革兰染色与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱应用于鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的价值

目的：探讨革兰染色与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱应用于鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的价值。方法：收集2021年1月1日—2022年12月31日期间在我院送检的儿童阳性血培养瓶153例作为研究对象,以转种培养后的鉴定结果为金标准,均采用革兰染色与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培养,分析革兰染色与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对阳性血培养病原菌的检出率、两种方式单独与转种培养后鉴定结果的一致性以及对儿童阳性血培养病原菌种类的诊断效能(灵敏度、特异度、准确度)。结果：本研究共收集153例阳性儿童血培养样本,其中单一菌样本143例(93.46%),两种菌样本10例(6.54%)。153例样本中,革兰阳性菌中以金黄色葡萄球菌最多(61.1%);革兰阴性菌中以肠杆菌科细菌最多(60.00%);153例儿童阳性血培养病原菌中以转种培养后的鉴定结果为判断标准,确定133例儿童阳性血培养病原菌为革兰阳性菌,20例为革兰阴性菌,其中革兰染色检测与转种培养结果诊断标准一致性尚可(Kappa=0.501);基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与转种培养结果诊断标准一致性好(Kappa=0.826);基质...     

VITEK-MS 质谱仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性血培养瓶微生物的实验研究

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（VITEK-MS）仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性培养瓶微生物方法的可行性与准确性。方法选取2016 年9 月-2016 年11 月安徽医科大学第一附属医院微生物室BacT/ALERT 3D全自动培养仪当天报告阳性的血培养瓶,差速离心法处理后直接用VITEK-MS 进行检测,并与常规鉴定法进行比较。结果150 例阳性培养瓶中,除13 例培养瓶中无细菌生长外,VITEK-MS 直接鉴定法正确检测出97 例（70.8%）菌株,错误检测出10 例（7.3%）菌株,30 例（21.9%）鉴定无结果。其中,革兰阴性杆菌正确鉴定出61 例（88.4%）菌株,鉴定无结果8 例（11.6%）;革兰阳性球菌正确鉴定出36 例（52.9%）菌株, 鉴定错误10 例（14.7%）,鉴定无结果22 例（32.4%）。结论利用VITEK-MS 直接鉴定阳性血培养瓶的方法准确性高、特异性强,革兰阴性杆菌鉴定准确率远高于革兰阳性球菌,且鉴定时间短（只需2 h）。该方法可以作为快速诊断阳性血培养瓶的新方法。     

MALDI-TOF MS在血流感染快速鉴定病原菌中的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）结合短时培养在快速鉴定血流感染病原菌中的应用。方法 对南京医科大学附属淮安第一医院微生物室2020年11月至2021年12月血培养报告阳性的标本进行革兰染色分类,并采用4h和6h短时培养法及MALDI-TOF MS技术快速鉴定感染病原菌并实时报送病区单元。结果 4h短时培养革兰阴性菌共351株,339株（96.6%）细菌鉴定到种属,与24h鉴定结果相同,11株无鉴定结果,1株鉴定错误;6h短时培养革兰阳性菌共216株,212株（98.1%）鉴定到种属,与24h鉴定结果相同,3株无鉴定结果,1株鉴定错误。跟踪321株革兰阴性菌的临床反馈,287例（89.4%）给予临床关注,89例（27.7%）进行药物调整,238例（74.1%）临床疗效良好;跟踪183株革兰阳性菌的临床反馈,其中150例（82.0%）给予临床关注,49例（26.8%）进行药物调整,131例（71.6%）临床疗效良好。结论 MALDI-TOF MS技术结合短时培养方法可有效提高血流感染病原菌鉴定准确率,改善血流感染患者抗菌药物治疗时机。     

MALDI-TOF-MS在儿童血流及尿路感染病原菌直接鉴定中的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速准确鉴定儿童血流及尿路感染病原菌方面的临床应用优势及操作关键点.方法 收集西安市儿童医院血培养报警阳性瓶382份,尿常规提示感染的尿培养标本314份.血培养阳性标本经过MALDI Sepsitype试剂盒处理后采用MALDI-TOF-MS直接鉴...     

鲍曼不动杆菌组鉴定方法的研究进展

鲍曼不动杆菌、pittii不动杆菌和nosocomialis不动杆菌统称为鲍曼不动杆菌组。由于表型相近,临床商品化方法并不能有效地鉴定它们。而准确地鉴定该菌种对临床诊断、治疗、预后相当重要。本文就现有的核酸分子生物学、蛋白分子生物学和免疫学等鉴定方法进行综述,结果表明分子遗传学方法对鲍曼不动杆菌组的准确鉴定很有必要。     

应用基质辅助激光解吸质谱的源内衰变及串联质谱技术测定重组人纽兰格林的C端序列

目的测定重组人纽兰格林的C端序列。方法用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF-MS）的源内裂解（ISD）及串联质谱技术（TOF—TOF,LIFT）,测定重组蛋白纽兰格林的C端序列。结果用该方法鉴定了重组蛋白纽兰格林C端序列的10个氨基酸残基。结论与现有的C-端序列测定方法比较,该方法简便快捷,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制。     

MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本的研究

目的 探讨用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定腹水培养阳性病原菌的方法.方法 收集2016年9～11月培养阳性的腹水标本202瓶,差速离心法富集菌体,利用MALDI-TOF MS对菌液进行直接鉴定.结果 202瓶样本中,196瓶为单菌株感染,6瓶为混合菌感染.单菌株感染中,菌株的种、属鉴定符合率分别为77.6％和93.4％.其中革兰阴性菌的种、属鉴定符合率为75.9％和91.1％;革兰阳性菌的种、属鉴定符合率为80.2％和95.3％;真菌的菌种、属鉴定符合率为12.5％和50.0％.6瓶混合菌感染样本,均鉴定出其中一种菌.结论 利用MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本中的病原菌,鉴定准确率高,检测时间短,为腹腔感染的快速诊断提供了有力的检测手段.     

复发性卵巢癌血清蛋白质质谱分析

目的 探讨复发性卵巢癌早期筛查的血清标志物.方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析21例复发性卵巢癌和18例完全临床缓解期卵巢癌的血清蛋白质质谱差异. 结果在Mr 1 000～12 000 D区段,Mr 1944、1980、2080、2661、2993、4450、4659、535...     

MALDI-TOF MS在感染性疾病诊断中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)用于临床感染性疾病的诊断具有操作简单、鉴定快速、通量高、灵敏度好、准确性高的优点,已成为目前临床微生物实验室方便快捷的实验技术。该文依据现有文献综述了MALDI-TOF MS在临床感染性疾病诊断中的最新应用,介绍了MALDI-TOF MS用于微生物鉴定的基本原理和现状,以及在抗生素耐药性检测和临床标本直接测试中的应用。     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱在微生物基因组研究中的应用

质谱已成为分子生物和生物化学研究中一个重要的分析工具,它的高通量、分析速度、准确性和灵敏度都是传统分析技术所不可比拟的。以基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱为代表的现代生物质谱技术是基因组研究的新兴技术,可用于核酸高通量的数量和质量分析。在微生物基因组研究中主要应用于微生物基因型鉴定、病毒准种分析,以及微生物基因组的进化研究、甲基化定量分析和突变检测。本文主要介绍基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术的原理及在微生物基因组研究的应用进展。     

磁珠分离结合质谱分析2型糖尿病肾病早期尿多肽谱

目的利用磁珠分离系统结合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）的方法获取糖尿病肾病（DN）早期的尿小分子差异多肽谱。方法按Mogensen标准,46例2型糖尿病患者经测3d平均微量白蛋白尿排泄率（UAER）后分组,其中正常蛋白尿组（DMl）24例,微量白蛋白组（DM2）22例,健康对照组（C）20例。DMl及DM2组肾小球率过滤（GFR）均大于90ml·min^-1·1．73m^-2。所有受试者留取空腹晨尿经采用弱阳离子（WCX）磁珠纯化试剂盒富集尿多肽,再采用MALDI-TOF-MS技术,获得尿液多肽谱,用ClinProtTM软件进行生物学比较分析。结果相对分子质量〈12000时,DMl组与C组相比,有15个蛋白质峰差异有统计学意义（均P〈0．01）。DM2组与C组相比,有1个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0．05）。DMl组与DM2组相比,有10个蛋白质峰差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论弱阳离子磁珠分离系统联合MALDI-TOF-MS蛋白质检测技术,能够获得健康人及DN早期尿液多肽谱,为进一步从中寻找早期诊断及评估药物干预效果需要的标志物提供前期的基础。     

结核患者感染非脱羧勒克菌的快速鉴定及药敏试验分析

目的 探讨结核(tuberculosis)患者感染非脱羧勒克菌(Leclercia adecarboxylata)的快速诊断和耐药状况。方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术筛选2019年6月至2022年6月在某医院就诊的结核患者标本,采用全自动微生物分析仪Phoenix^TM-100进行21种常规药物敏感性试验。结果 共收集26例非脱羧勒克菌的药敏结果,结果显示非脱羧勒克菌致病力较弱,对阿米卡星、头孢他啶、环丙沙星、多粘菌素、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦敏感率均为100.0%。对头孢吡肟、头孢噻肟、庆大霉素、亚胺培南、美罗培南、阿莫西林/克拉维酸钾、莫西沙星、复方磺胺、氨曲南敏感率均>80.0%。耐药性居前3位的是氨苄西林、头孢唑林和四环素,耐药率分别为26.9%(7/26)、23.1%(6/26)和19.2%(5/26)。结论 结核患者更易感染非脱...     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌鉴定中的应用研究

目的 探讨基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的可行性.方法 对广州市番禺区中心医院各个病区住院患者在不同部位分离的甲氧西林耐药及敏感的金黄色葡萄球菌,用Vitek 2 Compact的药敏卡AST-P639进行耐药性检测,用MALDI-TOF MS对菌株进行...     

PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究

背景　新型冠状病毒肺炎（COVID-19）在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒（SARS-CoV-2）含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的　应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）原理,在Clin-ToF Ⅱ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱（PCR-TOF MS）系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法　2020年2-3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1-2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份（咽拭子样本55份、痰液样本25份）及健康人群样本20份（均为咽拭子样本）作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据。建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶（SAP）消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比（SNP）确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准。对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比。结果　通过对PCR-TOF MS 模板条件的优化,模版量6 μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图。建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab（ORF1ab）基因和核壳蛋白（N）基因进行有效扩增检测。本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00%,高于实时荧光定量PCR法的75.00%,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00%的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果。对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00%和85.45%,高于荧光定量PCR法的64.00%和43.64%。阴性样本两种方法均未检出。结论　通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度。MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本。该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间。     

不同方法鉴定临床常见念珠菌性能评价

目的 评估表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析、真菌核糖体内转录间隔区序列测序三种方法鉴定念珠菌株的性能。方法收集分离自临床标本的63株念珠菌,采用表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析、真菌核糖体内转录间隔区序列分析三种方法进行念珠菌鉴定,以序列分析作为参考方法,比较表型鉴定与质谱分析对于念珠菌的鉴定性能。结果（1）真菌表型鉴定与测序鉴定结果一致率93.44%（57/61）。（2）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与测序鉴定结果一致率96.7%（59/61）。（3）表型鉴定与质谱分析鉴定结果差异无统计学意义。结论念珠菌生化表型鉴定可作为临床念珠菌株的常规鉴定方法,满足临床需要。当临床念珠菌株生化表型鉴定结果不确定时,应直接进行真菌rDNA ITS测序,不应加做质谱鉴定。有条件的实验室应首选MALDI-TOF MS质谱分析方法鉴定念珠菌以获得最大的鉴定效率,并可作为疑难菌种鉴定确诊方法。当质谱鉴定的结果不确定时,应直接进行真菌rDNA ITS测序,不应再用表型鉴定的方法确认鉴定结果。     

利用时间质谱检出312例6月龄内健康婴儿鼻咽部微生态菌群的分布特征

目的 利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术研究济南地区6月龄内健康婴儿鼻咽部微生态菌群分布特征,为鼻咽部微生态研究提供样本库信息。 方法 采集2019年11月至2020年4月济南地区312例6月龄内健康婴儿鼻咽拭子,增菌后,分离培养获得纯菌株;利用MALDI-TOF MS技术鉴定分离株到种置信水平;312例婴儿分为月龄≤2组、3月龄组、4月龄组和5月龄组,组间比较采用SPSS 22.0统计学软件,卡方或Fisher确切概率法统计分析。 结果 312例健康婴儿鼻咽拭子获得纯菌株741株,分属于25个属74种细菌。优势菌属为葡萄球菌属(31.6%)、棒杆菌属(30.8%)、链球菌属(18.9%)、莫拉菌属(8.6%)和狡诈球菌属(2.0%)。同时发现一些不常见菌种,例如缺陷乏氧菌、放射根瘤菌等。金黄色葡萄球菌检出率男婴(40.5%)高于女婴(26.4%),接近棒杆菌女婴(42.4%)高于男婴(27.4%)。4个年龄组中,假白喉棒杆菌检出率依次升高(10.8%、17.7%、18.9%、46.7%);肺炎链球菌检出率依次升高(2.2%、2.3%、4.1%、20.0%)。 结论 济南地区健康6月龄内婴儿鼻咽部微生态菌群以优势菌为主呈现多样化,MALDI-TOF MS是鉴定常见和不常见微生物菌种的快速、高通量技术手段。本研究可为济南地区儿童鼻咽部微生态研究提供有价值的样本库资料。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速检测产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的研究

随机收集54株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和24株对头孢菌素类抗生素敏感的肺炎克雷伯菌,通过PCR筛选ESBLs基因型,细菌与含有一定浓度的抗生素共同孵育一定时间后,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF MS)检测抗生素水解产物的特征峰.头孢噻肟与头孢曲松水解试验分别在反应1h与2h后,能够很好地鉴别产ESBLs的肺炎克雷伯菌;与ESBLs基因型检测相比,特异性为100％,敏感性为96.3％.MALDI-TOF MS在临床上能够快速准确鉴定病原菌,并且在细菌耐药性检测方面具有巨大潜力,MALDI-TOF MS酶解法能够快速检测产ESBLs肺炎克雷伯菌.     

中国汉族肢端恶性黑素瘤的差异蛋白质组学研究

目的：研究恶性黑素瘤与正常皮肤组织的蛋白质表达差异,寻找可能的恶性黑素瘤的诊断标志蛋白和治疗靶点。方法：选取经病理确诊的3例恶性黑素瘤切除标本,提取样本的总蛋白质,运用差异凝胶电泳技术分离蛋白质,DeCyder软件分析蛋白图谱的差异,以基质-辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)对差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果：质谱鉴定出差异蛋白质点12个,按功能分为4类,其中上调蛋白质3类,为14-3-3蛋白sigma、角蛋白和serpin B3;下调蛋白质1类,为白蛋白。结论：14-3-3蛋白sigma和serpin B3可能参与恶性黑素瘤的发生和发展,其差异表达提示了可能的恶性黑素瘤的发病机制。