VES诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡及其与Fas及TGF-β1表达的相关性分析

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,以及Fas和TGF-β1表达的变化。方法：MTT法和Annexin V法分别用于检测不同浓度VES处理人乳腺癌MDA-MB-453细胞后生长情况和细胞凋亡情况,流式细胞术检测凋亡率;免疫组化比较凋亡前后Fas及TGF-β1表达变化。结果：不同浓度VES处理的细胞在不同时间均受到不同程度的抑制,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20 mg/LVES处理组在24 h后受到明显抑制,第4天抑制率即接近100%;10 mg/L VES处理组7 d后细胞生长被抑制89.87%。经VES处理后,Fas及TGF-β1表达率差异有统计学意义,P〈0.001。结论：VES可诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,其机制可能与Fas和TGF-β1上调有关。     

VES诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡及其与Fas及TGF-β 1表达的相关性分析

目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,以及Fas和TGF-β1表达的变化.方法:MTT法和Anhexin V法分别用于检测不同浓度VES处理人乳腺癌MDA-MB-453细胞后生长情况和细胞凋亡情况,流式细胞术检测凋亡率;免疫组化比较凋亡前后Fas及TGF-β1表达变化.结果:不同浓度VES处理的细胞在不同时阃均受到不同程度的抑制,随VES剂量的增加,抑制作用增强.其中20 mg/LVES处理组在24 h后受到明显抑制,第4天抑制率即接近100%;10 mg/L VES处理组7 d后细胞生长被抑制89.87%.经VES处理后,Fas及TGF-β1表达率差异有统计学意义,P<0.001.结论:VES可诱导 HER-2 高表这乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,其机制可能与Fas和TGF-β1上调有关.     

维生素E琥珀酸酯诱导MDA-MB-435乳腺癌细胞的凋亡

目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)对MDAMB435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDAMB435(雌激素受体阴性)12、24和48h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数变化,Westernblot法检测VES作用后Fas蛋白水平变化。结果:VES对MDAMB435乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用并表现为时间和剂量依赖关系。流式细胞仪分析细胞凋亡,MDAMB435细胞的自然凋亡率为1.5%,5、10和20μg/mLVES分别作用48h后凋亡率升高至13.1%、20.2%和46.5%。TUNEL法检测VES作用后乳腺癌细胞凋亡指数由1.1±0.4升高至10.8±1.0、30.4±2.7和51.4±4.7,细胞Fas蛋白水平分别升高1.3、1.9和4.3倍,细胞表面Fas平均荧光强度由46.29升高至59.66、84.54和103.41。结论:VES对MDAMB435乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞的凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关。     

维生素E琥珀酸酯联合他莫昔芬抑制乳腺癌细胞增殖

目的:检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合他莫昔芬(tamoxifen)对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并分析调控Fas/FasL系统表达在抑制乳腺癌细胞增殖中的作用。方法:人乳腺癌细胞MCF-7(ER阳性)和MDA-MB-435(ER阴性)以VES联合他莫昔芬作用24和48 h,VES浓度为10和20μg/mL,他莫昔芬的浓度分别为1、5和10μmol/L。以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas/FasL表达的变化。结果:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用。药物联合作用后,乳腺癌细胞表现为明显的G0/G1期阻滞,MCF-7和MDA-MB-435细胞的凋亡率分别由(3.30±0.2)%和(4.88±0.9)%升高至(25.61±2.7)%和(23.33±1.1)%,流式细胞仪提示,MCF-7和MDA-MB-435细胞表面的Fas分别由50.07和46.29升高至116.72和136.68;FasL分别由51.85和57.43升高至146.82和127.90。结论:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用,其机制可能与细胞表面Fas和FasL表达上调有关。     

TAM和MA序贯或联合对乳腺癌Bcap—37细胞生长抑制作用的研究

目的：通过体外MA和TAM单药、不同序贯以及联合对乳腺癌Bcap-37细胞生长抑制作用研究，以指导临床选择合理的TAM／MA治疗方案。方法：模仿临床而设计了3个TAM／MA联合及两者单药的治疗方案，观察其体外对乳腺癌Bcap-37细胞的生长抑制作用，以MTT法测定其细胞存活率。结果：在低浓度时TAM和MA体外对Bcap-37细胞细胞的生长抑制作用相近，而2．5mg/L浓度以后TAM的生长抑制作用显著高于MA（P＜0．05）。TAM→MA序贯各浓度的肿瘤细胞生长抑制作用较MA→TAM序贯和TAM＋MA联合为强（P＜0．05）。TAM＋MA和MA→TAM相比，在低浓度（0．25mg/L-2.5mg/L)时两者肿瘤生长抑制作用相近，当MA浓度为5.0mg/L和7.5mg/L时，联合用药药组生长抑制作用更强（分别为P＝0．05和P＜0．05）。结论：在TAM与MA不同联合治疗方案中以TAM→MA序贯或联合治疗方案为合理。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡的研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas、Bcl-2和p53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖，P=0．004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示，G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高，P=0．005；Fas蛋白表达明显上调，P=0．002；Bcl-2蛋白表达下调，P=0．00～0；p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562/ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

维生素E琥珀酸酯联合紫杉醇对Her-2过表达乳腺癌细胞的诱导凋亡研究

背景与目的:维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)是天然维生素E的酯化衍生物,研究已证实其可诱导乳腺癌、前列腺癌、舌癌及肾癌等恶性肿瘤凋亡,却对正常细胞组织没有毒性作用.本实验以VES、紫杉醇单独及联合作用于Her-2过表达乳腺癌细胞,检测各组药物对乳腺癌细胞的诱导凋亡率.方法:免疫细胞化学法检测MDA-MB-453细胞Her-2蛋白表达水平.以VES、紫杉醇单独作用于MDA-MB-453细胞24、48 h,用TUNEL法检测细胞凋亡率,以浓度为10、20 mg/L的VES与浓度为50和100 nmol/L的紫杉醇组合,作用于MDA-MB-453细胞24、48 h,用TUNEL法检测不同组合的细胞凋亡率,比较各种组合对Her-2过表达乳腺癌细胞的诱导凋亡作用.结果:MDA-MB-453细胞Her-2表达率95%CI:63.32%～69.60%;YES与紫杉醇对MDA-MB-453细胞均有诱导凋亡作用,并成剂量和时间依赖关系,其中10mg/L VES联合100 nmol/L紫杉醇作用于MDA-MB-453细胞48 h对其的诱导凋亡作用最强.结论:VES和紫杉醇对MDA-MB-453细胞均有诱导凋亡作用,两药联合时诱导凋亡作用增强.     

多柔比星诱导肺腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的:探讨多柔比星(ADM)诱导肺腺癌细胞系A549细胞凋亡机制.方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测ADM对A549细胞增殖抑制作用,透射电镜观察细胞形态学改变;细胞电泳仪测定A549细胞表面电荷的变化;流式细胞仪(FCM)测定A549细胞Fas、Bcl-2蛋白水平变化;比色法检测Caspase-3活性的变化.结果:ADM可抑制细胞增殖,作用24、48及72 h的IC<,50>值分别为5.2、4.8和4.2 mg/L,电镜下见到明显的凋亡细胞;细胞表面电位在4 h开始下降,4～24 h期间下降最明显,>24 h下降趋势降低;Fas蛋白表达明显上调,Bcl-2蛋白表达下降,Caspase-3活性明显增强.结论:ADM能抑制并诱导A549细胞凋亡,细胞表面电荷下降可能是ADM诱导细胞凋亡的早期事件,其作用可能与上调Fas蛋白、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

维生素E琥珀酸酯诱导乳腺癌细胞凋亡机制的研究进展

维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)是天然维生素E衍生物,具有抑制不同肿瘤细胞生长、增殖和选择性诱导肿瘤细胞凋亡的作用。VES能够有效的抑制乳腺癌细胞增殖作用,其作用机制主要与Fas蛋白及TGF-β1蛋白水平上调有关。VES联合化疗药物后能够使乳腺癌细胞表面的Fas表达上调,显著的抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。VES与他莫西酚（Tamoxifen,TAM）具有协同作用,联合用药后对乳腺癌细胞的凋亡诱导作用增强。因此,这些机制的研究发现可以评价VES的临床应用价值,对肿瘤学的发展及抗肿瘤药物的开发起着重要作用。     

苦参碱促进三苯氧胺诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的机制研究

[目的]研究三苯氧胺(TAM)联合低剂量苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制及作用机制.[方法]用MTT法检测各组细胞的抑制率,克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测p53、Bax、Bcl-2蛋白表达.[结果]TAM对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,与低剂量苦参碱联合,其抑制作用明显增强.药物作用24、48、72h后,与对照组相比,TAM组的凋亡率均明显增高(P＜0.01);与TAM组相比,联合组的凋亡率均明显增高(P＜0.01).Western blot检测发现,与对照组相比,TAM组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低;与TAM组相比,联合组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低.[结论]低剂量苦参碱能促进TAM对Bcap-37细胞增殖抑制作用,其作用机制与增加p53、Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关.     

光学分子探针FITC-CSPLNTRFC对乳腺癌细胞Bcap-37的特异性和靶向性

目的 研究光学分子探针FITC-BCSP1对乳腺癌细胞Bcap-37的特异性和靶向性.方法 固相合成法制备探针FITC-BCSP1和阴性对照探针FITC-svBCSP1.MTT法检测两种探针对乳腺癌Bcap-37细胞的毒性.流式细胞术和荧光倒置显微镜鉴定FITC-BCSP1与Bcap-37细胞结合的特异性.光学分子成像...     

酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

目的： 探讨酸性神经磷脂酶 (acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法：常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明 (desipramine,DES)处理组 (12.5 μmol/L DES作用2 h),对照组 (含2％胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组 (用12.5 μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20 μg/mL VES)以及VES处理组 (20 μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果：VES (20 μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制 (P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组 (P均<0.05);细胞形态学显示20 μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为 39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%) (P均<0.05),VES+DES组 (19.47%±4.46%)较VES组明显降低 (P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低 (P均<0.05)。结论：ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡的研究

目的:研究维生素E 琥珀酸酯(vitamin E succinate , VES)对多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法: 以体外培养的K562/ADM细胞为研究对象,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测细胞增殖活性, Wright Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞Fas、Bcl-2 和p53 蛋白表达水平。结果:VES可显著抑制K562/ADM细胞的生长及增殖,P= 0 .004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示,G1 期阻滞,亚G1 期细胞比例增高,P=0 .005;Fas蛋白表达明显上调,P=0. 002;Bcl -2蛋白表达下调,P=0. 000;p53蛋白表达无明显变化。结论:VES可诱导K562/ADM细胞凋亡,作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl 2表达有关。     

Vitamin E succinate (VES) induces Fas sensitivity in human breast cancer cells: role for Mr 43,000 Fas in VES-triggered apoptosis

Fas (CD95/APO-1) is an important mediator of apoptosis. We show that Fas-resistant MCF-7, MDA-MB-231, and MDA-MB-435 human breast cancer cells become responsive to anti-Fas (CD95) agonistic antibody-triggered apoptosis after pretreatment or cotreatment with vitamin E succinate (VES; RRR-alpha-tocopheryl succinate). In contrast, no enhancement of anti-Fas agonistic antibody-triggered apoptosis was observed following VES pretreatment or cotreatment with Fas-sensitive primary cultures of human mammary epithelial cells, immortalized MCF-10A cells, or T47D human breast cancer cells. Although VES is itself a potent apoptotic triggering agent, the 6-h pretreatment procedure for Fas sensitization did not initiate VES-mediated apoptosis. The combination of VES plus anti-Fas in pretreatment protocols was synergistic, inducing 2.8-, 3.0-, and 6.3-fold enhanced apoptosis in Fas-resistant MCF-7, MDA-MB-231, and MDA-MB-435 cells, respectively. Likewise, cotreatment of Fas-resistant MCF-7, MDA-MB-231, and MDA-MB-435 cells with VES plus anti-Fas enhanced apoptosis 1.9-, 2.0-, and 2.6-fold, respectively. Functional knockout of Fas-mediated signaling with either Fas-neutralizing antibody (MCF-7-, MDA-MB-231-, and MDA-MB-435-treated cells) or Fas antisense oligomers (MDA-MB-435-treated cells only), reduced VES-triggered apoptosis by approximately 50%. Analyses of whole cell extracts from Fas-sensitive cells revealed high constitutive expression of Mr 43,000 Fas, whereas Fas-resistant cells expressed low levels that were confined to the cytosolic fraction. VES treatment of the Fas-resistant cells caused a depletion of cytosolic Mr 43,000 Fas with a concomitant increase in Mr 43,000 membrane Fas. These data show that VES can convert Fas-resistant human breast cancer cells to a Fas-sensitive phenotype, perhaps by translocation of cytosolic Mr 43,000 Fas to the membrane and show that VES-mediated apoptosis involves Mr 43,000 Fas signaling.     

丹皮酚对乳腺癌细胞的生长抑制作用

[目的]研究丹皮酚（Pae）对人乳腺癌细胞的作用及机制。[方法]采用MTT法检测Pae对乳腺癌Bcap37、MDA-MB．453细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测Pae对Bcap37和MDA-MB-453细胞凋亡和周期分布的影响,WesternBlot检测相关蛋白表达。[结果]Pae对乳腺癌Bcap37及MDA-MB-453细胞均具有增殖抑制作用,并呈时间和剂量依赖性;流式细胞仪分析细胞凋亡率呈浓度依赖性,细胞周期分析显示Pae阻滞Bcap37及MDA-MB-453细胞在G1期;WestemBlot检测凋亡相关蛋白Caspase7、Caspase3和PARP表达减少,而P-FEN蛋白表达增加。[结论]Pae对乳腺癌细胞系具有增殖抑制作用,其机制可能与促进细胞凋亡及引起细胞周期阻滞。PrEN表达上调有关。     

阿霉素通过Stat3-cMyc途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性

目的 观察阿霉素(Adriamycin,ADM)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性的诱导作用并探讨其机制。方法 培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞,用不同浓度阿霉素处理细胞24 h后,MTT法检测细胞生长抑制率及细胞对阿霉素的敏感度。免疫荧光染色法检测耐药蛋白ABCG2的表达;免疫印迹法检测Stat3、p-Stat3、转录因子cMyc及耐药蛋白ABCG2的表达水平。结果 阿霉素持续刺激4周后,获得的MDA-MB-468/ADM细胞对阿霉素的敏感度明显降低,且耐药蛋白ABCG2的表达明显增加;MDA-MB-468/ADM细胞p-Stat3、cMyc及ABCG2的表达量显著增加;MDAMB-468/ADM细胞培养液中加入WP1066后Stat3磷酸化明显抑制,cMyc及ABCG2的表达水平下调,并且MDA-MB-468/ADM细胞对阿霉素的敏感度明显增强（P<0.05）。结论 阿霉素可以通过Stat3-cMyc途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞产生耐药性。     

VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞的抑制作用及机制

目的：研究VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞的增殖、凋亡的影响、通过检测Her-2、p53探讨VES抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法：应用MTT法检测VES对MDA-MB-453细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测Her-2基因mRNA和Her-2、p53蛋白表达水平。结果：VES能抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20μg/ml VES处理组在48h后受到明显抑制,抑制率达52.25%;经VES处理后细胞出现凋亡,5μg/ml处理48h后,凋亡率为39.52%;药物干预组使肿瘤细胞大量阻滞于G1期（P〈0.01）;RT-PCR和免疫细胞化学法结果表明,VES能抑制Her-2基因mRNA的转录水平,从而抑制其蛋白的表达,也能降低p53蛋白的表达。结论：VES可诱导Her-2、p53共表达乳腺癌MDA-MB-53细胞凋亡,抑制增殖。其机制可能是通过抑制Her-2基因mRNA及蛋白的表达和通过抑制突变型p53蛋白的表达使细胞停滞于G1有关。     

树突细胞对肿瘤浸润淋巴细胞抗乳腺癌免疫活性影响的研究

背景与目的:树突细胞(dendriticcell,DC)又称树突状细胞,是目前已知的功能最强的抗原呈递细胞,它可以在体内、外向T淋巴细胞呈递抗原,并诱发细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)反应。本研究旨在探讨DC激活的肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocytes,TIL)体外对乳腺癌细胞的杀伤活性。方法:从乳腺癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte/macrophagecolonystimulatingfactor,GM-CSF)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对自体乳腺癌细胞和Bcap-37乳腺癌细胞的杀伤活性。结果:DC激活的TIL对自体乳腺癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率为(85.76±2.93)%,明显高于未经DC激活的TIL、DC激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体乳腺癌细胞的杀伤率犤分别为(52.11±1.48)%、(51.35±1.46)%和(3.59±0.25)%犦。而它们对Bcap-37乳腺癌细胞的杀伤活性则相对较低犤分别为(40.03±1.29)%、(22.09±0.87)%、(21.66±0.85)%和(1.76±0.14)%犦。结论:乳腺癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗乳腺癌免疫活性。