HUVECs,将细胞以1×105个/ml密度接种于5 cm2的培养皿中,待细胞生长近80％融合时进行干预.按0、1×102、1×103、1×104、1×105个ml浓度的EMPs进行分组及刺激,每组12个样本.在共同培养24h后收集细胞.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1和ICAM-1 mRNA和蛋白的表达.结果:HUVECs受EMPs刺激,VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著增加,且EMPs的这种作用呈浓度依赖性增强(均P＜0.05).结论:EMPs能上调HUVECs VCAM-1和ICAM-1的表达,EMPs不仅是内皮功能障碍的标记物,还能加重内皮功能损害.     

TNF-α诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡和炎症机制研究

目的 观察肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor alpha,TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及炎症反应的影响,并探讨其损伤血管内皮细胞的可能机制。 方法 常规培养的HUVECs至第三代,随机分为对照组和TNF-α组。对照组常规方法培养作为对照,TNF-α组应用200 ng/ml的TNF-α刺激HUVECs 6 h后,采用流式细胞法检测HUVECs的凋亡率,Western blot法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin和eNOS的蛋白表达水平;流式细胞术和Western blot法进一步评价核因子-κB (NF-κB)、激活蛋白-1(AP-1)的表达激活情况。 结果 与对照组相比,200 ng/ml TNF-α能明显增加HUVECs的凋亡率(P<0.05),同时上调ICAM-1、VCAM-1、E-selectin炎症因子在HUVECs中的表达(P<0.05),TNF-α抑制eNOS的释放(P<0.05),并激活NF-κB、AP-1的表达(P<0.05)。 结论 TNF-α能显著增加HUVECs的凋亡和炎症因子表达,其损伤机制可能是通过激活NF-κB、AP-1途径,并抑制eNOS的释放有关。      

活血解毒益气方含药血清对人脐静脉内皮细胞分泌ICAM-1、MCP-1的影响

目的:探讨经皮外周血管腔内成形术(PTA)后活血解毒益气方药物血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌ICAM-1、MCP-1的影响。方法:新西兔35只,随机分为正常组、模型组、普伐他汀组及活血解毒益气方大、小剂量组,各7只。除正常组外,另四组首先运用球囊原位扩张、拉伤致兔颈总动脉PTA术后内皮损伤模型。术前3天各组予相应药物给药,造模成功后继续给药15天,获取模型动物和给药动物血清;采用ELISA法观察药物血清作用24h和48h,对人脐静脉内皮细胞分泌ICAM-1、MCP-1活性的影响。结果:活血解毒益气方大、小剂量组和普伐他汀组药物血清作用24h均能显著抑制HUVECs分泌ICAM-1,与模型组比较,P<0.05;血清作用48h,普伐他汀组、大小剂量组仍具有显著的抑制作用,P<0.05。各组药物血清作用24h、48h均能显著降低HUVECs分泌MCP-1,与模型组比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:活血解毒益气中药可通过抑制HU VECs分泌ICAM-1、MCP-1,抑制炎症反应。     

依托咪酯对TNF-a诱导人脐静脉血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

[摘要] 目的 观察离体情况下依托咪酯对TNF-a诱导人脐静脉血管内皮细胞ICAM-1表达的影响,探讨依托咪酯对炎症反应的直接影响。方法 采用原代培养人脐静脉血管内皮细胞,将细胞随机分为3组（n=6）,,空白对照组（C组）;TNF-a组（T组）;依托咪酯组（E组）。细胞培养24 h时后,用胰酶+EDTA消化细胞、计数、乳酸脱氢酶试剂盒离心得到细胞沉淀,采用Western blot 法测定的ICAM-1 蛋白表达, 免疫荧光法测定NF-ｋB的表达水平。结果 与C组比较,T组ICAM-1 蛋白及NF-ｋB表达升高(P<0.05),与T组比较,E组ICAM-1 蛋白及NF-ｋB表达降低(P<0.05). 结论 与在体研究不同,依托咪酯可抑制TNF-a诱导人脐静脉血管内皮细胞ICAM-1表达上调,可能是通过NF-ｋB途径发挥作用。     

阿托伐他汀对大鼠心肌梗死后TNF-α、PDCD5表达的影响

目的:探讨心肌梗死后凋亡基因PDCD5表达的变化及阿托伐他汀对其表达的影响.方法:结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死(MI)模型.取大鼠45只,其中30只MI后24 h随机分为MI组(n=15)和阿托伐他汀组(n=15);余15只作为假手术组.阿托伐他汀组术后每d灌胃阿托伐他汀1 mg/kg,余2组灌胃等量生理盐水.6周后检测左心室非梗死区心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量、凋亡基因PDCD5 mRNA及其蛋白产物的表达.结果:6周后MI组、阿托伐他汀组和假手术组存活大鼠分别为10只、11只和14只.MI组非梗死区心肌组织TNF-α含量和PDCD5 mRNA及PDCD5蛋白表达高于假手术组(P均＜0.05);阿托伐他汀组上述指标的表达高于假手术组(P均＜0.05),但均低于MI组(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可能通过降低大鼠MI后非梗死区心肌组织TNF-α的含量而降低非梗死区心肌组织中PDCD5 mRNA及其蛋白的表达.     

阿托伐他汀对氯化锂诱导人脐静脉内皮细胞Wnt信号通路相关因子表达的影响

目的研究探讨阿托伐他汀对诱导人脐静脉内皮细胞Wnt信号通路相关因子表达的影响。方法人脐静脉内皮细胞、传代后取生长良好4～6代用于实验。实验分空白对照组、氯化锂组和阿托伐他汀组。细胞经孵育24h后,用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中的一氧化氮含量,用免疫组化法和蛋白质印迹法检测Wnt1、β-catenin及蓬乱蛋白-1（dvl-1）蛋白的表达。结果与对照组相比,其他两组细胞培养的上清液中一氧化氮含量显著减少,Wnt1、β-catenin及dvl-1蛋白的表达增多;与氯化锂组相比,阿托伐他汀组细胞培养的上清液中一氧化氮含量显著增多,Wnt1、β-catenin及dvl-1蛋白的表达明显减少。结论抑制Wnt/β-catenin信号通路可能是阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的机制之一。     

阿托伐他汀对脑出血大鼠脑组织NF-κB、TNF-α和IL-1β表达的影响

目的 观察阿托伐他汀对脑出血大鼠血肿周围组织中NF-κB、TNF-α和IL-1β表达的影响,探讨阿托伐他汀对脑出血大鼠的脑保护作用及可能的机制.方法 将120只SD大鼠按随机数字表法随机分为假手术组、脑出血组和治疗组.脑出血组和治疗组采用自体血立体定向注射法,建立脑出血动物模型.假手术组于相同部位注射等量0.9%氯化钠注射液.治疗组于术后2 h将阿托伐他汀按10 mg/kg进行灌胃.于造模后12 h、1 d、2 d、3 d和5 d分别处死各组大鼠留取脑组织.采用免疫组化法和Western blot法检测各组大鼠脑组织TNF-α、IL-1β及NF-κB的蛋白表达情况.结果 与假手术组相比,脑出血组TNF-α、IL-1β和NF-κB的表达增加(P<0.05),均为12 h开始持续增加,3 d时达高峰,持续表达至5 d;与脑出血组相比,治疗组TNF-α、IL-1β和NF-κB的表达减少(P<0.05).结论 脑出血大鼠血肿周围脑组织存在NF-κB、TNF-α和IL-1β的高表达.阿托伐他汀可通过下调NF-κB信号分子的表达及炎性细胞因子的产生,减轻脑出血后脑组织的炎症反应,从而起到脑保护的作用.     

刺五加注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型TNF-α和ICAM-1表达的影响

目的 探讨刺五加注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型TNF-α和ICAM-1表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法 检测局灶性脑缺血/再灌注模型大鼠脑组织中TNF-α和ICAM-1含量.结果 应用刺五加注射液的治疗组大鼠脑组织中TNF-α和ICAM-1免疫阳性细胞在各时间点的表达与模型组相比明显减少(P＜0.01或P＜0.05).结论 刺五加注射液能显著降低脑缺血/再灌注模型大鼠脑组织中TNF-α和ICAM-1表达从而防治脑缺血再灌注炎性损伤.     

益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4/NF-ΚB信号通路及TNF-a ICAM-1 mRNA表达的影响

目的:研究益气活血复方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/NF-KB及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、细胞间黏附分子(ICAM-1)mRNA表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法:(1)选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。(2)体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的表达。结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的高表达(与空白对照组比较P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.01或P<0.05)。结论:益气活血复方可阻断TLR4/NF-KB...     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞t-pA、pAI-1表达的研究

目的：观察肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activitor,t-PA）及其抑制剂-1（plasminogen activitor inhibitor-1,PAI-1）表达的影响。方法：原代分离HUVECs细胞并进行传代培养,分别以6个TNF-α浓度组（0、1、10、20、50、100 ng·m L-1）处理不同时间（0、1、3、6、12、24 h）,酶联免疫吸附分析（ELISA）法测定t-PA、PAI-1抗原的表达;逆转-聚合酶链反应（RTPCR）检测t-PA、PAI-1基因的表达。结果：TNF-α促进PAI-1抗原的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α10 ng·m L-1作用6 h时最明显（P〈0.01）;TNF-α促进PAI-1 mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α10 ng·m L-1作用3 h时已非常明显（P〈0.01）,6 h时达到高峰（P〈0.01）;而TNF-α对HUVECs表达t-PA抗原、mRNA无明显影响。结论：炎症因子TNF-α可能通过上调PAI-1表达而诱发血栓相关疾病。     

白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。     

番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的探讨番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法体外培养HUVEC,用0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的TNF-α与HUVEC共同孵育30min,乳酸脱氢酶实验检测TNF-α处理对HUVEC的毒性作用.选取TNF-α干预对HUVEC细胞造成损伤的最佳浓度,并在处理前加入不同浓度的番茄红素作用1h,WST-1实验检测HUVEC的增殖情况.结果10 ng/mL TNF-α与细胞共同孵育30min后,对细胞造成的毒性作用最明显.当HUVEC预先与5μmol/L 番茄红素孵育后,能显著降低TNF-α诱导的细胞毒性.结论番茄红素能显著降低TNF-α诱导的细胞毒性,这可能是番茄红素防治一些炎症相关性疾病的机制之一.     

CGRP对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及Caveolin-1表达的影响

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对过氧化氢（H2O2）诱导离体培养的人脐静脉内皮细胞（hU-VECs）损伤的保护作用及其机制。方法 CGRP预孵育hUVECs后,用不同浓度H2O2处理hUVECs,噻唑蓝比色法（MTT）观察hUVECs活性;Western-blot检测Caveolin-1表达。结果 CGRP（0.1-100.0 nmol/L）能呈浓度依赖性提高hUVECs活性。H2O2（0.2-5.0 mmol/L）能呈浓度依赖性降低hUVECs活性。CGRP（10~100 nmol/L）预孵育hUVECs 30 min能明显提高H2O2诱导的hUVECs抗损伤能力（P（0.05）;与0.1%FBS组比较,100 nmol/LCGRP和0.05 mmol/L H2O2处理组细胞Caveolin-1蛋白水平表达下降（P（0.05）;0.8 mmol/L H2O2处理组细胞Caveolin-1蛋白表达水平上升（P〈0.05）;与H2O2处理组比较,100 nmol/L CGRP预孵育hUVECs 30 min能显著降低细胞Caveolin-1蛋白水平的表达（P（0.05）。结论 CGRP对H2O2诱导的hUVECs损伤有一定的保护作用,其机制可能与下调氧化应激导致的hUVECs Caveolin-1的表达有关。     

通腑益气汤对脓毒症大鼠TNF-α、IL-lβ及ICAM-1水平的研究

目的 观察通腑益气汤对脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-lβ及ICAM-1的影响和肠组织的病理改变。方法 将雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组：模型组、氧氟沙星组、氧氟沙星+中药组（中药组）,每组12只。采用经典盲肠结扎穿孔法（CLP）制备脓毒症大鼠模型,氧氟沙星组采用灌胃氧氟沙星16mg/kg,中药组在此基础上采用中药灌胃,每日1次,连续3天,模型组用等量生理盐水灌胃。治疗后测定血清TNF-α、IL-lβ及ICAM-1水平和光学显微镜下观察肠组织病理改变并进行评分。结果 模型组血清TNF-α、IL-lβ及ICAM-1分别为（95.26±34.73）ng/ml、（30.8±12.3）pg/ml、（914.72±82.1）pg/ml,氧氟沙星组分别为（78.46±30.24）ng/ml、（24．7±10.5）pg/ml、（790.69±60.2）pg/ml,中药组分别为（60.38±21.81）ng/ml、（19.3±8.6）pg/ml、（681.69±52.6）pg/ml, 与模型组和氧氟沙星组比较,中药组的血清TNF-α、IL-lβ、ICAM-1的水平明显降低（P＜0.05）;肠组织损伤评分模型组、氧氟沙星组、中药组分别为（4.21±0.61）分、（3.56±0.32）分、（2.84±0.27）分,与模型组和氧氟沙星组比较,中药组肠组织损伤病理学评分最低（P＜0.05）。结论：通腑益气汤对脓毒症大鼠肠粘膜的保护作用可能与其抑制TNF-α、IL-lβ的过度激活,进而下调ICAM-1的水平有关。     

顺铂对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:为细胞间黏附分子(ICAMs)是否参与顺铂引起的血管损伤病理反应寻找证据。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以不同浓度顺铂(Cisplatin)或同一浓度顺铂处理不同时间后,蛋白印迹分析法和RT-PCR检测内皮细胞CAMs的表达情况,并通过凝胶阻滞分析(EMSA)和特异性抑制剂来探讨NF-κB在其中的作用。结果:顺铂能够在mRNA和蛋白水平明显上调内皮细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,而对P-选择素、E-选择素和VCAM-1的表达无明显影响。其表达是通过核因子κB(NF-κB)依赖途径实现。结论:ICAM-1参与了顺铂的血管毒性病理过程,具有靶向治疗前景。     

瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸损伤人脐静脉内皮细胞血管细胞间黏附分子－1表达的影响

目的：探讨瑞舒伐他汀（Rosu）对同型半胱氨酸（Hcy）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管细胞间黏附分子－1（VCAM－1）表达的影响。方法原代培养HUVECs,2～3代进行试验,MTT实验设立空白对照组、Hcy（0.2～1.2 mmol／L）组、Rosu（0.5、1.0、2.0和5.0 mmol／L）组,实验组：Rosu 1.0 mmol／L和2.0 mmol／L进行预处理细胞,2 h后加入0.6 mmol／L浓度的Hcy损伤HUVECs,Real time PCR法测定VCAM－1 mRNA表达,Western blot法测定细胞VCAM－1蛋白含量;Rosu 2.0 mmol／L＋甲羟戊酸（ Mev ）100μmol／L预处理2 h后再加入0.6 mmol／L浓度的Hcy以了解Mev对VCAM－1蛋白表达的影响。结果 Hcy组VCAM－1蛋白和mRNA表达较空白对照组明显增强（P＜0.05）;Rosu组VCAM－1蛋白和mRNA表达较Hcy组明显减弱（P＜0.05）,且Mev不能阻断Rosu的这种作用。结论 Rosu可通过抑制HUVECs表达VCAM－1产生抗炎作用,且这种作用独立于其调脂作用。