杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

【目的】探讨杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。【方法】分别取10日龄SD大鼠胫骨、股骨的骨髓,过滤离心后将所得BMSCs进行体外单层培养、扩增,采用DMEM培养基,37℃、体积分数5%CO2条件培养。在细胞达到80%～90%融合时,使用2.5 g/L胰酶消化传代。将传代细胞分别置于空白血清培养液(对照组)、杜仲水提取物含药血清及杜仲醇提取物含药血清培养液进行培养,观察细胞在3种条件下的形态、贴壁生长、增殖、集落等情况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法绘制生长曲线,比较3种培养条件下达到100%融合的时间。【结果】杜仲水提取物组、杜仲醇提取物组对大鼠BMSCs增殖的影响显著高于空白血清对照组(P<0.05),且杜仲醇提取物组作用优于杜仲水提取物组(P<0.05)。【结论】杜仲对大鼠BMSCs增殖具有一定促进作用。     

柚皮素对脂肪间充质干细胞增殖的影响

目的探讨柚皮素在体外对人脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cell, ADSC）增殖的影响。方法采用CCK-8法检测柚皮素对ADSC细胞活性的影响,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测P16ink4a的表达水平,β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老的情况,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧类（ROS）含量,mRNA测序（RNA-seq）分析相关调控信号通路。结果CCK-8结果表明柚皮素在浓度为25μmol/L时能够明显促进ADSC的增殖（P<0.01）,流式细胞术结果显示柚皮素能使ADSC快速进入S期,促进了细胞的增殖（P<0.05）,Western印迹法检测结果显示柚皮素能够下调P16ink4a的表达（P<0.05）,β-半乳糖苷酶染色检测结果显示柚皮素能够延缓细胞衰老（P<0.01）,活性氧检测结果显示柚皮素能够清除细胞内活性氧的含量（P<0.01）,RNA-seq结果表明柚皮素能够通过激活核苷酸结合寡聚结构域样受体（NOD-like receptors, NLRs）信号通路上调SOD2基因的表达促进hADSC的增殖。结论柚皮素能够促进ADSC的增殖,其相关机制可能与激活核苷酸结合寡聚结构域样受体信号通路上调SOD2基因的表达有关。     

大鼠脂肪源性干细胞和骨髓间充质干细胞增殖速度的差异性研究

目的比较大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖速度,探讨ADSCs替代BMSCs的可行性。方法从成年雄性SD大鼠取脂肪组织和骨髓分别提取ADSCs和BMSCs,利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖速度。结果第二代ADSCs和BMSCs细胞接种时光密度(OD)平均值分别为0.028和0.030,两者OD值进行比较差异无统计学意义(t=0.88,P>0.05),于接种后的第1、2、3、4日ADSCs的OD值都显著高于BMSCs(P<0.05)。结论大鼠ADSCs增殖速度显著高于BMSCs。     

六味地黄丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度六味地黄丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响.方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志.将BMSCs分为对照组及不同浓度六味地黄丸干预组,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察其增殖情况.结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长;免疫细胞化学鉴定,CD44、CD29阳性,CD34阴性.MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药含量4～0.25mg/ml浓度范围内,六味地黄丸水提液干预24h后,干预组吸光度均增高(P<0.05),其中1mg/ml浓度干预组吸光度升高最明显(P<0.01).结论:所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征.在一定浓度范围内,六味地黄丸水提液可以提高BMSCs的体外增殖能力.     

罗哌卡因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨罗哌卡因对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖能力和迁移能力的影响,为BMSCs的临床应用提供进一步的研究基础。方法：使用贴壁法分离扩增大鼠BMSCs,流式细胞仪检测细胞表面分子标志物;成脂、成骨和成肌诱导分化检测细胞的分化潜能;分别使用CCK-8和Brdu掺入方法检测不同浓度罗哌卡因处理对BMSCs增殖能力的影响;细胞划痕实验和Millicell小室迁移实验检测不同浓度罗哌卡因对大鼠BMSCs迁移能力的影响。结果：培养所得细胞具备BMSCs的表面标志物特点和多向分化潜能。50,100μmol/L罗哌卡因处理可显著降低BMSCs的增殖速度,降低BMSCs的Brdu阳性率,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。划痕实验和迁移实验表明罗哌卡因处理可引起BMSCs迁移能力的明显降低（P〈0.05）。上述效应均对罗哌卡因的给药剂量呈现明显的剂量依赖关系,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：罗哌卡因可显著降低大鼠BMSCs的增殖能力和细胞迁移能力,提示外科应用BMSCs时需注意罗哌卡因等长效局部麻醉剂对BMSCs造成的不利影响。     

rno-miRNA-133b对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨miRNA-133b对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及凋亡的影响,分析miRNA-133b影响BMSCs增殖的可能机制。方法:体外全骨髓贴壁法原代培养大鼠BMSCs,取生长良好的第2代细胞作为本实验的研究对象。利用siPORT NeoFX转染rno-miRNA-133b模拟物(mimic)、抑制剂(inhibitor)及其各自相对应的阴性对照(NC)。用带GFP荧光的miRNA和TaqManqRT-PCR验证转染效率,采用MTS法和Brdu细胞增殖比色法检测细胞增殖,TUNEL免疫荧光分析细胞凋亡。利用生物信息学方法预测miRNA-133b的靶点基因,并对其靶点基因进行基因功能分析。结果:①利用siPORT NeoFX转染大鼠BMSCs能有效实现细胞中miRNA-133b的过表达和抑制。②过表达miRNA-133b能明显促进BMSCs的增殖(P<0.05),而抑制miRNA-133b能明显减少BMSCs的增殖(P<0.05)。③miRNA-133b对BMSCs的凋亡无明显作用(P>0.05)。④生物信息学分析结果提示miRNA-133b的靶点中存在部分调节细胞增殖的基因位点。结论:miRNA-133b对BMSCs的增殖能力存在促进作用,其可能通过负调控多种增殖调节靶基因发挥作用。     

刺五加注射液对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的探讨刺五加注射液对大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）增殖的影响。方法体外培养MSC，用四甲基偶氮唑法检测刺五加注射液促进大鼠MSC增殖的作用；用免疫组化法检测MSC细胞的Brdu标记阳性率。结果4种浓度的药液对MSC的增殖作用与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论刺五加注射液有促进MSC增殖的作用。     

孤啡肽对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 观察孤啡肽(OFQ)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响.方法 Percoll法分离大鼠骨髓间充质干细胞,传2代后分别在含有浓度为0、10-13、10-12、10-11、10-10、10-9、10-8和10-7 mol/L的OFQ培养基中继续培养,MTT法测定细胞活性.结果 当OFQ浓度小于10-11 mol/L时,OD值随着浓度的增大而增大,而当OFQ浓度大于10-11mol/L时,OD值随着浓度的增大而减小.结论 适当浓度的孤啡肽可促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖.     

蜕皮甾酮对人脐带间充质干细胞增殖的影响

摘要：目的研究不同剂量蜕皮甾酮（EDS）对人脐带间充质干细胞体外增殖的影响。方法分离培养并鉴定人脐带间充质
干细胞(hUCMSCs)。取第3代hUCMSCs分别在基础培养基(低糖DMEM培养基、10%的胎牛血清、100 U/m青/链霉素、4
mmol/L L-谷氨酰胺)中加入不同浓度（0、25、50、100、150、200 μg/ml）EDS予以干预,分别于第1、3、5、7天行MTT法检测细
胞增殖活性;另外,设置相同分组EDS干预培养hUCMSCs7 天,绘制细胞生长曲线。结果第3 代细胞阳性表达CD29、
CD105,阴性表达CD34、CD45。MTT法检测结果显示经EDS干预培养的hUCMSCs增殖能力较空白对照组有明显差异
(P<0.05),其中EDS 100、150及200 μg/ml三组细胞活性比较无显著差异(P>0.05),较其他实验组有统计学意义(P<0.05)。
细胞生长曲线同样显示EDS实验组可有效促进间充质干细胞的增殖。结论一定浓度范围内EDS对hUCMSCs具有促增
殖作用,该作用在EDS浓度为100 μg/ml时较为显著,不随浓度的增加而增强。这有望成为促进脐带间充质干细胞增殖的
新方法。     

成人脂肪源间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用

目的：研究人脂肪间充质干细胞培养上清对人脐带血（HUCB）中所含有间充质干细胞（MSCs）的影响。方法：取脐带血,肝素抗凝,Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育。流式细胞仪检测表面抗原。结果：脐带血的单个核细胞与人脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育经体外培养贴壁后出现形似纤维状细胞形态并表达与MSCs相关的抗原（CD13,CD44,CD71,CD166）,但不表达造血细胞抗原（CD34,CD45）,这与源于骨髓的MSCs一致。结论：人脐血间充质干细胞与脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。     

表皮干细胞对角质形成细胞增殖的影响

目的:研究表皮干细胞对角质形成细胞增殖的影响.方法:体外培养角质形成细胞时比较有无表皮干细胞时对角质形成细胞生长曲线的不同.结果:有表皮干细胞时角质形成细胞增殖速度快,且实验组在第2天即可见到散在的细胞集落,而对照组在第3天才看得到集落,实验组形成的集落大而多,对照组则少而小.结论:表皮干细胞对角质形成细胞的增殖有正性作用,表皮干细胞可能通过分泌某种"表皮干细胞因子"对角质形成细胞发挥作用.     

脂肪源性干细胞对大鼠坐骨神经功能恢复的影响

目的：：探讨脂肪源性干细胞（ADSCs）对大鼠坐骨神经功能恢复的影响。方法：将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物（ANA）中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常对照组、培养基组和实验组,培养基组和实验组均建立坐骨神经损伤模型,然后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6W和12W采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅。结果：术后6 W、12W,实验组坐骨神经传导速度和波幅明显高于培养基组（P<0.05）,但低于正常对照组（P<0.01）;并且,实验组术后12W时的神经传导速度和波幅明显高于术后6W（P<0.05）。结论：ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅,促进坐骨神经功能的恢复。     

玻璃粘连蛋白对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化影响

目的体外分离纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),研究玻璃粘连蛋白(VN)在rMSC向成骨方向分化过程中的作用。方法贴壁分离培养法分离纯化rMSC,观察第1、3、5、8、10代细胞的增殖情况,并绘制出生长曲线。选第3代细胞用以VN包被的培养板培养,每4d检测碱性磷酸酶活性及钙结节的形成。结果经贴壁筛选法分离的rMSC生长曲线呈S形,第3、4、5代细胞排列具有典型的漩涡状结构;细胞表达CD44、CD90,而不表达CD34。用以VN包被的培养板培养12d,碱性磷酸酶染色呈阳性,硝酸银染色显示有钙结节形成。结论VN有诱导rMSC向成骨方向分化的作用。     

成鼠神经干细胞的分离、克隆和增殖

目的：从成年大鼠前脑室下带（SVZ)中分离神经干细胞,证实其增殖潜能和胚胎源性。方法：利用无血清培养和单细胞克降技术,在成年大鼠SVZ中分离出具有多潜能的神经干细胞。在单个细胞克实验中,将培养板分为两组：第1组采用纯新鲜培养液,第2组为新鲜与原代培养液各半的混合液。选取单个细胞克隆连续传代获得大量来源于同一细胞 的亚细胞系克隆。用5－溴－2－脱氧尿苷（BrdU）标记和免疫荧光检测证实其增殖潜能,并用免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白（Nestin)抗原的表达以证实其胚胎源性。结果：原代培养1周后每瓶细胞培养液中可见形成这些克隆细胞可连续传代。BrdU标记、免疫荧光检测及Nestin免疫荧光标记均获得阳性结果。结论：采用新鲜和原代培养各半混合的方法可提高神经干细胞单克隆形成率,且本实验中分离培养的神经干细胞具有增殖潜能和胚胎源性。我们的研究结果为下一步神经干细胞的分化研究奠定了基础。     

PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION OF NEURAL STEM CELLS IN ADULT RATS AFTER CEREBRAL INFARCTION

Objective To investigate proliferation and differentiation of neural stem cells in adult rats after cerebral infarction. Methods Models of cerebral infarction in rats were made and the time-course expression of bromodeoxyuridine (BrdU), Musashil, glial fibrillary acidic protein (GFAP), and neuronal nuclear antigen (NeuN) were determined by immunohistochemistry and immunofluorescence staining. BrdU and Musashil were used to mark dividing neural stem cells. GFAP and NeuN were used to mark differentiating neural stem cells. Results Compared with controls, the number of BrdU-labeled and BrdU-labeled with Musashil-positive cells increased strikingly 1 day after cerebral infarction; approximately 6 fold with a peak 7 days later; markedly decreased 14 days later, but was still elevated compared with that of controls; decling to the control level 28 days later. The number of BrdU-labeled with GFAP-positive cells nearly remained unchanged in the hippocampus after cerebral infarction. The number of BrdU-labeled with NeuN-positive cells increased strikingly 14 days after cerebral infarction, reached maximum peak in the hippocampus 28 days after cerebral infarction in rats. Conclusion Cerebral infarction stimulate proliferation of inherent neural stem cells and most proliferated neural stem cells differentiate into neurons.     

BDNF体外诱导骨髓间充质干细胞对脑缺血大鼠神经缺失功能的作用

目的:探讨移植脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠脑缺血模型的作用.方法:采用线栓法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,移植前6 h BDNF体外诱导BMSCs分化为神经元样细胞.1×107 经BDNF体外诱导的或未诱导的BMSCs经鼠尾静脉移植.移植后第2,7,14,21,28天行大鼠神经缺失功能的测定,免疫组织化学染色和蛋白质印迹法检测神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)的蛋白表达.结果:移植后第14天和第21天,BDNF-BMSCs移植组与BMSCs移植组较未移植组神经缺失功能评分明显好转,移植后第21天,BDNF-BMSCs移植组的神经功能缺失评分较BMSCs移植组高(P<0.05).BMSCs移植对运动功能的改善作用更明显,而在观察时间内BMSCs对感觉缺失功能恢复较慢.免疫组织化学染色和蛋白质印迹法显示移植第7天,NSE在BDNF-BMSCs移植组中的表达明显较其他组增强(P<0.05).结论:移植BDNF体外诱导的BMSCs能增强BMSCs改善缺血性大鼠神经缺失功能及 NSE的蛋白表达.BDNF和BMSCs可能通过上调NSE表达改善缺血性大鼠神经缺失功能.     

不同低氧环境对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨不同低氧环境对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖活性的影响.方法 将原代培养的大鼠PASMCs分为常氧组(21% O2,5% CO2)、低氧组(10% O2,85% N2,5% CO2)、缺氧组(1% O2,94% N2,5%...     

同型半胱氨酸对体外培养的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 (HCY)对大鼠动脉平滑肌细胞 (ASMCS)增殖的影响。方法 :利用体外细胞培养技术 ,通过 MTT比色测定、细胞计数及流式细胞仪对细胞周期的测定 ,观察同型半胱氨酸对大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果 :同型半胱氨酸能促进大鼠动脉平滑肌细胞的增殖 ,呈明显的剂量依赖关系。药物作用两天后 ,0 .2 m M· L-1HCY组与对照组相比 ,细胞数目增加 4 6 .4 8%,MTT比色OD值增加 4 5 .6 9%(P<0 .0 1) ;经细胞周期的测定 ,结果表明 HCY作用后 G0 ～ G1期细胞数由对照组的 87.2 2 %降低至 76 .6 5 %,减少了 12 .12 %;S期的细胞数由对照组的 0 .0 0 %增加到 6 .6 6 %,处于DNA合成期的细胞数明显增加。结论 :同型半胱氨酸能促进大鼠动脉平滑肌细胞的增殖 ,呈明显的剂量依赖关系。推测 HCY可能通过促进平滑肌细胞的增殖导致动脉粥样硬化的发生。