VD_3结合蛋白的分离纯化

目的 :纯化VD3 结合蛋白 (DBP)。方法 :利用DBP的相对分子质量及电荷性质 ,分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白 ,SDS PAGE鉴定纯度 ,并进行活性分析。结果 :分离到相对分子质量为 5 80 0 0的蛋白质 ,SDS PAGE呈单一区带。结论 :成功分离纯化出DBP。     

人子宫颈粘液抗菌活性多肽的分离纯化

目的　从人子宫颈粘液分离纯化新的抗菌多肽。方法　用 5 %乙酸提取人子宫颈粘液可溶物 ,经电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验发现 ,子宫颈粘液酸溶性提取物有一条主带对大肠杆菌耐氨苄株 ML - 35 P有强抗菌活性 ,命名为 HCP。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术及洗脱电泳技术得到构成该主带的混合物 ,最后应用反相高效液相色谱技术分离纯化多肽。经 Tricine- SDS- PAGE鉴定其相对分子质量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果　从子宫颈粘液酸溶性提取物中纯化出一多肽 ,相对分子质量约为 14× 10 3,命名为 HCP- 1,具有抗耐药性大肠杆菌和绿脓杆菌的活性。结论　 HCP- 1可能是宫颈粘液天然免疫机制中的新的效应分子     

VD3结合蛋白的分离纯化

目的纯化VD3结合蛋白(DBP)。方法利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白，SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS-PAGE呈单一区带。结论成功分离纯化出DBP。     

小麦非致病菌脂多糖对小鼠免疫功能的影响

目的 :研究小麦非致病菌脂多糖 (Pantoea agglom erans lipoplysaccharide,L PSp)对小鼠免疫功能的影响。方法 :观察L PSp对小鼠免疫器官的重量、溶血素生成、碳粒廓清速率和 2 ,4 -二硝基氯苯迟发型超敏反应的影响。结果 :L PSp可增加小鼠免疫器官脾和胸腺重量 ,促进溶血素生成 ,提高小鼠网状内皮系统吞噬功能 ,以及显著抑制 2 ,4 -二硝基氯苯诱发的迟发型超敏反应 (P <0 .0 5或 P <0 .0 1)。结论 :L PSp对小鼠的免疫功能具有明显的增强作用     

亲和层析纯化重组中性粒细胞激活蛋白

目的:直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化重组麦芽糖结合蛋白-中性粒细胞激活蛋白(recombinantmaltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP)。用于支气管哮喘模型小鼠进行免疫调节实验。方法:IPTG诱导基因工程菌E.coli TB1(pMAL-c2X-nap)表达rMBP-NAP,离心收获细胞,过柱缓冲液重悬菌体并超声破碎,再次离心取上清和沉淀,SDS-PAGE分析rMBP-NAP可溶性;直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描分析纯化后rMBP-NAP纯度;蛋白定量试剂盒测定rMBP-NAP浓度。结果:IPTG诱导工程菌表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,相对分子质量约为57 kD,与预期结果一致;亲和层析法纯化rMBP-NAP纯度可达96.5%,浓度可达0.625 g/L。结论:用直链淀粉树脂亲和层析法,可纯化得到高纯度、高浓度的融合蛋白rMBP-NAP。     

孕血清中早孕因子的分离纯化

目的:通过离子交换层析和亲和层析的分离方法从孕血清中得到纯化的早孕因子(EPF),为进一步制备单克隆抗体做准备。方法:采用依次经过DEAE52阴离子交换层析,SP Sepharose F.F阳离子交换层析,Con ASepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl6B亲和层析分离纯化方案,最终得到具有早孕因子活性的Hepa-rin-Ⅱ成分,早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条带,相对分子量分别为46.30kDa和10.71kDa。结论:经过四步层析得到较纯的EPF样品,并认为EPF在血清中可以以单体和多聚体形式存在。     

虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定

目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。     

重组人钙调素对白芷细胞增殖及结核杆菌生长的影响

目的 :探讨重组人钙调素 ( rh Ca M)对白芷悬浮细胞及结核杆菌增殖作用的影响。　方法 :用基因重组技术获得人钙调素基因 ( h Ca M c DNA)重组表达质粒 h Ca M / p BV2 2 0 ,将其转化大肠杆菌 DH5α。用 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物。将纯化 rh Ca M加入悬浮培养的白芷细胞及结核杆菌培养基中 ,观察 rh Ca M对其增殖作用的影响。　结果 :含 h Ca M / p BV2 2 0的重组菌经温度诱导可高效表达Ca M蛋白 ,经 15 % SDS-PAGE分析 ,可观察到一相对分子质量为 170 0 0的表达条带 ,Western blot结果证实 ,此表达条带可与标准鼠抗 Ca M Mc Ab起特异反应。每 1L菌液经 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化可获Ca M纯品 3～ 4mg。rh Ca M对白芷细胞增殖作用影响的研究结果表明 ,rh Ca M在低细胞密度培养条件下对白芷细胞有促进增殖作用 ,效果高于标准植物 Ca M。本研究同时还发现一定浓度的纯化 rh Ca M( 1、10μg/ ml)可促进牛型结核杆菌的生长。　结论 :rh Ca M对植物细胞和细菌均有细胞外促增殖作用     

中华眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2的提纯

目的:探索从中华眼镜蛇蛇毒中快速分离提纯磷脂酶A2(PLA2)的方法方法:应用ARG-CY仿生配基,用亲和层析一步法从中华眼镜蛇蛇毒粗毒中纯化PLA2,用SDS-PAGE进行纯度鉴定及相对分子质量测定,并测定其溶血活性.结果:纯化后获得的PLA2电泳图谱呈单一区带,相对分子质量为14 000,活性为182 μmol/(min·mg).产物具有溶血活性.结论:仿生亲和层析法提纯LPA2操作简单,纯度高,为一高效实用的方法.     

用羟基磷灰石柱层析纯化抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体(简报)

本文比较了用羟基磷灰石柱层析和DEAE-52纤维素两种方法从小鼠腹水液中纯化抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的结果。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,紫外分光光度定量分析及放射免疫分析法检测抗体免疫活性的结果表明:(1)羟基磷灰石柱层析法得率高,未见有其它杂蛋白污染,纯化前后的免疫活     

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠NK细胞活性的影响

目的:提取低分子量免疫活性地龙肽,并就其对自然杀伤(NK)细胞活性的影响进行体外研究。方法:采用粗分离、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法分离纯化地龙肽;采用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性。结果:用凝胶过滤层析分离得到地龙肽T(分子量8000～20000,含有7种蛋白)。用离子交换层析又将地龙肽T分为A、B两部分,地龙肽A由5种蛋白组成,其中有4种分子量在13000以下;地龙肽B仅由一种蛋白构成,分子量约11000;地龙肽A和T可明显提高NK细胞的活性;地龙肽A、B和T皆可减弱环磷酰胺和地塞米松的免疫抑制作用,提高NK细胞的杀伤率。结论:地龙肽T、A单独应用即可以增强NK细胞的活性,并与IL-2具有协同作用;地龙肽T、A和B还可以拮抗地塞米松、环磷酰胺等免疫抑制剂。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定

目的研究HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌（DH5α/pcDNA3.1-pp65）的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析（依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析）对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8-0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础。     

一种新的沙蚕纤溶酶的纯化、活性鉴定及部分分子特性

目的：从沙蚕Nereis virens的体腔液中纯化、鉴定出一种新的纤溶酶,并对其进行分子表征。方法：运用离子交换层析、凝胶过滤层析等常规色谱方法纯化蛋白酶,采用纤维蛋白板检测法鉴定纤溶活性及活性分布曲线,利用2D-电泳方法检测此纤溶酶的表观分子量和等电点,并检测多种蛋白酶抑制剂对其酶活性的影响,以确定此蛋白酶的类型。结果: 获取一种新的具有极强纤维蛋白水解活性的单链蛋白酶,其相对分子质量为29000,等电点为4.5,其蛋白水解活性在pH7.8和45℃时表现为最高,并能被二异丙基氟磷酸（DFP）和甲苯磺酚氟（PMSF）完全性抑制,确证其为一种典型的丝氨酸内肽酶。结论：Nereis virens的体腔液中存在一种纤溶活性极强的单链丝氨酸内肽酶,该纤溶酶对预防和治疗血栓性疾病具有一定的药用价值。     

重组人骨形态发生蛋白—2在大肠杆菌中的表达及纯化

目的：用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白－2（hBMP-2)，方法：hBMP-2原核表达载体pYR(pBV220-hBMP-2)转化E.coli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化状态以及诱导时间与目的蛋白表达率的关系。离子交换层析DEAE和分子筛S－300纯化重组蛋白，自然缓降复性法对其复性。结果：SDS－PAGE显示在相对分子质量约为13000时出现明显外源蛋白表达带，而且当工程菌30℃活化至D600约为0．45时，其表达效率较高，在此状态下，温度诱导表达4h，目的蛋白表达量最高，以后随着时间的延长，表达量销下降，重组蛋白经纯化后植入小鼠肌肉，组织学观察到肌肉内大量间充质细胞增生以及软骨与骨形成，结论：重组hBMP-2具有良好异位成骨活性。     

一步离子交换层析法提纯牛视网膜可溶性抗原

目的：探讨一步离子交换层析法提纯牛视网膜可溶性抗原（S-Ag)。方法：利用DEAESepharoseFF凝胶及自动层析系统一步层析分离提纯牛视网膜S-Ag，聚丙烯酰胺凝胶电泳确定分子量，等电聚焦电泳确定等电点。结果：分析证实，S-Ag分子量52000，等电点6.20，利用提纯S-Ag成功地诱发出实验性自身免疫性葡萄膜视网膜类（EAU）动物模型。结论：经一步层析法提纯的S-Ag，可用于EAU动物模型的建立。     

牛胎盘中肝细胞生长因子的纯化

用高速离心、分段盐析、亲和层析、超滤和阴离子交换层析法，从牛胎盘中分离纯化出一种肝细胞生长因子。结果表明，此因子的最终得率为０．００５ｍｇ／ｇ牛胎盘，其分子量约为９９０００ｕ，它能强烈刺激原代培养大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成。提示利用自制的亲和层析凝胶，通过此提纯流程可以得到一种肝细胞生长因子。     

粉尘螨Der f2变应原的分离纯化及其特征

目的 用粉尘螨（Dermatophagoides farinae）代谢培养基浸液（Dff）分离纯化粉尘螨2类变应原（Der f2）。方法 Sephadex G-100层析、DEAE离子交换层析、PAGE等方法分离纯化Der f2,并对Der f2作SDS-PAGE测定和热稳定性测定。结果 从Dff分离纯化得到较纯Der f2,经SDS-PAGE测定其相对分子质量为14000,并经100℃加热15min后,仍保留50%～83.3%生物学活性。结论 从Dff中分离纯化的变应原,其物化性质符合Der f2特征。     

α-1酸性糖蛋白的分离纯化

本文报道α-1酸性糖蛋白的分离纯化。人血清经DEAE-Sephadex-A50和ReactiveBlue 2-Sepharose CL-6B两次柱层析即可获得纯化的α-1酸性糖蛋白。纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳、免疫电泳和琼脂双向扩散等证明,其纯度和特异性均符合要求。     

大鼠肝抑素纯化及其对再生肝细胞和肝癌细胞增殖的影响

制备大鼠肝抑素（ＨＣ）纯品，研究它对再生肝细胞和肝癌细胞体外增殖的影响。用ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阴离子交换层析法提取ＨＣ纯品，用液法检测ＨＣ样品的生物活性。结果：提取的ＨＣ纯品的ＳＤＳ电泳纯度达８９．５％， Ｍｒ １３．５ × １０３；该 ＨＣ纯品对大鼠再生肝细胞和人肝癌细胞体外增殖有明显抑制作用，抑制率分别为６３．１％（０．２ ｍｇ／Ｌ）和７７．７％（０．３ ｍｇ／Ｌ），但对人胃癌细胞增殖无抑制效应。结论：结果提示提取的ＨＣ是抑制再生肝细胞和肝癌细胞增殖的特异性因子。