一株纤维素酶产生菌SWU6菌株的筛选鉴定

为寻找高效纤维素降解菌,用于蚕沙及桑树废弃枝条等的加工处理,本研究以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,从西南大学校园土壤中分离纤维素降解菌。结合测定菌株在羧甲基纤维素钠平板上形成水解圈直径与其菌落直径的比值,及胞外酶活测定法(DNS法)筛选获得一株纤维素酶高产菌株SWU6。该菌株24h发酵液上清液经DNS法检测纤维素酶活力达到136.24U/mL。菌种鉴定结果表明SWU6菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌;过氧化氢酶、硝酸盐还原呈阳性;能水解淀粉、液化明胶。基于16SrDNA的系统发育分析结果表明SWU6菌株与登录号为NR 116240的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)处于进化树的同一最小分支。综合菌体及菌落形态特征、生理生化实验结果以及基于16SrDNA的系统发育分析,将SWU6菌株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。     

纤维素酶及纤维素酶产生菌选育的研究进展

<正>纤维素(cellulose)作为植物光合作用的主要多糖类产物,是高等植物细胞壁的主要成分,是公认的自然界数量最丰富、最廉价的可再生有机物质资源,据估计,纤维素生成量每年高达1000亿吨。我国每年     

纤维素酶高产菌的分离筛选与培养基优化

以纤维素粉为惟一碳源,从取自某木材公司木材堆放处的土样中筛选出92株能够分解纤维素的菌株,采用刚果红鉴别培养基进行鉴定,选取透明圈较大的菌株10株进行液体培养,并测定它们的酶活,获得一株酶活高的里氏木霉FYFJ928,其发酵水平为8.3 IU/mL.进一步研究培养基组分及培养条件对里氏木霉FYFJ928摇瓶发酵产纤维素酶的影响,在培养温度28 ℃,转速为200 r/min条件下进行培养,其最佳培养基组成:0.5%酵母粉,0.06%硫酸镁,0.5%磷酸二氢钠,2%葡萄糖,2%玉米浆,0.5%硫酸铵和8%纤维素粉,培养6 d后,其发酵水平可达到15.6 IU/mL,比优化前提高了近1倍.     

高产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究

为了从腐殖质土壤中筛选得到高产纤维素酶菌株,本试验进行了产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其产酶特性研究。首先用羧甲基纤维素钠(CMA-Na)培养基初步分离产纤维素酶菌株,再经过酶活复筛得到一株高产纤维素酶菌株B17。经过形态学和16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其发酵产酶条件和酶学性质进行初步研究。试验结果表明,菌株B17的最佳发酵条件为:培养时间3 d、发酵温度35℃、初始pH为6.0,该条件下测得CMC酶活达85.48 U/mL、FPA酶活达59.85 U/mL。酶学性质研究表明:菌株所产纤维素酶最适反应条件为温度50℃、pH为6.0,且具在30～60℃、pH为4.0～7.0范围均具有较高酶活。以上结果表明,本研究所得菌株B17具有较高的开发价值,可应用于农作物秸秆饲料的生产。     

一株瘤胃兼性厌氧纤维素酶产生菌的筛选

试验通过选择性培养基初筛、纤维素刚果红培养基鉴别和固体发酵培养复筛,旨在从瘤胃内容物中筛选出一株产纤维素酶活性较高的细菌。结果表明,试验共分离得到19株有纤维降解作用的菌株,其中R2、R3、R4、R5、R7、R14及R197株的降解作用显著,通过刚果红染色及对纤维素酶活、干物质(DM)消失率的测定,最终以R3效果最佳,其透明斑直径/菌落直径为6.27、羧甲基纤维素酶活(CMCase)为5.94 U/g,滤纸糖酶活(FPase)为1.12 U/g、DM消失率达到23.73%。结果提示,筛选出的瘤胃菌中以R3对稻草秸秆的降解作用效果最佳。     

一株纤维素酶产生菌及其对秸秆纤维素的降解作用

应用双层平板法，从腐败秸秆上分离筛选到产生高活性纤维素酶的野生菌株，经鉴定属于绿色木霉。通过在最适培养基和最适培养条件下产生的酶曲产品，对秸秆类天然纤维素有较强的降解作用。     

产纤维素酶芽孢杆菌的分离鉴定

采集健康奶牛的新鲜粪便,利用刚果红平板染色法分离筛选具有产纤维素酶活性的芽孢杆菌,并进行细菌菌落、形态和生化鉴定。结果从牛粪中分离出35株兼性厌氧的芽孢杆菌,利用刚果红鉴别培养基筛选出具有分解纤维素能力的菌株,并测定其水解圈大小,初步筛选出10株纤维素酶高产菌株,并对其进行了种属鉴定:一株为梭状芽孢杆菌,其余9株为芽孢杆菌属细菌。     

产纤维素酶菌株的筛选及酶学性质的研究

从牛粪有机肥中筛选获得1株产纤维素酶的菌种,刚果红法鉴定该菌株具有一定的水解纤维素的能力.显微镜镜检及菌落表型观察,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属细菌;对菌株所产纤维素酶进行酶学性质的研究发现该酶的酶促反应最佳作用温度是45℃,最佳作用pH为4.5～5.5.     

土壤中产纤维素酶菌株的发酵条件及酶学性质的研究

试验探究从青藏高原土壤中筛选出的高产纤维素酶菌株产酶能力,并对高产纤维素酶菌株进行发酵条件优化以及酶学特性研究.采用刚果红染色法(水解圈法)和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法考察菌株产纤维素酶能力,采用形态学和分子生物学进行菌种鉴定,采用单因素试验和正交试验探究发酵条件优化及酶学性质.结果 显示,筛选分离出一株高产纤维...     

羊源芽孢纤维素降解菌的筛选与H-7菌株鉴定

采用梯度稀释涂布平板法,以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,刚果红染色法(透明圈法),CMC和FPA酶活检测,明确其产酶活性,滤纸崩解试验,确定其降解纤维素的能力,并进行形态特征的观察和生理生化试验及16S rDNA序列分析,确定其相应种、属。结果表明,从羊瘤胃液分离得到的H-7菌株和暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)在所构建的系统发育树上的同一分支上,相似性超过99%,初步确定其为暹罗芽孢杆菌,其菌圈直径为2.01 cm,CMC酶活最高为0.18 U/ml,FPA酶活最高为0.44 U/ml,降解的滤纸条在第3 d就接近糊状。表明H-7菌株具有很强的产纤维素酶的能力。     

高效稳定纤维素分解菌群筛选及其分解特性研究

为获得能够在常温条件下(28~32℃)快速分解纤维素的微生物群体,利用限制性培养基从不同材料(森林腐殖质、腐烂的玉米秸秆、牛场料槽旁土样、麦垛底部土样和牛鸡粪混合储粪池中土样)的土样中筛选纤维素分解菌群,采用失重法测定菌群对不同纤维材料的分解能力及其在不同初始酸碱条件下的分解特性,用固体平板法对其菌株组成特性进行了初步探究。结果表明,不同材料筛选的纤维素分解菌群中,以牛鸡粪混合储粪池土样筛选的菌群分解效果最佳,该菌群48 h能将培养基内滤纸分解成糊状;6 d对滤纸、玉米秸秆、稻草秸秆、小麦秸秆、柞木木屑和杨木木屑分解率分别为94.95％,48.52％,45.05％,44.30％,11.00％,1.22％。在发酵液初始 pH 5~11范围内,对滤纸分解率超过84.59％,并将反应体系pH最终调节稳定在8.5~8.8;该菌群经分离纯化得到的8株真菌、6株细菌和3株放线菌相互接种构建的人工菌群不具备纤维素分解能力。筛选的纤维素分解菌群能够高效分解纤维素,同时对秸秆类木质纤维材料也具有较强的分解能力。     

新型秸秆分解菌的筛选和酶活性研究

取江苏省泰州市的农田土壤和木材厂腐烂的木材,经过刚果红染色和滤纸条培养基的反复筛选,筛选出能降解纤维材料的7种菌,通过生化鉴定和纤维素酶活力的测定,菌种分别是白腐真菌、绿色木霉、纤维单胞菌、肋生菌、单胞菌、黑曲菌、节杆菌等。     

Characterization of bioactive recombinant woodchuck interleukin-2 amplified by RLM-RACE and produced in eukaryotic expression system

Woodchucks (Marmota monax) infected with woodchuck hepatitis virus (WHV) represent a highly valuable laboratory model of hepatitis B virus (HBV) infection, in which molecular, immunological and pathological events occurring in infected humans are adequately reflected. To advance studies on T cell immune responses and propagation of hepadnavirus in T lymphocytes in this animal model, we determined the complete sequence of woodchuck interleukin-2 (wIL-2) cDNA by utilizing RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends (RLM-RACE) reaction. The wIL-2 sequence revealed a single open reading frame encoding for the predicted precursor protein comprised of a signal peptide and a 134 amino acid-long mature protein. The mature wIL-2 protein produced in the Escherichia coli expression system, designated as ec-rwIL-2, was found to be immunogenic but not biologically active. In contrast, precursor wIL-2 protein cloned into baculovirus transfer vector and expressed in Sf9 cells, designated as bac-rwIL-2, demonstrated functional competence. Further, bac-rwIL-2 was able to stimulate proliferation and to induce multiple daughter cell generations in woodchuck T cells, as well as facilitated the survival of standard IL-2-dependent mouse CTLL-2 cells in culture. Western blot analysis of bac-rwIL-2 using antibodies generated against ec-rwIL-2 revealed a single protein band of 15.5kDa. The availability of biologically active recombinant wIL-2 should facilitate ex vivo studies on functional competence of woodchuck T lymphocytes derived from different stages of hepadnaviral hepatitis and assist in recognizing their contribution to the pathogenesis of liver injury in the woodchuck model of hepatitis B.     

黑曲霉固态发酵饲用复合酶酶活分析

通过NTG和γ射线等物理化学手段诱变获得的产酶霉菌 ,其固态发酵的产物通常都是含有多种酶活性的复合酶。准确分析这些酶蛋白的活力及其在不同 pH值条件下的稳定性对于产品应用于实际生产是很有必要的。黑曲霉是美国FDA和我国农业部认证的安全菌株。黑曲霉mafic -0 0 5在固态发     

四翅滨藜AcDREB2转录因子编码基因的克隆及其表达

脱水应答元件结合蛋白(DREB)在植物响应盐和干旱胁迫中发挥重要作用.为研究DREB在耐盐碱耐干旱的先锋植物四翅滨藜(Atriplex canescens)中的功能及其应用前景,本研究设计了一对简并引物,通过PCR扩增和RACE法克隆得到四翅滨藜DREB转录因子编码基因AcDREB2.该基因cDNA全长为867 bp,共编码242个氨基酸.序列BLAST比对与同源性分析结果表明,该基因与其他植物的DREB具有较高的同源性.利用RT-PCR方法进行表达模式分析发现,AcDREB2在四翅滨藜叶中高丰度表达,且其表达受NaCl和渗透胁迫处理的快速诱导,表明AcDREB2参与了四翅滨藜的抗逆响应.     

四翅滨藜AcDREB2转录因子编码基因的克隆及其表达

脱水应答元件结合蛋白(DREB)在植物响应盐和干旱胁迫中发挥重要作用。为研究DREB在耐盐碱耐干旱的先锋植物四翅滨藜(Atriplex canescens)中的功能及其应用前景,本研究设计了一对简并引物,通过PCR扩增和RACE法克隆得到四翅滨藜DREB转录因子编码基因AcDREB2。该基因cDNA全长为867 bp,共编码242个氨基酸。序列BLAST比对与同源性分析结果表明,该基因与其他植物的DREB具有较高的同源性。利用RT-PCR方法进行表达模式分析发现,AcDREB2在四翅滨藜叶中高丰度表达,且其表达受NaCl和渗透胁迫处理的快速诱导,表明AcDREB2参与了四翅滨藜的抗逆响应。     

Performance of Sheep and Goats Fed Arctostaphylos canescens With and Without Polyethylene Glycol Supplementation

Arctostaphylos canescens Eastw. is considered an important element in the chaparral fire matrix and an invasive plant in coniferous forest plantations in California. Previous studies reported that dry matter intake of Arctostaphylos was low, presumably because of its low nutritional quality and high condensed tannin (CT) content. We hypothesized that intake and digestibility of Arctostaphylos could be increased by the provision of a tannin-complexing agent polyethylene glycol (PEG). This study determined the effects of PEG (MW 4000) supplementation on intake (I) and digestibility (D) of Arctostaphylos in goats and sheep. Polyethylene glycol was added to drinking water at four levels (0.3%, 0.15%, 0.05%, and 0%) of body weight (BW). Alfalfa pellets were used as diet supplement at 1.5% of BW. Nutritional quality of Arctostaphylos was low as compared with alfalfa pellets. Arctostaphylos crude protein (CP) levels were low (4.5% vs. 17.9%) and CT concentration was high (23.1% vs. 0%), whereas estimates of in vitro organic matter digestibility (OMD, 36.6%) and metabolizable energy (5.1 MJ · kg^?1 dry matter [DM]) in Arctostaphylos were almost half of those found for alfalfa pellets (70.3% and 9.5 MJ · kg^?1 DM). A curvilinear increase (P < 0.05) in nutrient intake (per g · d^?1 and per kg BW^0.75) was observed in goats and sheep as PEG levels increased, although a linear increase (P < 0.001) was observed in CP intake (g · d^?1) of Arctostaphylos by goats. Addition of PEG curvilinearly increased (P < 0.05) digestibility of DM, CP, and neutral and acid detergent fiber, but quadratically increased (P < 0.05) that of OM in goats and sheep. Incorporation of PEG in drinking water at the level of 0.15% BW in sheep and goats was effective to maximize inactivation of CT in Arctostaphylos. However, the success in adopting this practice as a useful tool in vegetation management programs will depend on the cost–benefit ratio.     

应用酵母双杂交技术筛选E种肠道病毒HY12-VP1蛋白的互作蛋白

为筛选E种肠道病毒HY12毒株编码VP1蛋白的宿主互作蛋白,本试验应用PCR技术扩增出HY12病毒VP1蛋白基因的完整序列,并将其克隆到酵母载体pGBKT7中,构建重组诱饵质粒pGBKT7-VP1。将重组质粒转化到酵母菌株AH109中,通过对比重组质粒组和空白质粒组不同时间点的D_(600)值,检测其对酵母细胞的毒性,并把含有诱饵重组质粒的酵母菌涂布在缺陷型培养基上验证其自激活活性。将转有诱饵载体的AH109菌株与表达MDBK细胞的cDNA文库的Y187菌株混合培养,通过缺陷型培养基筛选杂交成功的菌落,并应用序列测定与比对分析和酵母回返试验等方法进行验证。提取阳性菌落的酵母质粒,通过缺陷型培养基及菌液PCR等方法,筛选到12个潜在HY12病毒VP1的互作蛋白,该结果为研究牛肠道病毒(BEV)感染机制及病毒结构蛋白VP1的功能等打下基础。     

酵母双杂交筛选与胞内劳森菌LI0902互作宿主蛋白

为了鉴定胞内劳森菌(Lawsonia intercellularis,LI)外膜蛋白LI0902在细菌感染中的作用,本试验以胞内劳森菌疫苗DNA为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并成功构建诱饵表达载体pGBKT7-LI0902。将通过菌落PCR和测序验证的质粒转化酵母菌株Y2H Gold后,发现LI0902能在酵母细胞中正确表达,对酵母细胞无毒性,且无自激活活性。将含有pGBKT7-LI0902的酵母菌株Y2H Gold与猪肠上皮细胞系IPEC-1 cDNA文库菌株Y187进行杂交,筛选、验证、测序后得到3个与LI0902相互作用的宿主蛋白。本试验研究了胞内劳森菌与猪肠上皮细胞相互作用,为揭示增生性肠炎的致病机理提供了线索。