维生素E拮抗苯并[a]芘对雄性大鼠的肝脏毒性

目的 探讨维生素E(VE)对苯并[a]芘(B[a]P)诱导的雄性SD大鼠肝损害的作用及其机制.方法 60只4周龄的雄性SD大鼠随机分为空白对照组(未处理)、溶剂对照组(植物油)、单独染B[a]P组(5mg/kg)、VE低剂量组(10 mg/kg VE+5 mg/kg B[a]P)、VE中剂量组(50 mg/kg VE+5 mg/kg B[a]P)、VE高剂量组(100 mg/kg VE+5 mg/kg B[a]P)6组,每组大鼠10只.连续灌胃30 d后,测定大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;H-E染色观察大鼠肝脏组织形态结构.结果 与对照组相比,单独染B[a]P组大鼠肝脏组织结构破坏,血清ALT和AST活性增加(P＜0.05),8-OHdG、MDA和TNF-α含量升高,SOD、GSH-Px活性下降(P＜0.05).与单独染B[a]P组相比,VE各剂量组大鼠的肝脏组织损伤呈现不同程度的减轻,AST、ALT活性下降,8-OHdG、MDA、TNF-α含量降低,SOD、GSH-Px活性明显改善,差异均具有统计学意义(P＜0.05);该效应具有剂量依赖性.结论 VE能拮抗B[a]P对雄性SD大鼠的肝脏毒性,起到肝脏保护作用.     

苯并[a]芘诱导的FL细胞锌指蛋白等表达的改变

目的：观察苯并[a]芘诱发的细胞应答反应，探讨苯并[a]芘引发的基因突变和致癌机制。方法：应用双向凝胶电泳与相应软件分析苯并[a]芘处理后细胞内蛋白质的表达谱，MALDI-TOF(matrix assisted laser desorp-tion／ionization-time of flight)质谱结合数据库检索鉴定差异表达的蛋白斑点。结果：细胞经苯并[a]芘处理后，可引起广泛的蛋白质表达的改变，其中以锌指蛋白和一些参与转录调控的蛋白多见。结论：这些表达改变的锌指蛋白和转录调控因子参与了苯并[a]芘诱发细胞的应答反应，提示可能参与苯并[a]芘引发的基因突变和肿瘤形成。     

苯并[a]芘对小鼠肝脏和肾脏中丙二醛和过氧化氢酶的影响

目的探讨苯并[a]芘(B(a)P)对小鼠肝脏和肾脏脂质过氧化及抗氧化能力的影响。方法采用B(a)P口腔灌胃连续染毒3 d后,取肝、肾组织作匀浆,采用TBA比色法测定鼠肝脏和肾脏内的丙二醛(MDA)的含量,钼酸铵比色法测定鼠肝脏和肾脏内的过氧化氢酶(CAT)的含量。结果肝中各剂量染毒组的MDA含量增加,其中5 mg/kg、10 mg/kg剂量组与油剂对照组比较差异有显著性(P0.05)。肾脏中各剂量染毒组的MDA含量均有所增加,其中10 mg/kg剂量组与对照组比较差异有显著性(P0.05)。肝脏中各剂量染毒组的CAT的含量低剂量增加高剂量减少,肾脏中各剂量染毒组的CAT的含量增加。结论B(a)P可引起MDA含量增加诱导小鼠肝肾的脂质过氧化损伤。     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的 探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法 不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0 μmol/L)的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,Western blotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0 μmol/L BaP）升高,其中7.5 μmol/L BaP组最高（P<0.05）。Western blotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5 μmol/L BaP组最高（P<0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0 μmol/L BaP组活力最高（P<0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。     

维生素E对苯并[a]芘诱导大鼠神经毒性的拮抗作用

【】目的：探讨维生素E(Vitamin E,VE)对苯并[a]芘(benzo(a)pryene,B[a]P)所致雄性SD大鼠神经毒性的保护作用。方法：将60只SD雄性大鼠随机分为空白、溶剂对照组、B[a]P组及VE低、中、高联合B[a]P处理组。连续灌胃30天,通过Morris水迷宫(Morris Water Maze, MWM)测试大鼠学习记忆能力;观察海马形态学改变以及海马体组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)活性、谷胱甘肽(Glutathione, GSH)、氧化型谷胱甘肽(Oxidized glutathione, GSSG)及丙二醛(Malonaldehyde, MDA)含量变化。结果：行为学结果显示B[a]P组较对照组平均逃避潜伏期明显升高,跨台次数和在原平台象限停留时间明显降低,差异有统计学意义(P=0.000);而VE可明显改善各指标变化。此外,海马神经形态学变化提示VE可拮抗B[a]P的损害作用;较之对照组,B[a]P组大鼠海马体组织SOD、GSH-Px、γ-GCS活性以及GSH、GSSG含量下降、MDA含量上升,差异均有统计学意义(P=0.000),且随着VE剂量增加,各指标均有明显改善。结论：VE可对B[a]P导致的神经毒性起到保护作用。     

苯并[a]芘对内皮细胞Jun N端激酶活化的影响

目的探讨苯并[a]芘(BaP)对猪主动脉内皮细胞JunN端激酶(JNK)磷酸化的影响。方法培养猪主动脉血管内皮细胞,分别以不同浓度的BaP染毒(0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L)24h,用Western-blot法检测JNK磷酸化的改变。结果无BaP作用时,磷酸化JNK1/2基本不表达;随BaP浓度的升高,JNK1/2被激活的程度升高,其中磷酸化JNK1水平升高比较明显,升高峰值为BaP浓度1μM左右,随之逐渐降低;而JNK2被激活的程度稍小,表达比较平稳。结论不同浓度的BaP作用下,内皮细胞JNK1/2分别不同程度地被激活,可能是导致HSP70基因表达改变和细胞损伤机制之一。     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原     

苯并[a]芘对神经胶质细胞中胰岛素降解酶与脑啡肽酶表达的影响

目的：探讨苯并［a］芘［benzo(a)pyrene,BaP］对神经胶质细胞中具有β-淀粉体（β-amyloid,Aβ）清除作用的胰岛素降解酶（insulin-degrading enzyme,IDE）及脑啡肽酶（neprilysin,NEP）表达的影响。方法：制备新生SD大鼠原代神经胶质细胞混合培养体系,接受不同浓度的BaP、Aβ1-42寡聚体、Aβ1-42纤维体单独或联合处理24 h后,采用细胞增殖 毒性检测试剂盒测定细胞存活率。随机分为对照组、BaP（2.00 μmol/L）组、Aβ1-42（20.00 mg/L）寡聚体组、BaP+Aβ1-42寡聚体组、Aβ1-42（20.00 mg/L）纤维体组、BaP+Aβ1-42纤维体组,其中BaP均为预处理12 h后再与不同聚集状态的Aβ1-42共同作用。进一步采用实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹技术检测体系中IDE、NEP的mRNA和蛋白表达水平。结果：20.00 μmol/L及以下浓度的BaP处理,20.00、40.00 mg/L的Aβ1-42寡聚体或Aβ1-42纤维体单独处理,BaP与Aβ1-42寡聚体或BaP与Aβ1-42纤维体联合处理对神经胶质细胞的存活率均无明显影响。与对照组相比,BaP单独处理组中IDE、NEP的mRNA和蛋白水平均未明显改变;而Aβ1-42寡聚体单独作用可明显上调IDE的mRNA及蛋白水平（P<0.05）,同时BaP预处理可显著抑制Aβ1-42寡聚体作用引起的IDE表达水平上调（P<0.05）;另一方面,Aβ1-42纤维体在单独处理或有BaP预处理情况下,IDE、NEP的mRNA和蛋白水平均未发生明显改变。结论：在对细胞存活率无明显影响的前提下,BaP预处理显著抑制了Aβ寡聚体作用后的IDE表达水平上调,提示苯并［a］芘可能干扰Aβ寡聚体降解途径导致Aβ增多聚集,进而可能促进认知功能降低及阿尔兹海默病的形成。     

空气苯并[a]芘暴露对3~5岁学龄前儿童尿液神经递质含量的影响

目的 调查不同区域空气中苯并[a]芘(B[a]P)暴露情况,探讨接触B[a]P对3～5岁学龄前儿童尿液神经递质含量的影响.方法 利用高效液相色谱法测定重庆市主城区某焦化厂附近不同区域(分别距焦化厂1 000、2 000、3 000、4 000 m)、不同季度空气中B[a]P暴露浓度;收集出生于该地区且出生以来居住地固定的3～5岁学龄前儿童尿液样本,用ELISA方法测定儿童尿液中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)的含量,分析B[a]P暴露变化与儿童尿液神经递质含量改变的关系.结果 空气B[a]P浓度随着与污染源距离变大而降低,同一季度4个不同区域整体比较差异有统计学意义(P＜0.05),同一区域不同季度整体比较差异也有统计学意义(P＜0.05).儿童尿液神经递质(Glu、GABA、DA、5 HT)在同一暴露范围内随着年龄的增大而含量升高,在同一年龄段4种神经递质的含量随着B[a]P暴露浓度的升高而降低.结论 B[a]P暴露可降低3～5岁儿童尿液神经递质Glu、GABA、DA、5 HT含量,其因果关联还需要进一步调查研究.     

邻苯二甲酸二乙基己酯对体外培养大鼠睾丸支持细胞氧化应激的 影响

目的对体外培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)染毒,探讨DEHP对体外培养大鼠睾丸支持细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,不同浓度的DE-HP(10、50、100 nmol·L-1)作用于支持细胞24 h,应用流式细胞术检测支持细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS),应用紫外分光光度计测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,DEHP各剂量组大鼠睾丸支持细胞MDA含量和ROS增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),且呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过激活细胞氧化应激而诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,进而影响支持细胞功能。     

邻苯二甲酸二丁酯和二(2-乙基已基)酯对大鼠尿液中超氧化物歧化酶酶活力和丙二醛含量的影响

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)一次性单独及一次性联合染毒对雄性SD大鼠尿液超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量影响。方法选取60只体质量200 g左右SD雄性大鼠,测量其体质量并随机分为10组,分别是阴性对照组(芝麻油)、DBP单独染毒组(低剂量:30 mg/kg;中剂量:100 mg/kg;高剂量:300 mg/kg)、DEHP单独染毒组(低剂量:50 mg/kg;中剂量:150 mg/kg;高剂量:450 mg/kg)以及DBP和DEHP联合染毒组(低剂量:DBP 30mg/kg+DEHP 50 mg/kg;中剂量:DBP 1 00 mg/kg+DEHP 1 50 mg/kg;高剂量:DBP 300 mg/kg+DEHP 450 mg/kg),每组6只。采用灌胃的方式进行一次性染毒,灌胃量为2 ml。染毒后收集24、48、72、96 h尿液,并测定其尿液中SOD酶活性和MDA含量。结果 DBP、DEHP单独和联合染毒均能在不同程度上降低大鼠24 h尿液中SOD酶活力,增加24 h尿液中MDA含量,但对大鼠48、62、96 h尿液中SOD酶活力和MDA含量的影响则无显著性差异;各组大鼠随着饲养天数的增加尿液中SOD酶活力有所回升,MDA含量有所下降。结论 DBP、DEHP单独和联合染毒均能在短期内对大鼠肾脏造成显著的氧化损伤,且联合染毒效应更高。     

苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺细胞HSP70合成的影响

用Western blot方法探讨苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺(HEL)二倍体细胞热应激蛋白70(HSP70)合成的影响.结果表明未经S9活化的HEL细胞,在不同剂量的BaP处理后,可轻度诱导HSP70的表达;经S9活化的BaP作用HEL细胞3 h,HSP70表达抑制,呈剂量-反应关系在较高浓度染毒时抑制作用表现明显(P＜0.05);预热应激的HEL细胞HSP70表达增加,但BaP染毒3 h后HSP70表达并不规律,具体表现为低剂量(10～50)μmol/L诱导,而高剂量(50～200)μmol/L呈抑制趋势.结果提示,体外未经代谢活化的BaP可以作为应激原诱导热休克反应;HSP70表达降低可能是BaP代谢活化产物作用的结果,预热诱导HSP70表达增加很可能掩盖了低浓度时BaP对HSP70合成的抑制作用.     

苯并芘对γ谷氨酰半胱氨酸合成酶调控作用的初步研究

目的分析苯并芘（B（a）P）对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）催化亚单位（GCLC）基因的调控作用。方法用超级凝胶滞留实验（Supershift）确认苯并芘（B（a）P）刺激能诱导芳香烃受体核转位因子（ARNT）或其复合物与大鼠GCLC上游调控序列中的E-box元件结合。在不同浓度苯并芘刺激下,在体外通过萤火虫荧光素酶报道系统比较大鼠GCLC 5’端全长调控序列及缺失E-box位点的5’端全长调控序列的功能变化,初步确定苯并芘的调控作用。结果B（a）P刺激能够使ARNT或复合物结合E-box元件。用不同浓度的B（a）P于不同的时间点检测,CCL-149细胞荧光素酶活性改变不大（P〉0．05）。结论B（a）P刺激能使ARNT与γ-GCS基因上的E—box结合,但这种结合似乎对γ-GCS基因上游调控序列基因的功能影响不大。     

室内空气中苯并(a)芘的致癌毒理学研究

本文概述有关室内空气中以苯并(a)芘[BaP]为代表的致癌性多环芳烃污染物的致癌性研究结果,并参考国外有关的研究资料,为制定我国室内空气中BaP的卫生标准提供了致癌毒理学依据,并提出建议值一室内空气中BaP日平均最高容许浓度为0.001～0.0015ug/m~3(0.1～0.15ug/100m~3)。