蛇毒丝氨蛋白酶多样性：底物专一性免疫化学及序列比较研究

本文报道烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶,眼镜王蛇蛇毒纤维蛋白原溶酶,竹叶青蛇毒专一纤溶酶原激活剂对５种小分子多肽底物的底物专一性,及这些蛇毒丝氨酸蛋白酶对各种凝血因子（第Ｘ因子、凝血酶原、纤溶酶原、蛋白Ｃ）的作用,并和其它蛇毒丝氨酸蛋白酶如矛头蝮蛇毒凝血酶样酶、铜头蝮蛇毒蛋白Ｃ激活剂ＡＣＣ－Ｃ、蝰蛇毒第Ｖ因子激活剂ＲＶＶ－Ｖ进行比较研究。通过酶标偶联免疫反应研究了抗ｓｖ－ＰＡ抗体与各种丝氨酸蛋白酶的免疫     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究

从赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆａｅｔｉｄａ）中纯化出的一种纤溶酶原激活剂（ｅ－ＰＡ）在纤维蛋白平板上可表现出三种活性,分别记为：ＣＦＰｇ,ｕＣＦＰｇ和ｕＣＦ．为更好了解各种活性与ｅ－ＰＡ的纤溶能力的关系,考察了在ＳＤＳ和不同抑制剂存在下各种活性的变化．结果表明,ＳＤＳ可以增强ＣＦＰｇ活性且使得ｅ－ＰＡ变得对一些抑制剂更敏感;ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ,ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ,ｐｅｐｓｔａｔｉｎ,ａｐｒｏ－ｔｉｎｉｎ,ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＰＭＳＦ）和ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ（ＤＴＴ）对ｕＣＦ没有影响;ｐｅｐ－ｓｔａｔｉｎ能增强ＣＦＰｇ和ｕＣＦＰｇ活性,Ｅ－６４（一种巯基抑制剂）能增强ｕＣＦＰｇ和ｕＣＦ活性．这些现象说明不能简单将ｅ－ＰＡ归结为丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶．此外又以纤溶酶原为底物,分析了ｅ－ＰＡ在体外降解天然蛋白质的肽键特异性,结果表明：ｅ－ＰＡ可以切割碱性氨基酸,小的中性氨基酸及Ｍｅｔ的羧基端,同时ｅ－ＰＡ确能将纤溶酶原切割为纤溶酶;这一结论为ｅ－ＰＡ有可能成为新型溶栓药物提供了生化基础．     

华广虻(Tabanusamaenus Walker)溶纤活性蛋白的纯化及生物活性分析

经过 ７５％ 饱和度硫酸铵沉淀、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 凝胶过滤层析、 Ｌｙｓ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ 亲和层析和电泳制备洗脱,从华广虻（ Ｔａｂａｎｕｓ ａｍ ａｅｎｕｓ Ｗ ａｌｋｅｒ）腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 ６７ｋ Ｄ 的溶纤活性蛋白 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ经纤维蛋白平板测定表明, Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 只具有纤溶酶作用,不具有激活纤溶酶原的作用;但 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—— Ｃｈｒｏｍ ｏｚｙｍ Ｕ Ｋ 及 Ｓ ２２８８还能水解胰蛋白酶专一底物 Ｂｚ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｎ Ａ 及 Ｃ Ｂ Ｚ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｎ Ａ,表明 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ具有类胰蛋白酶活性,专一水解精氨酸形成的酰胺键（或肽键） Ｔ Ａ Ｆ Ｐ无胰凝乳蛋白酶活性      

精制溶栓酶对家兔血浆t－PA和PAI的影响

精制溶栓酶对家兔血浆ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ的影响雷丹青广西医科大学蛇毒研究所南宁５３００２１纤溶系统是机体阻止血栓形成的屏障,ｔ－ＰＡ（纤溶酶原激活剂）是纤溶系统的关键物质,ｔ－ＰＡ对纤维蛋白原有极高的亲和力,它能选择性的激活血凝块中的纤溶酶原生成纤溶酶,...     

杭州虻纤溶酶的纯化及其生物活性分析

经过７５％硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤层析、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析、Ｂ ｅｎｚａｍｉｄｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,从杭州虻（Ｔａｂａｎｕｓ ｈｏｎｇｃｈｏｗｅｎｓｉｓ）腹部匀浆液中分离纯化出分子量约为３６．５ｋＤ的纤溶酶ＴＨＦＥ。经纤维蛋白平板测定表明,ＴＨＦＥ既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用。ＴＨＦＥ能分解纤溶酶原激活剂的生色底既具有纤     

2—型纤深酶原激活抑制剂研究进展

２－型纤溶酶原激活抑制剂（ＰＡＩ－２）是尿激酶型纤溶酶原激活剂的高效专一抑制剂。ＰＡＩ－２具有较高的稳定性,可以发生自我聚合。ＰＡＩ－２可与细胞内的细胞型纤溶酶原激活剂、纤连蛋白、谷氨酶胺转移酶等多种分子发生反应。ＰＡＩ－２与尿激酶型纤深酶原激活剂的反应遵循丝氨酸蛋白酶抑制剂的作用机制,其自我聚合的发生可能遵循环－片层机制。ＰＡＩ－２在肿瘤的侵润和扩散、皮肤组织受伤和治疗、炎症以及多种疾病的发生过     

蛇毒降纤酶的主要药理作用

蛇毒中 “凝血酶样酶”（ Ｔｈｒｏｍ ｂｉｎｌｉｋｅ Ｅｎｚｙｍ ｅ, Ｔ Ｌ Ｅ） 由中国卫生部定名为降纤酶 （ Ｄｅｆｉｂｒａｓｅ, Ｄｆ）。类同生理凝血酶 （ Ｔｈｒｏｍ ｂｉｎ, Ｔｂ） 能降解血浆纤维蛋白原 （ Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ, Ｆｇ）, 但只解离 Ｆｇ 结构的肽链 Ａ, 而不象生理凝血酶能同时解离肽链 Ａ 和肽链 Ｂ; 经 Ｄｆ降解的 “脱肽链 Ａ 纤维蛋白”是可溶性单体, 不接受血中稳定因子 （第十三因子, ⅩⅢ Ｆ） 的催化交联, 易被血中溶纤酶 （ Ｐｌａｓｍ ｉｎ, Ｐ１） 迅速消溶并被吞噬细胞所消除, 不产生 Ｄ Ｉ Ｃ现象; 蛇毒 Ｄｆ的直接效果是降低血浆纤维蛋白原在血中的含量, 从而降低血液粘度, 得以疏畅血流, 用于防治血液高粘滞伴发的血管闭塞性疾病; 蛇毒 Ｄｆ能激发组织溶纤酶原激活物 （ｔ Ｐ Ａ） 的释放, 促使溶纤酶原转变为有活性的溶纤酶, 能使纤维蛋白降解产物 （ Ｆ Ｄ Ｐ） 得以消除, 使血栓崩解。蛇毒 Ｄｆ能阻抑血小板的聚集从而延缓血栓的形成。     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解

以苯甲酰－Ｌ－精氨酸乙酯（ｂｅｎｚｏｙｌ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ,ＢＡＥＥ）为底物,研究了蚯蚓体内纤溶酶原激活剂（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｆｒｏｍＥｉｓｅｎｉａｆｅｔｉｄａ,ｅ－ＰＡ）的酶学性质．酶促反应的最适ｐＨ为８．４,ｅ－ＰＡ降解ＢＡＥＥ的Ｋｍ为１．２４±０．１６×１０－５ｍｏｌ／Ｌ,Ｋｃａｔ为１３．８０±４．０２ｓ－１．测定了构成ｅ－ＰＡ的大,小亚基分别降解ＢＡＥＥ的Ｋｍ和Ｋｃａｔ．结果表明,大亚基的Ｋｍ与全酶的Ｋｍ相差不多,但比小亚基小约１０倍,即对底物的亲和力比小亚基强约一个数量级．大小亚基的Ｋｃａｔ比较接近,分别是全酶的１／６和１／３．研究了８种抑制剂对ｅ－ＰＡ降解ＢＡＥＥ活性的影响,其中ｐｅｐｓｔａｔｉｎ和Ｅ－６４（一种巯基抑制剂）对酶促反应有激活作用,ＴＰＣＫ,ＴＬ－ＣＫ,ＰＭＳＦ,ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ和ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ对其有不同程度的抑制作用,ＥＤＴＡ对ｅ－ＰＡ的活性没有影响．对ｅ－ＰＡ的ＢＡＥＥ活性和ｅ－ＰＡ的纤溶活性之间作了比较．     

组织纤溶酶活剂突变体在转基因小鼠乳腺中的表达

组织纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ）是一种较理想的溶血栓药物,本研究采用其突变体－长效组织纤溶酶原激活剂（ＬＡｔＰＡ）的ｃＤＮＡ作为目的基因,将它插入羊β－乳球蛋白（ＢＬＧ）基因起始密码之前,使ＬＡｔＰＡ的转录、翻译受控于ＢＬＧ基因的５＇、３＇序列,再将所构建的ＢＬＧ－ＬＡｔＰＡ用显微注射方法建立转基因鼠,经点杂交筛选和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹鉴定,获得２只ＬＡｔＰＡ基因整合阳性鼠,并在阳性母鼠乳汁中检测到有     

凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究

用Ｋｕｎｋｅｌ突变法,将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｃｕ－ＰＡ）ｃＤＮＡ基因中编码Ｐｒｏ１５５—Ｌｙｓ１５８的片段定点突变,并将此突变的ｓｃｕ－ＰＡ（ｔｓｃｕ－ＰＡ）的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｎｅｏ中,与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞．获得的稳定表达株在无血清培养基中２４ｈ的表达量为６２０ＩＵ／１０６细胞．经锌离子螯合Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析得到ｔｓｃｕ－ＰＡ纯品．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ｔｓｃｕ－ＰＡ分子量为５３ｋＤ左右,与预期的结果相符．ｔｓｃｕ－ＰＡ是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活,但激活后也能转变为双链分子（ｔｃｕ－ＰＡ）．ｔｓｃｕ－ＰＡ仍保持了ｓｃｕ－ＰＡ的血纤维蛋白亲和性．酶动力学研究表明,激活后的ｔｓｃｕ－ＰＡ水解Ｓ２４４４的Ｋｍ和Ｋｃａｔ值与高分子量尿激酶（ＨＵＫ）相似．体外溶栓实验结果表明,ｔｓｃｕ－ＰＡ可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块,对贫凝血酶的血凝块作用不大     

菜花原矛头蝮的分布及其在山西繁殖生态的观察

菜花原矛头蝮(Ｐｒｏｔｏｂｏｔｈｒｏｐｓｊｅｒｄｏｎｉｉ[Ｇ櫣ｎｔｈｅｒ,1875])是我国主要毒蛇之一,隶蝰科(Ｖｉｐｅｒｉｄａｅ),蝮亚科(Ｃｒｏｔａｌｉｎａｅ),原矛头蝮属。它是山西省三种毒蛇之一,有一定危害,也具有一定的经济价值。现对其分布和繁殖生态报道如下。ＡｌｂｅｒｔＧ櫣ｎｔｈｅｒ(1875)依据印度东北部Ａｓｓａｍ邦Ｋｈａｓｓｙａ(=ＫｈａｓｉＨｉｌｌｓ)标本描述Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｊｅｒｄｏｎｉｉ,我国称菜花烙铁头蛇。稍后(1889),同一作者又依据我国湖北宜昌标本描述Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｘａｎｔｈｏｍｅ…     

蛇毒纤溶酶的性质及应用研究

蛇毒中含有许多不同生物活性的酶类,包括金属蛋白酶、凝血酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、磷酸二酯酶、透明质酸酶、精氨酸酯酶等。其中,在蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白（原）的酶,称为纤维蛋白（原）溶酶（简称纤溶酶,Fibrinolytic enzyme,FLE）。纤维蛋白原是由Aα、Bβ、γ三对肽链组成。纤维蛋白则是A、B两对肽链从Aα、Bβ两对肽链上水解下来后,剩下的（αβγ）2通过氢键聚合形成的不溶性纤维蛋白多聚体。纤溶酶对两者都有水解作用。自1976年Ouyang和Huang首次从尖吻蝮蛇毒中获得纯化的纤溶酶以来,迄今已从不同科属的至少15种蛇毒中获得了25种以上的纯化纤溶酶,并对其分子结构、酶学特性及出血活性的关系进行了深入的研究。纤溶酶是一种具有溶栓、抗栓等作用的药物,已成为蛇毒蛋白领域的一个研究热点。     

免疫亲和层析法纯化单链尿激酶型纤溶酶原激活剂

尿激酶原 (Ｐｒｏ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ,ｐｒｏ ＵＫ) ,也称单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (Ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｓｃｕ ＰＡ) ,与ｔ ＰＡ一样是第二代溶栓药物。给药时 ,保持无活性的酶原状态 ,只激活被纤维蛋白吸附的纤溶酶原 ,而对游离的纤溶酶原没有作用 ,即只在血栓表面才能活化转变为双链尿激酶 (Ｔｗｏ ｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔｃｕ ＰＡ或ＵＫ) ,因而具有较高的特异性溶血栓作用[1 ] 。尿激酶原…     

竹叶青Trimeresurus stejeegeri蛇毒凝血酶样酶的酶学性质研究

本文报道从竹叶青蛇毒中纯化的两个凝血酶样酶（组分Ⅰ和组分Ⅱ）的酶学性质研究。结果表明二者在体外都能使人纤维蛋白原转变为纤维蛋白,具有精氨酸酯酶活性,都能水解凝血酶专一性底物。纤维蛋白平板法证明组分Ⅰ具有激法纤溶作用;组分Ⅱ同时具有激活纤溶和直接纤溶作用;组分Ⅰ和组分Ⅱ能缓慢降解纤维蛋白原的α链,随着作用时间延长,组分Ⅰ还能进一步部分降解纤维蛋白原的β链,活性中心探讨表明,组分Ⅰ的活性中心由丝氨酸蛋白酶部位和糖基部位组成。组分Ⅰ水解BAEE的最适温度为50 ℃,最适pH为8.6。     

纳豆激酶

纳豆激酶 (ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ)是一种枯草杆菌蛋白激酶 ,是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ/ｎａｔｔｏ)产生的一种丝氨酸蛋白酶。 1 987年由日本的须见洋行等首先发现[1～ 3] 。研究发现 ,纳豆激酶具有纤溶活性 ,可治疗和预防血栓病 ,它还可激活体内的纤溶酶原 ,从而增加内源性纤溶酶的量与作用[4] 。目前常用的及一些还在开发的治疗心脑血管栓塞疾病的药品 ,如链激酶 (ｓｔｒｅｐ ｔｏｋｉｎａｓｅ ,ＳＫ)、尿激酶 (ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ,ＵＫ)、重组组织型纤溶酶原激活剂 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ…     

PAI—2及其突变体的生物化学性质

为研究和比较纤深酶原激活剂抑制物２型（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｙｐｅ ２,ＰＡＩ－２）及其突变体的生物化学性质,用ＰＣＲ、体外定点突变技术构建ＰＡＩ－２突变体ＰＡＩ－２ＣＤ和ＰＡＩ－２ＱｃＤＮＡ,将突变体ｃＤＮＡ与原核表达载体重组并转化怕杆菌。经诱导表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实表达出相应蛋白质,均占全菌总蛋白的１４％。Ｗｅｔｅｒｎ印迹、溶圈抑制及纤维蛋白翻转板     

SDS-PAGE纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

体内存在两种纤溶酶原激活剂(plasminogen activator, PA):血液中生理性的组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及尿中的尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)。它们通过将纤溶酶原转变成有活性的纤溶酶而启动纤溶过程使血栓溶解。目前模拟体内纤溶过程以纤维蛋白为底物的PA物质活性测定方法有纤维蛋白溶圈法和发光分析法,但这两种方法不能     

Batroxobin治疗脑血栓急性期15例疗效观察（摘要）

Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ治疗脑血栓急性期１５例疗效观察（摘要）李永昌，余海，秦淑梅，冯大刚Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ（商品名：东菱精制克栓酶）系南美蛇毒中采用生物技术提取的单成份溶血栓微循环治疗剂，能够专一性很强地分解血纤维蛋白原、诱发ｔ－ＰＡ释放、增强ｔ－Ｐ...     

麻蝇幼虫肠道类胰蛋白酶的分离纯化及性质(英文)

麻蝇幼虫肠液经硫铵沉淀, ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析, ＳＢＢＩ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,分离纯化出一种分子量为 １６ｋＤ的蛋白酶。底物及抑制剂的特异性表明,该酶为类胰蛋白酶。其能够强烈地降解蛋白酶非专一底物酪蛋白和 Ｈｉｄｅ ｐｏｗｄｅｒ ａｚｕｒｅ,以及类胰蛋白酶专一底物 Ｂｚ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ａｒｇ ＮＡ, Ｂｚ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ ＮＡ和Ｂｚ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ ＮＡ．该酶又能被丝氨酸蛋白酶抑制剂ＰＭＳＦ,类胰蛋白酶抑制剂 ＳＢ－ＢＩ和Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ强烈地抑制。蛋白酶在酸性环境下极不稳定,在弱碱环境（ｐＨ８．５－９．５）中活性最高。     

蟾蜍细胞溶素的纯化及其生化特性研究

利用阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对蟾蜍卵黄外被细胞溶素进行了分离纯化,获得了高纯度的样品．该酶的质量为３２ｋＤ,其特异性ＭＣＡ－人工合成底物为Ｂｏｃ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＭＣＡ,能被ＤＦＰ、ＳＢＴＩ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ和ｐ－ＡＭＰＳＦ等蛋白酶抑制剂所强烈抑制,但不受ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ、ｂｅｓｔａｔｉｎ、Ｅ－６４和ＥＤＴＡ等的影响,表明该酶是一种丝氨酸类型的蛋白酶