大鼠视网膜神经节细胞存活和突起生长与可溶性混合晶状体蛋白的促进作用：体外培养实验

目的：观察不同培养基中血清和混合晶状体蛋白对视网膜神经节细胞的影响，探讨晶状体损伤后其促进视网膜神经节细胞存活和再生的作用。方法：实验于2004-04／07在解放军第三军医大学西南眼科医院眼科实验室完成。选择成年Long Evens大鼠8只用于可溶性混合晶状体蛋白的提取；选择新生0～2d Long Evens大鼠30只用于视网膜神经节细胞的培养。分别用下列3组培养基对离体视网膜神经节细胞进行培养：①100mL／L新生牛血清+900mL／L DMEM／F12培养基(新生牛血清+DMEM／F12组)。②100mL／L新生牛血清+100mL／L胎牛血清+800mL／L DMEM／F12培养基(新生牛血清+胎牛血清+DMEM／F12组)。③100mL／L胎牛血清+900mL／L DMEM／F12培养基(胎牛血清+DMEM／F12组)。每组又分为6个亚组，其中5个亚组分别加入5种不同终浓度的可溶性混合晶状体蛋白(1，0．5，0．02，0．01，0．005mg／L)溶液，一个亚组不加可溶性混合晶状体蛋白液。每天在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况，记录存活细胞数和存活时间。培养2，4，6d后，计数每视野分散的、有突起生长的视网膜神经节细胞数和最长突起长度(每一视野随机取5个细胞进行测量，共30个视野，150个突起)应用Leica QWin图像分析系统。结果：①视网膜神经节细胞存活时间：新生牛血清+DMEM／F12组培养细胞能存活六七天，新生牛血清+胎牛血清+DMEM／F12组和胎牛血清+DMEM／F12组培养细胞能存活七八天。②有突起生长的视网膜神经节细胞数目和最长突起长度：在相同培养天数(2，4，6d)和条件下(加入同一终浓度晶状体蛋白)新生牛血清+胎牛血清+DMEM／F12组细胞数目均多于新生牛血清+DMEM／F12组[加入0．5mg／L晶状体蛋白，2d时(3．83&;#177;4．53比0．14&;#177;0．38)个／视野，(4d时14．7&;#177;9．62比2．5&;#177;3．89)个／视野．P&;lt;0．01；6d时(20．13&;#177;12．32比5．43&;#177;5．62)个／视野，P&;lt;0．05]；在4d内胎牛血清+DMEM／F12组细胞突起长度明显优于新生牛血清+胎牛血清+DMEM／F12组(P&;lt;0．01)；加入混合晶状体蛋白后细胞存活时间及突起长度明显长于未加晶状体蛋白组，晶状体蛋白液含量为0．01mg／L时，作用较明显。结论：加入晶状体蛋白液和不同血清的培养基两因素间无交互作用，分别独立地发挥作用。可溶性混合晶状体蛋白可以促进体外培养的视网膜神经节细胞存活和突起生长。     

移植坐骨神经大鼠相应背根神经节中生长相关蛋白43的表达

背景:周围神经移植后,相应的背根神经节感觉神经元胞体内生长相关蛋白43(GAP-43)表达的时程与规律尚未明确.目的:观察大鼠坐骨神经移植术后GAP-43在相应背根神经节中的表达变化.方法:取健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为2组,对照组行假手术组:实验组行坐骨神经移植,分别于术后3 d,1,2,4,6,8周6个时间点处死后取其手术侧L4~L5背根神经节,应用Fn-PCR和Westem Blot技术检测GAP-43 mRNA及其蛋白表达.结果与结论:对照组大鼠背根神经节中GAP-43 mRNA表达量较低,且随时间无明显改变;实验组术后1周时GAP-43 mRNA在相应背根神经节中即有表达增强,2周时达到高峰,6~8周表达逐渐减弱.两组大鼠背根神经节中GAP-43蛋白与GAP-43mRNA表达的变化规律相同.结果表明神经损伤后相应神经元的再生能力存在损伤反应性变化.     

大鼠视网膜神经节细胞存活和突起生长与可溶性混合晶状体蛋白的促进作用体外培养实验

目的观察不同培养基中血清和混合晶状体蛋白对视网膜神经节细胞的影响,探讨晶状体损伤后其促进视网膜神经节细胞存活和再生的作用.方法实验于2004-04/07在解放军第三军医大学西南眼科医院眼科实验室完成.选择成年Long Evens大鼠8只用于可溶性混合晶状体蛋白的提取;选择新生0～2 d Long Evens大鼠30只用于视网膜神经节细胞的培养.分别用下列3组培养基对离体视网膜神经节细胞进行培养①100 mL/L新生牛血清+900 mL/L DMEM/F12培养基(新生牛血清+DMEM/F12组).②100 mL/L新生牛血清+100 mL/L胎牛血清+800 mL/L DMEM/F12培养基(新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组).③100 mL/L胎牛血清+900 mL/L DMEM/F12培养基(胎牛血清+DMEM/F12组).每组又分为6个亚组,其中5个亚组分别加入5种不同终浓度的可溶性混合晶状体蛋白(1,0.5,0.02,0.01,0.005 mg/L)溶液,一个亚组不加可溶性混合晶状体蛋白液.每天在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,记录存活细胞数和存活时间.培养2,4,6 d后,计数每视野分散的、有突起生长的视网膜神经节细胞数和最长突起长度(每一视野随机取5个细胞进行测量,共30个视野,150个突起)应用Leica QWin图像分析系统.结果①视网膜神经节细胞存活时间新生牛血清+DMEM/F12组培养细胞能存活六七天,新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组和胎牛血清+DMEM/F12组培养细胞能存活七八天.②有突起生长的视网膜神经节细胞数目和最长突起长度在相同培养天数(2,4,6d)和条件下(加入同一终浓度晶状体蛋白)新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组细胞数目均多于新生牛血清+DMEM/F12组[加入0.5 mg/L晶状体蛋白,2 d时(3.83±4.53比0.14±0.38)个/视野,(4 d时14.7±9.62比2.5±3.89)个/视野,P＜0.01;6 d时(20.13±12.32比5.43±5.62)个/视野,P＜0.05];在4 d内胎牛血清+DMEM/F12组细胞突起长度明显优于新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组(P＜0.01);加入混合晶状体蛋白后细胞存活时间及突起长度明显长于未加晶状体蛋白组,晶状体蛋白液含量为0.01 mg/L时,作用较明显.结论加入晶状体蛋白液和不同血清的培养基两因素间无交互作用,分别独立地发挥作用.可溶性混合晶状体蛋白可以促进体外培养的视网膜神经节细胞存活和突起生长.     

星形神经胶质细胞对PC12神经元突起生长发育的影响

背景星形细胞对神经元有提供营养、支持及调节突触活性作用,但它对神经元发育的影响还尚不清楚.目的探讨体外培养的Sprague Dawley大鼠大脑皮质星形细胞对PC12神经元突起生长发育的作用.设计完全随机设计,对照实验研究.方法以培养的星形细胞与PC12神经元按不同细胞数目比例(501～11)共同培养,并用其制备的条件培养液培养PG12细胞.主要观察指标用快速灵敏的MTT'比色法测定PC12神经元的细胞活力,用光学相差显微镜观察PC12细胞形态学变化.结果①星形细胞条件培养液可增强PG12细胞活力(MTT测定的A值由0.255±0.012提高到0.510±0.036,P＜0.001),却不能促使PC12神经元突起的生出.②当将星形细胞与PC12细胞按301～11的比例共同培养时,既可提高PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长;但按501～401的比例共同培养时,只观察到提高PC12细胞折光性和光晕,而无促使其突起生长发育的作用.结论PC12神经元细胞活力的提高与星形细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关,而PC12神经元突起生长发育可能是和与星形细胞的直接接触以及二者的细胞数目比有关.     

星形神经胶质细胞对PC12神经元突起生长发育的影响

背景：星形细胞对神经元有提供营养、支持及调节突触活性作用，但它对神经元发育的影响还尚不清楚。目的：探讨体外培养的Sprague Dawley大鼠大脑皮质星形细胞对：PC12神经元突起生长发育的作用。设计：完全随机设计，对照实验研究。方法：以培养的星形细胞与PC12神经元按不同细胞数目比例(50：1～1：1)共同培养，并用其制备的条件培养液培养PC12细胞。主要观察指标：用快速灵敏的MTT比色法测定PC12神经元的细胞活力，用光学相差显微镜观察PC12细胞形态学变化。结果：①星形细胞条件培养液可增强PC12细胞活力(MTT测定的A值由0．255&;#177;0．012提高到0．510&;#177;0．036，P&;lt;0．001)，却不能促使：PC12神经元突起的生出。②当将星形细胞与PC12细胞按30：1～1：1的比例共同培养时，既可提高PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长；但按50：1～40：1的比例共同培养时，只观察到提高PC12细胞折光性和光晕，而无促使其突起生长发育的作用。结论：PC12神经元细胞活力的提高与星形细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关，而PC12神经元突起生长发育可能是和与星形细胞的直接接触以及二者的细胞数目比有关。     

有效抑制大鼠背根神经节细胞TRPV4通道小干扰RNA的筛选

目的:以不同浓度以及序列的小干扰RNA(SiRNA)转染,培养大鼠的背根神经节(DRG),观察对神经元形态、活性变化以及瞬时感受器电位离子4(TRPV4)通道功能的影响,筛选转染这种神经元的SiRNA。方法:取新生大鼠腰背段全部DRG,将处理好的DRG神经元进行培养,将神经元随机分为正常对照组、SiRNA不同浓度组、错配组,进行SiRNA转染,然后培养相应时间后观察各组神经元在荧光显微镜的形态学特点,并用四甲基偶氮唑兰比色法(MTT)分析各组神经元细胞生长活性的改变。另外利用Fluo3荧光探针,观察SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应,采用酶联免疫法方法观察KCl刺激下各组细胞释放P物质的改变。结果:荧光显微镜下观察适宜浓度组SiRNA转染DRG神经元形态较正常组无明显差异。MTT法比较10-40nM各组神经元活性的差异无显著性意义。而SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应以及细胞释放P物质的改变有显著差异。结论:40-80nMSiRNA可以有效转染DRG细胞,未对DRG神经元活性产生显著影响,这为研究TRPV4通道功能提供了一个有效的方法。     

蛋白激酶Cε对大鼠背根神经节持续受压后背角星型胶质细胞激活和机械痛敏的影响

摘要 目的：探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,CCD)后,脊髓背角星型胶质细胞的激活情况,以及PKCε是否可以通过调节星型胶质细胞的活性而参与CCD后神经病理性疼痛。 方法：将大鼠随机分为 6组,每组大鼠8只：假手术组、CCD7天组、CCD14天组、CCD7天+BIM I组、CCD+DMSO组、CCD+PDBu组,分别通过鞘内注射不同药物,或对正常大鼠鞘注DMSO/PDBu后,测量大鼠机械刺激缩爪阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）的变化,利用Western Blot技术检测脊髓背角PKCε和GFAP蛋白表达的变化,利用免疫荧光技术检测脊髓背角星型胶质细胞激活情况。 结果：CCD术后第4天,鞘内注射PKCε的激动剂PDBu 1—4h,明显降低CCD大鼠PWMT（P<0.05）,而给予BIM I 1—4h,可升高CCD大鼠PWMT（P<0.05）。从CCD术后第4天起,连续3天鞘注BIM I,可明显缓解大鼠的机械痛敏（4天,P<0.05）,但从停止注射后镇痛作用消失（P>0.05）。与假手术组比较,CCD后7天和14天,手术侧背角PKCε和GFAP表达升高,差异有显著性意义(P<0.05),星型胶质细胞激活增加,而注射BIM I可明显抑制PKCε和GFAP表达(P<0.05)和星型胶质细胞激活。PDBu可导致正常大鼠PWMT明显降低（P<0.05）,GFAP蛋白质表达量增加（P<0.05）,促进星型胶质细胞激活。 结论：大鼠背根神经节持续受压后,机械痛阈下降的同时,手术侧脊髓背角内PKCε和GFAP蛋白表达上调,星型胶质细胞激活增加。PKCε可能通过调节星型胶质细胞激活参与CCD后病理性神经痛的中枢敏化机制。     

S100A4蛋白对N2a细胞突起生长及骨架蛋白Tubulin聚合的影响

目的：观察S100A4蛋白对N2a细胞突起生长及细胞内骨架蛋白tubulin聚合的影响。方法：在N2a细胞培养基中加入S100A4蛋白（A组）或DMSO（B组）,使其终浓度为5μmol/L,观察0、12、24及36h时间点N2a细胞突起的生长情况,测量突起长度,采用免疫印迹法检测N2a细胞内骨架蛋白tubulin的聚合情况。结果：2组孵育12h时,N2aA组细胞胞体均增大,部分细胞长出短小突起差异无统计意义;24h时,A组的大部分N2a细胞生长出2～5个突起,平均突起长度较B组更长（P〈0.05）;36h时A组部分N2a细胞突起交织成网络,且较B组发达（P〈0.05）。免疫印迹检测显示,A组N2a细胞12、24及36h,细胞浆内未聚合的tubulin含量较0h时减少（P〈0.05）,而B组N2a细胞内未聚合tubulin含量无明显改变。结论：S100A4蛋白能增加胞浆内骨架蛋白tubulin的聚合,促进N2a细胞突起的生长。     

端侧神经吻合术后神经再生初期生长相关蛋白GAP-43在第2颈椎背根神经节内的探针标记

目的观察研究端侧神经吻合后轴突再生初期生长相关蛋白在背根神经节内的表达情况 。方法将兔两侧耳大神经制成神经端侧吻合模型,首先对再生神经轴突相应的背根神经节进 行GAP－43寡核苷酸探针标记,再利用电子计算机图像分析技术对结果半定量分析。结果神 经切断及切断后端侧神经吻合,背根神经节内便立刻有GAP－43的表达,14d时达到高峰,后 逐渐回落,两者之间有共性更有差异。结论神经的损伤与再生均能引起生长相关蛋白的表达 变化,这将有利于端侧神经吻合后轴突再生机制的研究。     

Activation of MrgC receptor inhibits N-type calcium channels in small-diameter primary sensory neurons in mice

Mas-related G-protein-coupled receptor subtype C (mouse MrgC11 and rat rMrgC), expressed specifically in small-diameter primary sensory neurons, may constitute a novel pain inhibitory mechanism. We have shown previously that intrathecal administration of MrgC-selective agonists can strongly attenuate persistent pain in various animal models. However, the underlying mechanisms for MrgC agonist-induced analgesia remain elusive. Here, we conducted patch-clamp recordings to test the effect of MrgC agonists on high-voltage-activated (HVA) calcium current in small-diameter dorsal root ganglion (DRG) neurons. Using pharmacological approaches, we show for the first time that an MrgC agonist (JHU58) selectively and dose-dependently inhibits N-type, but not L- or P/Q-type, HVA calcium channels in mouse DRG neurons. Activation of HVA calcium channels is important to neurotransmitter release and synaptic transmission. Patch-clamp recordings in spinal cord slices showed that JHU58 attenuated the evoked excitatory postsynaptic currents in substantia gelatinosa (SG) neurons in wild-type mice, but not in Mrg knockout mice, after peripheral nerve injury. These findings indicate that activation of endogenously expressed MrgC receptors at central terminals of primary sensory fibers may decrease peripheral excitatory inputs onto SG neurons. Together, these results suggest potential cellular and molecular mechanisms that may contribute to intrathecal MrgC agonist-induced analgesia. Because MrgC shares substantial genetic homogeneity with human MrgX1, our findings may suggest a rationale for developing intrathecally delivered MrgX1 receptor agonists to treat pathological pain in humans and provide critical insight regarding potential mechanisms that may underlie its analgesic effects.     

Increased excitability and spontaneous activity of rat sensory neurons following in vitro stimulation of sympathetic fiber sprouts in the isolated dorsal root ganglion

Many chronic pain conditions including complex regional pain syndrome are exacerbated by sympathetic activity. In animal models, sympathetic fibers sprout into the dorsal root ganglia (DRG) after peripheral nerve injury, forming abnormal connections with sensory neurons. However, functional studies of sympathetic-sensory connections have been limited largely to in vivo studies. This study describes a new method for studying sympathetic-sensory connections in an isolated whole DRG preparation in the rat spinal nerve ligation (SNL) model. Three days after ligation of the ventral ramus of the spinal nerve (SNL), sympathetic fibers sprouting into the DRG were observed to originate largely in the intact dorsal ramus of the spinal nerve, which at the lumbar level is a small branch of the spinal nerve separating from the ventral ramus near the intervertebral foramen. In whole DRG isolated 3 days after SNL, microelectrode recordings of sensory neurons showed that repeated stimulation of the dorsal ramus enhanced spontaneous activity in large and medium diameter neurons and reduced rheobase in large neurons. These effects, which were slow and long lasting, were attributed to stimulation of the sympathetic sprouts because: stimulation had no effect in uninjured DRG; and effects could be reduced or eliminated by a “cocktail” of antagonists of norepinephrine and ATP receptors, by pretreatment with the sympathetic release blocker bretylium, or by pre-cutting the grey ramus through which sympathetic fibers coursed to the ligated DRG. The latter treatment, a relatively minimal form of sympathectomy, was also highly effective in reducing mechanical pain ipsilateral to the SNL.     

大鼠背根神经节加压培养细胞模型的建立

目的建立大鼠背根神经节（DRG）细胞受压模型，观察在恒定压力下培养24h和48h后神经元形态和活性的变化，评价这种神经元压力培养模型的优缺点。方法将培养的新生大鼠DRG细胞随机分为正常对照组、受压24h组、受压48h组，在80mmHg压力的密闭环境中培养相应时间后观察各组细胞在荧光显微镜和电镜下形态学特点，并用MTT法分析各组神经元细胞生长活性的改变。结果加压培养后，荧光显微镜下DRG神经元形态未发生明显变化，超微结构示48h组和24h组较正常组线粒体肿胀明显，粗面内质网缩短、变少，游离核糖体增多，部分核固缩，神经元代谢水平下降，MTT法比较加压前、后各组细胞活性的差异无统计学意义。结论加压培养未使细胞活性发生显著改变，此模型可观察机械压力单一因素对神经元的影响，有望成为一种在亚细胞和分子水平研究机械压力对DRG神经元的影响的有效细胞模型。     

Prostaglandin E2/EP4 signalling facilitates EP4 receptor externalization in primary sensory neurons in vitro and in vivo

Inflammatory pain severely affects the quality of life of millions of individuals worldwide. Prostaglandin E2 (PGE2), a pain mediator enriched in inflamed tissues, plays a pivotal role in nociceptor sensitization and in the genesis of inflammatory pain. Its EP4 receptor mainly mediates its role in inflammatory pain. However, the underlying mechanisms are poorly understood. Here we found that PGE2/EP4 signalling-induced EP4 externalization in dorsal root ganglion (DRG) neurons contributes to nociceptor sensitization and inflammatory pain. In cultured DRG neurons, PGE2 and the EP4 agonist concentration- and time-dependently stimulated EP4 externalization. The inhibitors of anterograde secretory pathway, protein synthesis, or recycling pathway suppressed PGE2-induced EP4 externalization, suggesting that EP4 retained in Golgi apparatus and in recycling endosomes, as well as newly synthesized, are mobilized in this event. Interestingly, the intracellular cAMP levels of cultured DRG explants following 2 sequential treatments with the EP4 agonist were significantly higher than a single treatment, suggesting that the first treatment of agonist likely induces EP4 export to sensitize DRG neurons. Intraplantar injection of complete Freud’s adjuvant increases both total and cell-surface EP4 levels of L4-6 DRG neurons, an event suppressed by a cyclooxygenase-2 inhibitor or a selective EP4 antagonist, suggesting that PGE2/EP4 signalling in inflamed paw contributes to EP4 synthesis and export in DRG neurons, thus sensitizing nociceptors during inflammation. We conclude that PGE2/EP4 signalling-induced EP4 externalization in DRG neuron is a novel mechanism underlying nociceptor sensitization and inflammatory pain. Blocking EP4 externalization could open a novel therapeutic avenue to treat inflammatory pain.     

A型肉毒毒素重链对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10的表达及神经突起再生的影响

目的:探讨人工重组A型肉毒毒素重链(BoNT/A重链)对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10(SCG10)表达、神经突起再生以及损伤侧后肢感觉及运动功能的影响,为阐明BoNT/A重链促神经突起生长的作用提供实验依据。方法:大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型基础上局部及鞘内给予BoNT/A重链;于用药后不同时间提取局部蛋白进行双向电泳,并根据双向电泳提示的蛋白点群变化的分子量和等电点,选取SCG10为目标蛋白行Western Blot检测及神经突起测定;通过抓力和热痛敏实验测试损伤侧后肢的运动和感觉功能情况。结果:(1)BoNT/A重链可干预脊髓损伤后局部蛋白谱的变化,MW位于18—25kDa、等电点在5—7范围的蛋白点可以作为蛋白点群变化的代表之一;(2)作为分子量位于18—25kDa/等电点在5—7的蛋白成分之一的SCG10在单纯损伤时较正常对照组其表达有所增高,给予BoNT/A重链后, SCG10的表达显著增强(P0.05);(3)免疫荧光结果显示:单纯损伤时SCG10的阳性表达主要分布于损伤周边细胞的胞体,应用BoNT/A重链后,SCG10阳性分布于胞浆和细胞突起且以损伤近头端的周边区域较为显著;(4)突起测定结果显示:BoNT/A重链可促进脊髓损伤周边神经细胞突起增长,包括突起数目增多及含有突起的神经细胞百分比增多(P0.05);(5)给予BoNT/A重链后,损伤侧后肢肌力明显优于单纯损伤组(P0.05),但感觉功能未见明显改善。结论:脊髓损伤局部给予BoNT/A重链可促进生长相关蛋白SCG10的表达并促进损伤周边神经细胞突起生长,改善肌肉抓力。BoNT/A重链有助于脊髓损伤后的再生修复。     

电刺激迷走神经对感染性休克大鼠钙结合蛋白S100A8表达的影响

目的:通过建立感染性休克大鼠模型,探索电刺激迷走神经对感染性休克大鼠血浆中钙结合蛋白S100A8表达水平的影响。方法:雄性成年SD大鼠30只,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立感染性休克模型,将30只大鼠随机分为6组:1假电针正常组;2电针正常组;3假电针CLP组;4电针CLP组;5迷切假电针CLP组;6迷切电针CLP组。3~6组动物均行颈总动脉置管,连续监测平均动脉压;采用ELISA法检测各组大鼠的血浆钙结合蛋白S100A8。结果:CLP组手术后平均动脉压呈进行性下降,手术后12 h时血浆钙结合蛋白S100A8水平显著升高(P0.01);与CLP组比较,电刺激组动物平均动脉压下降程度较低(P0.01);迷切电针CLP组与迷切假电针CLP组相比,大鼠平均动脉压下降程度较低,血浆钙结合蛋白S100A8水平显著下降(P0.01)。结论:电刺激迷走神经可以缓解盲肠结扎穿孔导致的大鼠感染性休克所引发的进行性动脉压下降,降低血浆钙结合蛋白S100A8水平,对于治疗休克有辅助作用。     

吗啡、曲马多预先给药对急性心肌缺血大鼠背根神经节P物质和降钙素基因相关肽mRNA 表达的影响

目的 观察吗啡、曲马多预先给药对急性心肌缺血大鼠背根神经节内P物质mRNA(SP mRNA)和降钙素基因相关肽mRNA(CGRPmRNA)表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体质量270～300 g,随机(随机数字法)分为四组(n=6):假手术组(S组)、单纯冠状动脉结扎组(Ⅰ组)、吗啡干预冠状动脉结扎组(M组)和曲马多干预冠状动脉结扎组(T组).S组大鼠开胸后在冠状动脉左前降支下穿线不结扎;Ⅰ组大鼠开胸后结扎冠状动脉左前降支;M组和T组大鼠经尾静脉分别注射吗啡1.25 mg·kg-1、曲马多12.5 mg·kg-1,15 min后结扎冠状动脉左前降支.各组在穿线或结扎冠状动脉左前降支3 h后开胸快速取脊髓胸段(T1-5)背根神经节采用反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)观察各组大鼠背根神经节内SPmRNA和CGRPmRNA的表达.应用单因素方差分析进行统计学分析.结果 Ⅰ组大鼠背根神经节内SPmRNA(0.93±0.02),α-CGRP mRNA(0.98±0.02)和β-CGRP mRNA (0.83±0.02)的表达均较S组(0.84±0.04),(0.86±0.01),(0.45±0.03)明显上调(P＜0.05);M组和T组SP mRNA(0.88±0.03),(0.88±0.04),α-CGRP mRNA(0.90±0.02),(0.90±0.01)和β-CGRP mRNA(0.67±0.02),(0.66±0.01)的表达均明显低于Ⅰ组(P＜0.05),但仍高于S组(P＜0.05);M组和T组二者间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡、曲马多预先给药可降低急性心肌缺血大鼠背根神经节内SP mRNA和CGRP mRNA的表达.

Abstract：

Objective To investigate the effects of morphine and tramadol pre-emptive use on the expressions of substance P mRNA (SPmRNA) and calcitonin gene-related peptide mRNA (CGRPmRNA) in dorsal root ganglia (DRG) following acute myocardial ischemia in the rats. Method Twenty-four adult male SD rats weighing 270 to 300 g were randomly (random number) divided into four groups (n = 6, in each): group Ⅰ(sham operation), group Ⅱ (myocardial ischemia), group Ⅲ (morphine pre-emptive use) and group Ⅳ (tramadol pre-emptive use). The left anterior descending branch of coronary artery was occluded (CAO) for 3 hours in rats of group Ⅱ and Ⅳ.In group Ⅲ morphine 1.25 mg·kg-1 was injected through caudal vein 15 minutes before CAO.In group Ⅳ,tramadol 12.5 mg·kg-1 was daministered via caudal vein 15 minutes before CAO.In 3 hours after myocardial ischemia, the tissue of DRG (T1-5) were taken for detecting the expressions of SPmRNA and CGRPmRNA by using RT-PCR. One-way ANOVA was used for statistical analysis. Results In the tissue of DRG, the expressions of SPmRNA(0.93±0.02) ,α-CGRP mRNA(0.98±0.02) and β-CGRP mRNA(0.83 ± 0.02)were up-regulated in group Ⅱ compared with those in group Ⅰ (0.84±0.04),(0.86±0.01),(0.45±0.03) (P ＜0.05),and decreased markedly in group Ⅲ (0.88 ± 0.03) ,(0.90 ± 0.02), (0.67 ± 0.02) (P ＜ 0.05) and group Ⅳ (0.88±0.04) ,(0.90 ± 0.01),(0.66±0.01) (P ＜ 0.05), but showed no difference between group Ⅲ and Ⅳ (P ＞ 0.05). Conclusions Morphine and tramadol pre-emptive use can significantly inhibit the expressions of SPmRNA and CGRPmRNA in rat's dorsal root ganglia after CAO.     

侧脑室注射S100A4蛋白对局灶性脑梗死大鼠神经功能及脑内S100B表达的影响

目的：观察经侧脑室注射S100A4蛋白对脑梗死大鼠神经功能以及脑内S100B蛋白表达的影响。方法：36只健康成年SD大鼠线栓法成功复制大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCA0）,随机分为A、B组各18只,术后第1天A组侧脑室行人工脑脊液注射;B组行S100A4蛋白注射。在MACO术后第1、7及14d时各组各取6只行神经行为学评分,免疫组织化学法检测脑内S100B蛋白的表达情况。结果：B组大鼠在术后第7,14天时神经行为学评分与术后第1天比较有明显下降（1．96±0．49、1．75±0．40与2．94±0．72,P〈0．05）,并低于相同时间点A组大鼠。S100B阳性细胞数在术后第7天2组脑内达到峰值,以后开始减少,2组间比较,B组少于A组（P〈0．05）。结论：侧脑室注射S100A4蛋白可一定程度改善脑梗死大鼠神经行为学功能缺损,减少S100B蛋白在脑内的表达。     

不同强度的游泳训练对脑缺血再灌注大鼠蛋白激酶A表达的影响

目的 探讨强化游泳训练对脑缺血再灌注大鼠神经功能及蛋白激酶A(PKA)表达的影响.方法 采用线栓法建立左侧大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h再灌注动物模型.120只造模成功的雄性SD大鼠按随机数字表法分为训练1组、训练2组、训练3组和MCAO对照组,每组30只.训练1组大鼠每日游泳5 min,训练2组大鼠每日游泳10 min,训练3组大鼠每日游泳20 min;MCAO对照组大鼠不给予任何训练.另选30只大鼠为假手术组,不阻塞大脑中动脉血流,不给予任何训练.以上5组大鼠又分别随机分为术后3、7和14 d三个时间点亚组,每个时间点10只大鼠.分别于术后3、7和14d三个时间点,采用Menzies神经行为评分和前肢放置试验评价各亚组大鼠神经功能缺损情况,采用免疫组织化学方法测定各亚组大鼠脑缺血再灌注后脑内PKA阳性细胞的表达率,采用RT-PCR的方法测定各亚组大鼠脑缺血侧大脑皮质PKA的mRNA表达量,并进行统计学分析比较.结果 假手术组神经功能正常.MCAO对照组各时间点的神经功能评分与假手术组同时间点比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);各训练组分别在训练3、7和14 d后的神经功能改善情况优于同时间点MCAO对照组;训练3组训练14 d后受损神经功能改善最明显(P＜0.05),其训练3、7和14 d后的Menzies评分分别为(1.40±0.55)、(1.00±0.71)和(0.80±0.45)分,前肢放置试验评分分别为(5.20±0.84)、(3.80±1.30)和(2.40±1.14)分.训练1、2和3组各时间点的PKA阳性细胞表达率及其mRNA表达量高于同时间点MCAO对照组;且训练3组训练14d后的PKA阳性细胞表达率及其mRNA表达量增加较其它各训练组更为明显(P＜0.05),其训练3、7和14 d后的PKA阳性细胞表达率分别为(32.84±1.66)％、(35.05±1.33)％和(45.92 ±2.03)％,PKA mRNA表达量分别为(32.18±0.86)％、(37.44±1.27)％和(42.77±0.81)％.结论 强化游泳训练可以增加脑缺血再灌注大鼠PKA阳性细胞表达率及其mRNA表达量,改善受损神经功能,促进感觉和运动功能恢复.