多重PCR鉴定猪链球菌2型毒力菌株

为了鉴定猪链球菌2型毒力菌株,根据猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的荚膜多糖基因(capsular polysaccharide 2J,cps2J)、溶菌酶释放蛋白基因(muramidase-released protein,mrp)、毒力相关序列orf2基因(virulent-associate sequence orf2)设计合成3对引物,建立三重PCR检测方法,并对PCR扩增产物进行测序、酶切、特异性及敏感性实验。结果显示:26株SS2致病菌株均同时扩增出这3个目的片段,5株其他血清型猪链球菌(SS1,SS7,SS9)及13株非猪链球菌的其他猪源链球菌(兰氏B群、C群和D群)均未扩增出cps2J和mrp片段,检测结果与菌株的已知毒力因子背景完全相符。26株SS2的扩增片段经HincⅡ酶切鉴定,与预期结果一致。以SS2四川株ZY05719为模板的三重PCR产物(cps2J,mrp,orf2)测序结果与GenBank上相关序列比较,同源性分别为99%、100%、94%。该PCR敏感极限是600个细菌/每个反应。本试验所建立的三重PCR,特异性强,敏感性好,可用于实验室的快速诊断。     

1株猪链球菌的分离·鉴定及其毒力因子研究

[目的]对1株疑似猪链球菌菌株进行鉴定,为进一步研究猪链球菌的毒力提供理论基础。[方法]采用革兰氏染色镜检、形态观察和16S rDNA测序后NCBI数据库Blast比对鉴定菌株;另外选取猪链球菌7种主要毒力因子设计引物,利用PCR方法检测其毒力基因分布情况。[结果]显微镜下该疑似菌株为革兰氏阳性菌,多数呈链状,少见单个排列。16S rDNA测序结果与猪链球菌2型同源性达到99%。毒力因子检测均含有7种毒力因子。[结论]该疑似菌株为猪链球菌2型,其毒力基因型为：gdh＋/ef＋/mrp＋/sly＋/fbps＋/orf2＋/cps2J＋/。     

猪链球菌2型分离鉴定及其对小鼠的致病性分析

为了解猪链球菌2型菌株对昆明小鼠的致病性,并建立其感染昆明小鼠模型,本试验分别取2头疑似患链球菌病的病死猪脑组织、血液分别涂布于含5％胎牛血清的TSA固体培养基中进行细菌分离;并对分离获得的细菌进行形态观察、PCR鉴定、药物敏感性试验、小鼠致病性试验及组织病理切片观察.结果显示,分离菌为革兰氏阳性短链球菌,经PCR鉴定...     

猪链球菌国内分离株毒力因子的分布特征

为了研究国内致病性猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的毒力因子分布特征,本试验选取猪链球菌7种主要毒力因子—谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)和毒力相关序列orf2,设计并合成7对引物,用PCR方法进行检测。结果显示:25株猪链球菌2型(SS2)国内分离株,96%(24/25)表现为cps /gdh /epf /mrp /sly /fbps /orf2 ,仅1株表现为cps /gdh /epf-/mrp /sly /fbps /orf2 ;1株猪链球菌1型(SS1),表现为cps-/gdh /epf-/mrp-/sly /fbps-/orf2 ;1株猪链球菌7型(SS7)国内分离株,表现为cps-/gdh /epf-/mrp-/sly /fbps-/orf2 ;2株猪链球菌9型(SS9)国内分离株,均表现为cps-/gdh /epf-/mrp-/sly-/fbps-/orf2 ,可见国内SS2的毒力基因分布特征与欧美等国家明显不同,提示我国目前SS2的主要流行菌株是同时具有7种毒力因子的高致病菌株。     

广西猪链球菌2型的分离及PCR鉴定

无菌操作采取疑似猪链球菌病的仔猪组织,接种血平板,对染色镜检为链球菌的菌落分纯、液体培养后进行DNA抽提,用荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白基因、胞外蛋白因子基因的特异性引物分别扩增出236bp、572bp和867bp大小的目的片段,鉴定确认该菌株为猪链球菌2型。     

多重PCR方法检测猪链球菌主要致病血清型及其毒力因子

根据猪链球菌基因序列,设计合成10对引物,通过在3个反应体系Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ中的组合优化,建立涵盖7种猪链球菌主要毒力因子mrp、epf、sly、gdh、gapdh、orf2和fbps及猪链球菌主要致病性血清型(2、7、9型)的快速敏感的多重PCR检测方法.对不同菌株检测结果显示,该多重PCR方法特异性强、敏感性高,能快速检测出猪链球菌2、7、9型及其毒力因子表型,可用于快速诊断及猪链球菌的分子流行病学调查.     

猪链球菌2型临床分离株的分离鉴定和生物学特性分析

为了确定2019年江苏省某规模化猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,进行了细菌分离培养、生化试验、PCR分型鉴定以及毒力基因检测和药敏性测定。结果表明:分离株在血平板上形成浅灰色、半透明的有α溶血环的圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、基因分型,确定该病原菌为猪链球菌2型,命名为HA21。毒力基因检测结果显示,HA21主要毒力基因分布为sly~+/epf~+/mrp~+,提示HA21为强毒株。药敏试验结果显示,HA21对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、卡那霉素等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。     

猪链球菌的分离鉴定

试验通过采集临床症状疑似猪链球菌感染的猪内脏器官进行涂片染色镜检、分离纯化、生化试验,结果确诊该分离菌为猪链球菌。进行药物敏感性试验,结果发现其对菌必治、庆大霉素、氟哌酸、妥布霉素、氧氟沙星、环丙沙星等药物敏感,并且对小白鼠表现出较强的致病力。     

荧光定量PCR检测猪链球菌2型主要毒力因子方法的建立

[目的]建立荧光定量PCR检测猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、溶菌酶释放蛋白(Muramidase-released protein,MRP)和胞外因子(Extracellular protein factor,EF)3种主要毒力因子的方法。[方法]根据cps2j、mrp和ef基因的基因序列,分别设计并合成3对引物及相应的Taqman探针,其中cps2j和mrp的5'端标记FAM荧光发射基团,ef的5'端标记HEX荧光发射基团,3种基因的3'端都标记BHQ1淬灭荧光基团。通过优化反应体系和程序,建立了一种基于Taqman探针法的荧光定量PCR方法检测上述3种主要毒力因子,其中cps2j单独检测,mrp与ef的实行双重荧光PCR方法检测。[结果]cps2j、mrp和ef的最低检测限分别为12、51和51 CFU,灵敏度很高;与其他病原菌无交叉反应,重复性及特异性均较好;此外,整个检测过程在60 min内即可完成。[结论]该试验所建立的双重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测猪链球菌2型3种主要毒力因子。     

广东部分地区猪场猪链球菌的分离与鉴定

对从广东省广州、韶关、增城、湛江、东莞、四会、河源、汕头等地规模猪场疑似猪链球菌病病猪中分离的细菌进行了鉴定,经纯化培养、菌落形态观察、革兰氏染色镜检及生化试验等传统检测方法并结合PCR检测,将20株分离菌株鉴定为猪链球菌(Streptococcus suis).     

中西药结合治疗猪高热综合征的效果

分析并探讨中西药结合在治疗猪高热综合征方面的实际效果,并为养殖户治疗猪高热综合征提供有益借鉴和指导.以某肉猪养殖场为例对比,160头猪高热综合征病猪共有147头被治愈,治愈比例为92.5%(148/160).采用中西药结合方法治疗猪高热综合征具有良好的效果,建议推广使用.     

疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征的诊断报告

[目的]对一例发生于新疆沙湾某集约化猪场疑似仔猪多系统衰竭综合征( PMWS)的病原进行诊断,为进一步防治该病提供依据.[方法]使用临床剖解、细菌分离、PCR、RT - PCR等方法,同时对PCR产物进行了克隆、测序.[结果]该病的发生是由猪圆环病毒2型(PCV -2)、猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)、猪肺炎支原体等病原共感染引起的.[结论]该猪场已经存在PMWS的主要病原,是导致仔猪死亡的主要原因.     

猪链球菌2型四川株与江苏株对SPF猪的致病性

以SPF巴马小型猪为实验动物,分别用猪链球菌2型四川分离株以及江苏分离株进行攻击,通过临床症状观察、病理解剖检查、病原分离鉴定以及病原组织分布检测等,比较二者的致病性。结果表明:四川株攻击猪40 h后出现神经症状,关节肿大和全身出血等不很明显;病程为6￣7 d,而江苏株攻毒后18 h即出现神经症状,20 h即有死亡者,关节肿大和全身出血明显。死后病理解剖观察可见,四川株猪主要表现为肺淤血、肿大以及脑水肿,而未见败血症的变化,全身性出血不明显;而江苏株猪除了肺淤血、肿大以及脑水肿外,出现明显的败血症变化。均分离到与攻击相同的细菌,细菌溶血特性不明显,革兰氏阳性染色典型。细菌在组织中分布不同菌株也有一定的差异。     

猪无名高热综合症流行的原因及预防措施

猪无名高热综合症是农村中小规模猪场2006及2007年初发生的高发病率、高死亡率、高淘汰率的猪病,使农村广大的中小规模养猪场损失惨重。此症主要是由猪蓝耳病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、圆环病毒2型及猪流感病毒等继发其他病原菌共同作用引发的。农村中小规模猪场无名高热综合症暴发流行的主要原因是由于缺少生物安全、没有实施全进全出的饲养模式、人及畜禽的带菌感染、消毒不严、死猪及污物处理不当、免疫不合理等。根据此原因,从猪场选址、加强生物安全、推荐自繁自养及全进全出的饲养模式、合理的免疫程序、免疫增强剂的应用、药物保健等方面提出预防措施。     

双重 PC R检测罗非鱼源无乳链球菌方法的建立

根据罗非鱼源无乳链球菌16S rRNA 基因和sip基因序列,设计、合成2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,建立快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。该方法扩增无乳链球菌可获得1305 bp和121 bp 2个特异性片段;对6株链球菌属的菌株进行特异性分析,仅无乳链球菌能扩增出16S rRNA 基因和sip基因2条特异性条带,而海豚链球菌无条带检出;经灵敏度试验,可检测到无乳链球菌菌株070717LL的最小量为1.05＆#215;10^2 CFU ;同时,双重PCR可以检测出无乳链球菌菌株070717LL人工感染的罗非鱼脾、脑、肾组织中细菌DNA ,特别是脾脏和肾脏组织的样品检测效果好。结果证明所建立的方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点,适用于对罗非鱼源无乳链球菌病的流行病学调查。     

江苏部分地区猪高热病中猪瘟病毒和猪蓝耳病病毒的检测

猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病(猪繁殖与呼吸综合征)病毒(PRRSV)是引起严重的种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提.根据已发表的猪瘟病毒(CSFV)E2基因的保守序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的保守序列,设计合成了2对特异引物,分别扩增出大小为509 bp和372 bp的特异性基因片段,通过优化RT-PCR条件,分别对江苏不同地区送检的21份病死猪的血清、淋巴结、肺、肝、脾、心脏等组织进行单重RT-PCR检测.结果4份CSFV阳性,9份PRRSV阳性,其中3份CSFV和PRRSV同时为阳性.结果表明,CSFV和PRRSV单重RT-PCR诊断方法具有高度特异性,可用于临床诊断.     

广东省某猪场链球菌的分离与鉴定

为了解广东省茂名某猪场暴发猪链球菌病的详细情况及制作灭活疫苗给猪群接种免疫。该研究通过分离细菌、PCR鉴定、生化试验等方法分离、鉴定细菌,并通过动物试验了解该分离菌的致病性。最后通过药敏试验找出高敏药物用于临床治疗及了解该猪场细菌病的耐药性,指导临床合理用药。     

猪源狂犬病病毒N和G基因的序列分析

通过对新分离的猪源狂犬病病毒GD-SH01株N基因和G基因进行序列分析,解析它们与其他狂犬病病毒N和G基因的差异.提取猪源狂犬病病毒GD-SH01株的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增N基因和G基因,并与T载体连接,克隆至大肠埃希菌DH5α.测序后与国内外部分毒株的N基因和G基因进行核苷酸序列和氨基酸序列比对.与其他毒株相比,N基因核苷酸相似性为84.3%～98.0%;氨基酸相似性为92.5%～99.3%.G基因核苷酸相似性为80.4%～98.2%;氨基酸相似性为87.8%～99.6%.     

Prevalence of Streptococcus suis Isolated from Clinically Healthy Sows in China

Streptococcus suis is an important pathogen in pigs. Transmission of this pathogen is generally believed to occur between healthy carrier sows and their offspring, so the carrier status of S. suis in healthy sows is important for the control of S. suis infections in pigs, especially in suckling and growing pigs. In this study, the prevalence of S. suis isolated from clinically healthy sows in China was studied for the first time. A total of 1 043 tonsil samples were collected from clinically healthy sows from 10 regions in China from 2005 to 2007. Among the 421 S. suis isolates, 31 strains were identified as capsular type 2. The results showed that S. suis was widespread in swine herds in China with the carrier rates in different herds ranging from 19.5 to 93.9%. Overall, 40.4 and 3.0% of clinically healthy sows harbored S. suis and capsular type 2 in their palatine tonsils, respectively. Statistically significant differences of carrier rates of S. suis and capsular type 2 between the different farms were observed, which was independent of herd sizes and geographic distributions of different herds.     

猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定

利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离茵中筛选了一株酶活较大的菌株B．A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16SrDNA序列长度是1463bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99％,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2．19×10^3U·mL^-1。