紫草素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的观察紫草素对人滑膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨紫草素可能的免疫抗炎作用机制。方法分离并培养人膝关节滑膜成纤维细胞,各加入IL-1β、TNF-α15 ng/mL,体外模拟人类风湿关节炎滑膜细胞。以塞来昔布作阳性对照,进行紫草素(浓度为5～80μg/L)干预,分别作用24、48、72 h后终止培养。用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达情况。结果紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA的表达,对浓度无明显依赖性(P=0.089),用药时间上有显著统计学意义(P<0.0001)。塞来昔布抑制滑膜成纤维细胞COX-2mRNA水平的表达亦无明显浓度依赖性(P=0.051),而与用药时间显著相关(P<0.0001)。紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达的影响与塞来昔布相比,其抑制作用无明显差异。结论紫草素可通过抑制COX-2 mRNA基因表达,减少炎症性细胞因子的产生而发挥其对类风湿关节炎的免疫抗炎作用,为开发紫草素成为COX-2抑制剂提供一定的实验基础。     

RNA干扰技术抑制类风湿关节炎成纤维细胞COX-2合成

目的 体外合成针对人环氧化酶-2（hCOX-2）的小分子干扰RNA（siRNA）,并转染人人滑膜成纤维细胞,通过比较不同siRNA抑制COX-2 mRNA表达、COX-2蛋白合成以及下游产物PGE2水平,旨在确定特异性阻断人滑膜成纤维细胞COX-2的siRNA.方法 分离、培养和传代人类风湿关节炎（类风关）滑膜成纤维细胞.设计合成4条针对hCOX-2 mRNA siRNA（1#-4#siRNA）,1条随机序列siRNA.设立1#-4#siRNA和随机序列siRNA组（NC）及未转染对照组（CTL组）.应用Lipofect AMINE 2000将上述siRNA分别转染人滑膜成纤维细胞,4 h后各培养孔加入终浓度为100 nmol/L的佛波酯.转染36 h、48 h后,各组提取蛋白质和总RNA,应用RT-PCR检测hCOX-2 mRNA表达水平,通过Western Blot检测hCOX-2蛋白表达水平.采用ELISA方法检测各组上清液PGE2的水平.结果 转染36 h,PCR结果显示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、阳性对照HeLa细胞组hCOX-2 mRNA电泳条带密度值分别为1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot结果提示上述各组hCOX-2蛋白密度值分别为1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48.转染48 h后,各组hCOX-2蛋白条带密度值分别为0.05、0.52、0.51、0.9和0.15.转染24 h、48 h和72 h后,4#siRNA组培养上清液PGE2的水平较其他各组低.结论 4#siRNA能有效抑制人滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达和COX-2蛋白的合成,且上清液中PGE2水平最低,证实4#siRNA能特异性阻断COX-2在滑膜成纤维细胞表达.     

COX-2和iNOS在肺癌组织中的表达及其临床意义

[目的]研究诱导型环氧化酶(COX—2)和一氧化氮合酶(iNOS)在肺癌组织中的表达及其临床意义。[方法]用免疫组化法检测42例肺癌组织中COX—2和iNOS蛋白表达。[结果]COX—2和iNOS表达的阳性率分别为31％和33％；COX—2表达与术后生存期的长短呈负相关；iNOS与肿瘤组织的分化程度密切相关，分化越低，iN—OS表达越强；COX—2与iNOS表达之间未见相关性。[结论]COX—2和iNOS在肺癌中表达与否与患者的预后相关。     

COX-2、iNOS和NF-κB在鼠卵巢癌中的表达及三者之间的关系

目的 研究COX-2、iNOS和NF-κB在鼠卵巢癌中的表达和三者之间的关系.方法 采用免疫组化法检查25例小鼠的卵巢恶性肿瘤、15例小鼠的正常卵巢组织中COX-2、iNOS和NF-κB的表达.结果 25例小鼠的卵巢恶性肿瘤组织中COX-2、iNOS和NF-κB的阳性表达率(76.0%、72.0%,64.0%)明显高于...     

RNA干扰对人环氧化酶-2合成以及对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的分析siRNA对前列腺素E2（PGE2）、白介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF—α）和血管内皮生长因子（VEGF）合成的影响。方法设计4条（1^#-4^#）环氧化酶-2（hCOX-2）mRNA的小分子干扰RNA（siRNA）,设立空白阴性（CTL）和1条随机序列（NC）对照。应用LipofectAMINE 2000将siRNA转染入滑膜成纤维细胞（RASF）,4h后,再加入100nmol/L的佛波酯。应用RT-PCR和Western印迹分别检测hCOX-2 mRNA和蛋白表达水平。采用ELISA法检测各组上清液中致炎因子水平。结果转染48h后,NC、1^#-4^#siRNA组与CTL组mRNA条带吸光度比值分别为0．72、0,3、0．25、0．4、0．04。转染36和48h后,各组与CTL组hCOX-2蛋白吸光度比值分别为1．04、0、52、0．39、0．9、0和1．05、0．52、0．51、0．9、0．15;4^# siRNA组上清液PGE2、IL-1β、TNF—α、IL-6和VEGF水平较其他各组为低,且与其他处理组相比死亡细胞率差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论4^#iRNA组能有效抑制COX-2mRNA和蛋白表达,其上清液中致炎因子水平最低,死亡细胞较苴他各组无明显增加．     

雷公藤红素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中RANKL､OPG及炎性因子表达的影响

目的:观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)?骨保护素(OPG)?白细胞介素-6(IL-6)?肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)表达的影响?方法:以白细胞介素-1β(IL-1β)刺激MH7A,不同浓度的Cel(0.1?0.5?1.0?2.0 μmol/L)干预细胞24 h后,采用real-time PCR和免疫荧光的方法检测RANKL?OPG?IL-6?TNF-α及IL-8的表达?结果:IL-1β刺激MH7A细胞系24 h后,RANKL?OPG?IL-6?TNF-α及IL-8 mRNA及RANKL免疫荧光明显增强,Cel呈剂量依赖性抑制MH7A中IL-1β诱导的RANKL?OPG?IL-6?TNF-α及IL-8 mRNA水平(P < 0.05)和MH7A中RANKL免疫荧光表达,显著上调OPG/RANKL轴比值?结论:Cel能调节滑膜成纤维细胞中OPG/RANKL轴和抑制促炎因子?趋化因子的表达,可能在阻止类风湿关节炎“炎症”和“骨侵蚀”中发挥重要作用?     

硝基化和氧化相关酶类iNOS和COX-2与血液系统恶性肿瘤

硝基化和氧化相关酶类的可诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧化酶2型(cyclooxy-genase-2,COX-2)与肿瘤的相关性日益成为研究者关注的焦点.关于iNOS和COX-2与血液系统恶性肿瘤的相关性存在两种不同的观点,它们的作用机制尚不清楚.针对NOS、COX或两者的选择性抑制剂为血液系统恶性肿瘤的治疗提供了新的线索.     

NF-κB、COX-2及iNOS在胃癌及胃不典型增生中的表达及其意义

核因子κB(nuclearfactor-kappa B,NF-κB)是普遍存在于细胞质中以p50/p65异二聚体为存在形式的一种快反应转录因子,在炎症、免疫反应等病理过程中具有重要作用,近来发现它与细胞凋亡、肿瘤形成、细胞周期调控以及细胞分化等有关[1].     

舌鳞癌与其颈淋巴结转移癌组织中iNOS与COX-2的表达差异

 【目的】研究诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧化酶-2（COX-2）在舌鳞癌原发灶及其颈淋巴结转移灶组织中的表达差异，探讨舌鳞癌转移的机制。【方法】采用SP免疫组化法检测83例舌部原发鳞癌和其中35例相应的颈淋巴结转灶石蜡包埋标本中iNOS、COX-2的表达。【结果】①舌鳞癌颈淋巴结转移灶iNOS（9．6±2．1）、COX-2（8．7±0．9），相应的原发灶iNOS（7．7±1．8），COX-2（6．1±1．3）。无颈淋巴结转移的原发灶iNOS（3．5±2．7）。COX-2（2．4±1．9）。无转移的颈淋巴iNOS（0．7±0．3），COX-2（0．5±0．6），舌正常组织iNOS（0．6±0．4），COX-2（0．4±0．3）。上述组别两两比较，iNOS、COX-2免疫组化评分差异均有统计学意义（P〈0．01。P〈0．05）。②在舌鳞癌颈淋巴结转移癌组织中。iNOS、COX-2表达呈正相关关系（r=0．5841，P〈0．01）。③在舌鳞癌颈淋巴结转移灶中。M组iNOS（10．5±0．7）、COX-2（9．6±1．1）分别与N2组iNOS（9．4±0．6）、COX-2（9．1±0．2）比较差异无统计学意义（P〉0．05）。N1组iNOS（6．1±0．4）、COX-2（5．5±0．4）分别同N0组iNOS（0．7±0．3）、COX-2（0．5±0．6）比较。差异有统计学意义（P〈0．01）。N2组iNOS、COX-2分别同N1组iNOS、COX-2比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。【结论】iNOS、COX-2在舌鳞癌的转移及颈淋巴结转移灶的生长中起着重要的作用。     

尼美舒利、舒林酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、iNOS表达的抑制作用

目的：观察尼美舒利、舒林酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用及对COX-2、iNOS表达的影响。方法：MTT法检测不同浓度尼美舒利、甜林酸对SGC-7901细胞的生长抑制作用．免疫组织化学Power vision^TM两步法、Western blot方法检测药物作用前后细胞COX-2、iNOS表达情况：同时生化方法检测细胞内TNOS、iNOS、NO含量的改变。结果：尼美舒利、舒林酸可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性：与阴性对照组相比，舒林酸、尼美舒作用48h后，舒林酸0．6、1．2mmol／L组及尼美舒利100、200μmol／L组中COX-2、iNOS蛋白表达率及细胞内iNOS、TNOS、NO含量均明显降低（P〈0．05）。结论：尼美舒利、舒林酸可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖，其机制除了与抑制COX-2有关外还与抑制iNOS的蛋白表达与活性有关．     

COX-2介导肿瘤相关成纤维细胞在乳腺癌进展中的作用研究

目的 探讨COX-2介导肿瘤相关成纤维细胞在乳腺癌进展中的作用,以提高乳腺癌的诊治水平.方法 随机选取2005年12月~2015年12月乳腺病变微创手术或者外科手术标本:癌旁正常乳腺组织50例,标本均取自乳腺癌术后标本,同时距肿物5cm外的正常乳腺组织;良性病变组织80例,导管原位癌54例及浸润性导管癌135例,标本均取自于乳腺病变微创手术及外科手术术后标本,检测标本α-SMA和COX-2在乳腺各病变组织中的表达.结果 与癌旁正常乳腺组织、良性病变组织相比,导管原位癌组织α-SMA阳性30例(阳性率55.55%)、浸润性导管癌组织α-SMA阳性70例(阳性率51.85%),肿瘤相关成纤维细胞阳性率相对较高,表明肿瘤相关成纤维细胞在后两者中活化、累积.与癌旁正常乳腺组织、良性病变组织相比,导管原位癌组织COX-2阳性28例(阳性率51.85%)、浸润性导管癌组织中COX-2阳性73例(阳性率54.07%),COX-2阳性率相对较高,表明COX-2在后两者中过表达.COX-2在乳腺癌过表达与肿瘤相关成纤维细胞活化、累积相关.结论 COX-2介导肿瘤相关成纤维细胞的过表达能够提示乳腺癌进展情况,在未来研究诊断和治疗乳腺癌具有十分重要的临床价值     

雷公藤内酯醇对Aβ_(1-42)激活的小胶质细胞一氧化氮释放和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的研究雷公藤内酯醇(triptolide,T10)对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)1-42激活的小胶质细胞一氧化氮(nitrogenmonoxidum,NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。方法用不同浓度的T10(10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)预孵育小胶质细胞12 h,然后加入10μmol/L Aβ1-42共孵育12 h;Griess反应检测上清NO的含量,Western blotting检测iNOS蛋白的表达。结果 Aβ组iNOS的表达和NO释放明显高于对照组(P<0.01)。T10可明显减少Aβ诱导的小胶质细胞iNOS的表达及NO的释放(P<0.05)。结论 T10可抑制Aβ1-42激活的小胶质细胞iNOS蛋白的表达及NO的释放。     

雷公藤内酯醇对鳞癌A431细胞增殖凋亡及其COX-2和survivin表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对皮肤鳞癌A431细胞株增殖与凋亡、环氧合酶-2(COX-2)和生存素(survivin)mRNA表达水平的影响,探讨TP抗皮肤肿瘤的作用机制.方法 以体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定不同浓度TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布以及凋亡峰的出现.RT-PCR法检测TP对A431细胞株COX-2和survivin mRNA表达水平的影响.结果 随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP能够诱导A431细胞株凋亡和改变细胞周期的分布,与对照组相比,G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);另外,TP能抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA的表达,不同浓度处理组两两相比,差异具有显著性(P<0.01).结论 TP通过诱导A431细胞凋亡、抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA表达发挥抗皮肤肿瘤的作用.     

薤白对气滞型血管损伤COX-2和iNOS含量及相互作用的影响

目的探讨气滞型大鼠血管内皮损伤中环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白水平及相互作用,以及薤白的防治作用机制。方法用高L-蛋氨酸复制SD大鼠血管内皮损伤,并附以束缚法制造气滞实验模型。应用蛋白质印迹分析内皮损伤相关关键蛋白COX-2和iNOS蛋白水平的变化,免疫共沉淀和激光共聚焦显微镜技术,探讨COX-2和iNOS的相互作用,光镜和电镜分析血管内皮的病理变化。结果模型组血管COX-2和iNOS蛋白含量显著增高,并存在明显的相互作用,与血管内皮光镜和电镜下的病理损伤相一致;与模型组相比,薤白组COX-2和iNOS的蛋白含量降低,两者的相互作用减弱(P<0.05或P<0.01),且血管内皮的病理损伤明显减轻。结论气滞型大鼠血管内皮损伤中,COX-2和iNOS蛋白含量增高,且两者之间的相互作用增强,可加重血管内皮损伤,薤白能够纠正这些异常,起到保护血管内皮免受损伤的作用。     

NF-κB和COX-2在肺癌组织中的表达及其意义

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)、环氧化酶-2(COX-2)在肺癌发生中的作用及二者的关系。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测56例肺癌组织及相应的癌旁正常组织、12例肺良性病变中NF-κBmRNA和COX-2 mRNA的表达。结果:67.8%肺癌组织表达NF-κB mRNA,相应癌旁正常组织、肺良性病变则分别为12.5%(P<0.01)、5/12(P<0.01),60.7%肺癌组织表达COX-2 mRNA,相应癌旁正常组织、肺良性病变则分别为10.7%(P<0.01)、3/12(P<0.01),肺癌组织NF-κB mRNA和COX-2 mRNA表达的阳性率均高于癌旁正常组织(P均<0.01),癌旁正常组织和肺良性病变则差异无显著性(P均>0.05);肺癌组织NF-κB mRNA和COX-2 mRNA表达呈显著正相关(P<0.01)。结论:NF-κB和COX-2基因表达在肺癌组织增高,二者呈显著正相关,提示二者协同作用共同促进肺癌的发生、发展,从而为肺癌治疗提供新的靶位点。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马COX-2、iNOS表达的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及大脑海马CA1区神经元炎性反应的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组10只,采用双侧海马注射凝聚态Aβ25-35制备AD大鼠模型。电针组选取双侧肾俞穴、双侧足三里穴和大椎穴,接韩氏电针仪治疗。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测脑组织中海马神经元环氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果大鼠海马注射Aβ25-35导致海马CA1区锥体神经元的损伤,同时伴有COX-2、iNOS表达增加。与模型组相比,电针能有效抑制COX-2、iNOS表达(均P0.05),显著提高AD大鼠的学习记忆能力(P0.05)。结论电针能有效抑制AD大鼠脑内神经元炎性反应,改善AD大鼠空间探索的能力,其作用机制可能与减轻COX-2过表达,抑制iNOS活性有关。     

口腔恶性黑色素瘤COX-2表达和肿瘤血管生成的研究

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）表达和口腔恶性黑色隶瘤血管生成的关系。方法免疫组化检测口腔恶性黑色素瘤COX-2、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、血管内皮生长因子（VEGF）表达。并测定肿瘤微血管密度（MVD）。结果口腔恶性黑色素瘤COX-2表达与VEGF、iNOS表达密切相关（P〈0.05）。口腔恶性黑色素瘤COX-2表达阳性组和阴性组MVD有显著差异（P〈0．01）。结论口腔恶性黑色素瘤COX-2表达和肿瘤血管生成有关，iNOS和VEGF可能参与COX-2对肿瘤血管生成的促进作用。     

重组人诱导型一氧化氮合酶在V_(79)成纤维细胞株中的表达及意义探讨

目的　观察人诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因转染至V79成纤维细胞株后 ,iNOS的表达和分泌一氧化氮的情况 ,以探讨血管壁成纤维细胞分泌一氧化氮的可行性。方法　构建真核表达载体pcDNA3 iNOS,将人iNOS基因转入V79细胞中 ,经G41 8筛选 ,克隆扩增 ,通过RT PCR、免疫荧光法进行鉴定。结果　pcDNA3 iNOS基因转染的V79成纤维细胞中有iNOSmRNA的转录 ,在细胞胞质中可见分泌的iNOS蛋白 ,iNOS转染组一氧化氮的含量 (2 37.67± 2 7.2 8)与正常细胞组 (78.2 6± 1 1 .77)和空质粒组 (84.2 2± 1 2 .67)相比有显著性意义 (P <0 .0 0 1 ) ,但正常细胞组和空质粒组相比无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　iNOS基因可以成功地转入成纤维细胞中并能使转染的成纤维细胞具有分泌NO的功能 ,从而可能替代血管内皮细胞的部分功能