丙型肝炎病毒(HCV)截短型E2的原核表达和蛋白纯化

对丙型肝炎病毒(HCV)截短型包膜糖蛋白E2-661基因进行原核表达和纯化.利用PCR法扩增出661 bp的截短型HCV E2区基因片段,并将测序正确的E2-661基因克隆入原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定.结果表明目的蛋白分子量约为35 kDa,主要以包涵体形式大量存在.Western-blot结果显示目的蛋白与抗His标签单抗及HCV阳性血清均具有良好的反应原性.并通过镍离子亲和层析方法获得纯化的重组蛋白.以上结果为HCV E2功能的进一步研究奠定了基础.     

丙型肝炎病毒NS3基因真核质粒的构建及其在人肝细胞中的诱导表达

目的：进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCVNS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3．1（-）重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3．1（-）／NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCVNS3蛋白的表达。结果：所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70000。结论：成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3．1（-）／NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCVNS3蛋白。     

BVDV-2 E2基因的原核表达及重组蛋白反应原性的研究

为了对BVDV进行诊断,根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆分离株SWE2基因进行扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入BL21（DE3）表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-28a-E2,并转化人大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为32ku;Westernblot分析表明该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性,为BVDV-2诊断试剂研发奠定基础。     

慢性丙型肝炎患者HCV基因分型研究

我国是丙型肝炎的高发地区。自然人群中丙型肝炎病毒（HCV）感染率为0.7%~3.1%。作者对兰州市部分人群调查健康人群HCV感染率为4.4%。HCV感染虽不如HBV感染常见，但是HCV感染更容易引起慢性化，并在肝硬化和肝癌的发生发展中起作用。HCV基因型的地理分布差异较大。目前人们对不同基因型感染致病机理和临床意义的研究还较少，为不断积累我国HCV基因分型地区性分布资料，了解本地区HCV基因型的分布特点，我们对慢性丙型肝炎患者血清进行了HCV基因分型研究。1 材料与方法1.1 研究对象1996年6月—1999年12月我院传染科住院和门诊的慢…     

丙型肝炎病毒NS5A基因的克隆以及在原核和昆虫细胞中表达的研究

克隆了丙型肝炎病毒的NS5A基因，并在细菌和昆虫两种不同的系统中成功地进行了该基因的表达。利用PCR方法获得了NS5A完整的编码区并克隆到原核表达载体pGEX—KG上，在大肠杆菌中诱导表达了78kDa的NS5A与GST的融合蛋白。同时发现，融合蛋白被部分切割为50kDa的NS5A和28kDa的GST。在原核细胞中表达的78kDa和50kDa两种蛋白均具有较高的免疫原性，通过免疫家兔获得了高特异性的兔抗血清。另外，利用两种昆虫表达系统，即AcMN—PV和HaSNPV的Bac-to-Bac系统对NS5A进行了表达，表达产物为58kDa。     

丙型肝炎病毒DNA免疫研究进展

DNA免疫是近年发展起来的一种新型免疫技术。由于其具有显的优越性,特别适用于具有高度变异性的丙型肝炎病毒(HCV)疫苗的研制。对丙型肝炎病毒DNA免疫的研究证明,确可诱生较高水平的体液及细胞免疫应答。     

丙型肝炎病毒核酸疫苗的研究

从丙型肝炎病人的阳性血清中提取出丙型肝炎病毒ＲＮＡ，通过ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得丙型肝炎病毒Ｃ区基因片段。并将此片段克隆到真核细胞表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋），得到重组质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ，再将其通过肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／小鼠后，小鼠产生了抗ＨＣＶ／Ｃ区抗体。     

拟南芥抗旱相关基因的表达载体构建及转基因植株鉴定

文章以拟南芥Col-0植株的基因组DNA和cDNA为模板扩增出LWT2基因全长和CDS片段,用pEASY-Blunt Zero Cloning Kit试剂盒连接至中间载体,转化到Trans1-T1感受态细胞内,通过单克隆挑选、菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定及质粒测序验证获得DNA阳性克隆。利用限制性内切酶双酶切获得含有黏性末端的目的片段和载体片段,进行DNA连接反应可得最终的互补和过表达构建。提取质粒DNA测序确认后将2个构建分别转化至农杆菌菌株GV3101,菌落PCR鉴定后通过浸花转化法转化拟南芥lwt2-1突变体植株,最后通过转基因筛选与遗传鉴定获得相应构建的转基因阳性植株。     

戊型病毒性肝炎研究进展

戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越引起人们的重视.由我国自主创新研制的重组戊型肝炎疫苗现已在中国完成世界上首个Ⅲ期临床试验,其预防戊型肝炎的保护率达到100%(95%CI,72.1%~100.0%).     

HCV非结构基因NS5分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因5(NSS)区是RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)及一种磷蛋白的编码区,与HCV的复制、致病及抗药性关系密切。就HCV NS5区有关的分子生物学研究进展进行了综述。     

HEV经输血感染兔模型研究

目的 建立输血感染戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)兔模型,了解HEV全血输注传播的可能性,并观察感染后的指标动态.方法 以兔HEV接种4只SPF兔,经腹腔静脉窦采集抗凝血,然后立即以约10 mL/kg经耳缘静脉注射输血方式分别给予正常SPF受体兔5只,每周监测受体兔粪便和血清抗原、抗体和核酸,...     

2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

广西肝细胞癌与丙型肝炎的关系

用４种抗丙型肝炎病毒蛋白的单克隆抗体，免疫酶染色法直接检测肝细胞癌的病理组织中丙肝病毒蛋白。结果８／５２例（１５．４％），一至数种抗体阳性，阳性反应物主要定位于肝和癌细胞的胞浆中，值得注意的是本组几乎全部病例为乙肝，丙肝两种病毒混合感染，表明广西丙型肝炎的混合感染的比较高，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）加上黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）或丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）可能是广西肝细胞癌（ＨＣＣ）高发的原因。     

长叶车前花叶病毒上海株(RMVsh)外壳蛋白基因的克隆、序列分析及原核表达

长叶车前花叶病毒上海分离株（RMVsh)是从上海郊区的青菜（Brassica chinensis)上分离鉴定的，以提纯的病毒为材料，SDS－酚法纯化的基因组RNA作为模板，通过RT－PCR方法克服了该病毒的外壳蛋白基因（CP），DNA序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长474个碱基，编码157个氨基酸，将CP基因插入原核表达载体pBAD/His-C中，转化E.coli Top10后，诱导表达，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈－特异性的蛋白条带，Western blot检测表明，表达产物与RMVsh抗血清呈阳性反应，RMVsh CP基因的核苷酸序列及氨基酸序列与烟草花叶病毒属中其他能侵染十字花科作物的成员相比，同源率分别为83．5％－98．9％和87．9％－99．4％，并讨论了RMVsh的分类地位为烟草花叶病毒属侵染十字花科植物2个亚组中的第一亚组的代表。