吗啡预先给药对急性心肌缺血大鼠心肌P物质和降钙素基因相关肽的影响

目的观察吗啡预先给药对急性心肌缺血大鼠心肌组织缺血区和非缺血区P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法健康成年雄性SD大鼠18只,体重270～300 g,随机分为3组(n=6),假手术组(S组)、单纯冠状动脉结扎组(I组)、吗啡干预冠状动脉结扎组(M组)。S组大鼠开胸后在冠状动脉左前降支下穿线不结扎;I组大鼠开胸后结扎冠状动脉左前降支;M组大鼠经尾静脉注射吗啡1．25 mg·kg-1,15 min后结扎冠状动脉左前降支。各组在手术后计时3 h。采用免疫组化、酶联免疫和反转录-聚合酶链反应法从蛋白和基因水平观察各组大鼠缺血区和非缺血区心肌SP和CGRP的表达。结果I组大鼠缺血区心肌SP／SP mRNA和CGRP／β-CGRP mRNA的水平较S组升高(P<0．05),M组低于I组(P<0．05),但仍高于S组(P<0．05);非缺血区各组的变化趋势类同缺血区,但各扎闭冠状动脉组SP／SP mRNA和CGRP／β-CGRP mRNA的水平均低于相应组缺血区的水平(P <0．05)。结论吗啡预先给药可降低急性心肌缺血大鼠心肌组织SP和CGRP的表达。     

背根神经节压迫对大鼠痛行为及脊髓背角内降钙素基因相关肽的影响

目的 建立有效的背根神经节慢性压迫模型，探讨大鼠痛行为及脊髓背角内降钙素基因相关肽的变化。方法 采用铬制1-0肠线通过椎间孔压迫大鼠L4、L5背根神经节制备压迫模型，术后观察缩爪阈值变化，用放射免疫分析方法测定脊髓背角中降钙素基因相关肽的含量。结果 压迫组术后痛敏明显，术后1周时达高峰，以后逐渐恢复，但到术后4周时仍未完全达到正常水平；假手术组术后痛敏恢复较快，于术后7d恢复至正常水平。压迫组背角内降钙素基因相关肽含量在术后5d及4周时均明显增高，与同组对侧、假手术组及对照组相比差异有显著性。光镜观察，压迫组术后5d压迫侧背根神经节出现明显的神经内膜水肿及神经元胞质水肿，到术后4周这种改变虽然仍存在，但明显减轻。结论 稳定可靠的背根神经节慢性压迫模型，受压侧脊髓背角中降钙素基因相关肽含量持续升高，与慢性痛行为一致。     

大鼠腰椎P物质和降钙素基因相关肽能神经纤维的分布

目的　观察腰椎小关节 ,椎间盘 ,前、后纵韧带 ,棘上、棘间韧带上 P物质 (SP)和降钙素基因相关肽 (CGRP)能神经纤维的分布 ,探讨其意义。方法　采用 2 5例 SD大鼠腰椎组织切片 ,以SP、CGRP多克隆抗体进行免疫组织化学研究。结果　 SP、CGRP能神经纤维在腰椎上有广泛的分布。除滑膜皱襞外 ,小关节的其他部位均观察到上述神经纤维。在椎间盘 ,神经纤维只分布于纤维环的最外层。棘间韧带上仅见 CGRP能神经纤维。结论　腰椎上有广泛的感觉神经分布 ,上述结构参与慢性下腰痛发生有其神经解剖学基础     

烫伤大鼠垂体前叶P物质和降钙素基因相关肽神经的变化

目的　观察烫伤早期大鼠垂体前叶P物质 (SP)与降钙素基因相关肽 (CGRP)神经的形态分布变化。　方法　采用大鼠 30 %TBSAⅢ度烫伤模型 ,于伤后 1、2、6、10、12、2 4、72h 7个时相点 ,对垂体前叶SP和CGRP两种肽能神经行免疫组织化学染色观察 ;经图像分析测定 ,比较两种神经覆盖面积的变化。　结果　两种肽能神经的形态变化明显 ;伤后 1hSP、CGRP神经数目与对照相比分别增加 85 .7%和 6 0 .5 % ,神经纤维的膨体、分枝等明显增多 ;2h后减少 ,2 4h后趋于恢复。图像分析显示 :两种肽能神经的覆盖面积呈正相关变化 ,其基本变化趋势为伤后 1h升高 ,随后降低 ,伤后 12h降至最低点 ,然后回升。　结论　烫伤后早期大鼠垂体前叶的SP与CGRP神经形态分布发生明显变化 ,可能参与了全身应激反应的功能调节     

人神经生长因子β基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角致痛物质含量的影响

目的 探讨人神经生长因子β(hNGFβ)基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)含量的影响.方法 雄性SD大鼠48只,体重200～250 g,随机分为3组(n=16):假手术组(Ⅰ组)假手术后立即鞘内注射人工脑脊液;Ⅱ组和Ⅲ组制备坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型,术后分别立即鞘内注射人工脑脊液或重组腺病毒介导入神经生长因子β(Ad-hNGFβ)基因.于术前1 d、转染后28 d内每4天测定热痛阈、机械痛阈及行为学评分.每组分别于转染后4、7、14及28 d各处死4只大鼠,取脊髓组织,采用免疫组织化学法测定SP和CGRP含量.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组行为学评分升高,机械痛阈及热痛阈均降低(P<0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组行为学评分及机械痛阈差异无统计学意义(P>0.05),转染后8～24 d热痛阈升高(P<0.05).术后Ⅱ组和Ⅲ组术侧脊髓背角SP及CGRP含量明显高于Ⅰ组,术后7～28 dm组术侧脊髓背角SP及CGRP含量明显低于Ⅱ组(P<0.05或0.01).结论 Ad-hNGFβ基因转染可能通过降低脊髓背角SP及CGRP含量减轻神经病理性痛大鼠的热痛觉过敏.     

鞘内预注射L-NAME对神经性疼痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽表达的影响

目的 观察鞘内预注射NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯(L-NAME)对结扎坐骨神经所致神经性疼痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法 选择鞘内置管后无神经损伤症状的SD雌性大鼠96只,随机分为4组,每组24只。A组:假手术组;B组:坐骨神经结扎组;C组:假手术前15 min鞘内注射L-NAME 10 μl(250 μg);D组:坐骨神经结扎前15 min鞘内注射L-NAME 10 μl(250 μg)。各组分别在术后第1、4、7和14天随机处死6只大鼠。采用免疫组织化学方法观察各组大鼠结扎侧脊髓背角CGRP的表达。结果 与A组比较,B组、D组大鼠结扎侧脊髓背角CGRP表达在术后第4、7和14天明显升高(P<0.05),C组差异无显著性。与C组比较,D组大鼠结扎侧脊髓背角CGRP表达在术后第4、7和14天明显升高(P<0.05)。而D组大鼠结扎侧脊髓背角内的CGRP表达与B组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论 鞘内预注射L-NAME不能抑制周围神经损伤所诱导的脊髓背角CGRP表达,提示一氧化氮介导神经性疼痛的作用不是通过促进CGRP释放实现的。     

背根神经节内P物质、降钙素基因相关肽免疫阳性神经元与阴茎包皮系带感觉信息的传递

目的：探讨背根神经节（DRG）内P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）免疫阳性神经元与阴茎包皮系带感觉信息传递之问的关系。方法：通过荧光金（FG）逆行标记对大鼠阴茎包皮系带内神经末梢的来源作追踪定位，并结合SP、CGRP免疫荧光标记法，研究大鼠DRG内FG标记阳性神经元中SP、CGRP免疫阳性神经元的形态和分布。结果：FG逆行标记结果发现，大鼠阴茎包皮系带内的神经末梢起源于第6腰髓对应的背根神经节（L6-DRG）和第1骶髓对应的背根神经节（S1-DRG）的神经元。对这些神经元分别作SP、CGRP免疫荧光标记后发现，标记细胞大小不等，分别呈深红色和深绿色，沿神经束成行排列或散在分布。FG／SP、FG／CGRP双标记阳性细胞均为中小型，其数量分别占FG逆行标记阳性细胞总数的1／3和1／2，FG／SP／CGRP三标记阳性细胞占FG逆行标记阳性细胞总数的1／5。结论：大鼠L6-DRG和S1-DRG内的SP、CGRP免疫阳性神经元可能参与阴茎包皮系带感觉信息的传递。     

降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对大鼠颅盖骨来源成骨细胞的影响，以进一步了解CGRP促进成骨的作用机制。方法 利用二次酶消化法培养的成骨细胞，加入含不同浓度CGRP的条件培养液，24小时后通过MTT比色，^3H-TdR掺入以及细胞内碱性磷酸酶（ALP）含量的测定来观察CGRP对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 CGRP可以明显促进成骨细胞增殖，而且作用呈剂量依赖性。CGRP对细胞内ALP含量无明显影响。结论 CGRP能够直接作用于成骨细胞并通过促进其增殖而有利于骨形成。     

电针联合鞘内注射芬太尼对慢性炎性痛大鼠脊髓背角孤啡肽mRNA和脑源性神经营养因子mRNA表达的影响

目的 观察电针联合鞘内注射芬太尼对慢性炎性痛大鼠脊髓背角孤啡肽（OFQ）mRNA及脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA表达的影响，探讨其镇痛机制。方法 鞘内置管成功的成年雌性SD大鼠30只，随机分为5组（n=6）：正常组（A组）、致炎组（B组，大鼠右踝关节腔内注射完全弗氏佐剂50μl）、电针组（C组，大鼠致炎后第4、7、10天电针阳陵泉和足三里，频率2 Hz／100 Hz，强度≤2 mA，30min／次）、芬太尼组（D组，大鼠致炎后第4天开始，连续7 d鞘内注射芬太尼10μl）和针药合用组（E组，针药使用方法同C组、D组）。热板法测定大鼠痛敏分数。于致炎后第11天取L4-6脊髓，采用RT-PCR法检测大鼠脊髓背角OFQ mRNA和BDNF mRNA表达，并采用电泳图像分析系统行半定量分析。结果 与A组相比，B组OFQ mRNA及BDNF mRNA表达升高（P〈0．05）;与B组相比，C组、D组、E组痛敏分数降低（P〈0．05），OFQ mRNA及BDNF mRNA表达降低（P〈0．05）;与C组相比，E组痛敏分数降低（P〈0．05），OFQ mRNA及BDNF mRNA表达降低（P〈0．05）。结论 慢性炎性痛大鼠针药合用的镇痛效果强于单独使用电针，其镇痛机制与抑制OFQ和BDNF在脊髓背角的表达有关。     

鞘内吗啡对切口疼痛模型大鼠脊髓背角P物质的影响

目的研究鞘内(IT)吗啡对切口疼痛模型大鼠脊髓背角P物质(SP)的影响.方法雄性SD大鼠16只,随机分为四组(每组4只)假手术组(组Ⅰ)、术前30min IT 0.9%氯化钠20μl组(对照组,组Ⅱ)、术后30min IT吗啡5μg组(组Ⅲ)和术前30min IT吗啡5μg组(组Ⅳ).按Brennan法制成切口疼痛模型,以累积疼痛评分确定疼痛行为.免疫组织化学方法观察脊髓背角SP免疫反应(SP-LI).结果组Ⅲ和组Ⅳ大鼠的累积疼痛评分均明显低于组Ⅱ(P＜0.01).组Ⅱ大鼠术侧脊髓背角浅层SP-LI物质积分光密度明显高于组Ⅰ及对侧(对照组0.62±0.07,假手术组0.40±0.09,P＜0.01);与组Ⅱ比较,组Ⅳ的大鼠术侧脊髓背角浅层SP-LI物质积分光密度(0.37±0.06)明显降低(P＜0.01),但两用药组间比较无显著差别.结论在大鼠切口疼痛模型中,术前IT吗啡的抗伤害作用与其抑制SP在脊髓背角的释放有关.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节CGRP、SP、BDNF表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 取鞘内置管成功的25只大鼠,于左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂50μl致炎,致炎后第4天开始鞘内给药.随机分为5组(n=5):A组鞘内给予生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,仅给药1 d;C组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;D组鞘内给药方法同C组,同时每日首次给药后用电针刺激仪电针大鼠阳陵泉穴和足三里穴,刺激强度2 mA,刺激频率2 Hz,波宽0.6ms,刺激时间30 min;E组电针刺激频率15Hz,波宽0.4 m,余同D组.于致炎前、鞘内给药前1 d、给药后1、2、3、4、5、6、7 d(T0-8)时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).给药7 d后取L4～L6背根神经节,采用RT-PCR法测定CGRP、SP、BDNF的mRNA表达.结果 与T0时比较,各组T1时PWL缩短(P＜0.05);与T1时比较,B组～E组T2时PWL延长(P＜0.05);与T2时比较,B组～E组T3-8时PWL缩短(P＜0.05).与A组比较,B组～E组PWL延长,C组CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05);与B组比较,C组～E组PWL延长(P＜0.05);与C组比较,D组和E组PWL延长,CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达下调(P＜0.05);与D组比较,E组PWL缩短,CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05).结论 大鼠背根神经节内CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调参与了吗啡镇痛耐受的形成;电针治疗可抑制吗啡镇痛耐受的形成,机制可能与抑制背根神经节内CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达有关.     

手法加载对慢性下腰痛模型大鼠降钙素基因相关肽和神经生长因子的影响

目的:观察手法加载对慢性下腰痛(chronic low back pain,CLBP)模型大鼠的镇痛效应以及腰大肌组织相关炎性因子表达的影响,探索手法对局部炎性微环境状态的改善情况。方法:选取体质量为340～360 g的SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为空白组、假手术组、慢性下腰痛模型组、治疗组,每组8只。模型组大鼠腰椎L4-L6植入外部链接固定系统(external link fixation system,ELFS),假手术组不植入ELFS,仅行切开缝合,空白组不作任何处理,治疗组植入ELFS后,在脊柱两侧用力量为5 N,频率为2 Hz的刺激量进行手法干预,15 min/次,1次/d,连续干预14 d,分别在造模前、干预后第1、3、7、10、14天检测四组大鼠机械刺激反应阈值(paw with drawl threshold,PWT),热刺激反应阈值(paw withdrawl latency,PWL),治疗周期结束后,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测腰大肌组织中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的浓度值。结果:空白组与假手术组的PWT、PWL在造模后均无显著差异(P0.05);模型成模后,CLBP模型组和治疗组PWT、PWL明显降低(P0.01);手法加载后第1、3天,治疗组的PWT较CLBP模型组改善不明显(P0.05);手法加载后第7天,治疗组与CLBP模型大鼠相比,痛阈值呈现出升高的趋势,但二者相比无统计学意义(P=0.0560.05),至治疗第10、14天,治疗组大鼠的机械痛阈值开始上升,且与CLBP模型大鼠相比有统计学意义,分别为(P0.05,P0.01);手法治疗后第1、3天,治疗组的PWL较CLBP模型组改善同样不明显(P0.05);待第7天比较,治疗组与CLBP模型组的PWL有统计学意义(P=0.0160.05),手法加载对CLBP大鼠热痛觉过敏现象有了改善直到实验结束。CLBP模型组腰大肌中CGRP和NGF含量均高于空白组和假手术组(P0.01),治疗后两者的含量均有明显下降(P0.01)。结论:局部按揉手法加载对CLBP大鼠有镇痛作用,同时可以抑制CLBP大鼠腰大肌组织CGRP、NGF的含量,改善局部炎性微环境状态。     

鞘内注射芬太尼联合电针对慢性炎性痛大鼠的镇痛效果

目的探讨鞘内注射芬太尼联合电针对大鼠慢性炎性痛的镇痛效果及相关机制。方法采用完全弗氏佐剂(CFA)关节炎大鼠模型,将30只鞘内置管成功的成年SD雌性大鼠随机分为5组(n=6):对照组(A组,仅予以鞘内置管)、致炎组(B组,鞘内注射生理盐水25μl连续1周,1次／d)、电针组(C组,模型成功后第1天和第4天,采用电针仪电针大鼠“阳陵泉”和“足三里”两穴,强度≤2 mA,频率2／100Hz,时间30min)、芬太尼组(D组,鞘内注射25μl芬太尼,剂量1μg,1次/d,连续1周)和针药合用组(E组,处理与给药方法同C组、D组)。CFA致痛后第4天模型建立成功,开始电针刺激和给药处理。从给药第1天开始,每天9:00以热板法测量大鼠痛敏分数,连续观察7 d;于给药第7天,10％水合氯醛液按375 mg·kg-1腹腔麻醉大鼠,快速取出脊髓L4-6段,以毛细管电泳仪和免疫组化方法检测脊髓(L4-6)谷氨酸(GLU)含量及脊髓背角P物质(SP)表达。结果B组痛敏分数,脊髓(L4-6)谷氨酸含量和患侧腰髓背角SP的表达均比其它组增加(P<0．05);与C组及D组相比,E组痛敏分数,GLU含量和SP表达均降低(P<0．05)。结论鞘内注射芬太尼加强了电针的镇痛作用,针药合用减轻了慢性炎性痛所致的中枢敏化作用。     

小针刀对肌张力增高大鼠脊髓和背根神经节内P物质影响的研究

目的:探讨骨骼肌受压后初级感觉神经元兴奋性递质(substance P,SP)在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内的合成、脊髓中枢端末梢的释放机制,观察小针刀针刺的影响。方法:采用大鼠股薄肌70kPa受压模型。24只大鼠随机均分为3组,分别为空白组、压迫组、针刀组。除空白组6只外,其余18只大鼠左侧设为压迫组,右侧设为针刀组,组内分1、2、3d不同组,每组6只。两组同时进行70kPa压强压迫,每天压迫1次,每次2h。同时于造模后对针刀组股薄肌进行小针刀针刺。用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测各组大鼠股薄肌受压后及针刺后背根神经节和相应脊髓节段内P物质的表达变化。结果:在DRG中,空白组针刀侧阳性反应明显强于对侧,P0.01;针刀1、2d组SP表达整合光密度(integrated optical density,IOD)较压迫组低,P0.05。在脊髓中,与压迫组比较,针刀1、3d组SP阳性表达area和IOD数值较高,P0.01;2d组两指标则低于对侧。结论:小针刀针刺可明显减低骨骼肌受压后DRG内疼痛物质SP的合成,SP在中枢末梢的释放在短期内(3d)未见明显变化。     

内皮素和降钙素基因相关肽在慢性肾小球疾病中的作用

目的：通过观察慢性肾小球疾病患血尿内皮素（ET）和降钙素基因相关肽（CGRP）水平的变化，探讨ET和CGRP在慢性肾小球疾病的病理过程中的作用。方法：采用放免法测定了25例原发性肾病综合征（PNS），2例慢性肾小球肾炎（CGN），34例慢性肾衰竭（CRF）患和19例健康查体血，尿ET和CGRP的水平。结果：（1）血浆和尿的ET水平：PNS，CGN和CRF组 高于正常对照组（P＜0．05，P＜0．01）；（2）血浆和尿的CGRP水平，PNS，CGN和CRF组均低于正常对照组（P＜0．05，P＜01）。结论：慢性肾小球疾病患血尿ET水平明显升高，而血尿CGRP水平明显下降，提示血尿ET的升高和CGRP的下和可能在促进慢性肾小球疾病的病情发展中具有重要作用。     

降钙素基因相关肽混合去甲肾上腺素对大鼠心肌细胞L-型钙电流的影响

Objective To investigate the effects of calcitonin gene-related peptide (CGRP) combined with norepinephrine (NE) on L-type calcium current (LCa-l) in rat ventricular myocytes. Methods Ventricular myocytes were isolated from SD rats (weighing 260-280 g) by retrograde perfusion of the heart via the aorta with an enzyme-containing solution as previously described. Whole-cell patch-clamp recording was made using Axopatch 200B amplifier. The cells were perfused for 1 min with Tyrode solution containing CGRP 1 × 10-7 mol/L (group CGRP) , NE 1 × 10-6 mol/L (group NE), or CGRP 1 × 10-7 mol/L + NE 1 × 10-6 mol/L (group CN) and again washed with Tyrode solution. ICa-L was recorded 1 min before and 1 min after the cells were perfused and 1 min after the cells were washed. I-V curve of ICa-L was made after the cells were perfused with solution containing CGRP or NE alone. Results CGRP significantly inhibited the peak of ICa-L, while NE significantly promoted the peak of ICa-L(P < 0.05) . The peak of ICa-L was significantly decreased 1 min after the cells were perfused in group CGRP,while increased 1 min after the cells were perfused in group NE compared with group CN ( P < 0.05). CGRP made the I-V curve of ICa-L move up-ward, while NE made the I-V curve of ICa-L move down-ward. Conclusion CGRP can weaken the promotion of ICa-L induced by NE in rat ventricular myocytes.