姜黄素对人胃癌SGC7901细胞的抑制作用及其作用机制探讨

目的 研究姜黄素对人胃癌SGC7901细胞的抑制作用及其可能作用机制.方法 采用MTT比色法检测24 h和48 h时不同浓度水平(0μmol/ml、10μmol/ml、20μmol/ml、40μmol/ml、80μmol/ml)姜黄素对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用;20μmol/ml姜黄素处理人胃癌SGC79...     

SYK基因激活对人胃癌SGC7901细胞株VEGF表达的影响

目的利用去甲基化酶5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-CDR）对脾酪氨酸激酶（Syk）基因激活的作用,观察Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,从而研究Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响。方法检测用5-aza-CDR处理后的人胃癌SGC7901细胞株的生长情况、SYK基因的表达水平及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平,与未接触5-aza-CDR的对照组进行对比。结果经5-aza-CDR处理过的人胃癌SGC-7901细胞株的生长明显受抑;该细胞株SYK基因的表达水平较对照组明显升高,血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平较对照组明显减弱（P〈0.05）。结论 Syk基因的表达能够抑制人胃癌SGC-7901细胞株生长,抑制该细胞株VEGF的表达。血管内皮生长因子（VEGF）的表达抑制可能是SYK基因的激活,从而抑制该细胞株的生长和转移的机制之一。     

脓毒症患者血清miR-205和HMGB1的表达关系及意义

目的:检测脓毒症患者血清miR-205、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平,并探讨二者在脓毒症中的关系及意义。方法:随机选取2017-03-12—2019-09-20期间于本院就诊的55例脓毒症患者为观察组,根据患者21 d时的生存情况分为存活组和死亡组,同期选取于本院进行体检的50例健康人群为对照组,采用qRT-PCR法检测各组血清miR-205水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中HMGB1的表达水平,采用Pearson法分析血清miR-205、HMGB1水平与反映疾病严重程度的急性生理学和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分、多器官功能障碍综合征(MODS)评分的相关性,采用ROC曲线分析血清miR-205、HMGB1及APACHEⅡ评分对脓毒症患者不良预后的预测价值。结果:观察组血清miR-205表达水平显著低于对照组,血清HMGB1水平显著高于对照组(P0.05);死亡组APACHEⅡ评分、MODS评分及血清HMGB1水平均显著高于存活组,血清miR-205水平显著低于存活组(P0.05);Pearson法分析结果显示,脓毒症患者血清miR-205与HMGB1、APACHEⅡ评分均呈负相关(P0.05),HMGB1与APACHEⅡ评分呈正相关(P0.05),血清miR-205、HMGB1与MODS评分均无相关性(P0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-205预测脓毒症患者不良预后的曲线下面积为0.851,敏感度为67.30%,特异度为92.00%;血清HMGB1预测不良预后的曲线下面积为0.888,敏感度为76.40%,特异度为94.00%;APACHEⅡ评分预测不良预后的曲线下面积为0.908,敏感度为83.30%,特异度为88.90%。结论:脓毒症患者血清miR-205水平降低,血清HMGB1水平升高,对患者不良预后有一定预测价值。     

脓毒症合并急性肾损伤患者血清miR-205、miR-233相对表达水平与肾功能及预后的关系

目的 探讨脓毒症合并急性肾损伤(AKI)患者血清微小RNA(miR)-205、miR-233相对表达水平与肾功能及预后的关系.方法 选取石家庄市第一医院2015年7月至2017年7月收治的脓毒症患者150例作为研究对象,按是否合并AKI分成AKI组(72例)和非AKI组(78例).选取同期收治的70例健康体检者作为对照...     

miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

胃癌组织中miR-1258的表达水平及其对胃癌细胞侵袭转移能力的调节机制研究

目的研究胃癌组织中微小RNA-1258(miR-1258)的表达水平及其对胃癌细胞侵袭转移能力的调节机制。方法采用回顾性研究,收集108例胃癌组织标本及其对应的癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR对miR-1258在两组中的表达水平进行检测。采集胃癌细胞,将其分为空白对照组(未转染的SGC-7901细胞)、阴性对照组(转移阴性miRNA模拟物)及实验组(转染miR-1258模拟物)。采用MTT实验检测miR-1258对三组细胞增殖能力的影响,并通过Transwell小室实验检测miR-1258对三组细胞侵袭能力的影响;建立裸鼠胃癌肺转移的动物模型,分析miR-1258对三组细胞转移能力的调节机制。结果相比癌旁正常组织,miR-1258低表达于胃癌组织(P 0. 01)。空白对照组细胞增殖能力明显升高,其次为阴性对照组,而实验组细胞增殖能力明显减缓(P 0. 05)。相比空白对照组和阴性对照组,实验组SGC-7901细胞侵袭能力明显下降(P 0. 01)。相比空白对照组和阴性对照组,实验组小鼠肺部转移癌灶数量明显减少(P 0. 01)。结论 miR-1258低表达于胃癌组织,促使miR-1258高表达具有阻滞胃癌细胞侵袭和转移的作用,提示其可能具有肿瘤抑制剂的作用,有望成为胃癌的新型肿瘤标志物,在临床治疗中可作为潜在靶点,具有重要的临床意义。     

胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的建立及其耐药机制研究

目的建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/DDP,并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法采用逐步递增顺铂浓度持续作用法诱导获得SGC7901/DDP,采用CCK-8法检测药物敏感性,并计算半数抑制浓（IC50）和耐药指数RI,流式细胞仪分析细胞周期分布与细胞内罗丹明123积累量;采用实时荧光定量PCR检测耐药相关基因MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、 MRP-5、ERCC1、 Survivin的mRNA表达,及凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA的表达。用Western blotting法检测耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP与其亲代药物敏感胃癌细胞株 SGC7901凋亡相关蛋白 Survivin及耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达。结果成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP,对顺铂的耐药指数为9.86,并对盐酸阿霉素,氟尿嘧啶交叉耐药,SGC7901/DDP细胞与亲本细胞SGC7901相比,生长缓慢,倍增时间延长,细胞周期分析发现S期细胞减少,G1、G2期细胞增多,细胞蓄积罗丹明123能力下降,MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2表达升高,细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3表达下降, Survivin、P-糖蛋白上升。结论耐药机制可能与MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2的表达上调和Bax、Caspase-3表达下调有关,以及Survivin与P-糖蛋白表达上调,提示多种耐药机制参与顺铂引起的胃癌细胞耐药。     

HSV-TK/GCV系统在体外对胃癌MNK-45细胞株的增殖抑制作用研究

目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷（HSV-TK/GCV）自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法　分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞在24,48,72和96h的增殖、侵袭和迁移的改变;对MNK-45细胞凋亡相关蛋白mRNA水平的变化。结果　HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞的增殖效应,并能够减弱胃癌MNK-45细胞的侵袭和迁移能力,诱导MNK-45细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax蛋白水平和mRNA的表达增加,抑制Bcl-2蛋白表达水平的降低,促进凋亡的发生。结论　HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移,诱导MNK-45细胞凋亡的发生。     

胃癌组织miR-597、miR-3188表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探讨胃癌患者组织中微小RNA-597(miR-597)、微小RNA-3188(miR-3188)表达情况,以及与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2019年1月至2020年6月在东莞市人民医院住院并行手术治疗的96例胃癌患者为研究对象,收集患者术中切除的胃癌组织标本和癌旁组织标本,同时整理收集患者的临床病理资料。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测组织中miR-597、miR-3188相对表达水平,分析miR-597、miR-3188表达与患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析胃癌组织miR-597、miR-3188表达与患者预后的关系,多因素COX回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-597和miR-3188相对表达水平均显著低于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织中miR-597的表达与患者的肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),miR-3188的表达与患者的浸润深度、肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。胃癌组织miR-597高表达患者3年生存率高于低表达患者...     

尼美舒利对人胃癌SGC7901细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的胃癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人胃癌细胞株SGC7901为对象,用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平,体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果尼美舒利可减少PGE2产生,尼美舒利对人胃癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,尼美舒利可改变胃癌细胞株细胞周期的分布,明显降低其增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制环氧合酶-2（COX-2）活性抑制肿瘤细胞的分裂和增殖、阻止细胞周期进展,诱导其凋亡中起重要作用。     

尼美舒利对耐药胃癌细胞SGC7901/VCR的逆转作用

目的：研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对耐药胃癌细胞药物敏感性的影响及其作用机制，为COX-2抑制剂应用于胃癌的联合化疗提供支持依据。方法：以长春新碱（VCR）诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901／VCR为研究对象。应用MTT法观测尼美舒利对SGC7901／VCR耐药性的逆转作用。采用高效液相色谱（HPLC）法分析尼美舒利对SGC7901／VCR细胞内VCR浓度的影响。结果：尼美舒利能逆转耐药细胞SGC7901／VCR对长春新碱的耐药，且呈浓度依赖性，逆转倍数在尼美舒利浓度为100、200、400Izmol／L时分别为1．38、3．07、6．45倍：400μmol／L尼美舒利能增加SGC7901／VCR中VCR的浓度3．22倍。结论：尼美舒利能增加耐药细胞内VCR浓度．从而部分逆转胃癌细胞SGC7901／VCR对VCR的耐药     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

悬浮球培养法制备ABCG2阳性表达胃癌细胞株

目的:探讨悬浮球培养法制备具有干细胞特性(ABCG2阳性表达)胃癌细胞株MKN45的可行性。方法:采用悬浮球培养法在含成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的无血清培养基中培养人胃癌细胞株MKN45,观察细胞球体的形成过程,并检测球体细胞及原代贴壁细胞中干细胞标志物ABCG2的表达水平。结果:在无血清培养基培养条件下,胃癌细胞MKN45能形成悬浮球体;球体细胞ABCG2表达水平高于原代贴壁细胞,差异有统计学意义(P0.05)。结论:悬浮球培养法可制备具有肿瘤干细胞特性的ABCG2阳性表达胃癌细胞株,为后续研究奠定了基础。     

替吉奥对人肺癌细胞A549及胃癌细胞SGC-7901的体外抑制作用

目的研究替吉奥对人肺癌细胞A549及胃癌细胞SGC-7901的体外抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）测定不同浓度的替吉奥对A549细胞及SGC-7901细胞的抑制作用,并选择5-氟尿嘧啶（5-Fu）作对比,计算半数抑制浓度（IC50）。运用流式细胞仪观察替吉奥对A549及SGC-7901细胞周期和凋亡的影响。结果替吉奥对2种细胞的抑制作用随浓度的增加而增加,呈明显浓度依赖性。替吉奥对3．549细胞及SGC-7901细胞的IC50分别为78．33μg／mL和63．40μg／mL,明显低于5-Fu的241．60μg／mL和201．68μg／mL。替吉奥能明显使2种细胞的细胞周期被阻滞于G0／G1及S期,且对A549细胞及SGC-7901细胞的凋亡率分别为（36．64±3．92）％和（38．69±3．02）％,明显高于空白组。结论替吉奥对人肺癌细胞A549及胃癌细胞SGC-7901的体外抑制作用明显,显著优于5-Fu。     

miR-1288调控骨髓间质干细胞促进胃癌细胞迁移

目的探讨miR-1288在胃癌细胞培养上清诱导后骨髓间质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMMSC)中的表达情况及其调控BMMSC对胃癌细胞迁移能力的影响。方法采用SGC-7901、MGC-803和HGC-27 3种胃癌细胞培养上清分别处理BMMSC,实时荧光定量PCR检测处理前后BMMSC中miR-1288的表达水平。采用寡核苷酸片段NC-mimics和miR-1288-mimics转染BMMSC,Transwell试验检测转染后BMMSC对HGC-27细胞迁移能力的影响。收集胃炎和胃癌组织标本,实时荧光定量PCR检测组织中miR-1288的表达水平。结果经SGC-7901、MGC-803和HGC-27胃癌细胞上清处理后BMMSC中miR-1288的表达水平分别是对照组的(5.91±0.25)倍(t=15.55,P0.01)、(9.69±0.62)倍(t=13.34,P0.01)和(24.29±2.69)倍(t=8.631,P0.01)。miR-1288-mimics转染组迁移细胞数量为(623.3±26.03)个,明显高于NCmimics对照组[(326±32.08)个],差异有统计学意义(t=7.197,P0.01)。胃癌组织中miR-1288的表达水平显著高于胃炎组织(P0.05)。结论胃癌上清诱导后BMMSC和胃癌组织中异常高表达miR-1288,其可参与调控胃癌细胞的迁移。     

小飞蓬活性成分对乳腺癌MCF-7细胞的作用

目的通过体外实验研究小飞蓬（Erigeron canadensis L.）活性成分对乳腺癌MCF-7细胞生长、凋亡和侵袭的影响。方法以5-氟尿嘧啶（5-FU）作用组为阳性对照组,以不加药组为阴性对照组,小飞蓬组为实验组作用MCF-7细胞。采用CCK8试剂盒测定药物对MCF-7的生长抑制率。绘制在不同药物浓度作用下的细胞生长曲线。观察不同药物浓度作用下细胞的形态学变化。利用免疫细胞化学染色技术检测药物作用后MCF-7细胞Caspase-3、MMP-9表达情况。结果 （1）小飞蓬活性成分可抑制MCF-7细胞的生长,IC50为0.29 mg.mL-1;（2）生长曲线显示,药物作用后的MCF-7细胞生长较对照组缓慢,形态学观察显示细胞逐渐变为长,黏附性减弱;（3）药物作用后的MCF-7细胞Caspase-3的表达强于不加药物组（P〈0.001）,MMP-9的表达明显弱于对照组（P〈0.001）。结论小飞蓬活性物质可抑制MCF-7细胞生长、侵袭,诱导凋亡。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱＋20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂（Z-VAD-FMK）作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐（MTT）比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱+20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂(Z-VAD-FMK)作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐(MTT)比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。