牵张应变诱导人牙周膜细胞凋亡信号通路初探

目的通过研究Caspase酶在牵张应变作用下的变化,来初步探讨其引起人牙周膜细胞(HPDLCs)凋亡的可能机制。方法体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置对HPDLCs加载1%、10%和20%的动态牵张应变6、12、24、48 h,利用酶标仪检测Caspase-3活性以及添加Caspase-8和Caspase-9阻断剂后Caspase-3活性。结果 Caspase-3活性具有一定的时间和应变值依赖性,各应变组细胞的Caspase-3活性在加载24 h时达到峰值,Caspase-9阻断剂可以显著降低Caspase-3的活性,而Caspase-8却并没有明显作用同时发现。结论 Caspase-9激活Caspase-3介导的凋亡通路参与了牵张应变诱导HPDLCs的凋亡。     

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。     

牵张应变作用下人牙周膜细胞形态及钙离子浓度变化的实验研究

目的：观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞（HPDLCs）形态及游离Ca2＋浓度的变化。方法：通过原代和传代培养获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载,并加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行Ca2＋浓度的检测。应用SPSS13.0软件对数据进行方差分析。结果：细胞内游离Ca2＋浓度随牵张应变时间的延长逐渐升高,至60min时达到该组的峰值（P〈0.01）;以后随加载时间的延长逐渐下降,120min时降至对照组水平（P〉0.05）。结论：牵张应变可以引起细胞形态的改变和细胞内游离Ca2＋浓度的变化。     

机械牵张应变对人牙周膜细胞内游离钙离子浓度的影响

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内游离Ca2 浓度的变化。方法:体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置,对1%、10%和20%应变组的细胞分别进行30、60和120min的动态牵张加载,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2 浓度的变化,并应用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:当HPDLCs加载30min时,各组检测到的胞内游离Ca2 浓度与对照组无显著差异(P>0.05);60min时,各个应变组的胞内Ca2 浓度明显升高,与对照组相比均有非常显著的差异(P<0.01);加载时间延长到120min时,各组Ca2 浓度又降至对照组水平(P>0.05)。结论:机械牵张应变可通过钙离子信号系统影响HPDLCs的生物学活性。     

Bcl-2和Bax在牵张应变诱导HPDLCs凋亡中的表达研究

目的：研究牵张应变诱导人牙周膜细胞（HPDLCs）凋亡过程中细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化情况。方法：体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置对HPDLCs加载20%动态牵张应变24h,通过real-time PCR检测Bcl-2和Bax在mRNA水平上的表达差异。结果：HPDLCs加载后,呈现栅栏状相互平行排列趋势,排列方向垂直于牵张力方向。Bcl-2和Bax基因表达显著增加,Bcl-2/Bax比值显著下降,有明显统计学意义（P〈0.05）。结论：牵张应变诱导人牙周膜细胞凋亡过程中,Bcl-2家族起到了重要作用。     

牵张应变对人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的影响

目的：观察在机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞（HPDLCs）内磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）水平的变化。方法：通过原代和传代培养,获得性状稳定的HPDLCs,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1％、10％和20％动态牵张应变加载。加载于不同的时间段,通过流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜对细胞进行PLC-γ1水平的检测。应用SPSS13．0软件对数据进行方差分析。结果：使用流式细胞仪对细胞内PLC-γ1水平检测发现：加载初期,细胞内的PLC-γ1水平维持在较低水平,随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内PLC-γ1水平逐渐升高。50min时PLC-γ1水平达到了各个应变组的最高值（P〈0．01）。随着加载时间的继续延长,60min时各应变组的PLC-γ1水平都有所下降（P〈0．01）。激光扫描共聚焦显微镜检测发现：对照组和动态加载组都有PLC-γ1的表达,但加载50min组表达相对较强。结论：机械牵张应变可以引起HPDLCs内PLC-γ1水平的变化。     

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平变化的实验研究

目的 观察人牙周膜细胞（HPDLCs）内磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）水平在机械牵张应变作用下的变化.方法 通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1％、10％和20％动态牵张应变加载.并于加载后10 min、20 min、30 min、40 min、50 min和60 min,通过流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内PLC-γ1水平的变化.应用SPSS13.0软件包对数据进行统计分析.结果 流式细胞仪检测发现：加载初期,细胞内的PLC-γ1水平维持在较低水平,随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内PLC-Y 1水平逐渐升高.50 min时PLC-Y 1水平达到了各个应变组的最高值（P＜0.01）,60 min时各应变组的PLC-γ1水平都有所下降（P.＜0.01）.激光扫描共聚焦显微镜检测发现：各组都有PLC-γ1的表达,其中50 min加载组表达相对较强.结论 机械牵张应变可以引起人牙周膜细胞内PLC-γ1表达量发生改变.     

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行PLC-γ1水平检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:在加载牵张应变初期,细胞内的PLC-γ1水平维持较低水平;随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内的PLC-γ1水平逐渐升高。50min时,PLC-γ1水平达到各应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60min时,各应变组的PLC-γ1水平都显著下降(P<0.01)。结论:牵张应变可引起细胞内PLC-γ1水平的变化。     

静态牵张应变对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的:探讨牵张应变对体外培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响。方法:牵张应变量设为0%、8%、13%、18%、23%共5组,每组分别加载1 h8、h、16 h、24 h后收集细胞,免疫组化检测细胞中COX-2的表达,灰度分析并进行统计学处理。结果:8%~18%牵张应变范围,细胞内COX-2表达随着加载时间和应变量的增高而增强,23%应变量作用下COX-2表达降低,且与加载时间无关联。结论:在细胞的生理应变范围(8%、13%、18%)内,静态牵张应变促进人牙周膜成纤维细胞COX-2的表达,当牵张应变量超过生理应变范围(23%),则COX-2的表达量降低。     

尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的实验研究

目的：了解在体外培养环境中,尼古丁对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响。方法：将尼古丁作用于培养至第6代的人牙周膜成纤维细胞后,通过四唑盐比色法、流式细胞仪研究尼古丁能否诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡。结果：四唑盐比色法证实当尼古丁浓度在0.05～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的抑制呈浓度依赖性,流式细胞仪分析提示,当尼古丁浓度在0.5～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的凋亡率呈浓度依赖性。结论：尼古丁对人牙周膜成纤维细胞有一定的毒性作用,通过抑制牙周膜成纤维细胞增殖和诱导凋亡加重对周膜的破坏。     

Cyclic stretching force-induced early apoptosis in human periodontal ligament cells

Objective:  Human periodontal ligament (PDL) cells occur changes in morphology and express relative protein by stretching force. However, whether stretching force, especially excessive stretching force, induces PDL cell apoptosis is not yet clearly understood. In the present study we investigated the relationship between early apoptosis and stretching force in human PDL cells in vitro.
Materials and methods:  The human PDL cells were obtained from healthy premolars. After three to five passages, the cells were stretched by strain 1%, 10% and 20% for 30 min, 1 h, 6 h and 12 h, then early apoptosis were detected through annexin fluorescein isothiocyanate (V-FITC) binding by flow cytometry and confocal laser scanning microscopy.
Results:  The experiments indicated that human PDL apoptotic cells in the early stage increased in a time- and force-dependent manner in response to stretching strain within 6 h, and then apoptosis decreased at 12 h. Human PDL cells which stretched inclined parallel to each other and aligned their long axis perpendicular to the stretching force vector, but in the centre of the disc, cells showed minimal deformation and unidirectional alignment of PDL cells.
Conclusion:  The overall results suggested that stretching force not only influenced morphology but also induced early apoptosis in human PDL cells.     

口腔扁平苔藓细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的变化

目的观察口腔扁平苔藓（oral lichen planus, OLP）病损区口腔黏膜超微结构的变化,以及Bcl-2 、Bax和凋亡细胞的表达水平,探讨细胞凋亡在OLP发生、发展中的作用。方法选取35例OLP患者和10例健康志愿者（对照组）。采用免疫组织化学法检测0LP患者和正常对照组口腔黏膜组织中Bcl-2 、Bax的表达,应用TUNEL法及流式细胞术检测上皮细胞的凋亡情况,应用透射电镜技术观察口腔黏膜超微结构的变化。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果免疫组织化学检测显示,Bcl-2在OLP中的阳性表达率与正常口腔黏膜相比无显著差异（P>0.05）,但在淋巴细胞浸润带处表达增强。Bax在OLP中的阳性表达率和表达强度与正常口腔黏膜相比显著增高（P<0.01）。OLP病变组织的上皮细胞凋亡指数显著高于对照组（P<0.01）,与流式细胞术测定结果一致（OLP组上皮细胞凋亡百分率显著高于对照组）。透射电镜观察发现,OLP组口腔黏膜凋亡细胞增多,染色质边聚,并见凋亡小体。结论凋亡细胞表达上调以及病损区超微结构改变,病损区淋巴细胞浸润带处Bcl-2 与上皮基底层角质形成细胞中Bax的表达增强,证实细胞凋亡异常与OLP 的发生、发展有密切关系。     

Cyclic stretching force induces apoptosis in human periodontal ligament cells via caspase-9

The response of periodontal ligament (PDL) cells to mechanical stimulation is important in the periodontal tissue remodelling. Our previous study showed that cyclic stretching force on PDL cells induced early apoptosis. However, the mechanism of stretching force-induced cell death is unclear. In the present study, we examined whether PDL cells undergo apoptosis by stretching force using the terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP-biotin nick-end-labellling method (TUNEL) and investigated the mechanism by which cyclic stretching force initiated apoptosis. We found that PDL cells became aligned regularly and the number of apoptotic cells increased significantly in a time-and force-dependent manner after the application of cyclic stretching force. Caspase-3 activity increased in proportion to the magnitude of the stretching force, and this effect was reduced significantly by a caspase-9 inhibitor, whereas a caspase-8 inhibitor had no such effect. We therefore concluded that the in vitro application of cyclic stretching force can induce apoptosis in PDL cells by activating the caspase-3 via the caspase-9 signalling cascade. Our findings may provide a novel insight into the mechanism of apoptosis induced by stretching force in PDL cells.     

LPS刺激单核巨噬细胞培养上清对成骨细胞OPG/RANKL的影响

目的观察经牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞MC3T3-E1 OPG/RANKL表达的影响。方法收集经100 ng/mL Pg-LPS刺激的单核巨噬细胞RAW264.7培养24 h后的上清,以不同稀释浓度（10%、20%、30%、40%和50%）的培养上清作用于MC3T3-E1 24h,分别通过RT-PCR、免疫印迹法(Western blotting)检测细胞OPG/RANKL基因和蛋白水平表达的变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果MC3T3-E1经不同稀释浓度的培养上清刺激后,其OPGmRNA及蛋白表达随浓度的增加而显著减少(P<0.05),而RANKLmRNA及蛋白表达随浓度的增加显著增加(P<0.05)。结论Pg-LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过抑制成骨细胞OPGmRNA及蛋白的表达,增加RANKLmRNA及蛋白的表达而抑制其成骨能力,且与浓度呈一定的正相关。     

粪肠球菌luxS基因缺陷菌株的构建

目的通过同源重组方法构建粪肠球菌密度感应调控基因luxS基因缺陷突变菌株。方法利用PCR扩增粪肠球菌luxS基因的上、下游片段（up、dn）和红霉素抗性基因片段（erm）,依次采用相应的双酶切反应,将这些片段连接入载体pUC18,以构建目的质粒Puemrd重组载体。采用同源重组方法,将红霉素耐药基因erm置换粪肠球菌基因组中的luxS基因,并在含抗性标记的选择性培养基中筛选出阳性克隆。结果经酶切鉴定,目的质粒各片段插入无误,插入片段的测序报告也显示碱基无错配,成功构建粪肠球菌luxS基因缺陷株。结论本研究成功构建的粪肠球菌luxS基因突变株,为进一步研究该基因在生物膜中的作用及其调控机制提供了技术平台。     

氧化锆角度基台及种植体周骨壁应力分布的有限元分析

目的研究氧化锆角度基台及种植体周骨壁应力的分布情况,为临床应用提供参考。方法采用三维有限元分析方法,对氧化锆直基台、15°、20°基台修复时的种植体基台、固定螺丝及种植体周骨壁应力的分布进行分析,并与常规钛基台进行比较。结果角度基台模型的基台、螺丝、种植体周骨壁的等效应力大于直基台;20°基台模型的基台、螺丝、种植体周骨壁等效应力远远大于15°基台模型;氧化锆基台模型与钛基台模型相比,2组无显著差异。结论基台角度对应力分布有影响,并随角度的增大而增大,提示临床上应注意种植体植入方向,尽量使用直基台或小角度基台,以减少种植体颈部骨吸收及修复并发症的发生;基台材料改变对基台、螺丝、种植体周骨壁的应力分布无显著影响,从生物力学考虑,临床上可以放心选用氧化锆角度基台。     

南通市545名公务员血糖水平与牙周炎的相关性分析

目的对南通市545名公务员的血糖水平及牙周状况进行调查,以探讨两者的相关性。方法随机抽取2013年01月—2014年01月来院体检的南通市公务员545名,将研究对象以60岁为界分为中青年组与老年组。使用全自动生化仪测量受检者的空腹血糖水平并用Florida探针检查其牙周指数。采用SPSS16.0软件包对数据进行χ²检验及Logistic 多因素回归分析。结果血糖水平与牙周炎具有相关性。在整个人群的多因素回归分析中,吸烟、年龄、血糖和学历与牙周炎显著相关（P<0.05）。中青年组受检者的吸烟和受教育程度低与牙周炎显著相关。在老年组,血糖水平超过7.0mmol/L和吸烟是牙周炎的危险因素。结论血糖偏高为该人群牙周炎患病的危险因素,对牙周炎患病的影响主要在60 岁以上。     

新疆汉族与维吾尔族成人颜面比例分析

]目的：获得新疆地区汉族和维吾尔族正常成人颜面比例特征及不同民族之间的差异。方法从乌鲁木齐市在校大学生中,按一定标准随机选取一定数量的汉族和维吾尔族正常成人（男女分开）为研究对象,按照同一标准分别对每位受试者拍摄正面像;将资料导入计算机,选择20个软组织标志点,利用Photoshop软件对正面像进行15个项目的定点测量,建立19项颜面比值,利用SPSS19.0软件包对比值结果进行独立样本t检验。结果与女性相比,男性面部偏短宽,鼻翼宽度较大。不论男女,汉族人眼裂宽度、口裂宽度较小,而内眦及鼻翼宽度较大。结论新疆地区汉族与维吾尔族男女颜面比例存在一定差异。     

术前口腔宣教对急性牙髓炎患者焦虑心理的影响

目的探讨术前口腔宣教对急性牙髓炎患者焦虑心理的影响。方法选择2011年7月—2013年6月间因急性牙髓炎就诊的154例患者,年龄19~64岁。将其随机分为试验组（78例）和对照组（76例）。试验组在治疗开始前接受口腔宣教,对照组接受常规治疗;在正式治疗开始前,对2组患者分别进行2次口腔焦虑评估问卷调查,采用SPSS12.0软件包,应用t检验和χ²检验对结果进行分析。结果试验组宣教后牙科焦虑（dental anxiety）分显著低于宣教前（t=4.1346,P<0.01）。试验组宣教后DA分显著低于对照组（t=6.2784,P<0.01）。试验组对首次治疗的可接受度高于对照组患者,完成后续治疗情况也显著好于对照组。结论对急性牙髓炎患者在开始治疗前进行相关疾病的口腔宣教,能够使患者增加对疾病的了解,在一定程度上减轻患者治疗过程中的压力和紧张、焦虑情绪,从而顺利完成首次治疗和后续治疗。