人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、TUNEL/胰岛素双重免疫荧光染色,显微镜下观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,GLP-1治疗组小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。在对照组小鼠胰腺组织切片中观察到较多凋亡β细胞,而在GLP-1治疗组却很少见到。GLP-1治疗组小鼠胰岛β细胞凋亡率与对照组小鼠相比明显下降(0.07±0.01%vs0.26±0.02%,P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并抑制β细胞凋亡。     

人GLP-1(7-36)酰胺促进非肥胖型糖尿病小鼠胰腺导管上皮细胞分化

目的 探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰腺导管上皮细胞分化与增殖的影响.方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织分别做导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色、胰腺十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)/胰岛素双重免疫荧光染色及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCK双重免疫染色,显微镜下观察胰腺导管上皮细胞的分化和增殖.结果 在GLP-1治疗组胰腺导管上皮中可见较多胰岛素阳性细胞及PDX-1/胰岛素双阳性细胞,而在对照组几乎看不到;GLP-1治疗组小鼠BrdU阳性的导管上皮细胞的百分数与对照组小鼠相比明显增高(P ＜0.001).结论 人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可促进胰腺导管上皮细胞分化与增殖.     

2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的相关因素研究进展

随着人们对胰岛β细胞功能障碍导致2型糖尿病发生、发展认识的深入，胰岛β细胞凋亡问题也渐渐受到临床关注。与1型糖尿病自身免疫介导的凋亡不同，多种复合因素参与了2型糖尿病胰岛β细胞的凋亡过程。了解胰岛β细胞凋亡的本质与影响因素有助于人们制定更为合理有效的2型糖尿病防治方案。     

胰高糖素样肽GLP—1（7—36）NH2对体外培养的新生大鼠胰岛细胞 …

目的与方法 探讨ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２对培养的新生大鼠胰岛细胞胰岛素和胰高 糖素释放的影响，并以Ｆlro－３为探针，用５７０型粘附式细胞仪研究ＧＬＰ－１（７－ ３６）ＮＨ２对β细胞内Ca＾２＋的作用。结果在含１１．２mmol/Ｌ葡萄糖的ＫＲＢＢ液中孵育１h,ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２在１０＾－１１～１０＾－８mol/Ｌ使胰岛细胞胰岛素分泌无明显增加，但在含葡萄糖５．６、１１．２和１６．７mmol/Ｌ时，胰岛素分     

霉酚酸酯对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的:探讨霉酚酸酯(mycopbenolate mofetil,MMF)对非肥胖性糖尿病小鼠non-obese diabetic mice,NOD)胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用.方法:8周龄NOD雌性小鼠22只分为两组,每组11只,干预组给予霉酚酸酯30 mg/kg灌胃,对照组给予等量的生理盐水.两组小鼠饲养期间定期监测其血糖水平.30天实验结束时,每组取5只小鼠处死,行HE染色观察胰岛炎程度,TUNEL法检测胰岛β细胞凋亡率.余下小鼠观察到发生精尿病或20周处死.结果:干预前两组小鼠血糖均在正常水平.干预期间和干预期满后,MMF干预组小鼠血糖与生理盐水对照组之间无差异(P>0.05);MMF组胰岛炎严重程度及胰岛β细胞凋亡率较生理盐水对照组明显减轻(P<0.01).结论:MMF可以在早期抑制NOD小鼠的胰岛炎和胰岛β细胞凋亡,从而减轻胰腺损伤.如果在糖尿病发病前给予MMF可能延缓或防止糖尿病的发生.     

艾塞那肽对2 型糖尿病大鼠糖脂代谢和胰岛超微结构的影响

目的 研究胰高糖素样肽-1 受体激动剂艾塞那肽对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和胰岛细胞的影响及其作用机制。方法 健康雄性SD 大鼠随机分为正常对照组（C 组6只）、正常对照+ 艾塞那肽处理组（C+E 组6 只）、糖尿病组（D 组5 只）以及糖尿病+ 艾塞那肽处理组（D+E 组5 只）,由高脂饮食加小剂量STZ 诱导成2型糖尿病后,D+E 组以及C+E 组大鼠予艾塞那肽,5μg,腹部皮下注射,1 次/d 干预;8 周后,分别测定各组大鼠体重、FBG、空腹胰岛素（FINS）、稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）以及血脂谱。同时行透射电子显微镜观察大鼠胰岛组织超微结构改变。结果 D+E 组大鼠FBG、FINS、TG、TC、LDL、HOMA-IR水平均明显低于未予干预的D 组大鼠（均P＜0.05）,ISI 则显著高于D 组大鼠（P＜0.05）。超微结构研究,与D 组大鼠比较,D+E 组大鼠胰岛β 细胞数量增加,形态较规则,胞质分泌颗粒增加,颗粒密度较正常;仅见少量线粒体肿胀,结构模糊。内质网结构无明显破坏。结论 艾塞那肽能显著改善2型糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱,对其残存的胰岛细胞具有明确的保护作用。     

胰高糖素样肽1对大鼠胰岛功能影响的研究

目的:研究胰高糖素样肽-1(GLP-1)对大鼠胰岛功能的影响,探讨GLP鄄1在糖尿病治疗中的作用。方法:①GLP鄄1(10nmol/L)与原代培养的大鼠胰岛共孵育1天、3天和5天后,分别行葡萄糖刺激下的胰岛素分泌试验(GSIS),在试验的0、10、20及60min依次收集细胞培养上清液,放免法检测胰岛素水平的变化。或与GLP鄄1共育1天、3天、5天后分别收集各组胰岛细胞,RT鄄PCR法检测各组胰岛素基因表达的变化。②分别予不同浓度的GLP鄄1(0、1、10、102和103nmol/L)与大鼠胰岛细胞瘤细胞RINm5f共育24h,及GLP鄄1(10nmol/L)与RINm5f共育24h、48h及72h,MTT法检测各组A值变化。结果:①与GLP鄄1共育后,大鼠胰岛基础胰岛素分泌量增加(P<0.05),GSIS试验中各时间点胰岛素分泌量均升高(P<0.05),胰岛素基因的表达量呈时间依赖性升高,即予GLP鄄1刺激5天后,胰岛素基因表达量最高;②与GLP鄄1共育后,随GLP鄄1浓度的增高及刺激时间的延长,RINm5f细胞MTT法中A值呈剂量及时间依赖性的增加。结论:GLP鄄1可促进大鼠胰岛细胞胰岛素基因的表达和蛋白的分泌,对大鼠胰岛细胞亦有明显的促增殖作用。     

GLP-1及其类似物在2型糖尿病治疗领域研究进展

胰升糖素样肽-1（GLP-1）及其类似物的研究应用是近年糖尿病治疗领域的研究热点。2005年,第一个GLP-1类似物（Exenatide）经美国FDA批准上市应用于临床,经过5年的临床实践,已作为糖尿病治疗新药受到医学界的广泛关注。2010年,GLP-1类似物及DDP-4抑制剂在中国上市。本文借此机会对GLP-1及其类似物在2型糖尿病治疗领域的研究进展进行综述,以使我国广大临床医生对这一新的糖尿病治疗药物获得全面认识。     

GLP-1与糖尿病的研究进展

胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)是30个氨基酸的多肽,是目前所知最强的葡萄糖依赖型的胰岛素分泌促进激素.GLP-1是第一个被描述的肠促胰岛素(incretin),是一种消化时由胃肠道系统释放出来的物质,促进葡萄糖依赖性的胰岛素从胰腺β细胞中释放出来.不仅如此,GLP-1还具有降低血浆中的胰高血糖素水平,降低胃排空的速率,促进饱食感和刺激胰岛β细胞的增殖与分化等多种生理活性,这些特性使许多学者认为GLP-1可能成为治疗2型糖尿病比较理想的药物,因此成为糖尿病治疗新药物研究的热点.本文就GLP-1与糖尿病的关系作一综述.     

GLP-1受体激动剂Exendin4对胰岛β细胞胰岛素和IAPP分泌模式的影响

目的：探讨GLP-1受体激动剂（GLP-1RA）Exendin4作用下胰岛β细胞的胰岛素及胰淀粉样多肽（IAPP）的分泌模式。方法：观察小鼠胰岛瘤细胞系MIN6细胞在不同浓度Exendin4作用不同时间后的细胞形态的变化;利用MTT实验检测MIN6细胞在不同干预后的细胞活性的变化;采用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,检测MIN6细胞在不同干预后培养液上清中的胰岛素和IAPP分泌量的变化;采用荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组MIN6细胞的胰岛素和IAPP mRNA表达水平的变化。结果：与正常对照组比较,Exendin4组的细胞数量增加,贴壁牢固,形态正常;细胞活性随Exendin4作用浓度以及作用时间的增加而显著增加,具有一定的浓度及时间依赖性;胰岛素和IAPP的分泌水平随Exendin4作用浓度以及作用时间的增加而显著增加,具有一定的浓度及时间依赖性,而IAPP/胰岛素的比值随作用浓度以及作用时间的增加而减小;胰岛素和IAPP mRNA水平均随Exendin4作用浓度以及作用时间的增加而上调,具有一定的浓度及时间依赖性,IAPP/胰岛素mRNA比值随作用浓度以及作用时间的增加而减小。结论：Exendin4作用于MIN6细胞可增加细胞数量和细胞活性,改善细胞状态,保护胰岛细胞功能;并且可引起胰岛素以及IAPP分泌水平增加,胰岛素和IAPP mRNA表达水平增加,而IAPP/胰岛素比值下降。     

胰高糖素样肽GLP-1(7-36)NH2对体外培养的新生大鼠胰岛细胞作用的研究

目的与方法探讨ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２对培养的新生大鼠胰岛细胞胰岛素和胶高糖素释放的影响,并以Ｆｌｕｏ－３为探针,用５７０型粘附式细胞仪研究ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２对β细胞内Ｃａ２＋的作用。结果在含１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的ＫＲＢＢ液中孵育１ｈ,ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２在１０~－１１－１０~－８ｍｏｌ／Ｌ使胰岛细胞胰岛素分泌增加和胰高糖素分泌减少;在１０~－９ｍｏｌ／Ｌ时,促胰岛素释放作用最大。在含２.８ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖时,ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２使胰岛素分泌无明显增加,但在含葡萄糖５６、１１．２和１６.７ｍｍｏｌ／Ｌ时,胰岛素分泌明显增加：在含葡萄糖１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ时,ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２使胰岛β细胞内Ｃａ~２＋升高明显。结论ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素释放作用和抑制胰高糖素分泌作用。     

GLP-1对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中FABP-4、CPT-1A水平的影响

目的 探讨胰高糖素肽-1(GLP-1)对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中游离脂肪酸结合蛋白4(FABP-4)、肉碱脂酰转移酶1A(CPT-1A)表达水平的影响。方法 采用传统“鸡尾酒”法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并在分化过程中加入1×10-8mol/L GLP-1进行干预。在诱导分化的第6、8天,用油红O染色检测细胞内脂质聚集,RT-PCR及Western blotting法检测FABP-4、CPT-1A的mRNA及蛋白水平。 结果 ①在诱导分化第6天,大约40%的细胞出现脂滴聚集,第8天时大约80%的细胞已分化成熟;②油红O染色结果显示,与对照组相比,GLP-1组脂质总量在分化第6天略有增加,在分化第8天轻度下降(P>0.05);③RT-PCR结果显示, GLP-1组FABP-4的mRNA水平在分化第6、8天都明显增加;CPT1-A的mRNA水平在分化第8天增加明显(P<0.05);④Western blotting结果显示,GLP-1显著增加了FABP-4的蛋白表达(P<0.05)。对照组CPT-1A的蛋白水平在分化第6、8天无显著变化;而GLP-1组CPT-1A蛋白水平显著增加,尤其在分化第8天,与对照组相比增加了3.57倍(P<0.01)。结论 在3T3 L1前脂肪细胞分化过程中,GLP-1显著促进了FABP-4和CPT-1A的mRNA及蛋白水平,提示GLP-1同时促进脂肪细胞对游离脂肪酸的吸收及分解,能有效改善游离脂肪酸介导的胰岛素抵抗。     

胰高血糖素样肽1 (GLP-1)对心血管疾病治疗的研究进展

 胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)是肠道L细胞分泌的一种由30个氨基酸组成的多肽,具有促进胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌和刺激胰岛β细胞增殖等生物学作用。GLP-1在体内主要以GLP-1(7-36a)的形式存在。GLP-1(7-36a)的半衰期很短(1～2 min),可被二肽基肽酶4(diaminopeptidyl peptidase-4, DPP4)迅速降解为GLP-1(9-36a),因此GLP-1(9-36a)是GLP-1在循环中的主要存在形式。GLP-1不仅具有调控血糖和能量代谢的作用,还有保护心肌细胞、改善心脏功能和舒张血管等作用,直接或间接发挥心血管保护效应。心血管疾病是2型糖尿病的常见并发症和首要死因。目前基于GLP-1的2型糖尿病药物研发主要有两个方向:可以抵抗DPP4降解的GLP-1受体(GLP-1R)激动剂和DPP4抑制剂。虽然,这两种方法均可延长内源性GLP-1的作用,但显然未兼顾GLP-1(9-36a)对心脏的保护效应。本文通过总结GLP-1(7-36a)及GLP-1(9-36a)在心血管效应方面的异同及其生理学研究进展,探讨GLP-1应用于心血管疾病治疗的新策略。     

气相色谱法测定重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）注射液中丙二醇含量

目的：建立气相色谱（GC）法测定重组人胰高血糖素类多肽-1（rhGLP-1）（7-36）注射液中丙二醇的含量。方法采用石英毛细管柱（30 m×320μm,0.5μm）,载气为N2,流速：1ml/min,进样口温度为230℃,检测温度为250℃,进样量为1μl;结果丙二醇的浓度在0.5～1.5 mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系（r=0.9991）,平均回收率（n=9）为100.2%;不同色谱条件下,耐用性良好,RSD均＜2.0%。结论该方法快速、简便、重复性好,适用于rhGLP-1（7-36）注射液中丙二醇含量的测定。     

胰高血糖素样肽2 (GLP-2)促进肠切除术后大鼠小肠黏膜增殖及其与时间的相关性

 目的  探索胰高血糖素样肽2 (glucagon-like peptide-2,GLP-2)促进肠切除大鼠术后残余小肠黏膜的增殖情况及其与时间的相关性。 方法  30只健康雄性SD大鼠随机分为实验组、对照组和空白组(每组10只)。实验组和对照组建立小肠切除术模型,实验组术后每日注射GLP-2、对照组和空白组注射等量生理盐水,分别在注射当天、术后第7天和第14天分批处死大鼠,随机选取残余肠黏膜行HE染色,并计算其肠绒毛高度、厚度及陷窝深度。结果  实验组较对照组、对照组较空白组在肠绒毛高度、厚度、陷窝深度的数值均有明显升高(P<0.05),且实验组第14天较第7天时数值亦有明显升高(P<0.05)。结论  GLP-2能有效改善肠切除大鼠术后小肠的黏膜增殖功能,且随着应用时间延长效能增加,并在2周后达到术前水平。     

艾塞那肽对糖耐量减低大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白4表达的作用

目的探讨胰高血糖素样肽．1（glucagon—like peptide-1,GLP-1）受体激动剂艾塞那肽对糖耐量减低（impaired glucose tolerance, IGT）大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter 4, GLUT4）表达的作用。方法54只Wistar大鼠,按照完全随机化分组方法分为正常糖耐量组（NGT组,18只）和IGT组（36只）,NGT组予常规饲料,IGT组予高糖高脂饲料。12周时IGT造模成功,成模后从IGT组随机抽取18只大鼠设为艾塞那肽干预组（Ex组）,每日2次皮下注射艾塞那肽（5μg／kg）;另外18只设为IGT对照组。NGT组及IGT对照组均给予等体积生理盐水皮下注射。于干预前和干预后4周分别测空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）和餐后2h血糖（2hBG）;实时荧光定量PCR检测骨骼肌GLUT4mRNA的表达,免疫组织化学法检测骨骼肌GLUT4蛋白的表达。各组间两两比较采用单因素方差分析（ANOVA）,LSD—t检验。结果干预前,与NGT组比较,IGT对照组及Ex组2hBG增高,骨骼肌GLUT4mRNA表达降低,差异有统计学意义（均P〈0．05）。IGT对照组及Ex组骨骼肌细胞内棕黄色着色较少,NGT组着色广泛,着色颗粒较多。艾塞那肽干预4周后,与同期IGT对照组及干预前Ex组比较,Ex组2hBG下降,骨骼肌GLUT4mRNA表达增高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。干预后Ex组较同期IGT对照组及干预前Ex组骨骼肌细胞内棕黄色着色增多,主要表达在细胞浆中。结论艾塞那肽可上调骨骼肌GLUT4的表达。促进骨骼肌葡萄糖的摄取,降低餐后血糖。