大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立

背景：研究表明Wistar和SD大鼠普遍为封闭杂交系而非近交系,有一定的遗传稳定性,同时也有一定的基因多态性,因此Wistar和SD大鼠之间的肝移植模型可能不是研究大鼠急性排斥反应的理想模型。 目的：建立Lewis-BN大鼠肝脏移植急性排斥反应模型。 方法：采用改良的“Kamada”二袖套法,分别进行同基因Lewis-Lewis间肝移植及Lewis-BN间肝移植。移植后3,5,7 d观察受体肝脏组织病理变化,测定谷丙转氨酶和总胆红素水平变化及大鼠存活时间。 结果与结论：同基因移植组大鼠无急性排斥表现,平均存活时间超过100 d,肝功能损害较轻。异基因移植组大鼠存活 (12.75±1.25) d,移植后第7 天肝脏病理检查有明显的排斥反应,肝功能损害较重,移植后各时相点谷丙转氨酶和总胆红素水平均明显高于同基因移植组(P < 0.05)。提示Lewis-BN大鼠肝移植组合为稳定的大鼠肝移植急性排斥模型,但近交系大鼠对手术耐受性差,建模难度大,熟练的显微外科技术和细心轻柔的操作是模型成功的关键。     

DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立：技术改良分析*☆

背景：国际上研究肝移植免疫耐受的基础动物模型是大鼠肝移植急性排斥反应模型,国际上公认的肝移植急性排斥反应模型鼠种配对方式为DA至Lewis大鼠、DA至BN大鼠及BN至Lewis大鼠,但由于鼠种缺乏和操作技术有待成熟的原因,国内较少引用以上鼠种配对方式进行该模型的建立。 目的：课题组在大量SD大鼠肝移植模型建立训练的基础上,采用DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,摸索DA至Lewis大鼠肝移植急排模型建立技巧和经验。 方法：通过改良二袖套法,以雄性DA大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,建立原位肝移植动物模型60只,受体大鼠术前1 d和术后1周内饲喂治疗剂量的他克莫司,1周后半量递减并停药,记录移植手术时间,观察受体大鼠的术后生存状况、手术成功率及生存期,分别于术后7,14,21,28 d处死受体大鼠,获取肝组织标本,苏木精-伊红染色,观察肝脏大体和镜下的病理学变化,进行急性排斥反应评分。 结果与结论：供肝冷缺血时间30~60 min,供体手术时间(18.5±4.0) min,供肝修整时间(7±3) min,受体手术时间(35.0± 7.3) min,无肝期为(13.0±3.0) min,手术成功率为98%,1周存活率为91.6%。术后2周随着他克莫司撤药,受体大鼠迅速发生急性排斥反应,于术后14~28 d死亡,平均生存时间为(20.85±0.71) d,中位生存时间为21 d。实验建立DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应动物模型需要以大量SD大鼠肝移植训练为基础进行,通过对二袖套法技术的改良和围手术期短期应用他克莫司有助于该模型的稳定建立。     

肝移植后急性排斥反应的诊断及防治

肝移植后急性排斥反应的诊断指标众多，有肝脏功能指标、D二聚体、血清中趋化因子IP10 和外周血淋巴细胞CXCR3，HSP70等。肝移植术后急性排斥反应的防治措施除了经典的免疫抑制治疗外，大黄素、雷公藤多甙、受体骨髓间质干细胞等都有可能是有前途的治疗药物或方法。肝移植术后急性排斥反应常见，早期诊断、综合防治是降低其危害的有效手段。了解肝移植术后急性排斥反应的诊断指标和方法，分析肝移植患者手术后预防治疗急性排斥反应的方法对肝移植术后的恢复起到至关重要的作用。     

大鼠双侧供肾左侧原位肾移植模型的建立及肾功能监测

背景：大鼠肾移植模型是移植免疫耐受、免疫抑制及器官库开发的重要实验手段。 目的：建立实验动物使用效率高,重复性好的耐受、急性排斥、慢性排斥肾移植模型,及移植肾功能动态无创检测方法。 方法：封闭群Wistar大鼠用于解剖及预实验。采用改良左侧原位肾移植术,分次顺序使用供体左肾与右肾,动静脉及输尿管端端吻合,7 d后行右侧肾切除。DA、Lewis大鼠分别为供受体作为急性排斥组。F344、Lewis大鼠分别为供受体作为慢性排斥组。Lewis大鼠自体肾移植组作为移植耐受组。观测大鼠双侧肾脏应用解剖,供肾热缺血时间、冷缺血时间,肾移植手术成功率。检测分析肾移植模型生存曲线、蛋白尿水平动态变化。 结果与结论：解剖观测大鼠43例,灌注肾29例,行单侧原位肾移植21例。移植肾热缺血时间小于10 s,冷缺血时间(47.2± 3.7) min,成功率85.7%(18/21)。其中自体肾移植3例,急性排斥肾移植3例,慢性排斥肾移植12例。改良的单侧原位肾移植术简捷经济,分次顺序使用供体左肾与右肾,不干扰受体腹主动脉及下腔静脉血流,重复性好。结果提示,建立的近交系大鼠移植耐受、急性排斥、慢性排斥肾移植模型生存曲线、蛋白尿动态检测具有显著性差异。     

直视下单人操作大鼠原位肝移植手术技巧探讨

背景：大鼠原位肝移植模型(rat orthotopic liver transplantation,ROLT)是一种非常有价值的模型,适用于肝脏移植器官保存、组织缺血再灌注损伤、移植免疫排斥反应及免疫耐受机制等方面的实验研究,稳定的肝移植动物模型是肝移植实验研究的基础。 目的：探讨直视下单人操作建立稳定大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧。 设计、时间及地点：观察实验,于2008-12/2009-03在福州总医院动物实验中心完成。 材料：成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠100只,体重200～250g,供体体重小于受体约20 g。 方法：采用“二袖套法”行大鼠原位肝移植,充分暴露腹腔,不翻动肝脏先行经腹主动脉供肝灌注;在体一步法离断肝上下腔静脉,不带膈肌环;吻合肝上下腔静脉采用单线连续缝合;橡皮泥固定法安装门静脉袖套,肝动脉不重建。术后充分补液维持大鼠血液动力学稳定。 主要观察指标：供体手术时间、供肝修整时间、受体手术时间、肝上下腔静脉吻合时间、门静脉袖套时间、肝下下腔静脉袖套时间、无肝期时间,受体1周、1月存活率,评价模型稳定性。 结果：供体手术时间(36.2 ± 2.5)min,供肝修整时间(12.2 ± 1.5)min、受体手术时间(45.6 ± 3.5)min、肝上下腔静脉吻合时间(10.1 ± 2.1)min、门静脉袖套时间(1.5 ± 0.9)min、肝下下腔静脉袖套时间(1.1 ± 0.6)min、无肝期(15.1 ± 2.2) min,手术成功率100％,1周存活率100％,1月存活率100%。 结论：稳定的麻醉、良好的供肝灌注、充分的暴露,熟练的显微外科操作及血管吻合技术,是确保模型成功的关键因素。     

大黄素对大鼠肝移植后急性排斥反应中肝细胞凋亡的影响

背景：抑制急性排斥反应的高效免疫抑制剂为器官移植所必需,较多的中药成分具有免疫调节作用。课题组在前期实验成功建立全血供大鼠肝移植模型基础上,初步发现大黄素对大鼠肝移植后急性排斥反应具有抑制作用,而且这种抑制作用可以通过多途径达到。 目的：观察大黄素对同种异体大鼠肝移植后早期急性排斥反应过程中肝细胞凋亡的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005-04/09在西安交通大学第一附属医院肝胆外科实验室完成。 材料：供体选用SD大鼠80只,雌雄不限;受体选用雄性Wistar大鼠80只,制备SD→Wistar大鼠全血供肝移植模型。 方法：将制备的80只大鼠模型按随机数字表法分为4组,每组20只。于移植后第1天开始按分组设计行腹腔内药物注射,模型对照组仅给予生理盐水,大黄素组给予大黄素1.5 mg/（kg?d）,环孢素A组给予环孢素A 3 mg/（kg?d）,环孢素A+大黄素组给予环孢素A 3 mg/（kg?d）+大黄素1.5 mg/（kg?d）。 主要观察指标：移植后第7天各组处死10只大鼠,取肝脏标本,观察移植肝组织急性排斥反应强度、肝细胞凋亡指数、Bcl-2蛋白的表达。余受体继续应用药物干预直至死亡,记录其生存时间。 结果：与模型对照组相比,大黄素组、环孢素A组、环孢素A+大黄素组大鼠移植后存活时间明显延长（P < 0.05）,以环孢素A+大黄素组存活时间最长。移植后第7天,与模型对照组相比,大黄素组、环孢素A组、环孢素A+大黄素组大鼠移植肝排斥反应强度、肝细胞凋亡指数显著降低（P < 0.05）,Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P < 0.05）;大黄素+环孢素A组大鼠的移植肝排斥反应强度、肝细胞凋亡指数显著低于其他3组（P < 0.05）,Bcl-2蛋白表达水平显著高于其他3组 （P < 0.05）。 结论：大黄素具有抑制同种异体大鼠肝移植急性排斥过程中肝细胞凋亡程度,改善肝功能的作用,与环孢素A具有一定的协同作用,同时又能减轻环孢素A引起的肝功能损害。     

冷保存方法构建的大鼠肝移植模型

背景：肝移植是终末期肝病最为有效的治疗手段,移植后胆病是制约肝移植发展的主要障碍之一。目的：建立稳定的大鼠冷保存肝移植模型,探讨冷保存对肝移植后肝脏胆管的影响。方法：120只雄性SD大鼠随机分为4组,按照组内随机配对的原则,体质量相对较轻的大鼠做为供体,供肝置于4 ℃ UW液中分别保存2,8,16 h后行原位肝移植。在“两套袖法”基础上,以“支架法”建立动脉化大鼠原位肝移植模型,供受体肝总动脉采用改良“支架法”进行端端吻合,重建肝动脉血供。记录移植手术时间及移植成功率,并分别于移植后3,7 d检测血清转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶水平,同时观察组织病理学改变。结果与结论：实验共完成55例次大鼠原位肝移植手术,手术成功率为93%。冷保存2,8,16 h组术后7 d存活率分别为100%(9/9),83%(10/12),73%(8/11)。随着冷保存时间的延长,肝功能及肝内胆管损伤加重,胆管组织病理学评分显示各组间差异有显著性意义(P < 0.05)。其中供肝冷保存16 h大鼠肝移植模型既有较高的手术存活率又有严重的胆管损伤,是研究冷保存对肝移植胆管病影响的较好模型。主要观察指标：移植手术时间,移植成功率。分别于移植后3,7d检测血清转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶及组织病理分析。结果：冷保存时间延长导致胆道功能严重损伤,胆管组织病理学评分显示各组间差异有显著性。结论：供肝冷保存16 h大鼠肝移植模型是研究冷保存对肝移植胆管病影响的较好模型。     

二袖套法建立恒河猴原位肝移植的稳定模型

背景：以往多应用大鼠建立肝移植模型对肝移植术后排斥反应进行基础研究,而灵长类非人类大动物建立肝移植模型能更接近临床肝移植的需求。 目的：探讨建立稳定的恒河猴原位肝移植模型的最佳方案。 方法：选用健康恒河猴进行同种异体原位肝移植20次,以10只雄性作为受体,10只雌、雄不限为供体,借鉴临床肝移植和各种动物模型建立的方法,使用二袖套法加肝动脉重建建立稳定的恒河猴原位肝移植模型。 结果与结论：20次恒河猴原位肝移植模型成功率90%,供肝切取时间(17±3) min,供肝修整时间(35±5) min,受体移植时间(133±45) min,受体无肝期(12±4) min,术后24 h存活率90%(18/20),72 h存活率为80% (16/20),1周存活率50%(10/20), 14只分别于术后2周内死于急性排斥反应,最长存活38 d,也死于急性排斥反应,所有受体均无门静脉血栓形成及胆道并发症发生。改进后的恒河猴同种异体原位肝移植模型具有操作简便、手术成功率高、重复性和稳定性好的优点, 是肝移植临床前期研究的较理想动物模型。     

大鼠帕金森森病模型的建立及其评价

目前越来越多的神经科学家致力于帕金森病的研究,并且已经建立了几种不同的动物模型（如小鼠、大鼠和猴子模型）。其中,大鼠模型应用最为广泛。本文对几种常用的大鼠帕金森病模型造模方法进行了简要的概述和评价。     

30%小体积肝移植大鼠模型的手术技巧及改良

背景：活体肝移植显著缓解了供肝短缺矛盾,如何使供者献出的肝量最小,同时受者得到最大的临床受益成为了目前的研究热点。 目的：探索一种简便、稳定的小体积肝移植大鼠模型的建立方法。 方法：以Kamada“二袖套法”非动脉化原位肝移植SD大鼠模型为基础并参考国内外文献,制作30%小体积肝移植模型。实验分为Ⅰ组为体内肝叶减除;Ⅱ组为体外肝叶减除组;Ⅲ组为改良后小体积肝移植模型。主要观察供体手术各阶段时间;移植后并发症和生存情况。 结果与结论：改良后模型较改良前的供肝获取时间和肝叶减除时间均显著缩短(P < 0.05)。Ⅱ组的供肝冷缺血时间显著长于Ⅰ组和Ⅲ组(P < 0.05)。改良后的小体积肝移植模型手术成功率较改良前显著提高(P < 0.05),改良后7及14 d存活率均高于改良前模型(P < 0.05)。改良模型较改良前生存时间延长了9 d。改良模型的手术总并发症例次较改良前组显著较少(P < 0.01)。提示采用此改良方法能建立稳定的30%小体积肝移植大鼠模型,而且在操作简便、减少并发症、提高手术成功率和术后存活率等方面有显著优势。     

大鼠原位肾移植模型的移植技巧及并发症预防

背景：大鼠器官移植模型可重复性好，可稳定模拟临床缺血再灌注损伤、急性排斥反应及慢性排斥反应等情况，是免疫耐受以及新型免疫抑制剂开发不可缺少的组成部分。 目的：探讨稳定的大鼠原位肾移植模型的移植技巧及并发症的预防。 设计、时间及地点：显微外科操作实验，于2002-10/2008-03在中山大学附属第一医院动物中心、蒙特利尔大学实验中心及河南省动物中心完成。 材料：健康、雄性、清洁级Wistar大鼠、SD大鼠，分别为供、受体；Lewis大鼠、F344大鼠，分别为供、受体。 方法：在Fisher的移植方法的基础上进行改良，采用大鼠左侧原位肾脏移植，动、静脉及输尿管均采用端端吻合方式，实验在德国产Carl Zeiss手术显微镜下进行。 主要观察指标：监测移植后大鼠一般情况及尿量，大鼠尿量 < 1 mL认为移植肾脏功能差，活检确认原因。 结果：共实施大鼠原位肾移植500次。供体手术时间（15.5±2.1）min，受体移植时间（40.6±5）min，移植成功（移植后存活 > 5 d）率93.2%（466/500），一组慢性排斥模型大鼠达到长期存活（> 180 d）。 结论：施行多次肾移植可建立稳定、快速的大鼠原位肾移植模型，娴熟的动物外科解剖和精湛的显微外科技术是预防移植后并发症的先决条件。     

碱性磷酸酶对大鼠自体原位肝移植后急性肺损伤的保护作用★

目的: 肝移植术后并发症不仅包括肝脏本身的损害，亦能导致肝外多个器官功能衰竭，其中肺脏是较易且较早受累的器官。文章通过建立大鼠自体原位肝移植模型，观察肝移植术后肺部急性损伤情况及碱性磷酸酶的干预作用。 方法:①实验于2007-05/10在南方医科大学附属南方医院实验动物中心、消化内科实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。②选用SD大鼠24只，按随机数字表法分为对照组、自体原位肝移植组和碱性磷酸酶组，每组8只。后两组建立大鼠自体原位肝移植模型，对照组开腹后游离肝叶后即关腹，碱性磷酸酶组于肝脏恢复血供前5 min自舌静脉注入碱性磷酸酶。③手术结束后2 h检测肺组织髓过氧化物酶活性、丙二醛含量、肺组织表面活性蛋白A含量及肺组织干湿重比值，并行肝脏、肺脏病理检查。 结果:大鼠24只全部进入结果分析。①自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均高于对照组（P﹤0.01），碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均低于自体原位肝移植组（P﹤0.01）。②碱性磷酸酶组、自体原位肝移植组肺组织表面活性蛋白A含量较对照组低，而碱性磷酸酶组较自体原位肝移植组有所升高。③自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值均低于对照组（P﹤0.01），碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值高于自体原位肝移植组（P﹤0.05）。④病理结果显示，肝移植后大鼠肝、肺组织受到明显损害，而碱性磷酸酶能减轻损伤程度。 结论:肝移植术后肺部确实存在急性损伤，而碱性磷酸酶对其具有保护作用。     

原位肝移植前后胆道及血管的磁共振成像评估*

背景：磁共振成像扫描技术的完善,实现了“一站式”磁共振综合检查,即1次检查过程中运用多种序列,同时对肝脏血管、胰胆管系统及上腹部器官进行影像评估,方便、快速、简捷。目的：评价磁共振成像检查在肝移植前后的应用价值。方法：选择中南大学湘雅三医院移植中心收治的肝硬化及肝癌患者38例,男27例,女11例,年龄23~68岁。原位肝移植前后进行磁共振成像检查,同时行双排螺旋CT检查,比较两种方法的优劣,最后以手术、病理检查结果确认。结果与结论：所有终末期肝脏疾病患者原位肝移植前后经磁共振成像检查,能较准确地描述出肝癌病灶的情况,血管及胆道系统的异常解剖形态及其内栓子和结石的情况,其结果明显优于双排螺旋CT检查。说明磁共振成像在肝移植前评估和移植后并发症早期发现中有非常重要的作用。     

犬活体肝移植模型的建立及评价*☆

目的: 犬活体肝移植接近于临床实际，能模拟临床活体肝移植的全部过程。应用非体外转流和分流方法建立犬活体肝脏移植模型，以期为开展临床活体肝移植提供实验数据。 方法：①实验材料：实验于2006-05/2007-04在南方医科大学南方医院动物研究所完成，选用健康本地杂种犬36只，动物实验方法符合动物伦理学要求。②实验方法：将36只犬按随机数字表法分为供体组和受体组，共行非转流条件下犬活体肝脏移植手术18对次。活体供肝组行标准Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ叶左半肝切取术。受体组先行左侧Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ叶肝脏组织切除，在新肝植入后，再切除原肝残留Ⅵ，Ⅶ叶肝组织。③实验评估：检测动物手术时间、术中失血量、输血量及存活期；犬死后当天行尸体解剖明确死亡原因。 结果：成功建立非转流犬活体肝移植模型14只。①活体供肝组手术结果：供体术中死亡1只，术后第1天因出血死亡1只，术后5 d存活率为88.2%。手术时间（183.7±32.4）min，失血量为（78.5±12.8）mL，输血量0 mL，供肝的热缺血时间几乎为零，冷缺血时间（146.7±24.4）min。②受体组手术结果：术中死亡4只，其中创面出血2只，左肝静脉吻合口出血1只，1只死于急性肺水肿。术后存活14只，术后5 h存活率为85.7%；受体犬手术时间（276.7±34.1）min，无肝期0 min；失血量为（242.5±25.6）mL，输血量（230.6±47.3）mL。 结论：犬是理想的活体肝移植动物模型，受体肝脏分两步切除，新肝植入期，可有效维持受体血循环稳定，免除了体外转流或门腔分流的操作，为临床开展活体肝移植提供了技术和经验的参考。     

改良三套管法建立大鼠左肺原位移植模型

背景：肺移植是治疗终末期肺部疾病的惟一方法。建立肺移植动物模型是肺移植基础研究的首要条件。 目的：建立一种简便、稳定和有效的同种大鼠异体左肺原位移植模型。 方法：50只雄性SD大鼠随机分为供体以及受体,采用改良三套管法进行大鼠左肺原位移植。首先完成供肺制备,并将供肺置于受体原左肺上方并保持供肺于4 ℃ LPD液环境中。按照左肺动脉-左肺静脉-左肺支气管的顺序依次完成供肺与受体相应结构的吻合。然后依次开放左肺静脉-肺动脉,调整潮气量,离断受体原左肺。观察手术成功率、手术时间,5周后对受体行血气分析。 结果与结论：手术成功率92%,手术时间为(55±3) min,术后存活均达5周。5周后阻断右肺门15 min前、后左肺静脉取血,血气分析差异无显著性意义(P > 0.05)。提示新改良的三套管法是一种简便稳定有效的大鼠原位左肺移植模型。     

人脑恶性胶质细胞瘤组织裸小鼠原位移植模型的建立

目的 建立人脑间变性星形细胞瘤的裸小鼠原位移植模型,并探讨移植瘤细胞的生长状况.方法 将表达表皮生长因子受体(EGFR)的新鲜人脑间变性星形细胞瘤的手术标本移植于裸小鼠右尾状核并传代,观察各代移植瘤的生长特性及组织学特点.结果 移植瘤在裸小鼠右尾状核已连续传至7代,向周围鼠脑侵袭性生长;瘤细胞排列紊乱,核大深染且异型明显;移植瘤中EGFR的表达率为70%.结论 本法建它的人脑间变性星形细胞瘤的原位模型能够真实地模拟其原发脑肿瘤的生物学特性,为进一步对间变性星形细胞瘤的放、化疗等实验研究提供可靠的动物模型.     

人脑转移癌组织裸小鼠脑内移植模型的建立

目的 建立人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠原位移植模型,并分析移植瘤的生物学特征.方法 取人肺腺癌脑转移瘤组织块,接种于裸小鼠右尾状核.致瘤后即用裸小鼠的瘤组织进行其原位传代接种,观察致瘤率及荷瘤鼠生存期;MRI观察移植瘤在鼠脑内的大体形态;HE染色分析各代移植瘤的组织学形态;免疫组化染色观察移植瘤中CEA的表达;Alcian blue/PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质.结果 移植瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至6代,共65只鼠.荷瘤鼠生存期原代为(47.6±1.8)d,2～3代有所缩短,4～6代稳定在(38.0±0.9)d;移植瘤MRI类圆形,瘤周无水肿.移植瘤病理为低分化腺癌,不向周围正常鼠脑组织浸润;移植瘤中CEA表达阳性,有酸性粘液存在.结论 人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤的病理学特征,本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型.