2-氨基嘌呤对小鼠的毒理学研究

目的:2-氨基嘌呤(2-Aminopurine,2-AP)是一种真核生物翻译启动因子2α(eukaryotic translation initiation factor-2α,e IF-2α)激酶的抑制剂。细胞水平的研究发现2-AP能够抑制病毒的复制及泡沫细胞的形成,因此有可能作为药物用于治疗或预防病毒感染和动脉粥样硬化相关的心血管疾病,如缺血性心脏病和中风。这里我们研究了2-AP对小鼠的毒性作用。方法:C57BL野生型小鼠在30d内每两天2-AP灌胃1次,剂量为200、300或400mg/kg体重。结果:所有给药400mg/kg体重的小鼠在14d内全数死亡。解剖后发现在小鼠胃内积累了大量未消化的食物,但其他器官,如心、肾、肝、肺及消化道则没有表现出明显的病理变化。给药剂量为300mg/kg体重的小鼠没有死亡,但与对照组相比,小鼠的生长速度迟缓。给药200mg/kg体重的小鼠,食物摄入量、血糖水平以及体重并没有减少,死亡率与对照组相比也没有增加。结论:小鼠隔日1次灌胃给药2-AP的剂量应该≤200mg/kg。     

IL-24与蛋白激酶和 eIF-2α在胶质瘤中的表达

目的：探讨IL-24与蛋白激酶（ PKR）、真核细胞翻译起始因子（ eIF-2α）在胶质瘤中的表达情况。方法收集30例不同级别的胶质瘤标本,利用荧光定量PCR及免疫组化技术检测胶质瘤中IL-24及PKR、eIF-2α的表达。结果胶质瘤中IL-24及PKR、eIF-2α的mRNA及蛋白表达随级别的增加表达降低。结论胶质瘤中IL-24下调可能通过PKR、eIF-2α的表达抑制,降低胶质瘤细胞凋亡。     

shRNA沉默elF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的 构建靶向真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)的shRNA表达载体,观察eIF4E表达抑制对喉癌细胞生物学行为的影响.方法 根据人eIF4E mRNA序列设计并构建2个靶向人eIF4E基因的shRNA真核表达载体(pSilencer4.1-sl和psilencer4.1-s2);然后以脂质体转染的方法将shRNA表达质粒转染至人喉癌细胞系Hep-2,经G418筛选出稳定转染的阳性细胞.分别通过反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术对构建成功的2个shRNA干扰质粒进行有效性筛选,分析其eIF4E mRNA及蛋白表达水平,并筛选出表达抑制最强的稳定转染喉癌细胞系(Hep-2-s2).通过噻唑蓝(MTT)试验检测Hep-2-s2细胞的体外增殖活性,流式细胞仪技术(FCM)检测其细胞周期和凋亡变化情况.结果 经双酶切证实转录shRNA的目的 基因片段已成功克隆入pSilencer4.1-CMVneo真核表达载体中,经测序证明插入序列完全正确;eIF4E-shRNA2可以显著下调eIF4E mRNA及蛋白表达水平;eIF4E基因的表达下调明显抑制Hep-2细胞的体外增殖(P＜0.05);Hep-2-s2细胞的Go/G1期细胞比例显著增加了(14.7±1.1)%,而S期细胞比例减少了(13.2±1.6)%(P＜0.05);Hep-2-s2的细胞凋亡率显著增加到(18.3±1.7)%(P＜0.05).结论 shRNA介导的eIF4E基因表达下调可显著降低喉癌细胞的增殖活性,同时诱导其细胞周期阻滞和凋亡率增加,为喉癌基因治疗筛选出了新的靶点.     

shRNA沉默eIF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的构建靶向真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的shRNA表达载体，观察eIF4E表达抑制对喉癌细胞生物学行为的影响。方法根据人eIF4EmRNA序列设计并构建2个靶向人eIF4E基因的shRNA真核表达载体（pSilencer 4．1-sl和pSileneer4．1-s2）；然后以脂质体转染的方法将shRNA表达质粒转染至人喉癌细胞系Hep-2，经G418筛选出稳定转染的阳性细胞；分别通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blotting技术对构建成功的2个shRNA干扰质粒进行有效性筛选，分析其eIF4E mRNA及蛋白表达水平，并筛选出表达抑制最强的稳定转染喉癌细胞系（Hep-2-s2）。通过噻唑蓝（MTT）试验检测Hep-2-s2细胞的体外增殖活性，流式细胞仪技术（FCM）检测其细胞周期和凋亡变化情况。结果经双酶切证实转录shRNA的目的基因片段已成功克隆入pSileneer4.1-CMVneo真核表达载体中，经测序证明插入序列完全正确；eIF4E—shRNA2可以显著下调eIF4EmRNA及蛋白表达水平；eIF4E基因的表达下调明显抑制Hep-2细胞的体外增殖（P〈0．05）；Hep-2-s2细胞的G0／G1期细胞比例显著增加了（14．7±1、1）％，而S期细胞比例减少了（13.2±1．6）％（P〈0．05）；Hep-2-s2的细胞凋亡率显著增加到（18．3±1．7）％（P〈0．051。结论shRNA介导的eIF4E基因表达下调可显著降低喉癌细胞的增殖活性，同时诱导其细胞周期阻滞和凋亡率增加．为喉癌基因治疗筛选出了新的靶点。     

真核翻译起始因子4E对宫颈癌细胞增殖迁移的作用研究

目的：探讨eIF4E对宫颈癌细胞增殖迁移的调控作用。方法：eIF4E表达质粒转染C33a细胞。 Real-time PCR检测eIF4E mRNA表达,CCK-8法、Transwell实验分别检测细胞增殖以及迁移。结果：eIF4E质粒转染C33a细胞后,eIF4E的mRNA表达水平升高约52%（P＜0.01）,细胞增殖中与NC组相比,eIF4E组细胞增殖在24h、48h、72h分别增加了20.2%、67.7%、54.3%（P＜0.05）。而细胞侵袭数目在24h、48h、72h分别增加了23.7%、35.7%、42.7%（P＜0.05）。结论：eIF4E能够促进宫颈癌C33a的增殖侵袭能力,是宫颈癌防治的潜在靶点。     

免增灵对小鼠血清白细胞介素-2和肿瘤坏死因子的影响

目的研究免增灵对小鼠血清白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）和肿瘤坏死因子（turnout neerosisfactor,TNF-α）的影响。方法采用上海森雄科技实业有限公司生产的“小鼠白细胞介素-2定量酶联检测试荆盒”和“小鼠α-肿瘤坏死因子定量酶联检测试剂盒”测试小鼠血清中的白介素-2和α-肿瘤坏死因子。结果小鼠经环磷酰胺（化疗）后,小鼠血清的白细胞介素-2和α-肿瘤坏死因子生成减少,而免增灵可以对抗环磷酰胺的此种抑制作用,使之恢复正常。结论免增灵能改善和提高环磷酰胺降低小鼠血清白细胞介素-2和α-肿瘤坏死因子含量的功能。     

阿托伐他汀钙对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1通路的影响

目的 探讨阿托伐他汀钙(AVT)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路的影响。方法 2021年9―12月,采用随机数字表法把15只BALB/c雌性小鼠分为NS组(尾静脉注射生理盐水)、LPS组(尾静脉注射LPS诱导ALI模型)、LPS+AVT组(经AVT灌胃治疗的ALI模型),每组各5只。收集动脉血,测定血氧分压(PaO₂)、氧合指数(PaO₂/FiO₂);处死后取出双肺,HE染色观察肺组织,测定湿干重比(W/D),酶联免疫吸附(ELISA)法测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白质印迹法(Western blotting)测肺组织中Nrf2、HO-1的表达。结果 NS组、LPS组及LPS+AVT组PaO₂ [(89.66±8.54)、(50.88±6.26)、(67.84±5.76)mmHg]、PaO₂/FiO₂[(426....     

独角莲醇提液对H22 肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响

目的探讨独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响。方法建立体内H22肝癌荷瘤小鼠的模型，采用灌胃法给予其100mg·kg^-1·d^-1独角莲醇提液，以生理盐水灌胃和5-FU腹腔注射作为对照，连续10d，停药后第2天摘取小鼠眼球取血后断髓处死，取出胸腺、脾脏称重，计算小鼠的胸腺重量指数、脾脏重量指数，采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果与生理盐水灌胃的H22肝癌荷瘤小鼠比较，5-FU腹腔注射和独角莲醇提液灌胃处理的H22荷瘤鼠血清中细胞因子IL-2、TNF-α水平明显升高；但胸腺重量指数、脾脏重量指数显著下降，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论独角莲醇提液可提高H22荷瘤鼠的血清IL-2和TNF-α水平。     

eIF3a 2554G>A基因多态性对肺癌患者铂类药物化疗敏感性的影响

目的elF3a在基因转录和翻译过程中起重要的调控作用,近年来研究发现elF3a蛋白在肺癌组织中具有高表达。本研究检测elF3a基因2554G7A此位点的突变,研究这些突变与肺癌发生的易感性以及与肺癌患者化疗药物敏感性的关系。方法在湘雅医院收集肺癌患者和健康对照者血液标本。用半巢式聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性分析法对16号外显子的2554G〉A进行分型,分析该基因多态性与肺癌易感性及肺癌患者对铂类药物化疗敏感性的相关性。结果elF3a2554G〉A突变在肺癌中的突变频率为10．9％,其中鳞癌突变频率为10．9％,腺癌为5．9％,小细胞癌为13．4％;健康人群中突变频率为15．3％。在肺癌患者中,elF3a2554G〉A三种基因型GG、GA和AA的频率分别为78．8％、20．6％和0．6％。而健康对照者中,GG、GA和AA三种基因型的频率分别为72．9％、23．5％和3．5％。经非条件logistic回归平衡了性别、年龄和吸烟史后,GA、AA、GA＋AA基因型患肺癌的危险性与GG基因型相比均无统计学意义,相对于GG基因型,GA型患肺癌（OR=0．83,95％CI：0．49～1．41）,AA型患肺癌（OR=0．18,95％cI：0．02-1．59）,GA＋AA基因型（OR=0．76,95％CI：0．45～1．27）。小细胞肺癌组GG基因型患者的化疗有效率低于GA基因型（65.0%-75.0%）,而非小细胞肺癌组GG基因型患者的化疗有效率高于GA＋AA基因型（24.3％W16．7％）。结论elF3a2554G〉A基因多态性与肺癌的发生无明显相关性。在小细胞肺癌和非小细胞肺癌中．elF3a2554G〉A不同基因型的个体具有不同的铂娄化疗疗效．     

姜黄素对小鼠S180肉瘤Ang-2和HIF-1α表达的影响

目的探讨姜黄素对肿瘤血管形成抑制作用机制。方法通过建立动物肿瘤模型,运用分别实验治疗,结合免疫组化,检测其肿瘤内血管密度以及瘤体Ang-2和HIF-1α的表达。结果姜黄素中剂量和大剂量姜黄素组的S180瘤体内微血管密度均明显低于对照组;免疫组化显示中剂量和大剂量姜黄素组可抑制S180瘤体内Ang-2和HIF-1α的表达。结论姜黄素对小鼠S180肉瘤血管形成有明显抑制作用,降低Ang-2和HIF-1α的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。     

HIV-1gag／IFNα-2b表达产物免疫小鼠的实验研究

为了将艾滋病病毒核心蛋白(gag)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠，观察小鼠的体液免疫和细胞免疫应答，将IFNα-2b基因片段插入到gag基因的nt531位点，经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选出重组痘苗病毒。经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。用重组病毒vJ38gae／IFNα-2b免疫小鼠，用ELISA方法检测血清IgG抗体含量，用流式细胞仪测定小鼠脾CD4^+、CD8^+T淋巴细胞计数。结果表明，血清IgG抗体含量逐渐增高，实验组与对照组比较差异有显著意义(P&;lt;0．05)。CD4^+、T淋巴细胞计数与对照组比较差异有显著意义(P&;lt;0．05)。结论：重组痘苗病毒vJ38gag／IFNα-2b能增强小鼠的体液免疫和诱导细胞免疫。     

板蓝根提取物对肺炎支原体感染小鼠血清白介素-6、肿瘤坏死因子-α和白介素-17A的影响研究

目的探讨板蓝根提取物对肺炎支原体感染小鼠血清细胞因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-17A(IL-17A)水平的影响。方法 选取40只BALB/c小鼠并随机分为对照组、模型组、三种不同浓度（250、125、62.5 mg/ml）板蓝根提取物组,每组8只。采用肺炎支原体标准菌株M19滴鼻法建立肺炎支原体感染小鼠模型。建模成功后灌胃不同浓度的板蓝根提取物,对照组和模型组灌胃等量的生理盐水。苏木精-伊红染色法观察肺组织病理变化,流式法检测小鼠血清IL-6、TNF-α、IL-17A的水平。结果 模型组血清IL-6、TNF-α、IL-17A水平高于对照组;板蓝根低、中、高浓度组IL-6和IL-17A水平均低于模型组,板蓝根中、高浓度组TNF-α水平均低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 板蓝根能缓解肺炎支原体感染引起的肺组织炎性病变及过量炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17A的释放,抑制过度免疫反应,减轻免疫病理损伤。     

重组人干扰素α-2b滴鼻剂对小鼠免疫功能影响的研究

目的研究重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)滴鼻剂对小鼠免疫功能的影响。方法应用比色法、ELISA双抗体夹心法,分别测定在高(10 000 u/只)、中(1 000 u/只)、低(100 u/只)3种剂量rhIFNα-2b滴鼻剂作用下,不同时间(10,20,30 d)小鼠脾脏NK细胞毒指数和唾液IgA含量的变化。结果与基质液组比较,10 d高剂量组、10,20,30 d中剂量组和20,30 d低剂量组的NK细胞毒指数均显著增加(P<0.05),20 d高剂量组增加极显著(P<0.01)。10,20,30 d各剂量组IgA含量均极显著增加(P<0.01),20 d高、中剂量组IgA含量最高,药理作用强于10,30 d组(P<0.05)。结论rhIFNα-2b滴鼻剂具有显著提高小鼠免疫功能的作用。     

2-甲氧基雌二醇对小鼠急性毒性研究

目的:观察2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)灌胃给药的小鼠急性毒性反应。方法:经预试确定按最大给药量法设计试验,小鼠40只,♀♂各半,随机分为给药组和阴性对照组,给药组以2-ME2 000 mg.kg-1为最大给药剂量,40mL.kg-1为最大给药容量,在24 h内一次灌胃,阴性对照组以等容积的纯化水一次灌胃,给药后自由饮食饮水,连续2周观察小鼠体质量、行为活动以及死亡情况。结果:给药组小鼠观察期间内体质量及行为活动异常无变化,未见死亡。结论:2-ME灌胃给药对小鼠急性毒性甚低,提示该药为低毒化学物。     

γ-促分泌酶抑制剂对脑缺血再灌注小鼠海马肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的研究γ-促分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对脑缺血再灌注小鼠海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 72只昆明小鼠分为假手术组(Sham,8只)、γ-促分泌酶抑制剂组(MW167,32只)、缺血再灌注组(I/R,32只)。γ-促分泌酶抑制剂组和I/R组依据缺血后再灌注的不同时间点再细分为1、3、7、14d4个亚组。应用免疫组织化学法、蛋白印迹法检测各组小鼠海马TNF-α蛋白的表达。结果免疫组织化学和蛋白印迹法结果发现,缺血处理后的各个时间点,TNF-α表达持续增高,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.01);与相同时间点的缺血组比较,MW167组的TNF-α蛋白阳性表达明显降低(P<0.05)。结论调节炎性因子TNF-α蛋白的表达可能是Notch信号通路参与脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

纳米α-亚麻酸对病毒性心肌炎小鼠心肌损伤的保护作用

目的：探讨果王素活性成分纳米α-亚麻酸对病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌损伤的保护作用。方法：30只BALB/C小鼠腹腔无菌注射柯萨奇病毒（CVB3）制作病毒性心肌炎模型,造模后小鼠随机分为生理氯化钠溶液(NS)对照组和纳米α-亚麻酸高、低剂量治疗组(180,60 mg&#8226;kg-1),灌胃7 d,每组10只。另取20只BALB/C小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分别给予NS和纳米α-亚麻酸对照组（180 mg&#8226;kg-1,灌胃给药,7 d）。测定小鼠给药前后的心率变化率,计算死亡率;14 d后处死小鼠,并取血检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白（cTn-T）和B-型钠尿肽（BNP）水平。结果：心肌炎小鼠NS对照组的心率增加率、血清CK-MB、cTn-T和BNP表达水平均显著高于非感染小鼠(P<0. 01);与心肌炎小鼠NS对照组比较,纳米α-亚麻酸180 mg&#8226;kg-1治疗组小鼠心率增加率［(38.2±8.7)% vs (12.6±1.9)%,P<0.05］和死亡率均明显降低［50% vs 10%,P<0.05］,CK-MB,BNP和cTn-T表达水平均显著下降(P<0.01)。结论：纳米α-亚麻酸可以提高病毒性心肌炎小鼠的生存率,减轻心肌损害。     

基于植物生长调节剂萘乙酸和6-苄氨基嘌呤组合的红花组织培养体系的优化

目的:建立高效的红花(Carthmus tinctorius L.)离体组织培养体系,为红花的基因操作搭建平台.方法:以萌发6～8d的红花无菌苗子叶为外植体,选用MS基础培养基,应用萘乙酸(1-naphthylacetic acid,NAA)+6-苄氨基嘌呤(6-benzyl amino purine,6-BA)+激动素(kinetin,KT)为组织培养的植物生长调节剂,优化红花的组织培养体系.结果:红花组织培养的最佳植物生长调节剂配方为:NAA 2.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+KT 20.0 mg/L,添加活性炭(4 g/L)或硝酸银(5 mg/L),光照时间为16 h/d,光照强度9000 lx,培养温度为(25±2)C,平均愈伤组织发生率高达86.4％,而且再生芽生长稳定,重现性高.结论:本研究优化建立了红花的不定芽再生体系,为红花基因操作平台的建立奠定了基础.     

新型重组人肿瘤坏死因子-α对四氯化碳及刀豆蛋白A诱导小鼠肝损伤的影响

目的 :研究不同剂量的新型重组人肿瘤坏死因子 (nrhTNFα)对肝功能及肝脏组织形态学的影响。方法 :用四氯化碳 (CCl4)或刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠肝损伤 ,nrhTNFα低、中、高剂量 (5× 10 4,5×10 5,5× 10 6IU·kg-1)im ,测血清中ALT、AST、LDH、IFN α、IL 2和NO浓度变化 ,检查肝脏组织形态学变化。结果 :3个剂量的nrhTNFαim对正常小鼠肝功能及肝脏组织形态学无影响 ;低、中剂量nrhTNFα对CCl4诱导肝损伤小鼠的肝功能及肝脏组织形态学无影响 ,高剂量nrhTNFα加重肝损伤 ;3个剂量的nrhTNFα降低ConA诱导的肝损伤小鼠血清ALT、AST、LDH和IFN γ浓度增加 ,且nrhTNFα低剂量作用明显 ,能明显减轻肝脏病理学改变。结论 :nrhTNFα低、中、高剂量im对正常小鼠无肝毒性 ;nrhTNFα低、中剂量im不影响CCl4诱导的肝损伤 ,高剂量则加重之 ;3个剂量的nrhTNFαim抑制ConA诱导的肝损伤 ,其作用机理与抑制ConA诱导的小鼠IFN γ产生有关。     

饱和氢盐水对短暂性脑缺血再灌注损伤小鼠海马PERK/eIF2α/ATF4信号通路的影响

目的 探讨饱和氢盐水对短暂性脑缺血再灌注损伤小鼠海马PERK/eIF2α/ATF4信号通路的影响.方法 选择SPF级健康♂ C57BL/6小鼠150只,采用随机数字表法将其分为5组(n=30):对照组、假手术组、脑缺血再灌注组、饱和氢盐水治疗组和生理盐水治疗组.于再灌注12,24 h行神经行为学评分,然后处死小鼠取海马...     

牙周基础治疗对伴2型糖尿病牙周炎患者肿瘤坏死因子-α的影响

目的通过检测牙周基础治疗前,后伴2型糖尿病牙周炎患者肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,来研究2型糖尿病患者与牙周炎症的相互关系。方法纳入我院牙周科中重度牙周炎70例。其中伴2型糖尿病牙周炎患者35例(伴糖尿病牙周炎组),无系统疾病者35例(单纯牙周炎组)。健康对照组35例。这其中伴糖尿病牙周炎组中HbA1c<7%为血糖控制较好组(A组),HbA1c>7%为血糖控制较差组(B组)。三组患者分别进行问卷调查,治疗前,及治疗后3个月分别记录全口探诊深度(PD),附着丧失(AL)出血指数(BI)和菌斑指数(PLI)及TNF-α检查。结果伴糖尿病牙周炎组及单纯牙周炎组PD、AL、BI、PLI与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中基线时伴糖尿病组中B组(血糖控制较差者)牙周炎症重于A组(血糖控制较好者)(P<0.05)治疗后两组差异无统计学意义(P>0.05)。基线时伴糖尿病牙周炎组和单纯牙周炎组的TNF-α浓度均显著高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05),伴糖尿病牙周炎组的TNF-α浓度高于单纯牙周炎组的TNF-α浓度,差异有统计学意义(P<0.05),伴糖尿病牙周炎组B组(血糖控制较差者)的TNF-α浓度高于A组(血糖控制较好者)差异有统计学意义(P<0.05)。牙周基础治疗前,基础治疗后3个月伴糖尿病牙周炎组B组(血糖控制较差者)TNF-α浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05),其余组治疗前后TNF-α浓度无明显改变(P>0.05)。结论牙周基础治疗可改善伴糖尿病牙周炎及单纯牙周炎患者的牙周状态,同时也可一定程度改善血糖控制较差的伴2型糖尿病牙周炎患者的TNF-α浓度