神经节苷脂类抑制BT325细胞系生长机理的初步探讨

用 ¹²⁵I-EGF与人多形成胶质细胞瘤BT325细胞系膜上EGF受体的饱和结合实验, 竞争抑制实验研究GM3,BBG(bovine brain gangliosides)对EGF受体最大结合量, 亲和常数及受体数目的影响; 放射受体法观察EGF-EGFR复合物内吞过程, 测定胞质和培养基中EGF含量.结果表明: BT325细胞质膜上存在高亲和力EGF结合位点,GM3对EGF与其受体的亲和力无明显抑制作用(P＞0.05),但能明显减少其受体的数目(P＜0.05); GM3能明显延长EGF-EGFR复合物内吞过程; GM3处理的胞质中EGF浓度比对照组显著升高(P＜0.05), 培养液中无明显差异,这可能是由于GM3抑制EGF分泌所致.     

外源性神经节苷脂GM3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

通过苔酚蓝染色细胞发现,外源性ＧＭ３能明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长,在ＧＭ３处理３ｄ时,出现明显差异,通过ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ分析发现,外源性ＧＭ３可明显影响人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ四种癌基因的ｍＲＮＡ表达,未经ＧＭ３处理的细胞中没有检测到ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ,但ｃ－ｊｕｎ微量表达,并有ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ的高     

神经节苷脂GM3对人白血病J6—2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化。在ＧＭ３诱导分化同时,Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化。采用（＾３２Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－＾３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－＾３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨。ＧＭ３促进［＾３２Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ;抑制［ＣＨ３－＾３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱;ＧＭ３促进［Ｃ     

神经节苷脂GM_3对J6－2细胞蛋白质磷酸化的影响

通过研究神经节苷脂ＧＭ＿３对国人单核样白血病细胞系Ｊ６－２细胞蛋白质磷酸化的影响,在［γ－￣３２Ｐ］ＡＴＰ,ＧＭ＿３,ＡＴＰ,Ｍｇ￣（２＋）与Ｊ６－２细胞液及颗粒两部分共同反应,１Ｏｍｉｎ（３０℃）体系中,观察到ＧＭ＿３对两部分蛋白质磷酸化的调节作用。ＧＭ＿３（１００μｍｏｌ／Ｌ）促进颗粒部分分子量为１８００００,８７０００,７８０００,６７０００,４３０００及３１０００的蛋白质磷酸化,促进胞液部分分子量为８７０００及５６０００的蛋白质磷酸化,而且能抑制７００００及４３０００蛋白质磷酸化。由于ＧＭ＿３已被前人证实能对Ｊ６－２细胞起分化作用,其作用时间长达４－６ｄ,很可能ＧＭ＿３对蛋白质磷酸化作用的调节是ＧＭ＿３促分化作用的早期信号。     

神经节苷脂GM_3对人白血病J6-2细胞PKC转位及DAG含量的影响

应用SDS PAGE及Western印迹技术检测神经节苷脂GM3 处理前后人白血病J6 2细胞不同类型PKC在细胞内的转位情况 ,同时利用高效薄板层析技术观察了细胞内DAG含量的变化 ,从而探讨GM3 抑制PKC活性的机制 .实验发现 ,GM3 处理后胞液PKCα明显增加 ,而颗粒结合PKCα则相对减少 ;GM3 对其它亚型PKC在细胞内分布无显著影响 .同时还发现 ,GM3 处理后细胞内DAG含量降低 (P <0 0 5 ) .结果表明 ,GM3 抑制PKCα由胞浆向质膜转位 ,对其它亚型PKC在细胞内转位无影响 .提示GM3 抑制的PKC亚型可能是PKCα .同时GM3 降低细胞内DAG含量 ,这可能与GM3抑制PKCα活性机制有关     

神经节苷脂对脂多糖损伤大鼠嗜铬细胞瘤细胞的保护作用

目的：研究内源性神经节苷脂对大鼠嗜铬细胞瘤细胞株（PC12）脂多糖（LPS）损伤后的作用及机制。方法：培养PC12细胞,建立LPS损伤模型,采用MTT法检测不同浓度LPS对PC12细胞存活率的改变、葡萄糖神经酰胺合成酶抑制剂D（D-PDMP）耗竭内源性神经节苷脂时LPS对PC12细胞存活率的改变以及添加外源性神经节苷脂GM1后对PC12细胞存活率的保护作用;倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞状态;RT-PCR检测NF-κB的相对表达含量。结果：LPS能导致PC12细胞形态学的改变及存活率下降,且随着LPS浓度的增加细胞存活率逐渐降低;神经节苷脂GM1能明显改善LPS所致的细胞形态学以及存活率的改变;工具药D-PDMP耗竭内源性神经节苷脂后,LPS对PC12细胞的损伤更严重,添加外源性神经节苷脂GM1,细胞形态学及存活率得到明显改善,细胞存活率上升;LPS损伤时细胞内NF-κB含量增加;D-PDMP预先耗竭内源性神经节苷脂时NF-κB含量增加更多;添加外源性神经节苷脂GM1后NF-κB含量降低。结论：内源性神经节苷脂对PC12细胞LPS损伤具有保护作用,可能是通过NF-κB信号通路来发挥作用的。     

外源性神经节苷脂GM_3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

通过苔酚蓝染色细胞发现,外源性GM3（10μg/ml）能明显抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长,在GM3处理3d时,出现明显差异．通过NorthernBlot分析发现,外源性GM3可明显影响人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中c-fos、c-jun、c-myc和N-ras这四种癌基因的mRAN表达．未经GM3处理的细胞中没有检测到c-fosmRNA,但c-jun微量表达,并有c-myc和N-rasmRNA的高水平表达而GM3可在短时间内快速大量地诱导c-fos、c-junmRNA的生成．GM3处理的细胞,c-myc和N-rasmRNA的表达均明显减少．GM3处理45min时,c-myc基因表达只为对照组的39．55％;GM3处理24h时,N-ras基因表达为对照组的30.48％．以上结果提示：GM3抑制SMMC-7721细胞生长很可能是通过改变癌基因表达来实现的．     

GM_3抑制人白血病J6－2细胞肌醇磷脂代谢循环

采用无载体￣（３２）Ｐ和［￣３Ｈ］肌醇标记磷脂,观察了促分化剂神经节苷脂ＧＭ＿３对人单核样白血病Ｊ６－２细胞肌醇磷脂代谢的影响,ＧＭ＿３抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入Ｊ６－２细胞磷脂酰肌醇（ＰＩ）,促进［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入磷脂酰肌醇－４,５－二磷酸（ＰＩＰ＿２）,抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ掺入磷脂酸（ＰＡ）,抑制［￣３Ｈ］肌醇掺入三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）．ＧＭ＿３的上述作用均为浓度依赖性的,随ＧＭ＿３浓度的提高而增强．上述结果表明,ＧＭ＿３抑制Ｊ６－２细胞的肌醇磷脂代谢循环．     

神经节苷脂GM_3对人单核样白血病J6-2细胞中磷脂代谢的影响

用50μmol/L GM_3处理J6-2细胞6天,经组化与细胞学检查,证实细胞沿单核巨噬细胞途径分化。以[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱冲激(Pulse)后,将洗净的细胞进行Folch分配。取下相进行薄层层析,再做放射自显影。结果表明:GM_3的处理能促进[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱向磷脂酰胆碱的参入,而抑制向其他磷脂组分的参入。用[CH_3-~(14)C]胆碱冲激的Folch分配上相含水溶性胆碱代谢物,经TLC,结果表明CM_3的处理使[CH_3-~(14)C]胆碱向CDP-胆碱的参入减少。本研究证实,GM_3能调节J6-2细胞的磷脂代谢,其调节机制值得研究。     

神经节苷脂GM1对帕金森模型小鼠黑质细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察神经节苷脂GM1对帕金森模型小鼠黑质细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其预防帕金森病的机制。方法成年C57-BL雄性小鼠分为正常对照组、模型组和神经节苷脂GMI治疗组。应用TUNEL法和免疫荧光组织化学染色技术观察各组小鼠黑质神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达情况。结果TUNEL、Bcl-2和Bax阳性神经元主要位于黑质致密部。模型组黑质神经元凋亡数明显多于正常对照组,神经节苷脂GM1组黑质神经元凋亡数明显少于模型组。在模型组Bcl-2阳性神经元和Bax阳性神经元的数量均较正常对照组明显增多;在神经节苷脂GM1组Bcl-2阳性神经元的数量较模型组明显增多,但Bax阳性神经元的数量较模型组明显减少。结论神经节苷脂GM1可能通过增强黑质神经元内Bcl-2基因表达及抑制Bax基因表达的途径抑制黑质神经元的凋亡。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的:通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法:实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素+奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC-7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果:体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC-7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素+奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性(P>0.05),细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加(P<0.01),同时重组人类生长激素+奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素+奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论:体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的：通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法：实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素＋奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC．7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果：体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC．7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素＋奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性（P〉0．05）,细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加（P〈0．01）,同时重组人类生长激素＋奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素＋奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论：体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

Establishment and Partial Characterization of a Continuous Human Malignant Glioma Cell Line: NG97

1. A human glioma cell line, NG97, was established from tissue obtained from a patient diagnosed with a grade III astrocytoma.2. The NG97 cell line has been subcultured for more than 100 passages in standard culture media without feeder layer or collagen coatings.3. NG97 cells grow in vitro as two subpopulations with distinct morphological appearance: stellate cells with pleomorphic nuclei, and small round cells with few processes. The cells have a doubling time of about 72 h and a plating efficiency of 1%. The injection of NG97 cells into congenitally athymic mice induced the formation of solid tumor masses that could be retransplanted every 4 weeks. The cells obtained from tumor mass when cultivated in vitro had a morphology comparable to those of the initial culture.4. This cell line may prove useful for cellular and molecular studies as well as in studies of gliomas treatment.     

人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用(英文)

卵泡刺激素(FSH)对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生长作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同。关于表皮生长因子(EGF)对腔前卵泡的作用尚不确切。本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素(rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用。利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞-颗粒细胞复合体(OGCs)(Fig.1)。体外每孔30~40个培养物并分别添加胎牛血清(FBS)、rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相。结果显示rechFSH显著促进小鼠OGCs及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强(p<0.05)(Fig.2)。但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内同期生长对照组(p<0.05)(Fig.3)。说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。     

IL—3对人红白血病细胞株珠蛋白基因表达的影响

运用ＲＴ－ＰＣＲ等方法研究了白细胞介素－３（ＩＬ－３）对人类红白血病细胞株（Ｋ５６２细胞）内珠蛋白基因表达的影响,结果显示,Ｋ５６２细胞在诱导前,不能表达β－珠蛋白基因,用ＩＬ－３５０ｕ／ｍｌ诱导Ｋ５６２细胞３ｄ和５ｄ后,可检测到β珠蛋白基因的转录产物,而α珠蛋白基因和γ－珠蛋白基因在诱导前后无明显变化,同时,用苯肼当色细胞的方法检测到：Ｋ５６２细胞在诱导前蓝染细胞数极少,ＩＬ－３诱导Ｋ５６２细胞     

凝血因子VII基因表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达

凝血因子Ⅶ是凝血块形成的起始关键分子之一,它对外源性凝血途径的启动具有重要的作用。为表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ,通过PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA,并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中,构建重组表达载体pIRES-FⅦ,测序正确后用脂质体介导的方法转染BHK-21细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株,收集无皿清培养上清,进行SDS-PAGE、Western blot和活性鉴定。结果成功构建了重组表达载体pIRES-FⅦ,实现了其在BHK-21细胞中的表达,且表达产物具有促凝活性。重组人凝血因子Ⅶ在哺乳动物细胞中的成功表达,为整体止血剂的研究奠定了基础。     

多发性骨髓瘤细胞株ARH—77恶性相关基因hMMTAG2的克隆和序列分析

为从人类多发性骨髓瘤细胞株中克隆新的恶性相关基因 ,构建人类多发性骨髓瘤细胞株ARH 77cDNA文库。从ARH 77细胞中提取mRNA并逆转录合成双链cDNA ,经PCR扩增后 ,插入表达载体 ,得到ARH 77细胞cDNA表达文库。将文库菌落印迹至尼龙膜 ,分区培养提取质粒DNA ,建立基因池 ,并分别转染NIH/ 3T3细胞。经G418筛选并计集落数 ,选择克隆数最多的基因池进入第二轮。如此反复进行。通过测序 ,排除所有已知的癌基因、抑瘤基因、细胞因子及其受体 ,获得了有转化活性的cDNA克隆A6 2 17。进一步使用RACE技术对 5′端进行快速扩增 ,获得全长为 130 0bp的cDNA序列 ,该基因由 8个外显子组成 ,编码产物为 2 6 3个氨基酸组成的多肽链。将该基因暂时命名为多发性骨髓瘤转化基因 2 (tumor associatedgene 2fromhumanmultiplemyeloma ,hMMTAG2 )。该基因定位于人类染色体 1q42 .13。生物信息学分析发现 ,hMMTAG2编码有多个蛋白激酶的磷酸化位点、N 肉豆蔻酸化位点及核定位信号 ,提示该基因的表达产物可能是细胞核内的一种信号分子。     

基质金属蛋白酶MMP-26能有效促进人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3浸润能力

胚胎植入过程中,滋养层细胞浸润与肿瘤的迁移过程非常相似,但显著的区别在于前者是受严格调控的有节制的浸润,基质金属蛋白酶(MMPs)的许多成员在其中起重要的作用.MMP-26是近年来发现的MMPs家族的新成员,它在滋养层细胞中的作用所知甚少.利用国际常用的人滋养层细胞模型——人绒毛膜上皮癌细胞系(JEG-3)作为体外实验模型,探讨MMP-26在人滋养层细胞浸润调节中的作用.将含有MMP-26全长cDNA的pCR3.1质粒转染到JEG-3细胞中,获得过量表达MMP-26基因的稳定细胞系JEG-3/MMP-26;细胞浸润分析表明JEG/MMP-26细胞的浸润能力较母本细胞明显增强;RT-PCR和明胶酶谱分析显示JEG-3/MMP-26细胞中MMP-9的表达和分泌水平提高;双荧光免疫细胞化学进一步显示MMP-26和MMP-9蛋白在细胞中有共定位现象.上述结果表明MMP-26能有效促进人滋养层细胞浸润,其作用可能是通过与其他MMP分子(如MMP-9)的协调来实现的.     

表皮生长因子受体调控的人鼻咽癌细胞系CNE2分泌蛋白质的筛选

为筛选表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)调控的鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞的分泌蛋白质,揭示EGFR在NPC发病中的作用机制,采用无血清培养法培养NPC细胞系CNE2,并用转化生长因子(transforminggrowthfactor-α,TGF-α)刺激CNE2细胞24h作为实验组,对照组CNE2细胞不用TGF-α刺激.超滤法脱盐并浓缩两组细胞的培养上清制备分泌蛋白,采用双向凝胶电泳技术(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE)分离两组细胞的分泌蛋白,PDquest图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白.建立了实验组和对照组CNE2细胞分泌蛋白的2-DE图谱,图像分析识别了22个差异蛋白质点,质谱鉴定了8个非冗余蛋白质,其功能涉及肿瘤细胞侵袭转移、细胞凋亡和增殖,为进一步揭示EGFR在NPC发病中的作用及其机制奠定了基础.