不同剂量多疗程地塞米松对早产大鼠肺WNT信号转导途径的影响

目的 探讨产前孕鼠应用不同剂量多疗程地塞米松对早产大鼠肺WNT信号转导途径的影响.方法 孕SD大鼠12只随机分为对照组、地塞米松小剂量组和地塞米松大剂量组,每组4只.于孕第16、17、18天,连续3 d腹腔注射药物.对照组予9 g/L盐水;地塞米松小剂量组予地塞米松0.4 ms/(ks·d);地塞米松大剂量组予地塞米松0.8 mg/(kg·d),均用9 g/L盐水稀释至0.5 mL.取孕19 d胎鼠肺组织,RT-PCR法检测WNT信号转导途径中WNT7b、WNT5a、WNT2、糖原合成酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-cate-nin)基因mRNA的表达.结果 地塞米松小剂量及大剂量组胎肺WNT7b(0.55±0.19、0.64±0.54)及β-catenin基因mRNA的表达量(2.03±0.58、2.40±0.89)均显著高于对照组(WNTTb:0.18±0.10,β-catenin:1.77±0.54)(Pa<0.01),WNT5a mRNA(0.57±0.26、1.13±0.53)和GSK-3β基因mRNA(1.04±0.46、1.09±0.56)表达量均显著低于对照组(WNT5a:1.48±0.70,GSK-3β:2.22±1.02)(P<0.05,0.01),WNT2的表达量与对照组相比差异无统计学意义.结论 产前给予地塞米松影响胎肺WNT7b、WNT5a、β-catenin及GSK-3β基因的表达,可能通过引起WNT信号转导途径障碍导致胎肺形态发育异常,造成胎肺功能缺陷.     

地塞米松和倍他米松对大鼠胎肺骨形态发生蛋白信号转导的影响

目的：比较产前地塞米松、倍他米松给药对大鼠胎肺骨形态发生蛋白(BMP)信号转导通路的影响。方法：15只孕鼠随机分成5组：对照组、地塞米松治疗1 d组、3 d组和倍他米松治疗1 d组及3 d组。孕鼠妊娠第19天剖腹取胎鼠肺组织,通过RT-PCR、免疫组化和Western blot技术检测各组胎肺BMP4、BMP受体2（BMPR-II）、Smad1、转录活化因子2（ATF-2）基因转录及蛋白表达水平。结果：(1) BMP4 mRNA、BMPR-II mRNA、Smad1 mRNA的表达在倍他米松3 d组、1 d组及地塞米松3 d组均高于对照组(P＜0.05)。(2)免疫组化结果显示：与对照组相比,BMP4、BMPR-II、pSmad1、ATF-2在地塞米松3 d组、倍他米松1 d组及3 d组表达量显著增加(P＜0.01)。(3) Western blot检测显示与对照组相比,BMP4、BMPR-II蛋白在地塞米松3 d组及倍他米松1 d组、3 d组中表达丰富(P＜0.01)。结论：倍他米松、地塞米松可能参与调控大鼠胎肺BMP信号转导过程。对BMP信号转导分子BMP4、BMPR-II、Smad1表达的上调可能是其促胎肺成熟的重要机制之一。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：891-896］     

硝普钠对早产兔动脉导管胱硫醚-y-裂解酶-硫化氢体系的影响

目的 探讨一氧化氮(NO)供体硝普钠对早产兔动脉导管胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)-硫化氢(H2S)体系的影响.方法 孕龄21 d日本大耳白兔16只,随机分为对照组,腹腔注射硝普钠(NO供体)小剂量(1 mg/kg)组,中剂量(2.5 mg/kg)组,大剂量(5 mg/kg)组,每组4只,对照组单纯用空针穿刺孕兔腹腔,各腹腔注射硝普钠组待孕龄23和25 d时分别腹腔注射相应剂量的硝普钠.待孕龄第26天时对各组动物进行麻醉解剖取胎兔(对照组取得胎兔28只,硝普钠小剂量组27只,中剂量组29只,大剂量组26只),胎兔心脏取血1ml后立即解剖胎兔取动脉导管组织.用去蛋白方法测定胎兔血浆H2S含量,用实时荧光定量RT-PCR测定动脉导管组织中CSE基因,用Western-blot测CSE蛋白表达情况.结果 对照组胎兔血浆H2S含量为(55.68±6.57) μmol/L,动脉导管组织CSEmRNA表达量为1.07±4.12;硝普钠腹腔注射小剂量组分别为(60.02±6.09) μmol/L,3.46±0.18;中剂量组为(64.71 ±7.12) μmol/L,10.93 ±0.22;大剂量组为(70.63±8.07) μmol/L和19.57 ±0.17,小剂量组与对照组、中剂量组与小剂量组、大剂量组与中剂量组比较均P＜ 0.05,胎兔动脉导管CSE蛋白表达随着孕兔注射硝普钠剂量的增大而逐渐增多.结论 硝普钠对早产兔动脉导管中CSE-H2S体系在一定浓度范围内具有浓度依赖性促进作用.     

血管内皮生长因子对早产鼠肺泡表面活性物质结合蛋白B的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)对早产鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)发育和肺泡表面活性物质结合蛋白B(SP-B)表达的影响。方法孕19d Wistar大鼠剖腹取胎鼠,原代培养AECⅡ,分成VEGF-165组、地塞米松组、VEGF加地塞米松组和对照组,检测各组AECⅡ和SP-B表达。结果VEGF-165组、地塞米松组与VEGF加地塞米松组SP-B阳性表达,对照组阴性表达。结论VEGF-165能促进早产鼠肺泡细胞SP-B表达与分泌,可促进肺发育和肺成熟。     

盐酸氨溴索和地塞米松对胎鼠肺表面活性蛋白基因表达的影响

目的　探讨盐酸氨溴索和地塞米松对发育期胎鼠肺表面活性蛋白 (SPs)基因表达的影响。方法　将胎鼠 4 2只随机分为生理盐水对照组和盐酸氨溴索、地塞米松两个干预组 ,剖宫取孕19d的胎鼠肺组织作为早产鼠肺模型 ,用原位杂交研究胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞内SP B基因的表达 ,逆转录PCR(RT PCR)观察分析各组肺表面活性蛋白SP A、SP B和SP CmRNA表达变化 ,用 β actinmRNA扩增产物为内参照密度扫描半定量分析。结果　 (1)发育 19d的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞内SP BmRNA表达阳性 ;(2 )鼠胚胎发育后期 ,支气管周围也分布着肺泡Ⅱ型上皮细胞 ;(3)生理盐水对照组SP A、SP B、SP CmRNA表达与 β actinmRNA比值分别为 0 81± 0 2 6、0 97± 0 2 0、0 88± 0 11。盐酸氨溴索干预SP A、SP B、SP CmRNA表达比值分别为 1 0 4± 0 16、1 2 8± 0 2 9、1 0 9± 0 2 5 ,与对照组比较显著性增加 (P <0 0 5 )。地塞米松干预后的胎鼠肺SP A、SP B、SP CmRNA表达比值分别为 1 0 8±0 2 5、1 2 3± 0 35、1 2 1± 0 2 5 ,与对照组比较显著性增加 (P <0 0 5 )。 (4 )对比盐酸氨溴索与地塞米松在促进SP A、SP B、SP C基因表达上 ,两者差异没有显著意义 (P >0 0 5 )。结论　盐酸氨溴索和地塞米松产前用药对发育期的胎鼠SPs基     

盐酸氨溴索、地塞米松产前用药对大鼠胎肺形态发育影响的对比

目的比较产前3d给盐酸氨溴索、地塞米松及单次给地塞米松对大鼠胎肺形态发育的影响。方法孕鼠12只随机分为9g／L盐水对照组和产前盐酸氨溴索3d治疗组、地塞米松3d及1d治疗组4组，每组3只。孕d19每只孕鼠取6只胎鼠肺组织，通过光镜观察及电镜技术比较2种药物及不同疗程对胎肺形态发育的影响。结果1．光镜下3个治疗组每视野肺泡计数、平均肺泡表面积均高于对照组（Pa〈0．01），平均肺泡间隔厚度均低于对照组（Pa〈0．01）。2．光镜下地塞米松3d治疗组每视野肺泡计数、平均肺泡表面积均高于地塞米松1d治疗组，平均肺泡间隔厚度低于地塞米松1d治疗组（Pa〈0．01）。3．光镜下地塞米松3d及1d治疗组每视野肺泡计数、平均肺泡表面积均高于盐酸氨溴索治疗组，平均肺泡间隔厚度低于盐酸氨溴索治疗组（Pa〈0．01）。4．透射电镜观察：治疗组Ⅱ型肺泡上皮内多见板层小体，尤以地塞米松3d治疗组更为多见，且染色深、致密，线粒体等细胞器多；对照组难见板层小体，少见细胞器。结论产前应用地塞米松、盐酸氨溴索均能显著促进胎肺发育；多次地塞米松优于单次地塞米松治疗；多次及单次地塞米松疗效均优于盐酸氨溴索治疗。     

表皮生长因子与地塞米松对早产大鼠肺发育的影响

目的 探讨表皮生长因子(EGF)和地塞米松(DEX)对早产大鼠呼吸窘迫综合征的防治作用.方法 将72只胎鼠随机分为EGF、DEX 2个干预组和9 g/L盐水对照组,于孕19 d剖腹取胎鼠,称取胎鼠体质量;通过光镜、图像分析观察胎鼠肺的形态结构;用免疫组织化学方法检测胎鼠肺组织表面活性蛋白A和B(SP-A及SP-B)的表达,并通过计算免疫组织化学平均灰度值比较各组SP-A及SP-B的表达.结果 EGF组胎鼠体质量与对照组比较无明显差异[(1.398 60±0.073 05)g,(1.386 30±0.037 27)g],DEX组胎鼠体质量明显低于对照组[(1.319 20±0.053 26)g,(1.386 30±0.037 27)g].光镜下EGF组与DEX组胎肺可见到明显的肺泡腔结构,对照组肺泡腔尚未发育;图像分析表明EGF组与DEX组胎肺的肺泡腔与肺泡间隔面积之比均大于对照组(Pa<0.01).SP-A及SP-B在3组中均有表达,与对照组比较,SP-A及SP-B在EGF组和DEX组中的表达强度均显著增强(Pa<0.01).结论 EGF和DEX在SD大鼠妊娠第16-18天作用于母体,均能促进胎鼠肺的形态发育和表面活性物质的合成,对早产大鼠呼吸窘迫综合征的发生具有防治作用.二种药物对胎鼠肺的影响程度无明显不同,但产前应用DEX会降低胎鼠体质量,EGF无此不良反应.     

氨溴索和糖皮质激素对胎鼠肺组织骨形态发生蛋白4表达的影响

目的 探讨产前给予氨溴索、糖皮质激素(地塞米松、倍他米松)对胎鼠肺组织骨形态发生蛋白4(BMP4)表达的影响.方法 18只孕鼠随机分成6组:对照组、氨溴索组、地塞米松1d组和3 d组,倍他米松1 d组和3 d组,每组3只.孕鼠妊娠第19天行剖宫产取胎仔肺组织,通过逆转录聚合酶链反应、免疫组化和免疫印记技术检测各组胎肺BMP4基因转录水平及蛋白表达差异.结果 BMP4 mRNA表达在地塞米松3 d组、倍他米松1、3 d组的表达均明显高于对照组(P<0.05),氨溴索组与地塞米松1 d组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).免疫组化和免疫印记法结果显示,与对照组相比,地塞米松3 d组、倍他米松1 d组及3 d组BMP4表达量显著增加(P<0.01),而氨溴索组、地塞米松1 d组与对照组相比表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 产前给予地塞米松、倍他米松均能显著促进胎肺组织BMP4的表达,提示糖皮质激素可能通过上调BMP4表达促进大鼠胎肺发育.     

轻度维生素A缺乏对不同时期胎鼠肺发育的形态学影响

目的 观察轻度维生素A缺乏(MVAD)对不同时期胎鼠肺发育的形态学影响.方法 24只SD雌鼠随机分为MVAD组(n=15)和对照组(n=9).通过喂养缺乏维生素A(VA)饲料建立MVAD孕鼠模型,高效液相色谱法检测2组雌鼠血清VA水平和孕20 d胎鼠肝脏VA水平.取孕16 d、20 d、出生1 d MVAD组和对照组胎(乳)鼠肺组织,经HE染色,光镜下观察其肺形态学改变,比较MVAD组和对照组鼠血清VA、孕20 d肝VA水平及胎肺发育的形念学区别.应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 MVAD组雌鼠毛色干枯,少食少动,孕鼠体质量下降,部分流产不孕,平均孕胎数较对照组下降(P＜0.05);出生1 d MVAD组乳鼠体质世、身长、尾长值均较对照组小(Pa＜0.01).MVAD组雌鼠血清VA水平显著低于对照组(P＜0.01),孕20 d胎鼠肝脏VA水平MVAD组亦显著低于对照组(P＜0.01).HE染色显示MVAD组16 d胎鼠支气管圆形管腔较对照组分支样管腔幼稚;MVAD组20 d胎鼠较埘照组原始肺泡少,平均肺泡表面积较小,肺泡间隔较厚(P＜0.01);MVAD组出生1 d乳鼠表现为肺发育的不均一性,较多区域有肺泡过度膨胀,肺泡间隔较薄(P＜0.01),有离断;局部又有肺泡膨胀小全,间质充血,肺泡间隔增厚.结论 VA在肺发育中起重要作用,MVAD会导致胎鼠肺发育小全.     

钙敏感受体及相关分子在新生大鼠持续肺动脉高压发病中的作用

目的探讨钙敏感受体(CaSR)及相关分子在持续肺动脉高压(PPH)新生大鼠肺组织中的表达及在PPH发病机制中的作用。方法选取6只Sprague-Dawley(SD)孕鼠,孕第19天时随机分为PPH组和对照组,每组3只。PPH组孕鼠置于12%氧浓度的缺氧箱中并腹腔内注射吲哚美辛0.5 mg/kg,2次/天,连续3天,建立胎鼠肺动脉高压模型;对照组孕鼠暴露在空气中并腹腔内注射等量生理盐水。两组孕鼠均于孕第22天行剖宫产,对照组、PPH组分别获取新生大鼠26、28只,两组各随机抽取15只仔鼠用于后续实验。采用RT-PCR技术检测新生大鼠肺组织CaSR mRNA及Ⅱ型11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD2)mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测新生大鼠肺组织CaSR蛋白和一氧化氮(NO)含量。结果与对照组比较,PPH组新生大鼠肺组织中CaSR mRNA[(0.592±0.052)比(0.408±0.017)]及蛋白表达[(0.717±0.027)比(0.445±0.011)]升高,NO含量[(1.50±0.20)μmol/g比(0.37±0.16)μmol/g]升高,11β-HSD2 mRNA[(0.413±0.073)比(0.978±0.079)]表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CaSR及相关分子在新生大鼠PPH发病中可能发挥重要作用。     

Wnt通路中相关基因表达在肾母细胞瘤发生中的作用

目的 研究 β-catenin、Wnt-4和sFRP-1基因在肾母细胞瘤、瘤旁肾组织、胚胎肾和正常肾组织中的表达实验对象分组,肾母细胞瘤组20例,瘤旁肾组织20例,胚胎肾组10例,正常肾组织8例.采用实时定量PCR的方法,分别检测上述各组标本中β-catenin、Wnt-4和sFRP-t基因的表达.结果 肾母细胞瘤组织、瘤旁肾组织和胚胎肾组织中β-catenin的表达量分别为4.6800±0.3086、4.5020±0.2385 和4.4960±0.3846,三组间差别无统计学意义.但均高于正常肾组织中β-catenin的表达量2.9220±0.3013,差别具有统计学意义.肾母细胞瘤组织Wnt一4的表达量3.7150±0.060明显高于瘤旁肾组织和胚胎肾组织中Wnt-4的表达(分别为3.1260±0.090和3.1250±0.073),前三者又均明显高于正常肾组织中Wnt-4的表达量2.6680±0.080.肾母细胞瘤组织和瘤旁肾组织中sFRP-1的表达量分别为4.6465±0.2890～f114.8020±0.2943,两组间差别无统计学意义.胚胎肾组织和正常肾组织中sFRP-1的表达量分别为2.7980 ±0.2003和2.9420±0.3867,两组间差别无统计学意义.但是肾母细胞瘤和瘤旁肾组织中sFRP-I的表达均明显高于胚胎肾组织和正常肾组织,差别具有高度的统计学意义.结论 Wnt信号通路中相关分子的表达异常可能是肾母细胞瘤发生的重要原因之一.     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

Wnt/β-catenin信号通路在幼兔激素性股骨头缺血坏死模型中的表达及意义

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路与幼兔激素性股骨头缺血坏死的关系.方法 选用8周龄健康新西兰幼兔35只,体重在1.2～1.7 kg.按照随机数字表法将其分为激素注射组25只,对照组10只.前者臀肌注射糖皮质激素7.5 mg/kg,1周2次;后者注射等体积生理盐水,总共注射8周.分别于注射后4、8周时行双髋关节X线正位片、CT检查.注射8周后处死全部实验动物并立即取出双侧股骨头.根据X线正位片与CT检查结果判断发病与否,并将激素注射组分为发病组和未发病组.用RT-PCR方法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、脂联素(Adipoq)、β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)、骨形成蛋白-2(BMP-2) mRNA在各组股骨头中的表达情况,比较其在各组中的表达差异.结果 激素注射组动物存活22只,被认为发生股骨头坏死6只(发病组),未发病16只(未发病组),股骨头坏死发生率为27.3％ (6/22).RT-PCR示:β-catenin在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.22±0.01、0.35±0.09和1.07±0.41,发病组与未发病组、对照组比较,差异有统计学意义(t=4.94、10.60,P＜0.05);LRP5在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.22±0.05、0.35±0.12和1.12±0.36;发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=4.39、9.93,P＜0.05);Adipoq在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为17.84±5.51、3.33±1.26和1.11±0.27,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=5.88、12.01,P＜0.05);Caspase-3在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为3.10±0.90、1.29±0.35和1.06±0.24,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=7.15、7.75,P＜0.05);BMP-2在发病组、未发病组、对照组的相对表达量分别为0.08±0.05、0.31±0.21和1.12±0.32,发病组与另两组比较,差异均有统计学意义(t=2.93、8.08,P＜0.05).在对照组、未发病组及发病组中,β-catenin与LRP5的表达均呈正相关关系,Caspase-3与β-catenin呈负相关关系,Caspase-3与LRP5呈负相关关系,Adipoq与β-catenin呈负相关关系,Adipoq与LRP5呈负相关关系,BMP-2与β-catenin呈正相关关系,BMP-2与LRP5呈正相关关系.结论 糖皮质激素对Wnt/β-catenin信号通路的抑制可能促进股骨头骨和软骨细胞的凋亡以及脂肪细胞的形成,抑制其成骨能力.     

地塞米松对先天性膈疝胎鼠肺发育的影响

目的研究地塞米松对先天性膈疝(Congenital Diaphragmatic Hernia,CDH)胎鼠肺发育的影响,并探讨其可能机制。方法采用Nitrofen法制作胎鼠CDH模型并分组,地塞米松组予以产前地塞米松治疗,Nitrofen组则不予地塞米松治疗,另取正常胎鼠为对照组;采用组织学检查方法评价肺发育情况,免疫组化和图像分析方法检测地塞米松作用前后胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin-like Growth Factor,IGF-Ⅰ)在胎肺中的表达及相对含量。结果与Nitrofen组相比,地塞米松组肺组织中IGF-Ⅰ的表达明显降低,且肺组织发育明显改善。结论胎儿期地塞米松通过下调肺组织中IGF-Ⅰ的表达,来改善肺组织的发育。     

Wnt1信号通路蛋白分子在肾上腺及神经母细胞瘤组织中表达的研究

目的 观察新生儿肾上腺、>2岁小儿肾上腺和神经母细胞瘤组织中经典Wnt信号通路中Wnt1、β-catenin和CyclinD1的表达,探讨Wnt1信号通路调控异常与神经母细胞瘤的相关性.方法 应用免疫组化方法 检测新生儿肾上腺、>2岁小儿肾上腺及各期、各病理类型、化疗前后神经母细胞瘤组织中Wnt1信号通路中Wnt1、β-catenin和CycinD1的表达.结果术前未化疗的肿瘤Wnt1和β-catenin蛋白表达明显强于新生儿肾上腺组织,后者又明显强于>2岁小儿肾上腺(P=0.014),差别均具有高度的统计学意义;Ⅲ～Ⅳ期肿瘤的Wnt1和β-catenin蛋白表达较Ⅰ～Ⅱ期肿瘤高;Ⅲ～Ⅳ期肿瘤中术前未化疗的Wnt1和β-catenin蛋白表达明显高于术前化疗的肿瘤;组织预后不良型(UH)肿瘤Wnt1和β-catenin蛋白表达较组织预后良好型(FH)肿瘤高,差别具有高度的统计学意义.新生儿肾上腺及>2岁小儿肾上腺组织中CyclinD1染色均为阴性,而肿瘤组织中表达阳性,Ⅰ～Ⅱ期肿瘤与Ⅲ～Ⅳ期术前未化疗的肿瘤CyclinD1蛋白表达无差别;Ⅲ～Ⅳ期术前未化疗的肿瘤CyclinD1蛋白表达明显高于术前化疗的肿瘤,UH肿瘤的CyclinD1蛋白表达高于FH肿瘤.结论 Wnt1信号通路对肾上腺细胞分化成熟有一定的调控作用.Wnt1通路异常可能是参与神经母细胞瘤发生和侵袭的重要机制.     

Wnt7b在Nitrofen诱导的先天性膈疝大鼠模型胎肺中的表达

目的 研究Wnt7b在Nitrofen诱导的先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)胎肺中的表达特点,探讨其在CDH肺发育不良发生机制中的可能作用.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测Wnt7b基因在妊娠E17.5、E19.5、E21.5的Nitrofen诱导CDH大鼠模型胎肺及正常对照大鼠胎肺中的相对表达量,并用免疫组化方法检测Wnt7b蛋白在胎肺中的表达.结果 正常对照组和CDH组胎肺中Wnt7b mRNA的表达水平均随着胎龄的增加呈下降趋势,其中E17.5胎龄CDH组胎肺中Wnt7b mRNA的表达水平与对照组相比,差异无统计学意义;而E19.5、E21.5胎龄CDH组胎肺中Wnt7b mRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).对E21.5胎龄对照组和CDH组的标本进行免疫组化检测,结果显示Wnt7b免疫阳性细胞主要分布在支气管和细支气管上皮,且CDH组Wnt7b免疫阳性程度(以平均光密度值表示)较正常对照组升高,有统计学差异.结论 Wnt7b mRNA表达量随大鼠胎肺逐渐发育成熟而下降,提示其在胎肺中的表达量与胎肺发育的成熟度有关.CDH组中E19.5、E21.5胎龄时Wnt7b mRNA的表达水平明显高于对照组,是CDH孕晚期胎肺发育滞后的分子基础之一,提示Wnt7b在CDH孕晚期胎肺中表达增高可能参与了肺发育不良.Wnt7b蛋白在肺发育中特异性定位于气道上皮,提示信号町能在肺上皮与间质细胞之间有重要联系,协同促进上皮和间质的发育.     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

产前使用盐酸氨溴索、地塞米松对大鼠胎肺血小板源性生长因子-A表达的影响

目的探讨产前给盐酸氨溴索、地塞米松对大鼠胎肺血小板源性生长因子-A（PDGF-A）表达的影响。方法9只孕鼠随机分为盐酸氨溴索治疗组、地塞米松治疗组和9g/L盐水对照组,每组3只。分别于孕16、17、18d连续腹腔注射给药,孕19d每只孕鼠取4只胎鼠肺组织用反转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDGF-AmRNA表达水平,每只孕鼠取5只胎鼠肺组织用免疫组织化学法检测PDGF-A蛋白水平表达。结果1.盐酸氨溴索治疗组、地塞米松治疗组PDGF-AmRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组（Pa〈0.01）。2.盐酸氨溴索治疗组PDGF-AmRNA和蛋白表达水平显著低于地塞米松治疗组（Pa〈0.01）。结论PDGF-A表达于胎肺组织。产前给盐酸氨溴索、地塞米松均能显著促进PDGF-A表达,PDGF-A高表达可能是盐酸氨溴索、地塞米松促胎肺成熟重要机制之一。     

Wnt通路中Wif-1和β-catenin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

目的研究Wnt通路中Wnt通路抑制因子1(Wif-1)和β连环蛋白(β-catenin)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及可能的作用。方法收集初发并且诱导缓解治疗第33天完全缓解的35例ALL患儿的临床资料,以治疗前作为初发组,第33天达完全缓解时作为缓解组,对照组为15例非恶性血液病患儿。RT-PCR方法检测Wif-1和β-cateninm RNA的表达,ELISA法测Wif-1蛋白的表达。结果初发组Wif-1m RNA及蛋白的表达明显低于对照组和缓解组,β-cateninm RNA的表达高于对照组和缓解组(P0.05)。在初发组和缓解组,高危患儿的β-cateninm RNA表达均高于中危和低危患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于中危和低危患儿(P0.05)。在初发组和缓解组,T-ALL患儿β-cateninm RNA的表达高于B-ALL患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于B-ALL患儿(P0.05)。各组Wif-1和β-cateninm RNA表达呈负相关(P0.05)。结论 Wif-1表达下降、β-catenin表达增高是儿童急淋发病机制之一,Wif-1下降和/或β-catenin增高的程度可能与预后相关。     

核心蛋白聚糖抑制转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化机制研究

目的 研究核心蛋白聚糖抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞-间充质细胞-转分化(EMT)的机制.方法 将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为4组:(1)阴性对照组;(2)100 ng/ml核心蛋白聚糖组;(3)10 ng/ml TGF-β1组;(4)100 ng/ml核心蛋白聚糖和10ng/ml TGF-β1组.Western blot法检测信号通路ERK、PI3K、Smad_3的磷酸化水平和β-catenin的蛋白水平;实时定量-PCR检测snail mRNA的表达情况,逆转录-PCR检测淋巴细胞增长因子1(LEF-1)mRNA的表达情况.结果 (1)与对照组相比,TGF-β1诱导组ERK(1.11 ±0.09:0.47 ±0.07)、PI3K(14.79 ±1.02:2.48 ±0.06)、Smad_3(0.95 ±0.02:0.08 ±0.01)的磷酸化水平明显增高,snail(2.59±0.70:1.02±0.13)、LEF-1(1.85 ±0.08:0.30 ±0.11)的mRNA的表达量明显增高,β-catenin(1.46 ±0.20:0.49±0.05)的最明显增高;(2)单纯核心蛋白聚糖组与对照组相比,所得结果 差异均无统计学意义.核心蛋白聚糖和TGF-β1共同刺激组与TGF-β1组相比,ERK(0.58 ±0.08)的磷酸化水平及snail mRNA(1.24 ±0.03)的表达量明显降低而PI3K(15.84 ±1.64),Smad_3(0.90 ±0.04)的磷酸化水平,LEF-1的mRNA(1.64 ±0.07)、β-catenin(1.42±0.09)的量差异无统计学意义.结论 核心蛋白聚糖抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞EMT可能是通过阻止ERK信号转导通路实现的.